壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞的毒性研究

目的 了解壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞的毒性作用,为其治疗牙周病提供依据.方法 人牙龈成纤维细胞在不同浓度的壳聚糖温敏凝胶中体外培养24h、48h、72h、96h.用MTT法测定细胞相对增殖率(RGR),判断细胞毒性的级别.结果 各组细胞不同时间点相对增殖率均在96%～144%之间,各浓度的壳聚糖水凝胶材料浸提液的细胞毒性均为0级或1级,完全符合生物材料的安全评价标准.结论 壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞无毒性,用于牙周病局部治疗具有进一步的研究价值.     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导不同细胞分泌炎性细胞因子的差异性

目的：探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）脂多糖（LPS），诱导人口腔上皮细胞KB和人牙龈成纤维细胞HGF-1及人单核-巨噬样细胞THP-1，分泌炎性细胞因子的能力及其差异。方法：采用酚水法提取PgATCC33277株的脂多糖（Pg—LPS）。采用鲎试验和红外光谱对提取的Pg—LPS进行鉴定。采用ELISA试剂盒，定量检测不同浓度和时间Pg—LPS作用的上述3种细胞培养物上清中TNF—α、IL-1β、IL-6和IL-8变化水平。实验中采用商品化大肠杆菌O111：B4脂多糖（E—LPS）为对照。结果：Pg—LPS和E—LPS凝固鲎试剂所需最低浓度均为15ng／ml，其红外光谱也极为相似。在Pg—LPS或E—LPS作用下，HGF-1细胞分泌的TNF—α和IL-1β水平呈单峰形增高（P〈0．01），但THP-1细胞为持续性升高（P〈0．01）。Pg—LPS或E—LPS具有促HGF-1和THP-1细胞持续性增强IL-6分泌的作用（P〈0．01）。Pg—LPS和E—LPS均可诱导THP-1细胞增强IL-8的分泌（P〈0．01），但对HGF-1细胞仅Pg—LPS有促IL-8分泌的效应（P〈0．01）。Pg—LPS和E—LPS均不能诱导KB细胞分泌上述细胞因子。结论：Pg—LPS有很强的促靶细胞分泌多种炎性细胞因子的生物学活性，从而引发初始的局部炎症反应。Pg—LPS致炎作用与E—LPS相似，但诱导不同炎性细胞因子的模式颇有差异。KB细胞不能作为LPS致炎作用的效应靶细胞。     

蜂胶对人牙周膜成纤维细胞毒性及细胞回复能力的影响

目的 体外研究蜂胶对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性及毒性的可逆性.方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs),选用蜂胶为实验组,碘酚溶液和奥硝唑溶液为药物对照组,培养基作为空白对照组,分别与HPDLFs接触进行细胞培养24h,用MTT法测定细胞相对增殖率(RGR),更换新鲜培养基继续培养细胞24h,测定细胞回复度.结果 3种药物随着药物浓度的增加,细胞相对增殖率均成下降趋势,同种药物不同浓度间比较,差别具有统计学意义(P＜0.05).所选浓度的蜂胶和奥硝唑细胞毒性为1～2级,而对照药物碘酚细胞毒性为4级.更换新鲜培养基继续培养细胞24h后,蜂胶组和奥硝唑组细胞回复度均大于80％,表现出较小的细胞毒性;而碘酚组回复度小于30％,表现出一定的细胞毒性.结论 蜂胶对HPDLFs具有较小的细胞毒性,且毒性可逆.     

牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Pg)对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的影响，探讨Pg对牙龈血管内皮细胞的毒性作用。方法：以厌氧袋法培养Pg，原代培养HUVEC，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）观察HUVEC的增殖状态。结果：活的和灭活的Pg都剂量依赖性地抑制HUVEC的增殖，活的Pg作用比灭活的Pg更为强烈，而Pg毒力株W83和非毒力株ATCC33277对HUVEC增殖的影响无显著差异。结论：Pg可能通过损伤牙龈组织的血管内皮细胞加重局部的炎性反应，可能是Pg诱导牙周组织破坏的病理机制之一。     

枸杞和骨碎补对人牙龈成纤维细胞体寿命的影响

以人二倍体牙龈成纤维细胞为体外寿命实验模型，观察枸杞骨碎补的抗衰老作用。实验发现，１．２５ｍｇ／ｍｌ的枸杞和骨碎补溶液，能使细胞附着率增加，铺展过程加快，群体倍增时间缩短，生长饱和密度增大，分裂代数增加１８．８％和２０．０％；寿命延长４１．２和３８．１％。表明枸杞和骨碎补对体外培养的牙龈成纤维细胞有较明显的延寿作用。     

牙龈卟啉菌菌毛的研究进展

牙龈卟咻菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）是目前获得公认的一种牙周致病菌。Pg含有大量毒性因子，如蛋白酶、菌毛、脂多糖、血凝索等。其中菌毛（Pili，fimbriae）在牙周致病作用中占据了一个重要地位，而且与Pg在口腔的定植有关。因其广泛的生物学活性成为牙龈卟咻菌研究的一个热点。现就Pg菌毛的相关研究进展综述如下。     

奥沙利铂联合地塞米松对肺腺癌 A549细胞增殖的影响

目的：研究奥沙利铂联合地塞米松对肺腺癌A549／DDP 细胞及肺腺癌患者外周纯化Th17细胞的影响。方法：使用不同浓度的奥沙利铂（0．3125μg／mL、0．625μg／mL、1．25μg／mL、2．5μg／mL、5μg／mL、10μg／mL ）及地塞米松（1nmoL／L、10nmoL／L、100nmoL／L、200nmoL／L、500nmoL／L、1000nmoL／L）在不同时间点（24h、48h、72h）干预人肺腺癌A49／DDP 细胞及Th17细胞,通过细胞增殖抑制实验、细胞凋亡实验检测肺腺癌细胞生长抑制率及细胞凋亡情况,结果：在1nmoL／L～200nmoL／L时地塞米松对肺腺癌A549细胞增殖无抑制作用,500～1000 nmoL／L的浓度范围内,地塞米松以剂量依赖性方式抑制肺腺癌A549细胞增殖,并表现出明显的量效关系（ r＝0．282, P＜0．05）;且随着作用时间的延长,抑制率逐渐增加,呈现出浓度和时间依赖性。在0．3125～1．25μg／mL奥沙利铂肺腺癌A549细胞增殖无抑制作用,2．5～10μg／mL奥沙利铂以时间及剂量依赖性对肺腺癌A549细胞的增殖产生抑制作用,当5μg／mL及10μg／mL奥沙利铂作用于肺腺癌A549细胞细胞72h后,抑制率分别为61．12±0．98％、63．67±0．18％,抑制作用相当（ P＞0．05）。连续给药24h、48h、72h后发现干预24h后即对肺腺癌A549细胞增殖产生抑制作用,联合用药组OD值明显低于单用组,即联合用药其抑制率显著高于其他单用组,且趋势随着用药时间的延长而逐渐明显。结论：地塞米松联合奥沙利铂联合用药能产生协同作用,抑制A549细胞增殖。     

蜂胶与氢氧化钙单独用药的细胞毒性研究

目的:研究蜂胶与氢氧化钙(Ca(OH)2)对人牙龈成纤维细胞的细胞毒性作用.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分别评价蜂胶与Ca(OH)2溶液对人牙龈成纤维细胞相对增殖率的影响,用五级毒性分类法评级,并对结果进行统计分析.结果:0.1%～0.6%蜂胶与Ca(OH)2各稀释溶液毒性级均为1～2级,二者之间无显著性差异.结论:蜂胶与Ca(OH)2均对人牙龈成纤维细胞的毒性较小,是治疗口腔疾病的安全药物.     

蜂胶水溶液处理污染种植体的体外实验研究

目的探讨蜂胶水溶液对牙周主要致病菌的杀灭作用及对污染种植体表面消毒清洁作用。方法使用液体稀释法测定不同浓度的蜂胶水溶液,分别处理处于对数生长期的牙龈卟啉单胞菌及成熟菌斑膜。采用菌落计数法和计算平均杀菌率来检测杀菌效果。将形成牙龈卟啉单胞菌菌膜的钛片置于各处理组中,采用扫描电镜观察各组试件表面黏附细菌的形貌变化。结果肉眼可见随着蜂胶水溶液浓度的升高,其菌落数量逐渐降低。菌落计数结果表明,不同浓度蜂胶水溶液处理的牙龈卟啉单胞菌菌落数差异有统计学意义。各个浓度的蜂胶水溶液平均杀菌率差异有统计学意义。1.875 g/L的蜂胶水溶液平均杀菌率接近50%,3.75 g/L的平均杀菌率达到了60%以上,7.5 g/L的平均杀菌率达到了90%以上。扫描电镜观察显示,蜂胶水溶液处理前后的牙龈卟啉单胞菌部分菌体细胞完整性受到了破坏。结论蜂胶水溶液对牙龈卟啉单胞菌具有良好的杀菌作用,可以作为治疗种植体周围炎的一种辅助方法。     

常用抗厌氧菌药物对牙龈卟啉单胞菌的体外抗菌活性研究

目的 研究口腔临床常用抗菌药物对牙周炎主要病原菌牙龈卟啉单胞菌（Pg)的抗菌活性。方法 用从成人牙周炎患者龈下菌斑中分离的、通过PCR鉴定的106株Pg临床分离株,采用琼脂稀释法测定了甲硝唑、克林霉素和替硝唑对三种不同浓度Pg菌液的最小抑菌浓度（MIC）。结果 上述药物对Pg的MIC范围依次是≤0.25-8mg/L,≤0.06-8mg/L和≤0.06-4mg/L,MIC90依次为8mg/L,8mg/L,4mg/L.10^5CPU/ml,10^6CFU/ml和10^8CPU/ml三种菌液浓度对实验结果无明显影响。结论 Pg对这三种药都非常敏感,敏感性大小依次为替硝唑、克林霉素和甲硝唑。     

常用根管消毒药物对人牙龈成纤维细胞的毒性

目的：观察根管消毒药物甲醛甲酚(FC)、樟脑酚(CP)、氢氧化钙饱和液、氢氧化钙药尖及中药制剂洁尔阴的细胞毒性及毒性的可逆性。方法：人牙龈成纤维细胞(HGF)于含不同浓度的5种消毒药物中体外培养,通过MTT法测细胞增殖率、回复度及ALP活性。结果：①FC、CP对HGF的增殖有显著抑制作用,且随药物浓度增大抑制作用增强,细胞的回复度和ALP活性降低。②洁尔阴、氢氧化钙饱和液、氢氧化钙药尖对HGF增殖及ALP无显著抑制作用。结论：FC、CP细胞毒性大,且细胞毒性不可逆。洁尔阴、氢氧化钙饱和液、氢氧化钙药尖无细胞毒性。     

Ni2+与EGCG相互作用对人牙龈成纤维细胞的生物学效应

 目的 分析表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）、Ni²⁺及其相互作用对人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblast cells,HGF）的生物学效应。方法 用MTT法检测HGF的存活率,运用彗星电泳检测细胞的DNA损伤情况,使用流式细胞仪法检测HGF周期变化。结果 Ni²⁺可呈时间依赖性抑制HGF的生长,造成细胞DNA损伤,并且可使细胞周期阻滞于S期,诱导细胞凋亡。高浓度的EGCG（>200 μmol/L）可明显抑制HGF生长,使细胞的DNA损伤。Ni²⁺与EGCG相互作用后增加了对HGF的抑制（P<0.01）,DNA的损伤及凋亡细胞也明显增加（P<0.05）。结论 Ni²⁺和EGCG相互作用后使Ni²⁺对HGF的抑制作用增强,加剧HGF的DNA损伤和细胞周期阻滞,并明显增加细胞凋亡。     

遗传性牙龈纤维瘤病的临床病例分析

目的探讨遗传性牙龈纤维瘤病（hereditary gingival fibromatosis,HGF）的临床表型和遗传学特征。方法回顾我院2008年5月收治的2例HGF患者,对其发病机制,临床表现及其相关综合征、遗传学特征、组织病理学表现、诊断分型及治疗预后进行分析。结果2例患者均符合非综合征型HGF。结论HGF属常染色体显性遗传性疾病,表型多样。     

卡波济肉瘤相关疱疹病毒体外感染人牙龈成纤维细胞初探

目的:探索卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)体外感染人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)的途径和方法,为研究KSHV导致口腔卡波济肉瘤病变的机制提供依据。方法:用12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA)刺激人原发性渗出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma,PEL)细胞系的BC-3细胞,收集细胞上清(含KSHV病毒颗粒),感染HGF细胞。观察细胞病变效应(cytopatric effect,CPE),采用RT-PCR和Western blot分别检测HGF细胞内KSHV编码基因的转录情况和蛋白表达水平。结果:KSHV感染HGF细胞后可出现CPE;感染后采用RT-PCR可检测到不同时间点ORF26和ORF73基因的转录;感染后12 h可检测到vIL-6蛋白的表达。结论:KSHV可感染HGF细胞并建立潜伏感染,为进一步研究KSHV导致的口腔KS发病机制提供了较好的体外模型。     

The effect of Nifedipine on the expression of type I collagen in gingival fibroblasts

Objective:To investigate the effect of nifedipine(calciumchannel blocker)on the expression of collagen in gingival fibroblasts invitro.Methods:Primarily gingival fibroblasts were cultured and incubated with various concentrations of nifedipine(108μg/L,360μg/L and 1200μg/L)for 5 days.Gingival fibroblasts were primarily cultured derived from nifedipine responders and non-responders in the presence of 360μg/L nifedipine.Enzyme-linked immunosorbent assay was used to evaluate the amount of type I collagen.Cell proliferation was measured by cell counting with evaluating MTT value.Results:The expressions of collagen and cell proliferation were significantly different among the high concentration groups and the others on the fifth day,especially higher in 360μg/L and 1200μg/L groups and also different among nifedipine responders and non-responders.Conclusion:The expression of collagen and cell proliferation may be concerned with the biological mechanism for gingival overgrowth.     

牙龈卟啉单胞菌重组牙龈蛋白酶刺激牙龈成纤维细胞内钙离子浓度变化及其机制

目的：探讨牙龈卟啉单胞菌重组牙龈蛋白酶（rRgpB）刺激蛋白酶激活受体（PAR）介导的人牙龈成纤维细胞（HGF）内钙离子浓度（[Ca²⁺]_i）的动态变化及细胞内信号转导通路。方法：流式细胞术检测 HGF 表达的 PAR 类型,CCK-8 法检测细胞增殖,以牙龈卟啉单胞菌rRgpB作用于 HGF,激光共聚焦显微镜观察 HGF 内[Ca²⁺]_i的动态变化及 PAR-1 拮抗剂的阻断作用;蛋白质印迹法检测 HGF 内 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、胞外信号调节激酶 1/2（ERK1/2）、p38 丝裂原激活的蛋白激酶（p38 MAPK）、p65 蛋白水平的变化。结果：HGF 表达 PAR-1 和 PAR-3,且 rRgpB 可促进 HGF 生长。细胞受到 rRgpB 作用后能激发瞬时增强的[Ca²⁺]_i荧光信号,并且这种作用能够被 PAR-1 拮抗剂完全阻断;与空白对照组比较,rRgpB 诱导细胞6、12?h后,JNK、ERK1/2、p65 磷酸化蛋白表达均显著上调（均P<0.05）,但 p38 MAPK 磷酸化蛋白水平未见明显变化（P>0.05）;PAR-1 拮抗剂成功抑制了 rRgpB 诱导的 JNK、ERK1/2、p65 磷酸化蛋白表达的上调。结论：rRgpB 通过 PAR-1 诱导 HGF 内[Ca²⁺]_i增加,并激活细胞内 JNK、ERK1/2、核因子κB 信号通路。     

A Study on the Ultrastructure and Gene Location of Hereditary Gingival Fibromatosis

Objective To ascertain the histological characteristics of hereditary gingival fibromatosis and the location of HGF gene.Methods A pedigree analysis of HGF was made.The ultrastructure of gingival overgrown tissue was observed by electron microscopy(EMS) and the location of the HGF gene defined with microsatellite markers.Results The HGF consisted of coarse collagen bundles and fibrocytes,epithelial cells,smooth muscle cells,etc.were abnormally arranged;the HGF locus had been mapped to chromosome 5q13-q22.Conclusion The gingival Pathological changes resemble “hamartoma” and the findings have implications for identification of the underlying genetic basis of HGF.     

硝苯地平对药物性牙龈增生患者牙龈成纤维细胞增殖的影响

目的研究硝苯地平致药物性牙龈增生患者牙龈成纤维细胞（NIFr—HGF）细胞周期增殖指数（PrI）的变化。方法以服用硝苯地平发生牙龈增生患者的牙龈组织为实验对象。龈切术获得组织样本,组织块培养法分离培养NIFr—HGF,在细胞培养液中分别添加10ng／mL和1000ng／mL硝苯地平进行干预（低、高浓度药物干预组）,分别于干预后18h和30h时间点收集细胞,流式细胞仪检测细胞周期并计算PrI。以不添加硝苯地平的NIFr—HGF作为空白对照。结果在药物作用时间相同条件下,两药物干预组NIFr—HGF细胞周期PrI明显高于空白对照组（P〈0．05）;低浓度与高浓度药物干预组间NIFr-HGF细胞周期PrI比较差异无统计学意义（P〉0．05）。在低浓度和高浓度药物干预组,干预30h细胞周期的PrI明显高于干预18h,分别为（57．54±0．019）％vs（21．15±0．011）％和（59．36±0．031）％vs（19．01±0．012）％（P〈0．05）。结论对于硝苯地平致药物性牙龈增生患者,NIFr—HGF细胞周期PrI随硝苯地平作用时间延长而增大,而与药物浓度无明显关系。     

硝苯地平对药物性牙龈增生患者牙龈成纤维细胞增殖的影响

目的 研究硝苯地平致药物性牙龈增生患者牙龈成纤维细胞(NIFr-HGF)细胞周期增殖指数(Prl)的变化.方法 以服用硝苯地平发生牙龈增生患者的牙龈组织为实验对象.龈切术获得组织样本,组织块培养法分离培养NIFr-HGF,在细胞培养液中分别添加10 ns/mL和1 000 ns/mL硝苯地平进行干预(低、高浓度药物干预组),分别于干预后18 h和30 h时间点收集细胞,流式细胞仪检测细胞周期并计算Prl.以不添加硝苯地平的NIFr-HGF作为空白对照.结果 在药物作用时间相同条件下,两药物干预组NIFr-HGF细胞周期Prl明显高于空白对照组(P<0.05);低浓度与高浓度药物干预组间NIFr-HGF细胞周期PrI比较差异无统计学意义(P>0.05).在低浓度和高浓度药物于预组,干预30 h细胞周期的PrI明显高于干预18 h,分别为(57.54±0.019)% vs (21.15±0.011)% 和(59.36±0.031)% vs (19.01.4±0.012)%(P<0.05).结论 对于硝苯地平致药物性牙龈增生患者,NIFr-HGF细胞周期PrI随硝苯地平作用时间延长而增大,而与药物浓度无明显关系.     

IL-1β对牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上ICAM-1表达调节的免疫组化研究

目的 :了解牙龈成纤维细胞 (humangingivalfibroblast,HGF)、牙周膜细胞 (periodontalligamentfibroblast,PDLF)上细胞间粘附分子 1(intercellularadhesionmolecule- 1,ICAM - 1)的表达以及白细胞介素 - 1β(interleukin -1β ,IL - 1β)作用后ICAM - 1的表达。 方法 :取正畸拔牙 ,体外培养牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞 ,检测其未受和受IL - 1β作用后ICAM - 1的表达情况 ,图像分析结果。结果 :正常牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞上ICAM - 1表达阴性或弱阳性 ,IL - 1β作用后 ,ICAM - 1表达强阳性 ,和对照组相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。 结论 :牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞受IL - 1β作用后ICAM - 1的表达增强 ,提示ICAM - 1参与牙周炎的病理过程。