Puma/Bbc3在细胞凋亡中的作用及其机制

Puma/Bbc3是新发现的Bcl 2家族BH3 only亚家族成员 ,在 p5 3依赖性和p5 3非依赖性细胞凋亡中都起到重要作用 ,Puma/Bbc3、Bcl 2 /Bcl xL、Bax/Bak之间的相互作用 ,线粒体膜通透性的改变 ,促凋亡分子的释放及Caspase级联效应是Puma/Bbc3凋亡效应的分子基础。     

凋亡抑制蛋白与细胞凋亡调控

Caspases蛋白酶激活级联反应在凋亡调控中起核心作用,它主要涉及两条途径:死亡受体介导途径与线粒体依赖途径。不同的凋亡刺激信号经各自特定的途径起始不同的caspases级联反应,进而激活下游的效应caspases,诱发细胞凋亡。正常情况下细胞凋亡受到严密的调控以防因失调而导致机体病变。凋亡抑制蛋白作为凋亡通路的重要调节者,主要包括Bcl2家族抗凋亡成员、死亡受体阻断分子和IAP蛋白家族等三类,它们分别作用于凋亡途径的不同位点,抑制凋亡的进行,其中Bcl2s蛋白主要作用于凋亡的线粒体依赖途径;死亡受体阻断分子抑制凋亡的死亡受体途径;而IAPs或在凋亡途径的高度保守步骤抑制效应酶caspase3、6与7的活化或其催化活性,因而对这两条途径均有抑制作用。对凋亡抑制蛋白的研究,不仅可进一步阐明凋亡的作用机理,而且有望为肿瘤以及其它一些恶性疾病的选择性治疗提供理想的途径,具有重要的理论和实践意义。     

Bim介导细胞凋亡的调控及临床意义

Bim是Bcl-2家族成员，只具有一个BH3结构域，可以通过拮抗Bcl-2等抗凋亡因子的作用或直接与Bax等相互作用并共同转位到线粒体膜上引起细胞色素C释放而诱导凋亡。敲除Bim的小鼠表现出自身免疫病，提示Bim参与免疫系统的自我稳态调节。Bim的转录可以被FoxO3、Myb、E2F及TGF-beta等因子调控；而JNK对其某些特定位点的磷酸化对调节Bim的活性起着重要作用；同时，Erk1/2可以使Bim特定位点磷酸化后被蛋白酶体降解。Bim与自身免疫病、退行性疾病以及肿瘤的发生发展及治疗都有密切的关系，因而，Bim在细胞凋亡中的基础研究必然为临床治疗提供理论基础与线索。     

线粒体在细胞凋亡中的作用及分子机制

本文综述了线粒体在细胞凋亡的启动和调控方面的最新进展。细胞受凋亡刺激,Bcl-2家族BH3蛋白(Bim,Bad,Bid等)和其他可能的途径将凋亡信号转入线粒体中,与Bcl-2家族凋亡诱导蛋白共同调节,诱导释放线粒体凋亡蛋白细胞色素c、caspase的二级线粒体激活蛋白Smac、凋亡诱导蛋白、内核酸酶G和Omi/HtrA2等,进而通过caspase依赖途径和非依赖途径诱导细胞凋亡。     

线粒体在细胞凋亡中的作用及分子机制

本文综述了线粒体在细胞凋亡的启动和调控方面的最新进展。细胞受凋亡刺激，Bcl-2家族BH3蛋白(Bim，Bad，Bid等)和其他可能的途径将凋亡信号转入线粒体中，与Bcl-2家族凋亡诱导蛋白共同调节，诱导释放线粒体凋亡蛋白细胞色素c、caspase的二级线粒体激活蛋白Smac、凋亡诱导蛋白、内核酸酶G和Omi/HtrA2等，进而通过caspase依赖途径和非依赖途径诱导细胞凋亡。     

米托蒽醌对HL-60细胞的促凋亡效应

目的 :探索米托蒽醌 (MTN)促HL 6 0细胞凋亡效应及其机理。方法 :取对数生长期HL 6 0细胞 ,不同浓度MTN作用不同时间后 ,利用MTT法、透射电镜、DNA电泳、流式细胞术观察MTN对HL 6 0细胞的抑制效应、促凋亡效应及凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达情况。结果 :(1)毫微克级的MTN对HL 6 0细胞有明显的抑制效应 ,且效应具有时间、剂量依赖关系。(2 )MTN作用后的HL 6 0细胞透射电镜观察胞膜完整、出现核碎裂、凋亡小体等形态学特征。DNA电泳出现 2 0 0bp左右的梯形条带。 (3)Bcl 2、Bax蛋白表达 :MTN作用于HL 6 0细胞相同时间 ,Bcl 2蛋白及Bcl 2蛋白与Bax蛋白比值 (Bcl 2 Bax)随MTN作用时间延长而下降。结论 :MTN具有诱导HL 6 0细胞凋亡作用 ,此过程中伴Bcl 2下调和Bcl 2 Bax的降低。提示MTN可能通过Bcl 2途径诱导HL 6 0细胞凋亡     

IL-6抑制地塞米松诱导的人骨髓瘤细胞凋亡

目的 :研究地塞米松 (Dexamethasone ,DEX)诱导人骨髓瘤细胞系Sko 0 0 7凋亡的分子机制及IL 6对此凋亡作用的抑制效应。方法 :MTT法观察DEX对Sko 0 0 7细胞生长的影响 ;碘化丙腚 (propidiumiodide ,PI)染色和流式细胞术分析Sko 0 0 7细胞经DEX处理后的凋亡情况 ;免疫印迹法检测Bcl 2家族抗凋亡蛋白———Bcl 2、Bcl XL 和Mcl 1在Sko 0 0 7细胞凋亡过程中的表达情况。结果 :DEX能够抑制Sko 0 0 7细胞增殖并诱导其发生凋亡 ;同时促进胞内Bcl 2降解。IL 6抑制DEX诱导的Sko 0 0 7细胞凋亡 ,并使Bcl 2表达水平恢复。结论 :IL 6可通过调节Bcl 2表达而实现其对DEX诱导的骨髓瘤细胞凋亡的抑制作用。     

大鼠额叶损伤后细胞凋亡及Bax与Bcl-2蛋白的表达变化

本研究目的为探讨大鼠额叶锐器损伤后细胞凋亡的变化规律及调控机制。通过电镜、TUNEL法及免疫组织化学染色方法检测细胞凋亡和Bax、Bcl2蛋白的表达变化,结果发现凋亡细胞在损伤后3h即可发现,24h达到高峰;伤后3hBax和Bcl2表达明显升高,Bax表达12h达到高峰,而Bcl2表达6h即达到高峰;伤后Bax/Bcl2比值上调,24h达到高峰,随后逐渐下降。结果表明大鼠额叶锐器伤后存在细胞凋亡,凋亡细胞数量的变化与伤后时程有关,Bax/Bcl2比值是决定细胞凋亡的重要因素。     

脑缺血再灌注后神经元和内皮细胞凋亡与Bc1-2和Bax表达的时相关系

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后受损伤的神经细胞和血管内皮细胞凋亡 ,以及Bcl 2和Bax蛋白表达与再灌注时间的关系。　方法　应用原位末端标记 (TUNEL)技术和免疫组织化学方法 ,分别观察脑缺血再灌注 2h、6h、12h、2 4h、2d、3d、7d、14d和 2 1d等不同时间点神经细胞和血管内皮细胞凋亡数及Bcl 2和Bax蛋白的表达。　结果　 1.脑缺血周围区 ,再灌注 2h神经细胞和内皮细胞凋亡开始明显增多 ,12～ 2 4h达高峰 ,之后逐渐减少 ,7～ 14d降至假手术组水平 ;血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡约 12h。 2 .Bcl 2蛋白表达于缺血再灌注 2h开始逐渐增强 ,12～ 2 4h达高峰 ,之后逐渐下降 ,至 7～ 14d接近假手术组水平 ;3.Bax蛋白表达于缺血再灌注 6h开始逐步增高 ,2 4～ 4 8h达高峰 ,之后逐渐下降 ,至 14d与假手术组已无显著性差异。 4 .Bcl 2表达与细胞凋亡的时相变化基本一致 ,Bax表达时相迟于细胞凋亡。　结论　细胞凋亡是脑缺血再灌注损伤细胞死亡的形式之一 ,血管内皮细胞凋亡迟于神经细胞凋亡 ,Bcl 2和Bax参与细胞凋亡的调节。     

HDV/HBV感染树鼠句肝组织中的肝细胞凋亡

目的探讨HDV/HBV感染树鼠句肝组织中Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达与HDV感染之间的关系,以及Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE在丁型肝炎肝细胞凋亡中的作用.方法采用免疫组化技术对HDV/HBV感染树鼠句肝组织中Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE的表达进行检测;应用原位末端标记技术对肝细胞凋亡进行检测.结果HDAg表达与Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达之间关系密切(P＜0.05),HDAg表达越强,Fas、FasL、Bax和ICE表达也越强,而Bcl2表达则越弱.Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达与肝细胞凋亡之间关系密切(P＜0.05),Fas、FasL、Bax和ICE表达越强,凋亡细胞越多;相反,Bcl2表达越强,凋亡细胞越少.结论肝细胞内HDAg表达可诱导Fas、FasL、Bax和ICE表达,但对Bcl2表达无明显诱导作用;Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE在肝细胞凋亡中起重要作用.     

HDV/HBV感染树鼩肝组织中的肝细胞凋亡

目的探讨 HDV/ HBV感染树鼠句肝组织中 Fas/ Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE表达与 HDV感染之间的关系 ,以及Fas/ Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE在丁型肝炎肝细胞凋亡中的作用。方法采用免疫组化技术对 HDV/ HBV感染树鼠句肝组织中 Fas/Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE的表达进行检测 ;应用原位末端标记技术对肝细胞凋亡进行检测。结果 HDAg表达与 Fas/ Fas L、Bcl2 /Bax和 ICE表达之间关系密切 ( P<0 .0 5 ) ,HDAg表达越强 ,Fas、Fas L、Bax和 ICE表达也越强 ,而 Bcl2 表达则越弱。 Fas/Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE表达与肝细胞凋亡之间关系密切 ( P<0 .0 5 ) ,Fas、Fas L、Bax和 ICE表达越强 ,凋亡细胞越多 ;相反 ,Bcl2 表达越强 ,凋亡细胞越少。结论肝细胞内 HDAg表达可诱导 Fas、Fas L、Bax和 ICE表达 ,但对 Bcl2 表达无明显诱导作用 ;Fas/ Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE在肝细胞凋亡中起重要作用。     

老年鼠外周血淋巴细胞凋亡及基因调控的研究

本文采用TUNEL法及流式细胞仪观察不同鼠龄外周血淋巴细胞凋亡及凋亡发生率 ,并用免疫组织化学检测Bcl 2、Bcl xl及Bax基因表达变化。结果发现老年鼠组外周血淋巴细胞群中存有典型的凋亡细胞 ,凋亡细胞发生率明显高于青年组。老年鼠PBL的Bcl 2 ,Bcl xl表达下调 ,而Bax的表达量明显增加。提示在衰老过程中存在着免疫细胞凋亡 ,其发生与相关调控基因的表达一致。     

胰岛淀粉样多肽对高糖刺激下INS-1细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的探讨高糖刺激下转染过表达人胰岛淀粉样多肽基因的大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)细胞凋亡的影响及其相关基因表达。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测高糖刺激后INS-1及转染人胰岛淀粉样多肽的INS-1细胞(h IAPP/INS-1)上清液的胰岛素水平;利用Hoechst33258染色检测细胞凋亡百分率;采用RTPCR方法检测高糖刺激培养后的Bcl2、Bax m RNA的水平。结果高糖刺激下,与未转染人胰岛淀粉样多肽INS-1细胞相比较,h IAPP/INS-1细胞胰岛素分泌功能显著下降,凋亡细胞比例明显增加,抗凋亡基因Bcl2 m RNA表达水平下调,促凋亡基因Bax m RNA表达水平上调,Bcl2/Bax比例明显降低。结论人胰岛淀粉样多肽上调促凋亡基因表达和抑制抗凋亡基因表达可能与糖尿病的发生发展相关。     

Caspase 9及其相关分子基因表达水平改变对同型半胱氨酸内皮凋亡的影响

目的 了解caspase 3信号传导通路中上游分子Bcl 2、细胞色素c（cytochrome-c）、caspase 9在同型半胱氨酸作用下的人脐静脉血管内皮细胞内的mRNA及蛋白表达水平的改变，揭示线粒体参与信号传导链在caspase 3所介导的内皮细胞凋亡过程中的作用。方法 培养人脐静脉内皮细胞，用不同浓度同型半胱氨酸作用于细胞后，用逆转录-聚合酶链反应及Western印迹分别检测各分子基因及蛋白表达水平的改变。结果 Bcl 2、cytochrome-c和caspase 9在同型半胱氨酸作用下mRNA及蛋白表达水平下降，并且随同型半胱氨酸浓度的升高而降低。结论 Bcl 2可能参与了同型半胱氨酸促进细胞凋亡的信号传导途径。Caspase 3没有通过上游分子apoptosome和caspase 9途径活化。这些研究结果提示，同型半胱氨酸诱导细胞凋亡并不是通过以线粒体凋亡通路为主的信号传导通路。     

Bcl-2家族与心肌细胞凋亡的研究进展

Bcl-2家族调节的“线粒体途径”是细胞凋亡发生的主要途径。心肌细胞凋亡是心室重构和心功能不全发生的一个重要的病理生理机制,缺血、缺氧、药物和病毒感染等因素能够通过多个信号转导途径引起心肌细胞中Bcl-2家族成员表达水平的变化,影响心肌细胞凋亡的发生。     

db/db自发性糖尿病小鼠睾丸生殖细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax表达

目的　研究糖尿病时生殖细胞凋亡及相关基因Bcl 2和Bax表达变化。方法　以脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)检测生殖细胞的凋亡 ,免疫组化ABC法检测凋亡相关基因Bcl 2和Bax的表达变化。结果　凋亡管数及凋亡阳性率糖尿病组均较正常高 ,而且随糖尿病病程进展呈明显增加趋势 ,对照组中随加龄二者也有增加。Bcl 2蛋白以散在的颗粒状大量分布于除精原细胞的各级生精细胞中 ,且以精子细胞质为最多。随糖尿病病变加重 ,Bcl 2表达减少 ,而且 ,糖尿病组比对照组Bcl 2表达率低。Bax蛋白比Bcl 2蛋白表达量少 ,以散在的颗粒状分布于曲细精管基底部的精原细胞和支持细胞中。随糖尿病病程进展和年龄增加 ,表达均呈增加趋势 ,而且 ,糖尿病组比对照组Bax表达率高。结论　在db/db自发性糖尿病小鼠睾丸 ,伴随生殖细胞凋亡增加 ,Bcl 2表达减少 ,Bax表达增加 ,凋亡及相关基因在糖尿病生殖功能障碍中起重要作用     

肝细胞凋亡机制及调控因素的研究进展

受体介导是肝细胞凋亡的最主要途径之一。Fas受体配体系统是激发肝细胞凋亡的最主要的受体介导途径。肝细胞是否发生凋亡主要受Bcl2家族的调控。Caspase3的激活是Fas介导肝细胞凋亡的中心环节。如何阻止肝细胞的过度凋亡,将成为肝病研究领域的新的热点。     

SPK1通过调节Bcl-2/Bax途径干扰LLC细胞凋亡

目的:研究鞘氨醇激酶1(SPK1)是否通过调节Bcl-2/Bax途径干扰小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞的凋亡。方法:通过构建SPK1基因小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,将siRNA转染至LLC细胞,在荧光显微镜下观察LLC细胞转染的情况。采用流式细胞术检测转染后LLC细胞的凋亡率,Western blot法检测转染后LLC细胞中SPK1、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,ELISA法检测Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果:转染后的LLC细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光。siRNA-SPK1组细胞凋亡明显高于siRNA-SPK1-Neg组(P0.01)。Western blot结果显示, siRNA-SPK1组中Bax蛋白表达明显较siRNA-SPK1-Neg组高,Bcl-2蛋白表达较siRNA-SPK1-Neg组低。ELISA结果显示siRNA-SPK1组中Bax表达水平显著高于siRNA-SPK1-Neg组(P0.01), siRNA-SPK1组中Bcl-2表达水平显著低于siRNA-SPK1-Neg组(P0.01)。结论:SPK1在LLC细胞中的表达与细胞凋亡率有关。SPK1可能是通过Bcl-2/Bax途径干扰LLC细胞凋亡。     

人参皂苷Rh2对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的影响,并初步探讨可能的分子机制。方法:采用流式细胞术Annexin V-PI双染法和MTT法检测MG-63细胞的凋亡变化;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、Cyt C和激活型caspase-3的蛋白水平。结果:流式细胞术和MTT法结果显示人参皂苷Rh2呈浓度依赖性促进MG-63细胞的凋亡。免疫印迹法结果表明,与空白对照组相比,给药组细胞Bax的蛋白表达显著增加,Bcl-2的蛋白表达显著减少,Bcl-2/Bax比值减少;线粒体中Cyt C蛋白表达显著减少,而胞浆中表达显著增加;激活型caspase-3蛋白水平显著增加(P0.05)。结论:人参皂苷Rh2呈浓度依赖性促进MG-63细胞的凋亡,其凋亡过程可能与调控线粒体凋亡通路相关蛋白有关。     

细胞凋亡中的钙调节

胞质Ca2 + 升高是细胞凋亡中Ca2 + 调节的经典模式 ,但近年来有证据表明胞质Ca2 + 下降同样能诱导细胞凋亡。目前研究发现 ,胞内Ca2 + 在细胞质、细胞核以及细胞钙库线粒体和内质网的动态平衡破坏和重新分布直接参与细胞凋亡信号的调控 ,而Bcl 2家族蛋白在细胞凋亡过程的胞内Ca2 + 调节及继后的一系列生理效应中发挥特殊作用。细胞凋亡中Ca2 + 调节的深入研究不但有助于阐明细胞凋亡的调控机理 ,同时为相关疾病防治和药物开发提供新的策略