不同类型子宫内膜组织中GnRH及其受体的表达及意义

目的 在蛋白水平检测促性腺激素释放激素(GnRH)及其受体(GnRH-R)在不同类型子宫内膜组织中的表达,探讨其可能存在的意义。方法 采用免疫组化法检测子宫内膜异位症(EMS)的在位内膜和异位内膜以及子宫内膜增生、子宫内膜癌和对照组子宫内膜上GnRH及GnRH-R的表达及分布。结果 GnRH和GnRH-R在EMS和对照组在位内膜持续表达,阳性物质位于腺上皮和间质上皮胞浆内,分泌期染色最强;异位内膜组织中二者的表达率近50％;子宫内膜增生组织中GnRH和GnRH-R表达率分别为92．3％、92．3％,而子宫内膜癌组织中则分别为58．8％、82．4％。结论 在子宫内膜组织中存在着GnRH及GnRH-R的蛋白表达,其在异位内膜组织、内膜增生和内膜癌中的高表达可能成为临床诊断指标和治疗的靶点。     

整合素α6在子宫内膜异位症中的表达分析

目的分析子宫内膜异位症(EMS)患者在位和异位内膜组织中整合素α6的表达和分布,初步探讨其在子宫内膜异位症发生中的意义。方法收集EMS患者的子宫内膜(15例)、异位病灶组织(14例),并以正常子宫内膜组织(12例)作为对照组。采用RT PCR、Westernblot和免疫组织化学等方法,对整合素α6在这些组织中的分布和表达进行分析。另取21例新鲜组织(EMS患者的在位内膜9例,异位病灶组织6例,正常子宫内膜6例)进行流式细胞分析。结果对照组在位内膜和EMS患者同期在位内膜的整合素α6分子的表达无显著性差异;EMS患者异位病灶组织的整合素α6分子表达较在位内膜明显降低(P<0.01);异位组织的整合素α6分子表达较对照组明显降低(P<0.01)。结论整合素α6在异位子宫内膜组织中的表达下调可能与EMS的发生发展有关。     

基质金属蛋白酶MMP-1及其抑制因子TIMP-1在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的研究基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其抑制因子TIMP-1mRNA和蛋白在子宫内膜异位症(EM s)异位和在位内膜组织中的表达,探讨其在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化S-P法检测43例EM s的异位和在位内膜及20例正常子宫内膜中MMP-1,TIMP-1mRNA及蛋白的表达水平。结果在EM s异位内膜中MMP-1mRNA及蛋白均呈高表达,TIMP-1mRNA及蛋白均呈低表达,与EM s在位内膜和正常内膜相比,差异有显著性,P<0.05。MMP-1/TIMP-1比值在异位内膜和在位内膜分别为1.46±0.57,1.15±0.38,均显著高于正常内膜(P<0.05);而且异位内膜中比值>1的几率(33/39,84.6%)明显高于在位内膜(P<0.05),两者呈显著负相关。异位内膜组织中MMP-1,TIMP-1mRNA及蛋白的表达无周期性变化,但与r-AFS临床分期有相关性(P<0.05)。结论异位内膜组织中MMP-1高表达,TIMP-1低表达,导致MMP-1/TIMP-1平衡失调,使异位内膜组织具有更强的侵袭能力,在EM s的发生发展中发挥重要作用。     

血管内皮生长因子受体KDR在子宫内膜异位症中的表达

 目的探讨血管内皮生长因子受体(VEGFR)胎肝激酶(KDR/flk-1)在子宫内膜异位症(内异症)患者中异位、在位子宫内膜及正常子宫内膜组织中的表达及意义.方法采用半定量RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)和免疫组化(SABC法)方法,从基因和蛋白质水平检测44例内异症患者子宫内膜组织(卵巢子宫内膜囊肿32份)及30份在位内膜组织(研究组)中VEGFRKDR的阳性表达率.选择40例非内异症患者的正常子宫内膜组织作为对照组.结果两组多数异位及在位子宫内膜组织中均可检测KDR的表达,内异症组在位内膜和异位内膜KDR相对表达强度明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);不同月经周期KDR的表达,在增殖期KDR相对表达强度高于分泌期,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 VEGF受体KDR在内异症在位内膜和异位内膜中有明显表达,可能VEGF受体参与内异症血管生成,促使异位病灶远处转移种植、浸润;在位内膜增殖期KDR相对表达强度高于分泌期可能与卵巢激素相关.     

HLA-G蛋白及基因在子宫内膜异位症在位和异位内膜中的表达

目的 探讨人类白细胞抗原G（HLA-G）基因及蛋白在子宫内膜异位症（EM）在位和异位内膜组织中的表达及其生物学意义。方法 应用免疫组化法和原位杂交法检测38例子宫腺肌症、30例卵巢子宫内膜异位症异位内膜及在位内膜、20例子宫肌瘤患者（对照组）在位子宫内膜中HLA-G蛋白和基因的表达。结果 HLA-G蛋白和基因在子宫内膜异位症患者异位和在位内膜组织中的表达均明显高于对照组（P〈0．01）,但在异位内膜和在位内膜的表达无明显差异（P〉0．05）。HLA-G蛋白在EM不同临床分期的表达无明显差异（P〉0．05）,在增生期和分泌期子宫内膜的表达无差异（P〉0．05）。结论 HLA-G的表达可能与子宫内膜异位症的发病有关。     

小分子GnRH-luffinS重组嵌合毒素的制备及其细胞毒性检测

目的:制备以小分子丝瓜素(luffin)S2为毒性部分,以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH)为导向部分的重组嵌合毒素GnRH-luffinS,体外检测其对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:重叠PCR方法扩增GnRH-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化.纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa, A549, HepG-2, SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒性.结果:成功构建了GnRH-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为93%.GnRH-luffinS对HeLa,A549,HepG-2和SP2/0的IC50分别为67.19, 70.42, 84.44和106.25 μg/ml,而对CEF无作用.结论:重组毒素GnRH-luffinS对肿瘤细胞有一定的杀伤作用.     

Livin 、survivin、caspase-3在子宫内膜异位症中的表达及其意义

 目的 研究Livin、survivin、caspase-3在子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)中的表达,探讨其在EMs发病中的作用.方法 采用原位杂交方法检测Livin 在40例EMs在位内膜、异位内膜及25例正常子宫内膜中的含量,同时用二步法免疫组化的方法检测survivin、caspase-3在上述三组中的表达.结果 Livin、survivin在EMs异位内膜与EMs在位内膜的表达强于正常子宫内膜,其差异有统计学意义(P＜0 05);caspase-3在EMs在位内膜与异位内膜的表达弱于正常子宫内膜,其差异有统计学意义(P＜0 05);无论是EMs组还是正常对照组,Livin、survivin、caspase-3在月经增生期和分泌期表达强度差异无统计学意义(P＞0 05).结论 子宫内膜异位症的发病可能与Livin、survivin、caspase-3的异常表达有关.     

HOXA10基因启动子区5'CpG岛甲基化在子宫内膜异位症中的作用

目的 检测HOXA10基因启动子区5'CpG岛甲基化状况,探讨其在子宫内膜异位症(EMS)发生中的作用.方法 收集2007年9月-2008年5月南方医科大学珠江医院妇产科30例EMS患者作为EMS组,同期25例正常妇女作为对照组,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测EMS组异位内膜组织(其中Ⅰ-Ⅱ期10例,Ⅲ-Ⅳ期20例)和对照组子宫内膜组织中HOXA10基因启动子区5'CpG岛甲基化情况,并比较其在不同EMS临床分型间的差异.结果 30例EMS患者异位内膜组织中检测到程度不等的甲基化,其中20例Ⅲ-Ⅳ期EMS患者中有11例发生甲基化,甲基化发生率为55%,10例Ⅰ-Ⅱ期EMS患者中有1例发生甲基化,甲基化发生率为10%,Ⅲ-Ⅳ期EMS患者异位内膜组织HOXA10基因启动子区5'CpG岛的甲基化发生率高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05).25例正常子宫内膜组织均未检测到甲基化.结论 HOXA10基因启动子区5'CpG岛甲基化在EMS的发生、发展中可能起着重要作用.     

子宫内膜异位症裸鼠模型的建立及内皮抑素治疗的实验研究

目的 建立人子宫内膜异位症(EMS)裸鼠皮下种植及腹腔注射模型,探讨内皮抑素在EMS治疗中的作用.方法 将4例确诊为EMS并行子宫切除患者的子宫内膜标本植入30只BALB/c雌性裸鼠体内,建立EMS裸鼠模型.其中皮下种植组20只,腹腔注射组10只,2周后比较两组的成模成功率.将皮下种植组成模裸鼠按随机数字表分为对照组(7只)与实验组(8只).实验组以2mg/(1kg·d)的剂量局部注射内皮抑索,对照组局部注射同体积PBS.注射后14d处死,采用免疫组化法检测裸鼠异位内膜中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平.结果 腹腔注射组7只成模,皮下种植组15只成模,两组成模成功率分别为70%和75%(P>0.05).实验组异位病灶VEGF表达水平(0.73±0.13)较对照组(1.09±0.12)明显降低(P<0.05).结论 内皮抑素可通过抑制血管生成和降低VEGF的表达发挥治疗EMS的作用.     

胰腺纤维化进程中大鼠胰腺GnRH及GnRHR、Bcl-2及Bax、胰岛β细胞功能的变化

目的 观察SD大鼠胰腺纤维化进展过程中胰腺促性腺激素释放激素(GnRH)及其受体(GnRHR)、Bcl-2和Bax mRNA水平及胰岛β细胞功能的变化.方法 25只SD雄性大鼠随机均分为5组:正常组及注药1、2、3、6周组.注药组采用反复腹腔内注射二乙基二硫代氨基甲酸盐(DDC)法制作胰腺纤维化大鼠模型,剂量为500mg/kg,每周2次,正常组注射等量生理盐水.所有大鼠灌胃法行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)测定血糖、血清胰岛素并计算空腹胰岛素与空腹血糖比值(FINS/FBG)、糖负荷30min时胰岛素与血糖比值[INS/PG(30min)]、糖负荷30min时胰岛素净增量与血糖净增量比值[ΔIRI/ΔBS(30min)]、血糖/胰岛素曲线下面积[GLU/(INS-AUC)]、稳态模型评估胰岛素抵抗(HOMA-IR)评价胰岛β细胞功能;光镜下观察胰腺病理改变;实时定量PCR法检测各组大鼠胰腺GnRH、GnRHR、Bcl-2及Bax mRNA表达水平.结果 光镜下观察胰腺切片,注药1、2、3周组可见炎症细胞浸润、空泡变化、小叶间隙增宽,注药6周组可见腺泡细胞呈纤维素样排列.OGTT试验中各组间各时间点血糖无差异(P>0.05);与正常组比较,注药3周组空腹胰岛素(FINS)水平升高,注药2、6周组15min及60min胰岛素、注药2周组30min胰岛素、注药1、2、6周组120min胰岛素水平下降(P<0.05).与正常组比较,注药3周组FINS/FBG和HOMA-IR明显升高,注药2周组FINS/FBG下降,注药2周组和注药6周组INS/PG(30min)、ΔIRI/ΔBS(30min)和INS-AUC下降(P<0.05).与正常组比较,注药1、2、3周组胰腺GnRH表达均下降,注药6周组表达上升,注药组胰腺GnRHR表达均降低,胰腺Bcl-2和Bax表达均增加,Bcl-2∶Bax比值升高(P<0.05).胰腺GnRH与FBG呈负相关(r=-0.443);胰腺GnRHR与糖负荷15min时血清胰岛素呈正相关(r=0.435),与Bcl-2∶Bax呈负相关(r=-0.813).结论 GnRHR可能参与胰腺纤维化早期阶段的Bcl-2和Bax介导的细胞凋亡,导致早期胰岛β细胞功能下降,减少胰岛素分泌,胰岛素抵抗增加.     

芳香化酶P450与环氧化酶-2在子宫内膜异位症和子宫腺肌病中的表达及意义

目的研究细胞色素芳香化酶P450（P450arom）和环氧化酶-2（COX-2）在子宫内膜异位症（EMs）和子宫腺肌病（AM）在位和异位内膜中的表达及相关性。方法应用免疫组化Envision法和半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测正常子宫内膜、EMs及AM的在位和异位内膜中P450arom及COX-2的蛋白与mRNA的表达,并进行相关性分析。结果P450arom和COX-2在正常子宫内膜中无表达或弱表达,二者在EMs和AM在位和异位内膜中的表达均高于正常子宫内膜,差异均有显著性意义（P〈0.05）。P450arom与COX-2在EMs和AM异位内膜中的表达均高于在位内膜,差异均有显著性意义（P〈0.05）。P450arom在EMs和AM增殖期和分泌期表达无差异（P〉0.05）。COX-2在正常子宫内膜、EMs分泌期表达高于增殖期,差异均有显著性意义（P〈0.05）,在AM表达不随月经周期变化。P450arom mRNA与COX-2mRNA在EMs中的表达水平呈正相关（r=0.964,P〈0.01）;在AM中的表达水平亦呈正相关（r=0.813,P〈0.01）。结论P450arom和COX-2在EMs和AM中呈过表达,与EMs和AM的发病相关,二者协同作用促进EMs和AM的发生发展。     

腹腔镜手术前后联合曲谱瑞林治疗IV期子宫内膜异位症的比较分析

目的：探讨腹腔镜手术与曲谱瑞林联合治疗Ⅳ期子宫内膜异位症（EM）的最优方式。方法：对62例Ⅳ期EM患者行回顾性分析,32例于腹腔镜术后肌注曲谱瑞林,3．75mg,每月1次,连续3月;30例先使用3个月曲谱瑞林后再手术,用法同前。比较二者围手术期情况和远期预后。结果：两组手术时间分别为（126±29）min和（79±26）min,出血量为（390±32）ml和（180±60）ml,差异均有显著性（P〈0．05）。随访2～5年,其妊娠率、复发率及盆腔疼痛缓解率差异均无显著性（P〉0．05）。结论：与术后使用GnRH—a类药物相比,腹腔镜手术前用药疗效相似,但更有利于手术的实施。     

HER-2、Syk在胃癌中的表达及其临床意义

 目的 探讨人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2, HER-2)、脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase, Syk)在胃癌中的表达及与胃癌的相关关系.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和SP免疫组化技术,检测62例胃癌及癌旁组织中HER-2、Syk表达状况,与胃癌临床病理检测结果进行相关性统计分析.结果 胃癌组织中HER-2 mRNA、HER-2蛋白阳性率分别是11.29%和30.65%,均高于癌旁组织(P＜0.05);Syk mRNA、Syk蛋白阳性率分别为27.42%和22.58%,均低于癌旁组织(P＜0.05).淋巴结转移的胃癌组织中,HER-2 mRNA、HER-2蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移组(P＜0.05),Syk mRNA、Syk蛋白阳性表达率均低于无淋巴结转移组(P＜0.05).HER-2表达与胃癌患病年龄、性别、肿瘤大小、部位均无相关性(P＞0.05),与肿瘤浸润深度、病理分期相关(P＜0.05),Syk表达与胃癌上述临床病理结果均无相关性(P＞0.05).HER-2蛋白与Syk蛋白在胃癌组织中的表达呈负相关.结论 胃癌发生和转移与HER-2表达和Syk表达密切相关.检测HER-2、Syk对胃癌的治疗及其预后评估具有指导意义.     

基质金属蛋白酶-2,9及其抑制因子在增生性瘢痕中的表达特征及意义

 目的 探讨3种不同的基质金属蛋白酶-2, 9(MMP-2, 9)及其抑制因子(TIMP-2)在不同形成时期的增生性瘢痕中的基因表达和蛋白含量的变化.方法 用病理学技术检测增生性瘢痕和正常皮肤的结构特征后,分别用RT-PCR和Western blot方法检测这3种基因在16例不同发生时期的增生性瘢痕和8例正常皮肤组织中的基因表达和蛋白含量的变化规律.结果 在正常皮肤组织内,MMP-2, 9和TIMP-2的基因表达较弱,蛋白含量较低;而在增殖期的增生性瘢痕中这2种MMPs和TIMP2基因表达水平和蛋白含量都显著升高(P＜0.05),在成熟期的瘢痕中,MMP-2, 9基因表达量降低至正常皮肤水平,但蛋白含量仍保持较高水平,明显高于正常皮肤(P＜0.05),TIMP-2的mRNA水平和蛋白含量则降低至正常皮肤相近的水平.结论 MMP-2, 9和TIMP-2表达增强可能是增生性瘢痕形成的机制之一,而MMP-2, 9蛋白含量的增多,TIMP-2蛋白含量减少可能与增生性瘢痕达到相对稳定的成熟期有关.     

IL-23在鼻息肉中的表达及其意义

目的检测IL-23在鼻息肉（nasal polyp,NP）组织中的表达,探讨其在鼻息肉发病中的作用。方法收集15例鼻息肉标本（NP组）和15例在鼻中隔偏曲矫正手术中根据需要部分切除下鼻甲黏膜组织（对照组）,分别采用免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测两组IL-23蛋白和IL-23p19mRNA表达水平。结果 NP组IL-23蛋白阳性表达炎性浸润细胞数明显多于对照组,单位目标面积光密度均值（0.321±0.023）明显高于对照组（0.199±0.011）,差异有统计学意义（P〈0.01）;IL-23p19mRNA表达水平（0.676±0.077）明显高于对照组（0.212±0.015）,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论IL-23可能在参与了NP发病过程。     

束缚应激对心脏PPARα、PPARβ和M—CPT—ImRNA表达的影响

目的观察束缚应激对雄性Wistar大鼠心肌过氧化体增殖物激活型受体α（PPARα）、PPARβ和肌型肉碱棕榈酰转移酶-I（M—CPT—I）mRNA表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠,采用束缚应激模型,实验组大鼠每天给予束缚应激2次,每次3h。按照有无应激和应激时问长短分为正常对照组（C）、束缚1W（R1）、束缚2w（R2）和束缚4W组（R4）。采用逆转录酶多聚酶链反应（RT．PCR）检测各组心肌PPARα、PPARβ和M-CPT-I的mRNA表达水平。结果束缚应激1、2、4W大鼠心肌PPARαmRNA和M—CPT—ImRNA水平较正常对照组明显升高（P〈0．01或P〈0．05）;心肌PPARβmRNA水平较正常对照组变化不明显（P〉0．05）。结论束缚应激上调心肌PPARα和M—CPT—ImRNA表达,对PPARβ无明显影响,PPARot可能促进束缚应激大鼠脂肪酸氧化增加。     

Grp-94在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的研究葡萄糖调节蛋白94（Grp-94）在子宫内膜癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法应用免疫组化S—P法检测50例子宫内膜癌组织中Grp-94表达,同时回顾性研究了表达与子宫内膜癌发生、浸润及转移等临床病理学参数的关系。结果在50例子宫内膜癌组织中,Grp-94的阳性表达率为68．0％（34／50）,对照组织中Grp-94的阳性表达率为6．0％（3／50）,子宫内膜癌组织中的阳性表达率高于对照组织的阳性表达率,两组间比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。不同分化程度高分化、中分化、低分化Grp-94的阳性表达检出率分别为56．5％、70．0％和82.4％。三者比较,r=6．0．P〈0．05．统计学差异有显著性,随着分化程度的恶化,Grp-94的阳性表达增高。无淋巴结和有淋巴结转移Grp-94的阳性表达检出率分别为40．0％和86．7％,统计学检验显示,χ^2=24．0,P〈0．05,Grp-94的阳性表达在子宫内膜癌组织的表达升高与淋巴结转移明显相关。临床分期T Ⅰ～Ⅱ和TⅢ～ⅣGrp-94的阳性表达率分别为69．4％、64.3％,两者比较,χ^2=0．4,P〉0．05,统计差异无显著性。结论Grp-94与子宫内膜癌的发生发展关系密切,可成为子宫内膜癌转移及预后的标志物,与临床分期关系不密切。