转录因子Sp1和Sp3对JurkatT细胞端粒酶活性的调节作用

目的：探讨转录因子Sp1、Sp3对Jurkat T细胞端粒酶活性和粒酶逆转录酶（hTERT）的调节作用。方法：用脂质体将Sp1、Sp3表达载体转入JurkatT细胞，用Western blotting方法检测蛋白表达水平，用端粒酶PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性并用银染显示端粒酶活性梯度；用RT－PCR方法检测hTERT mRNA水平。结果：Sp1、Sp3载体转化36h的细胞Sp1、Sp3蛋白水平分别升高59．6％（P＜0．01）和36．8％（P＜0．05）；随着Sp1表达水平的增加，端粒酶活性和hTERT mRNA水平明显增加，增加率分别为38．5％（P＜0．05）和25．4％（P＜0．05）。而Sp3表达载体对端粒酶活性和hTERT mRNA水平无明显影响。结论：转录因子Sp1通过调节hTERT mRNA转录水平而调节Jurkat T细胞端粒酶活性，Sp3无此作用。     

吲哚美辛和hTERT-siRNA对胆囊癌细胞的作用

目的研究吲哚美辛和hTERT-siRNA对胆囊癌细胞株GBC-SD的端粒酶活性、细胞增殖、运动的抑制作用；并试从β-catenin／hTERT信号转导途径揭示其分子机制。方法采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Western Blot印迹方法检测GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和β-catenin基因mRNA、蛋白质表达水平。四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法检测琥珀酸脱氢酶（SDH）活性并做细胞增殖计数、运用Transwell小室和划线了解癌细胞侵袭与运动情况。结果质粒pGCsi-H1／GFP-hTERT转染GBC-SD细胞6～24h再加入吲哚美辛后对GBC-SD细胞的端粒酶、SDH活性、细胞增殖、运动、侵袭力均具有很明显的抑制作用，分别同阴性对照pGC-si-H1／NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较，差异有显著性（P〈0．01）。pGCsi-H1／GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛，检测hTERT mRNA和hTERT蛋白表达，分别与pGCsi-H1／NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较，差异有显著性（P〈0．01）。pGCsi-H1／GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛，检测β-catenin mRNA和p-catenin蛋白表达．分别与pGCsi-H1／NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较，无明显差异（P〉0．05）。结论吲哚美辛可增强hTERT-siRNA抑制GBC-SD细胞端粒酶、SDH的活性，及其增殖、运动、侵袭力，降低hTERTmRNA和hTERT蛋白表达，其机制与β-catenin／hTERT信号转导途径受抑存在一定联系。     

宫颈癌及各级宫颈上皮内瘤变端粒酶活性变化的探讨

目的：检测宫颈浸润癌及宫颈上皮内瘤样病变（CIN）各级组织中端粒酶活性的表达，探讨端粒酶活性测定作为肿瘤进展依据及鉴别诊断依据的可能性。方法：用免疫组化S－P法检测端粒酶TPT单克隆抗体，应用计算机图像分析系统测定TRT阳性指数，检测12例正常宫颈，23例CINⅠ，16例CINⅡ，12例CINⅢ，16例浸润癌组织端粒酶活性阳性表达情况。结果：随着宫颈病变的进展，端粒酶的阳性表达率显逐渐增高趋势（P＜0．05），两者呈正相关。CINⅠ、CINⅡ端粒酶阳性表达率比较，有显著性差异（P＜0．05），CINⅢ明显高于CINⅡ（P＜0．05）；各级CIN明显高于正常宫颈（P＜0．01）；CINⅢ与浸润癌无显著性差异（P＞0．05）。结论：端粒酶激活与宫颈癌变的进程有关，端粒酶活性表达有可能成为检测宫颈上皮内瘤变进展及CIN各级鉴别诊断的辅助指标。     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6 mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。     

初发SLE患者Th1/Th2及其调控因子基因的研究

目的：探讨未经药物治疗初发狼疮病人Th1/Th2细胞亚群分布及其调控细胞因子基因表达的差异。方法：运用三色荧光标记流式细胞术检测35例初发狼疮病人细胞亚群分布，并以10例正常人作对照；ABI 7700real-time PCR法同时检测38例病人和28例正常人IL－10、IL－12P40、IL18mPNA表达水平的差异。结果：1、初发狼疮病人Th1较正常人明显减低（P＜0．05），但Th1/Th2无显著性改变。2、与正常组相比，SLE组病人IL－12P35、IL－12P40、IL－18mRNA及其受体表达较正常人明显降低（P均＜0．05）；3、面部红斑组病人Th1/Th2、IL－12P35较正常组降低（P均＜0．05）；4、RNP阳性组病人IL－12P40较正常组升高，IL－12P35、IL－18较正常组降低（P均＜0．05）；5、有关节炎较无关节炎患者IL－18RmRNA表达升高（P＜0．05）。结论：SLE是一种以Th1细胞下降，Th2细胞相对占优势的自身免疫性疾病，源于诱导向Th1细胞分化的一系列细胞因子及其受体减少和细胞因子间失衡所致。     

VEGF、Flk-1在口腔粘膜上皮异常增生和口腔癌中的表达及意义

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体Flk-1在口腔粘膜上皮恶性病变发生发展中的作用。方法：采用免疫组织化学S-P法检测10例口腔正常粘膜，10例上皮异常增生，40例口腔鳞状细胞癌中VEGF及其受体Flk-1的表达。结果：VEGF和Flk-1在口腔粘膜上皮异常增生和口腔鳞状细胞癌中均有表达，其中在口腔鳞状细胞癌组中的表达强度明显高于其他两组（JP〈0．05）。VEGF和Flk-1的表达强度与口腔鳞状细胞癌的病理分级无显著相关（JP〉0．05）。在淋巴结转移组和无转移组之问存在显著性差异（P〈0．05）。结论：VEGF及其受体Flk-1与口腔粘膜上皮恶性转化和转移密切相关。可能成为口腔癌治疗的标靶和预后指标。     

卵巢恶性肿瘤端粒酶活性的研究

目的 探讨端粒酶活性与卵巢恶性肿瘤发生发展的关系以及端粒酶活化作为卵巢肿瘤标志物的可能性。方法 应用端粒重复序列扩增（TRAP－PCR）技术检测36例卵巢组织，包括17例卵巢恶性肿瘤及其盆腔相关组织、淋巴结，4例交界性肿瘤，10例良性肿瘤，5例正常卵巢组织中端粒酶活性。结果 端粒酶活性表达在恶性肿瘤组织中阳性率为88．2％（15／17），弱阳性（＋）者3例，中等阳性（ )4例，强阳性（ )者8例；4例交界性肿瘤阳性率75．0％（3／4），均为弱阳性（ )；10例卵巢良性组织中阳性率为10．0％（1／10），为弱阳性（ )；5例正常卵巢组织全部为阴性。统计学分析表明端粒酶活性表达在卵巢恶性肿瘤、交界性肿瘤与良性肿瘤组织及正常卵巢组织之间存在非常显著性差异（P＜0．05）。但与卵巢恶性肿瘤的病理类型、组织分化、分期均无关。结论 端粒酶活性表达在卵巢恶性肿瘤组织中普遍存在，端粒酶活性检测有可能成为卵巢恶性肿瘤诊断的重要辅助手段，同时对卵巢恶性肿瘤细胞减灭术效果的判定可能具有一定的参考价值。     

缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子在肾细胞癌组织中的表达及意义

目的检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在肾细胞癌中的表达及其相互关系。方法用免疫组织化学SABC法检测42例肾细胞癌组织中HIF-1α及VEGF蛋白的表达。结果肾细胞癌组织中HIF-1α阳性表达率为57．1％，癌旁及正常组织不表达；肾细胞癌VEGF阳性表达率为61．9％，与癌旁及正常组织（阳性表达率为20％）相比有显著性差异（P〈0．05）；癌转移患者与无癌转移者HIF-1α、VEGF比较均有显著性差异（P〈0．01）；HIF-1α与VEGF表达呈正相关（Kappa=0．41,P〈0．01）。结论HIF-1α在肾细胞癌组织中呈高表达，其与VEGF有相关性，有望成为判断肾细胞癌转移和预后等生物学行为的重要参考指标，HIF-1α是VEGF表达的调控因子之一。     

TGFβ1在子宫颈鳞癌细胞及细胞外基质中的表达

目的： 探讨细胞生长调节因子TGFβ1在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及其意义。 方法： 采用免疫组织化学SP方法,检测31例子宫颈鳞癌组织中TGFβ1的表达。 结果： TGFβ1在宫颈鳞癌细胞浆及细胞外基质中均可见表达。 分化越差，临床分期越晚，癌细胞中的阳性表达率越低，细胞外基质中的阳性表达率越高。宫颈鳞癌细胞中，低分化组TGFβ1表达阳性率与高分化及中分化组相比，差异具有显著性（P<0.05）,高与中分化组间差异无显著性 (P>0.05)。在宫颈鳞癌细胞外基质中，高分化组TGFβ1表达阳性率与低分化及中分化组相比差异具有显著性（P<0.05）, 中与低分化组差异无显著性 (P>0.05)。胞浆和细胞外基质中的阳性率在临床分期Ⅰ和Ⅱ期，Ⅰ期和Ⅲ期间差异均具有显著性（P<0.05），Ⅱ期和Ⅲ期间差异不具有显著性 (P>0.05)。结论： TGFβ1的表达下调与宫颈鳞癌细胞分化程度、临床分期有关, TGFβ1在细胞外基质的高表达提示其与肿瘤的转移有关。     

口腔鳞状细胞癌中端粒酶活性的表达

目的 了解端粒酶活性在口腔鳞状细胞癌中的表达情况,并探讨端粒酶活性在口腔鳞状细胞癌演变过程中的作用。方法 对３７例口腔鳞状细胞癌、４０例口腔良性肿瘤及１２例正常口腔组织,采用聚合酶链反应－酶联免疫吸附法检测其端粒酶活性。结果 口腔鳞状细胞癌组的端粒酶活性阳性率明显高于良性肿瘤组和正常组织组。结论 端粒酶可稳定染色体末端的端粒结构,端粒酶活化在口腔肿瘤恶变过程中起了重要作用;端粒酶可作为判断癌变能力     

p27Kip1、cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中的表达及其意义

目的 研究口腔鳞癌组织中p27Kip1及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达以及与临床生物学特性和细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化方法检测53例原发性口腔鳞癌组织及20例正常口腔黏膜组织中p27Kip1及cyclin D1蛋白的表达水平,Ki-67作为细胞增殖活性的指标也被检测.结果 p27Kip1在口腔鳞癌中阳性表达率显著低于正常口腔黏膜组织(P＜0.05),cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中阳性表达率显著高于正常口腔黏膜组织(P＜0.05) ;cyclin D1蛋白过表达与临床分级及淋巴结转移有关(P＜0.05),p27Kip1缺失表达与淋巴结转移有关(P＜0.05);p27Kip1负表达和cyclin D1过度表达与细胞增殖评价因子Ki-67呈负相关(r=-0.587和-0.667,P＜0.05).结论 在鳞癌的发生发展过程中,p27Kip1的缺失表达和cyclin D1的过度表达两者可能单独或共同参与.p27Kip1的缺失可能还与口腔鳞癌细胞的分化、转移及增值和预后有关.     

乳癌组织中端粒酶活性与端粒酶RNA的表达

目的:分析乳癌组织中端粒酶(telomerase)活性和端粒酶mRNA(hTR)的表达.方法:采用PCR-TRAP-ELISA法对54例乳癌、配对癌旁及30例乳腺良性病变组织中端粒酶活性进行半定量检测,运用原位杂交方法检测hTR的表达.结果:癌组织中端粒酶活性及hTR表达率高于癌旁及良性病变组织(P＜0.01).乳癌组织中端粒酶活性的表达与患者年龄、肿块大小、分化程度无关(P＞0.05),但与组织学类型及淋巴结转移关系密切(P＜0.05).结论:端粒酶激活与乳癌的发生关系密切.     

乳腺癌中RIZ1的表达及其临床意义初探

目的研究RIZ1基因mRNA表达的改变与乳腺癌发生及与患者相关临床和病理特征之间的关系。方法采用半定量RT-PCR方法检测34例乳腺癌标本及相应癌旁组织、15例乳腺良性肿瘤RIZ1基因mRNA的表达状况，并结合相关指标进行分析。结果RIZ1基因mRNA在乳腺癌中的表达明显低于癌旁乳腺组织与乳腺良性肿瘤组织，差异均有显著性（均P〈0．05）。RIZ1基因mRNA在乳腺癌中的表达与年龄、肿瘤TNM分期、淋巴结转移、激素受体（ER）状况无相关关系（均P〉0．05）。结论：RIZ1基因mRNA表达降低可能与乳腺癌的发生相关。     

口腔鳞癌患者端粒酶催化亚基mRNA的定量检测及其意义

目的探讨端粒酶催化亚基基因(hTERT mRNA)在口腔鳞癌患者中的表达情况及其意义.方法采用实时定量PCR法(qRT-PCR)检测25例鳞癌患者口腔鳞癌组织及其切缘组织,10例正常人口腔黏膜中hTERT mRNA的表达情况并进行比较.结果口腔鳞癌组织中hTERT mRNA的表达量明显高于切缘组织和正常口腔黏膜(P＜0.05),而切缘组织与正常口腔黏膜中hTERT mRNA的表达量无区别(P＞0.05).结论口腔鳞癌中hTERT高表达,口腔切缘和正常口腔黏膜中低或无表达,提示hTERT mRNA活化是口腔癌变过程中的重要事件,hTERT mRNA可以作为检测口腔鳞癌及其切缘安全范围的一个客观量化指标.     

基质金属蛋白酶2在口腔疣状癌和鳞癌中的表达

目的：研究基质金属蛋白酶2(MMP2)基因在口腔疣状癌和鳞癌中ｍRNA的表达水平。方法：将30名患者根据其病理结果分为3组：疣状癌组（n=10）、高分化鳞癌组（n=15）和中低分化鳞癌组（n=5）。采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)对3组患者的癌组织、正常组织MMP2基因ｍRNA的表达进行检测。结果：疣状癌组、高分化鳞癌组和中低分化鳞癌组癌组织MMP2基因ｍRNA的表达明显高于配对正常组织（P<0.05）。其中,疣状癌组癌组织MMP2 ｍRNA的表达明显高于高分化和中低分化鳞癌组（P<0.05）;而高分化鳞癌组与中低分化鳞癌组的癌组织MMP2 ｍRNA的表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：MMP2基因在口腔疣状癌和鳞癌中表达均有增加,其中在疣状癌中的表达又高于在鳞癌中的表达。     

凋亡蛋白Bcl-2、Fas在外阴白色病变的表达

目的检测外阴白色病变组织中Bcl-2、Fas蛋白的表达,探讨其在该病的发病机制中的作用及相互关系。方法采用免疫组化法检测41例妇女外阴白色病变石蜡包埋组织中的细胞凋亡相关基因Bcl-2、Fas的表达情况。另取石蜡包埋的妇女正常外阴皮肤11例作为对照。结果鳞状上皮细胞增生组Bcl-2基因蛋白表达阳性率高于正常的外阴皮肤组织、硬化性苔癣组及鳞状上皮细胞增生合并硬化性苔癣组,差异有显著性(P<0.05,P<0.05,P<0.05),硬化性苔癣组与正常的外阴皮肤组织及鳞状上皮细胞增生合并硬化性苔癣组三者之间相比差异无显著性(P>0.05,P>0.05,P>0.05)。正常外阴皮肤组织检测Fas基因蛋白的表达,阳性率为90.9%。外阴白色病变组织Fas基因蛋白表达总的阳性率为39.0%,与正常组织比较,有显著性差异(P<0.01),其中外阴鳞状上皮细胞增生表达阳性率33.3%,LS表达阳性率46.7%,二者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在外阴白色病变组织中Bcl-2、Fas的表达无相关性(P>0.05)。结论Bcl-2基因蛋白的过度表达可能与外阴鳞状上皮细胞增生发生有关,也可能为外阴鳞状上皮细胞增生较硬化性苔癣易于癌变的原因。Fas/FasL及其介导的细胞凋亡可能与外阴白色病变的发生相关。外阴白色病变组织中Bcl-2、Fas蛋白的表达无相关性。     

胃癌化疗组织学疗效与p53和P-糖蛋白表达及生存率关系的研究

目的探讨化疗组织学疗效与胃癌患者p53和P-糖蛋白表达及生存率的关系。方法采用SP免疫组织化学染色方法检测38例正常胃黏膜、18例未经术前动脉灌注化疗的胃癌组织和82例术前动脉灌注化疗的胃癌组织p53和P-糖蛋白的表达情况,并分析p53和P-糖蛋白表达与化疗组织学疗效和生存率的关系。结果p53和P-糖蛋白表达在正常组和胃癌组之间有统计学意义(P<0.05),在化疗组和未化疗组之间无统计学意义(P>0.05);化疗疗效与p53和P-糖蛋白的表达成负相关(P<0.01);生存期与组织学疗效成正相关(P<0.05);生存期与p53的表达成负相关(P<0.05),生存期与P-糖蛋白的表达无明显相关性(P>0.05);P-糖蛋白与p53的表达成正相关(P<0.01)。结论胃癌患者存在先天性多药耐药现象,术前检测P-糖蛋白与突变型p53的表达对胃癌的新辅助化疗具有重要的指导作用。     

泌尿系肿瘤人端粒酶催化基团mRNA的表达

目的　探讨泌尿系肿瘤中端粒酶催化基因 (hTRT)mRNA的表达与肿瘤分期和分级的关系。方法　应用原位杂交技术对膀胱癌、肾癌标本和膀胱、肾脏正常组织进行hTRTmRNA表达检测。结果　 48例膀胱癌标本中 42例hTRTmRNA阳性表达 ,hTRTmRNA阳性率为 88% ,对照组 30例中 2例正常膀胱组织黏膜阳性表达 ,两者存在明显差异 (P <0 .0 1) ,肿瘤分级与肿瘤组织hTRTmRNA表达情况无相关性。 2 9例肾癌组织hTRTmRNA阳性 2 5例 ,阳性率为 86 % ,对照组 30例中 2例肾脏正常组织hTRTmRNA阳性表达 ,两者存在明显差异 (P <0 .0 1) ,肿瘤分期与肿瘤组织hTRTmRNA表达情况无相关性。结论　hTRTmRNA在肾癌和膀胱癌中有异常阳性表达 ,但其表达情况与肿瘤的分期和分级无相关性     

胃癌患者血中游离癌细胞CK-20 mRNA检测的临床意义

目的：探讨胃癌患者手术前后血中游离癌细胞CK-20 mRNA的检测情况及临床意义。方法：采用RT-PCR方法,检测40例胃癌患者及20例胃、十二指肠良性疾病患者手术前后血中游离癌细胞CK-20 mRNA表达。结果：胃、十二指肠良性疾病组CK-20 mRNA表达均为阴性,胃癌组术后CK-20 mRNA表达阳性率(37.5%,15/40)明显高于术前(22.5%,9/40)（P<0.05）。术中先结扎肿瘤周围回流静脉组（A组）术后CK-20 mRNA表达阳性率为35%,不结扎回流静脉组（B组）术后阳性率为40%,二组比较差异无显著性（P>0.05）。CK-20 mRNA阳性检出率与胃癌分化程度无明显相关性（r=0.012, P>0.05）,与Bormann分型亦无明显相关性（r=0.024,P>0.05）。结论：进展期胃癌术前已有部分患者血中存在游离癌细胞,手术 中的牵拉刺激可增加癌细胞血行播散的可能性,术中单纯靠结扎回流静脉的方法无法完全阻断癌细胞播散入血。     

MC1R在食管鳞癌细胞和组织中高表达

目的 通过分析MC1R在食管鳞癌细胞和组织中的表达水平及其与相关临床病理参数的相关性,探讨MC1R在食管鳞癌中的临床意义。方法 通过生物信息学分析MC1R在食管癌中的表达情况;以RT-PCR和Western blotting方法比较分析人食管上皮细胞BAr-T、人食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30、KYSE150、KYSE510、TE-1、TE-13、EC9706、人胃癌细胞SGC7901及19对食管鳞癌组织和对应癌旁组织中MC1R的表达水平;以IHC方法比较分析32对食管鳞癌组织切片和对应癌旁组织切片中MC1R的表达水平;使用t检验进行组间MC1R表达量的差异比较,使用Fisher’s精确检验分析MC1R表达水平与临床病理特征之间的关系。结果 生物信息学分析显示MC1R在食管癌组织中显著高表达（P<0.05）;食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30、KYSE510、TE-13、EC9706和胃癌细胞系SGC7901中MC1R表达量高于食管上皮细胞（P<0.05）;食管鳞癌组织切片中MC1R相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。MC1R高表达现象主要存在于老...