超敏C-反应蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的:血清超敏C-反应蛋白(CRP)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)法的建立. 方法: 采用双抗体夹心法检测血清CRP水平(1株抗CRP的单抗用于包被微孔板,另1株抗CRP的单抗用于Eu3 标记). 结果: TRFIA的线性测量范围为1～1000 mg/L,灵敏度为0.06 mg/L,批内和批间精密度分别为4.0%～7.2%,6.7%～10.8%. 与人IgG和白蛋白未见明显的交叉反应. 109份血清标本用本方法与国外试剂盒同时检测,其相关系数为0.916. 结论: CRP-TRFIA各项指标均达到临床检测要求,可替代国外产品试剂盒,用于临床血清CRP的测定.     

人生长激素的时间分辨荧光免疫分析及其诊断试剂研制

 [目的]利用时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA）技术,建立人生长激素（human growth hormone,hGH）的快速检测方法并研制其诊断试剂.[方法]采用双抗体夹心法（一株抗GH的单抗用于包被微孔板,另一株抗GH的单抗用于Eu^3＋标记）建立hGH-TRFIA.[结果]hGH-TRFIA的线性测量范围为0.1×10^-3 100×10^-3U/L,灵敏度为0.036×10^-3U/L,批内和批间的变异系数分别为5.3%～8.6%和7.6%～12.8%.与促甲状腺激素（TSH）、卵泡生成素（FSH）、人胎盘催乳素（LH）和黄体生成素（HPL）均无交叉反应.将43份血清标本用本法与Wallac试剂盒同时检测相关系数（r）为0.957.[结论]hGH-TRFIA可作为一种具有灵敏度高、特异性强和测量范围宽的新方法,用于临床GH水平的测定.     

促红细胞生成素放射免疫分析及临床应用

目的 :建立促红细胞生成素 ( EPO)的放免分析方法 ,并探讨血清 EPO浓度测定的临床意义。　方法 :用rh EPO免疫动物制备了高质量的抗血清 ,建立了 EPO放免分析方法 ,并测定了正常人和贫血、肾衰患者血清 EPO值。　结果 :灵敏度为 0 .2 2 μg/L,批内 CV为 6.9%～ 8.4% ,批间 CV为 8.0 %～ 9.6% ,回收率为 93 .8%～110 .4%。正常血清 EPO值为 ( 1.5 9± 0 .69) μg/L,贫血患者为 ( 3 .64± 1.2 8) μg/L,肾衰患者为 ( 0 .85± 0 .2 5 ) μg/L,与正常人之间有显著性差异 ( P<0 .0 0 1)。　结论 :EPO的放免分析方法是一种简单、灵敏、特异的分析方法 ,可满足临床的需要 ,测定血清 EPO浓度对许多疾病的诊断和治疗有重要的意义     

人催乳素时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的建立人血清催乳素的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法。方法采用双抗体夹心法建立人血清催乳素TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的定量范围为16～11000mU/L,灵敏度为1.36mU/L,批内批间的精密度分别为2.6%～7.6%,5.7%～9.0%;与人胎盘泌乳素(hPL)、人生长激素(hGH)、人黄体生成素(hLH)和人促卵泡激素(hFSH)无交叉反应。30份异常血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.997。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

甲胎蛋白化学发光免疫定量分析方法的建立

目的:建立检测甲胎蛋白化学发光免疫定量分析方法.方法:采用双抗体异位点一步夹心法,以甲胎蛋白单克隆抗体作为固相包被,采用改良过碘酸钠法进行甲胎蛋白多克隆抗体与碱性磷酸酶偶联制备酶标抗体;以金刚烷胺衍生物CSPD作为底物,优化CSPD与SapphireII发光体系;用国家标准品校定定量标准品,建立了人血清AFP的化学发光免疫定量分析法.用该法检测800份正常人血清,确定正常值参考范围,将临床血清标本100份与bayer Acs:180全自动发光体系统进行比较.结果:本方法的最低检出量为2.0 ng /mL,线性范围2.0～600.0 ng/mL,批内和批间的变异率分别为6.7%和7.7%,回收率在98.2%～102.5%之间.与CEA(3 μg/mL)的交叉≤0.15%;与铁蛋白(10 μg /mL) ≤0.04%;与人血清白蛋白(200 g/L)≤2.5×10-8,与人血清丙球蛋白(100 g/L)≤2.0×10-8,与bayer Acs:180比较相关系数r=0.994(P＜0.001).结论:建立的甲胎蛋白化学发光免疫分析法可常规用于临床检测.     

抗抗总黄曲霉毒素单抗F(ab’)2多克隆抗体的制备及特性

目的:以抗总黄曲霉毒素单抗2G2株F(ab’)2片段作为免疫原制备抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体。方法:制备抗总黄曲霉毒素单抗2G2株F(ab’)2片段,分别用F(ab’)2片段和F(ab’)2-KLH免疫日本大耳白兔,制备抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体。采用ELISA检测该抗体替代黄曲霉毒素B1(AFB1)的情况,并分析与其他单克隆抗体的交叉反应情况。用该多克隆抗体免疫BALB/C小鼠,采用间接非竞争ELISA检测小鼠血清,鉴定该抗体的亚型。结果:由2G2株F(ab’)2片段所得的抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体纯化后,替代游离AFB1达到20%、50%和80%竞争抑制时的质量浓度分别为1、4和25mg/L,分别相当于0.47、2.74和16.00μg/L游离AFB1;该抗体替代AFB1包被抗原达到20%、50%和80%竞争抑制时的质量浓度分别为1、4和19mg/L,分别相当于0.33、1.35和5.45μg/L游离AFB1。小鼠生物鉴定显示该多克隆抗体为Ab2β型。结论:成功制备了抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体,为研制AFB1无毒检测试剂盒提供了依据。     

时间分辨荧光免疫分析法定量检测HBsAg的临床意义

目的 :探讨时间分辨荧光免疫分析法 (TRFIA)定量检测乙肝表面抗原 (HBsAg)的临床意义。方法 :对 3 5 8份乙肝病毒感染者血清标本采用TRFIA法定量检测HBsAg的含量。结果 :急性乙肝组血清HBsAg的含量为 2 0 . 8± 18 . 5 μg/ml ,慢性乙肝组、肝硬化组、肝癌组HBsAg含量分别为 5 . 3± 8 . 7μg/ml ,4 . 5± 7 . 2 μg/ml ,4 .1± 6 . 3 μg/ml,与急性乙肝组相比较差别显著 (P <0 0 1)。HBeAg(+ )组HBsAg含量为 2 6 .8± 18 . 2 μg/ml ,抗HBe(+ )组HBsAg含量为 3 . 6± 4 . 1μg/ml ,两组比较存在显著差异 (P <0 . 0 1)。结论 :采用TRFIA法定量检测HBsAg能较直观地反映乙肝病毒感染者体内乙肝病毒复制的活跃程度 ,结合乙肝其它血清学指标检查 ,对乙肝的病程监测及药物疗效判断具有一定帮助。     

抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2 F(ab'')2片段的特性

目的:研究经无花果蛋白酶酶切后所得的抗总黄曲霉毒素单抗2G2 F(ab′)2片段的特性,为研制开发特异性、灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型单克隆、多克隆抗体提供科学依据.方法:在制备出抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2株及其2G2 F(ab′)2片段的基础上,采用非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(非还原SDS-PAGE)和酶联免疫吸附法(ELISA)对单抗2G2及其F(ab′)2片段的特性进行研究并加以比较.结果:单抗2G2 F(ab′)2片段和单抗2G2的相对分子质量分别为105 000和180 000.单抗2G2 F(ab′)2片段和单抗2G2的比效价分别为3.33和1.25.单抗2G2 F(ab′)2片段的最低检出限和达到50%竞争抑制率时的检出限分别为0.17 μg/L和0.67μg/L,单抗2 G2的分别为0.47 μg/L和1 92 μg/L.单抗2G2 F(ab′)2片段的亲和力常数为2.95×10-9 mol/L,单抗2G2的亲和力常数为1.52×10-10 mol/L.结论:单抗2G2 F(ab′)2片段灵敏度优于完整抗体,可利用其生产特异性和灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型多克隆和单克隆抗体.     

高效液相色谱法测定人血浆中氟康唑浓度及其应用

目的:建立测定人血浆中氟康唑浓度的RP-HPLC法,并应用于临床药代动力学研究.方法:采用二氯甲烷萃取,高效液相色谱法检测,以单硝酸异山梨酯为内标,Phenomenx C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,4 μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(25:75:0.2),流速为1.0 ml/min;检测波长为261 nm.结果:血浆中内源性物质不干扰氟康唑的检测,氟康唑的线性范围为0.125～8.000 μg/ml,批内、批间精密度均小于15%,低、中、高浓度的(0.25 μg/ml、1 μg/ml和4 μg/ml)平均提取回收率分别为100.0%、98.8%、86.7%.结论:该法操作快速、简单、准确,符合生物样品检测要求,可用于临床药代动力学研究中大批量血样的处理.     

时间分辨免疫荧光分析检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是当前标记免疫分析研究应用领域的热点之一,具有高灵敏性和高特异性,用于生物分子的超微量检测.本研究者在建立一种灵敏度高、特异性强、操作简便的检测方法.方法 以Eu-DTTA{N1-(P-异硫氰基苄基)-二乙三胺四乙酸铕钠}为示踪物,建立了用TRFIA检测乙型肝炎血清学标志物乙型肝炎病毒表面抗原的方法.结果 所建立的标准曲线分析范围分别为0.2～300 ng/ml,分析灵敏度为0.05 ng/ml,检测参考标准品的批内变异系数均小于10%,与免疫放射测定同时定量检测多份血清样本,相关系数高达95%.结论 TRFIA分析范围宽,灵敏度高,操作简便,具有优越的定量检测能力,价格适中,十分适合临床推广应用.