不同地区草原革蜱基因组DNA多态性研究

目的研究我国不同地区草原革蜱是否有种型差异。方法从新疆阿尔泰、甘肃省武威、平凉地区采集草原革蜱标本，并分别提取它们的DNA，选取9条随机排列碱基序列片段，利用随机扩增多态DNA技术(Random Amplifted Polymorphic DNA，RAPD)，确定聚合酶链反应(PCR)总体积、反应条件。将扩增产物制备成DNA图谱，比较不同地区草原革蜱基因组DNA的多态性，从分子水平对不同地区草原革蜱进行差异分析。结果3个地区的草原革蜱部分DNA条带相同，但也有完全不同的DNA条带。结论3个地区的草原革蜱DNA存在差异。     

两个地理株青海血蜱基因组DNA差异研究

目的研究青海血蜱是否有种型差异.方法分别提取青海血蜱两个地理株的DNA,选取8条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物,进行RAPD-PCR扩增反应.将扩增产物制备成DNA图谱,比较青海血蜱两个地理株基因组DNA多态性.从DNA水平对青海血蜱两个地理株进行差异分析.结果青海血蜱两个地理株大部分DNA条带是相同的,少数DNA条带不同.结论两个地理株青海血蜱DNA存在着差异.     

用随机扩增多态DNA(RAPD)技术研究不同地理株埃及伊蚊的分化

目的 用RAPD技术对实验室饲养的广东、海南、台湾和印尼Baro等4个不同地理株的8只雌蚊进行随机扩增多态DNA分析。方法 随机扩增多态性DNA(RAPD)技术。结果 选用20个随机引物进行扩增，有8个引物表现清晰的RAPD谱带并呈显著多态性。UPGMA法构建的分子系统树表明埃及伊蚊4个地理株之间存在着一定程度的遗传分化。结论 用RAPD方法可以区分不同地理株埃及伊蚊。     

肠炎沙门菌随机扩增多态性DNA分子分型

目的对不同来源的12株肠炎沙门菌分离株进行分子分型。方法分别提取不同菌株基因组DNA,建立和优化随机扩增多态性DNA（RAPD）反应体系,试用22条随机引物对不同菌株进行RAPD扩增,筛选清晰稳定的扩增条带做统计分析。结果筛选到OPG-03、OPG-06、OPG-07和OPG-13共4条随机引物具有鉴别作用,每一菌株均可扩增出4~10条DNA片段,大多数片段在100~2000bp之间,共扩增出42条RAPD条带,其中共有条带7条,多态性条带35条,多态性为83.3%。不同来源的肠炎沙门菌分离株之间的遗传相似系数在42.6%~100%之间,在0.850的相似性水平上可将12株肠炎沙门菌分离株分为5个不同的亚型。结论应用RAPD技术在分子水平上对肠炎沙门菌进行鉴别和分型具有简便、快速和辨别能力高的优势,对肠炎沙门菌的分子流行病学研究具有较好的应用前景。     

DNA条形码技术在鉴定绥芬河口岸日本血蜱和嗜群血蜱中的应用

目的建立用DNA条码技术对绥芬河口岸两种形态学特征非常相近的嗜群血蜱和日本血蜱的鉴定方法,探讨DNA条形码在蜱类鉴定中的实用性。方法在黑龙江绥芬河口岸采集游离血蜱103只,形态学鉴定完毕后,提取蜱样本基因组DNA,采用PCR方法从2种血蜱基因组中扩增线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因,测序后进行同源性分析,用Mega6.0软件构建系统发生树并进行系统进化分析。结果经形态学鉴定嗜群血蜱89只,日本血蜱14只;2种血蜱COⅠ基因之间的同源性为87.5%,嗜群血蜱与GenBank中编号KR108867.1公布的嗜群血蜱CO Ⅰ序列相似性为99.8%;日本血蜱与GenBank中编号KR108879.1公布的日本血蜱CO Ⅰ序列相似性为99.8%,与形态学鉴定结果一致。结论对于形态学特征相近蜱种的鉴定,在传统形态学分类的基础上结合DNA条码技术鉴定方法能更准确地鉴定蜱的种类,也能更好地了解其进化关系,为蜱传播疾病的预防控制提供依据。     

用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术区分不同地理株白纹伊蚊

目的 对来自北京、广州、成都、上海和日本的冲绳及长乐寺6个不同地理株的12只雄蚊进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析。方法 RAPE—PCR。结果 UPGMA法构建的系统聚类图表明，12只白纹伊蚊可归为明显不同的两个组，不同地理株之间存在着显著的遗传分化。结论 用RAPD法可以区分不同地理株的白纹伊蚊。     

阴沟肠杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立阴沟肠杆菌(ECL)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱.方法以优化的随机引物和反应体系对临床分离的159株ECL进行RAPD法基因分型,并按DNA条带数及片段大小绘制指纹图谱.结果 159株临床分离ECL共得121种RAPD指纹图谱.结论 RAPD技术可将临床分离ECL分型121种.     

北京市褐家鼠种群遗传多态性及与汉坦病毒分布关系的研究

目的了解北京地区褐家鼠不同地理种群遗传多态性与该地区汉坦病毒（HV）基因变异及其分布可能存在的关联。方法选取北京市不同地区捕获褐家鼠，采用巢式RT—PCR法检测HVM基因片段，获得的阳性标本产物进行直接测序，构建系统发育树。另一方面对不同HV来源的宿主个体和其对应种群内随机选取的其他个体，以及其他一些地区鼠类作为参照，用随机扩增多态DNA（RAPD）技术获得褐家鼠基因组DNA多态性图谱，利用RAPDDIST和PHYLIP软件分析褐家鼠种群多态性，并与对应的北京地区的HV差异和分布进行比较。结果选用50个随机引物进行扩增，有5个引物获得清晰、多态性高的RAPD谱带。不同区域种群RAPD标记不尽相同，北京市褐家鼠地理种群之间存在一定程度的遗传分化，大部分种群遗传距离较为接近，其中采集于某农产品集散地的XFD种群遗传距离相对较大，有特异性标记条带。11个HV代表序列均为汉城型汉坦病毒，基因差异为0．1％～8．0％，可分为2个主要的支系，多数毒株变异类型在不同地域中交叉分布，但BjFT01株变异较大，成一个独立的支系。通过Bootstrap分析和系统树图比较，种群分化较大的XFD种群与该区获得1株亲缘关系相对较远的HV相对应。结论北京市不同区域HV及其褐家鼠DNA多态性均存在一定差异，不同种群尤其是输入性种群对北京HV流行影响程度不同，初步显示一些特定种群与特定的基因性别有一定的关联。XFD种群外源基因交流渗入的可能性较大，进一步证明北京市HV随着鼠类种群迁移输入的可能性极大，但仍有待于选用一些特异性标记基因多态性进行继续研究。     

随机引物技术调查监控医院感染流行株的临床意义

目的 探讨草绿色链球菌的基因分型，比较菌株间基因差异，寻找流行菌株与疾病的关系，为临床提供流行病学资料。方法 设计17bp随机引物，采用随机扩增多态DNA(random amplified polymorphic DNA，RAPD)技术对从临床标本中培养分离出的30株草绿色链球菌进行分析。结果 17bp随机引物将30株细菌扩增出12条特征性带，分为独特而稳定的3个型别，型别I在引起咽炎的菌株中占的比例相对较多。结论 RAPD技术是细菌基因分型及分子流行病学研究的好方法，在调查监控医院感染流行株方面有重要的临床意义。     

弗氏柠檬酸杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱. 方法以优化的反应体系及单一随机引物L8,对临床分离的116株C.freundii进行RAPD分析,并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱. 结果 116株临床分离C.freundii共得78种RAPD型. 结论 RAPD法可将C.freundii分型78种.     

褐黄血蜱与铃头血蜱的分子生物学鉴定

目的建立2种形态学特征非常相近的褐黄血蜱及铃头血蜱的分子生物学鉴定方法,探讨它们的系统发生关系。方法在湖北省从动物体表采集寄生蜱,形态学鉴定完毕后,采用PCR方法从2种血蜱基因组中扩增12SrDNA、16SrDNA及线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因,测序后进行同源性分析,用PAUP4.0软件分别构建系统发生树并进行系统进化分析。结果 2种血蜱12SrDNA、16SrDNA及COⅠ基因之间的同源性分别为90.8%、90.4%和86.8%,湖北省采集的褐黄血蜱3个基因片段与已知褐黄血蜱的同源性分别为100%、99.5%和99.7%。用这2种蜱的12SrDNA、16SrDNA及COⅠ基因的核苷酸序列分别构建系统发生树,湖北省采集的褐黄血蜱与已知的褐黄血蜱聚在一起,褐黄血蜱及铃头血蜱均形成独立的分支,但用3个基因构建的系统发生树中血蜱属不同种间的亲缘关系不同。结论对于形态学特征相近蜱种的鉴定,在传统形态学分类的基础上结合分子生物学鉴定方法能更准确地鉴定蜱的种类,也能更好地了解其进化关系,为蜱传播疾病的预防控制提供依据。     

我国斑点热立克次体新种检测及其rOmpA基因序列分析

采用斑点热群立克次体特异引物坟增福建南部来源蜱标本和标本中的ＤＮＡ,以发现我国可能存在的新种斑点热群立我闪体。以立氏立克次体ｒＯｍｐＡ基因序列中的相关我为引物,扩增标本扣ｒＯｍｐＡ基因部分片段,用ｐＧＥＭ－Ｔ载体及其宿主菌进行阳性克隆筛,阳性克隆经鉴定这后提取质粒ＤＮＡ,进行序列测定。测定序列用Ｂｌａｓｄｔ软件进行序列同源生比较并采集相关序列,用Ｂｏｏｔｓｒｒｉｐ方法随机取样１００次,用ＰＨＹＬＩ     

长角血蜱和微小扇头蜱的形态与分子生物学鉴定

目的 建立鉴定长角血蜱和微小扇头蜱的形态学和分子生物学相结合的方法.方法 采集自湖北和河南省布尼亚新病毒疫区家养动物体表寄生的蜱及草丛、灌木中的蜱;先以形态学鉴定,后用PCR方法扩增得到蜱的12S rDNA,测序后进行同源性和系统进化分析.结果 形态学方法鉴定采集到两种蜱:长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)和微小扇头蜱(Rhipicephalus microplus).蜱的12S rDNA经克隆、测序,用PAUP 4.0软件构建系统发生树,湖北、河南省两种蜱的12S rDNA序列分别与长角血蜱和微小扇头蜱聚类,与形态学鉴定结果一致.结论 在传统形态学分类的基础上结合分子生物学鉴定方法能更准确地鉴定蜱的种类.

Abstract：

Objective To establish a method combined morphology and molecular marker for identifying Haemaphysalis longicomis and Rhipicephalus microplus. Methods Ticks were collected from domestic animals and wild environment in epidemic area of Hubei and Henan provinces where cases of fever with thrombocytopenia syndrome were prevalent. We classified the ticks by morphology characteristics before 12S rDNA of ticks were amplified by PCR and subsequently sequenced. Phylogenetic tree was constructed by PAUP4.0. Results The ticks belonged to Haemaphysalis longicomis and Rhipicephalus microplus through observation and analysed by the morphological characteristics of the ticks. 12S rDNA was cloned and sequenced while data confirmed the morphological identification of the results. Conclusion The method based on morphology that combined with molecular marker seemed a good method for the identificaton of ticks.     

从四川东部林区二棘血蜱体内分离出莱姆病螺旋体

1991年5～6月,我们在四川省南川县对传播莱姆病螺旋体的媒介昆虫进行了调查。棘血蜱(Haemaphysalis bispinosa)是当地蜱类优势种。用6月上旬采集的50只二棘血蜱中肠涂片,进行直接免疫荧光抗体检测,20只为阳性;从10组(50只)二棘血蜱分离出8株螺旋体;用单克降抗体对8个新分离株(SH_1、SH_2、SH_3、SH_4、SH_5、SH_6、SH_7,SH_(10))进行鉴定,与美国B_(31)菌株反应基本相似,但不完全一致。二棘血蜱在传播莱姆病螺旋体上可能起重要作用。     

长角血蜱和微小扇头蜱的形态与分子生物学鉴定

目的 建立鉴定长角血蜱和微小扇头蜱的形态学和分子生物学相结合的方法.方法 采集自湖北和河南省布尼亚新病毒疫区家养动物体表寄生的蜱及草丛、灌木中的蜱;先以形态学鉴定,后用PCR方法扩增得到蜱的12S rDNA,测序后进行同源性和系统进化分析.结果 形态学方法鉴定采集到两种蜱:长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)和微小扇头蜱(Rhipicephalus microplus).蜱的12S rDNA经克隆、测序,用PAUP 4.0软件构建系统发生树,湖北、河南省两种蜱的12S rDNA序列分别与长角血蜱和微小扇头蜱聚类,与形态学鉴定结果一致.结论 在传统形态学分类的基础上结合分子生物学鉴定方法能更准确地鉴定蜱的种类.     

一组长角血蜱中检出莱姆病螺旋体和斑点热群立克次体复合感染

目的 了解浙江省山区野生动物和蜱中莱姆病、斑点热、埃立克体病(无形体病)的感染情况.方法 采用巢式PCR对采集的鼠、蜱标本进行莱姆病伯氏疏螺旋体、斑点热群立克次体、埃立克体(无形体)特异性核酸片段检测分析.结果 从121份鼠标本和105组蜱标本中检出阳性结果 14份.鼠标本中检出伯氏疏螺旋体5S～23S rDNA间隔区片段1份和埃立克体(无形体)16SrDNA 5'端片段2份.蜱标本中检出阳性11份,包括伯氏疏螺旋体5S～23S rDNA间隔区片段3份和斑点热群立克次体外膜蛋白OmpA基因5'端片段8份.其中1组长角血蜱成虫标本为伯氏疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染,5S～23S rRNA基因间隔区和ompA基因片段均阳性,分别与伯氏疏螺旋体法雷氏基因型和马赛立克次体株等关系较近.结论 在同一组长角血蜱成虫中同时检出莱姆病疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染.     

Cloning, expression and evaluation of the efficacy of a recombinant Haemaphysalis concinna Hc-23 antigen in rabbits

Haemaphysalis concinna is wide spread in China, and negatively impacted on husbandry production and then resulted in severe economic losses. Methods available for the control of ticks are mainly based on chemotherapy. However, this approach is associated with a number of disadvantages; searching for alternative tick control measures is necessary and vaccination is one of the best control strategies. Through H. concinna Hc-23 gene PCR amplification, cloning and sequencing, sequence analysis showed that Hc-23 genes could be amplified in nymphal, larvae and adult ticks. BLAST analysis suggested that Hc-23 gene was 99.83% homology with P27/30 of Chinese strains H. longicornis, and 99.67% with Japanese strains, but 88.06% with Rhipicephalus tick troponin I gene. The recombinant Hc23 expressed in BL21(DE3) with Freund's complete adjuvant (FCA) was used to immunize 6 rabbits, then another 6 were immunized with PBS and 6 with control FCA (as control) were challenge-infested with ticks at different developmental stages of the same specie. The result showed that ticks that fed on rHc23-immunized rabbits were observed to feed longer compared to the control (P ≤ 0.05), the engorged body weights of ticks feeding on rHc23-immunized rabbits were lighter than the control (P ≤ 0.05), and an apparent reduction in laying amount was observed for adult ticks fed on rHc23-immunized rabbits (P ≤ 0.05). These results demonstrated that the Hc-23 protein might be a useful vaccine candidate antigen for biological control of ticks.     

二棘血蜱生态习性及其特点的初步研究

目的：初步研究莱姆病主要媒介二棘血蜱的生态习性及其特征。方法：采用流行病学调查方法在疫源地进行相关因素的研究,分析其相关特点。结果：二棘血蜱为当地优势蜱种,其密度为275只/布旗人工小时;该蜱中肠检查带菌率为40%;从50只二棘血蜱分离到8株莱姆病螺旋体;该蜱有明显的季节消长和时限性;6-7月是二棘血蜱的繁殖期,其数量与气温、雨量密切相关;蜱的数量变化与生境等因素有关。其特征：二棘血蜱在疫源地内呈岛状分布;密度与农作物接壤的林间或林边草坪高于其他生境;二棘血蜱的数量变化与人畜野外活动频繁环境相关;该蜱喜向阳、光线充足、较湿润、浅草坪的生镜。结论：通过流行病学调查,初步掌握了二棘血蜱的生物学特征,为进一步研究莱姆病提供了依据。     

长角血蜱实验室繁殖规律研究与种群的建立

目的研究长角血蜱的繁殖规律和饲养条件,建立长角血蜱的实验种群。方法从自然界抓捕蜱,放在光照培养箱或干燥器中饲养,以小鼠和兔为饲血动物,对长角血蜱进行繁殖传代,记录饲血动物特异性、各虫态时间以及饲养条件。结果长角血蜱适宜养殖温度和相对湿度分别为（22±2）℃、（85±10）%,小鼠和兔可以作为长角血蜱的饲血动物,长脚血蜱一个生活周期约4～5个月。结论本研究基本摸清了长角血蜱的繁殖规律和饲养条件,并建立了实验种群。