当归多糖对小鼠衰老造血干细胞细胞周期蛋白的调控

目的观察当归多糖(ASP)对小鼠造血干细胞(HSC)细胞周期调控蛋白表达的影响,探讨ASP调控HSC衰老的可能机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为对照组、衰老组、ASP干预对照组和ASP干预衰老组,衰老组采用X线全身均匀照射,建立小鼠HSC衰老模型;ASP干预衰老组在照射期间给予ASP灌胃;对照组和ASP干预对照组分别给予NS和ASP灌胃。免疫磁珠分离HSC,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色和混合集落培养(CFU-Mix)观察HSC生物学特性变化;流式细胞术分析细胞周期;Western blot检测P16、P21、CDK2、CDK6、CyclinD及CyclinE表达。结果与对照组比较,X线能显著增加衰老对照组HSC SA-β-Gal染色阳性率、G1期比例及P16、P21表达;降低CFU-Mix、S期比例及CDK6、CyclinD和CyclinE表达。与衰老组比较,ASP能显著抑制衰老HSC SA-β-Gal染色阳性率、G1期比例及P16和P21表达的增加;抑制S期比例、CFU-Mix、CDK6、CyclinD及CyclinE表达的减少;而对CDK2表达无影响。结论 ASP可能通过调节P16、P21、CDK6、CyclinD及CyclinE表达延缓小鼠HSC衰老。     

机械拉伸对成骨细胞增殖及IGF-1 mRNA表达的影响

应用体外周期性机械拉伸装置对大鼠成骨细胞施加拉伸刺激。研究了应变15％,频率20次／min的拉伸刺激下不同加载时间对成骨细胞增殖及IGF-1 mRNA表达的影响。发现在受载12 h时,细胞相对增殖指数最大,随受载时间的增加而逐渐趋向于1,同时IGF-1 mRNA表达显著增加。说明成骨细胞对周期性机械拉伸刺激的响应,可能是通过增强成骨细胞IGF-1的自分泌作用来发挥其促增殖的生物学效应。并且受载的成骨细胞经过自身调控后,逐渐适应于新的力学环境,保持一种新的平衡状态。     

体外共培养大鼠骨髓间充质干细胞对肝星状细胞增殖的影响:CyclinD1与P27表达调控

背景:在肝纤维化发生发展过程中,肝星状细胞起着关键作用。研究证实骨髓间充质干细胞移植可作为治疗肝纤维化的方法,但其逆转肝纤维化的机制不明。目的:探讨体外共培养条件下,大鼠骨髓间充质干细胞对肝星状细胞增殖的调控机制。方法:实验组在半透膜上接种大鼠骨髓间充质干细胞,在6孔塑料培养板上接种肝星状细胞,建立上下双层细胞共培养体系;对照组将大鼠骨髓间充质干细胞更换为成纤维细胞;空白组仅行肝星状细胞单独培养。WST-8法检测肝星状细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测肝星状细胞CyclinD1和P27mRNA的表达,Westernblot检测肝星状细胞CyclinD1和P27蛋白的表达。结果与结论:与空白组、对照组比较,实验组共培养24,48,72h肝星状细胞生长抑制率均显著升高(P0.01);共培养72hG0/G1期细胞显著增加(P0.01),S期细胞显著减少(P0.01),可阻滞肝星状细胞由G0/G1期向S期转换。共培养24h,实验组CyclinD1mRNA及蛋白表达开始下调,至72h时表达量显著低于对照组、空白组(P0.01);共培养全过程中各组p27mRNA的表达无明显差异(P0.05),共培养24h时实验组p27蛋白表达较对照组、空白组均显著上调(P0.01)。结果证实大鼠骨髓间充质干细胞能够抑制肝星状细胞的增殖,其机制可能是通过下调CyclinD1表达、上调P27蛋白表达,使细胞周期停滞于G0/G1期实现的。     

ERK信号分子介导周期机械拉伸诱导的骨髓间充质干细胞增殖

目的 研究周期机械拉伸加载对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响及其相关力信号转导分子。方法 应用周期机械拉伸加载装置研究不同参数的周期机械拉伸加载对大鼠骨髓间充质干细胞生长的影响。RT-PCR法检测c-fos mRNA表达的变化,Western blotting分析细胞外信号调节激酶（ERK1/2）磷酸化水平及c-fos蛋白表达的变化。结果 适宜的机械拉伸加载可以明显促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖,在频率1 Hz、形变量10％、拉伸15 min且静止6 h的条件下可以使细胞数量增加到对照组的1.4倍,c-fos mRNA和蛋白的表达显著增加。Western blotting检测证实,周期性机械拉伸加载明显促进ERK1/2磷酸化,却不影响ERK1/2总蛋白（t-ERK1/2）的表达水平。抑制剂PD98059显著抑制了机械拉伸对细胞增殖的促进作用,同时抑制拉伸诱导的ERK1/2磷酸化及c-fos基因和蛋白的表达水平。结论 ERK1/2信号分子的活化在周期性机械拉伸加载调控大鼠骨髓间充质干细胞增殖的过程中起着重要作用,且该通路可能通过转录因子的调节促进rBMSCs的增殖。     

高迁移率族蛋白1对大鼠纤维母细胞样滑膜细胞增殖周期的调控作用

目的:探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1对滑膜细胞增殖周期的调控作用及可能机制。方法:将常规培养大鼠滑膜细胞株RSC364细胞随机分为正常对照组和10μg/LHMGB1刺激组,分别培养6、12和24小时,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞中Cyclin D1/CDK4蛋白表达;免疫细胞化学检测PCNA和p21蛋白表达。结果:HMGB1作用至12和24小时,处于G0/G1期的细胞逐渐减少,G2/M期细胞增多,增殖指数升高分别为(68.00±1.42)和(69.61±5.86),与正常对照组(53.83±4.95)和6小时组(55.98±6.34)相比差异具有统计学意义(P0.01或0.05)。PCNA和p21蛋白阳性信号均表达于滑膜细胞核内,随着作用时间延长,PCNA蛋白表达增强,阳性细胞数目逐渐增多,而p21蛋白表达减低,阳性细胞数目逐渐下降。HMGB1作用6～24小时CyclinD1蛋白相对表达量逐渐增加,分别为(1.42±0.02)、(1.65±0.03)和(1.67±0.01),与正常对照组(1.00±0.01)相比差异具有显著统计学意义(P0.01),CDK4蛋白表达量也显著增加分别为(1.26±0.23)、(1.29±0.07)和(1.26±0.03),与正常对照组(1.00±0.0.25)相比差异具有显著统计学意义(P0.01),但随着刺激时间的延长,其表达量无明显变化。结论:HMGB1可能通过上调细胞周期调控蛋白CyclinD1/CDK4的表达,下调细胞周期抑制剂p21的表达,促进滑膜细胞的增殖和分化。     

氯喹对人肺癌A549细胞周期阻滞及增殖抑制的机制

目的 探讨氯喹抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期的作用及其分子机制。 方法 应用MTT法和流式细胞术分别检测氯喹对A549细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting检测氯喹对A549细胞周期蛋白(cyclin E1)和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK2）、肿瘤抑制蛋白PTEN以及细胞周期抑制蛋白P21、P27表达水平的影响。 结果 氯喹能够抑制A549细胞增殖,并且具有时间-剂量依赖性。氯喹可以诱导细胞凋亡,不同浓度的氯喹作用于A549细胞24h后,细胞凋亡率随着作用剂量的增加而升高。进一步的研究发现,氯喹还能够阻滞细胞周期于G₀/G₁期,降低cyclinE1和CDK2表达水平,明显提高PTEN、P21和P27的表达水平。 结论 氯喹具有抑制肺癌细胞增殖、促进其凋亡和阻滞细胞周期的作用,其机制可能与其抑制CyclinE1和CDK2表达,并且上调PTEN、P21和P27蛋白的表达有关。     

干扰CDK4和CyclinD1的表达抑制MCF-7细胞的增殖

目前研究表明,CyclinD1、CDK4参与细胞周期G1/S期的转换,在多种恶性肿痛中存在CyclinD1、CDK4表达增加,并且 CyclinD1、CDK4的表达水平与肿瘤的恶性程度成正相关[1].鉴于RNA干扰技术可以明显地抑制靶基因的表达,同时CyclinD1和CDK4在细胞周期调控中的重要作用,本研究选择以CyclinD1、CDK4为靶点进行了RNA干扰,观察其对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用.     

人外周血活化淋巴细胞中Survivin蛋白表达的分子机制研究

目的:探讨活化淋巴细胞中Survivin蛋白诱导表达的信号转导通路、分子级联反应和生物效应,揭示Survivin蛋白表达调控的分子机制.方法:用PHA和rhIL-2刺激培养人外周血单个核细胞,附加JAK抑制剂-AG490的处理,以Western blot检测Survivin和相关蛋白的表达;以流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞分裂增殖.结果:刺激培养的细胞按照时序先后出现的分子和细胞学反应为:Stat3和Stat5磷酸化→CyclinD3、CyclinE蛋白水平上调→细胞进入S期及Survivin蛋白起始表达→细胞有丝分裂及Survivin蛋白表达水平增加.AG490对于上述反应均呈现明显的抑制作用,但对周期抑制蛋白P21和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平没有影响.结论:Survivin蛋白的表达依赖JAK-Stat信号转导通路的早期活化,通过上调CyclinD3和CyclinE周期蛋白水平,启动细胞周期的运行,诱导Survivin蛋白的周期时相依赖性表达,参与细胞有丝分裂与增殖.     

cyclinD1过表达对子宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞增殖及上皮间质转化的影响北大核心CSCD

目的 探讨cyclin D1过表达对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、分化的影响及其他信号分子的变化情况.方法 采用PCR法扩增cyclin D1基因全长,构建cyclin D1-pcDNA3.1质粒转染人乳头状瘤病毒16阳性的SiHa细胞,筛选cyclin D1稳定过表达细胞株.采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和Western blot分别检测转染细胞cyclin D1 mRNA和蛋白表达.采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法绘制细胞生长曲线,采用RT-PCR法和Western blot检测转染细胞CK7、E-cadherin、波形蛋白、Snail基因的mRNA和蛋白表达;采用RT-PCR法检测增殖分化相关基因CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E、Rb、E2F、E6/E7、Ki-67基因的mRNA表达水平.对细胞同步化处理,用RT-PCR法检测细胞周期不同时间点cyclin D1及p21基因的mRNA表达情况.结果 成功构建cyclin D1稳定过表达的G-3细胞株.生长曲线及Ki-67 mRNA升高（P〈0.05）提示G-3细胞增殖速度加快,G-3细胞中波形蛋白、Snail基因和蛋白表达明显增加（均P〈0.05）,E-cadherin、CK7基因和蛋白表达明显降低,提示转染细胞发生了上皮间质转化.cyclin D1过表达后,CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E表达增加,Rb、E2F、E6/E7、p16表达无明显改变,p21与cyclin D1表达趋势基本一致,在细胞周期不同时间点表达存在波动性.结论 转染诱导cyclin D1过表达可促进SiHa细胞增殖和上皮间质转化,这一过程中伴随着CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E基因表达的上调.cyclin D1过表达时,p21表达量也增高,可能通过影响波形蛋白表达参与了对SiHa细胞上皮间质转化的调控.     

周期性机械拉伸对类风湿关节炎和骨关节炎成纤维样滑膜细胞BMP-2表达的影响

目的 研究周期性拉伸对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)和骨关节炎(osteoarthritis,OA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)中骨形态发生蛋白-2 (bone morphogenetic protein2,BMP2)表达的影响,探讨力学刺激在不同病理过程中对滑膜组织的作用。方法 在正常条件和炎症条件下使用Flex cell 4000周期性力学加载系统,分别对正常、RA、OA来源的人膝关节FLS施加连续2 h和6 h的6%、0.5 Hz的拉应力,比较测定BMP-2 mRNA表达的差异性。结果 2 h的机械拉伸对3种FLS中BMP-2 mRNA的水平均无显著性影响,6 h的机械拉伸能够显著升高RA FLS中BMP-2 mRNA的水平。炎症因子(IL-1β)作用2 h对正常FLS无显著影响,作用6 h使其中BMP-2 mRNA的水平显著升高; IL-1β作用2 h和6 h均使RA FLS中BMP-2 mRNA的水平显著升高,但只有作用2 h才使OA FLS中BMP-2 mRNA的水平显著升高,作用6 h对OA FLS中BMP-2 mRNA的水平无显著影响;炎症因子和力学刺激共同作用2 h使正常和RA FLS中BMP-2 mRNA的水平显著升高,作用6 h使正常、RA、OA FLS中BMP-2 mRNA水平均显著升高。结论 正常、RA、OA FLS中BMP-2 mRNA对于力学刺激和炎症因子的响应不同,结果提示在RA和OA发病机制中,炎症因子的影响可能比力学刺激更强;力学刺激和IL-1β共同作用6 h后对OA FLS中BMP-2 mRNA产生协同效应,提示两者联合作用对OA病情发展具有一定作用。     

抑制cyclinD1表达对乳腺癌细胞增殖及cyclinE、CDK2和p21cip1转录的影响

目的　分析探讨人乳腺癌细胞中 cyclin D1的表达受到反义 RNA抑制后 ,细胞增殖能力的变化以及cyclin E,CDK2和 p2 1cip1 (cip1/ waf1/ sdi1)基因表达受到的影响。　方法　将表达 cyclin D1反义 RNA的重组质粒转入人乳腺癌细胞 ,由此抑制细胞中 cyclin D1的表达 ,然后分析细胞生长速率和各时相细胞分布比例的变化 ,并通过Northern blot分析有关基因的表达水平。　结果　 cyclin D1表达受到抑制的细胞与对照相比 ,细胞增殖速率明显下降 ,培养至第 6 d时 ,生长抑制率为 5 4%。细胞周期各时相的分布比例也有较大的变化 ,G1期细胞比例上升 ,而 S期及 G2 / M期细胞比例下降。cyclin E和 CDK2的 m RNA水平显示出有不同程度的下降 ,而 p2 1cip1的表达无明显变化。　结论　 cyclin D1表达的抑制可明显减弱人乳腺癌细胞的异常增殖 ,同时表明同为细胞周期调控基因的 cyclin E和CDK2的表达与 cyclin D1的表达密切相关 ,而 p2 1cip1的表达不受 cyclin D1的影响     

线粒体铁蛋白过表达抑制神经肿瘤细胞的增长与细胞铁代谢及细胞周期蛋白表达相关

目的 探讨过表达线粒体铁蛋白（MtFt） 抑制成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖机制。方法 以过表达MtFt的成神经母细胞瘤细胞MtFt-SY5Y为实验模型,野生型SH-SY5Y和pcDNA3.1-SY5Y（空质粒对照）为实验对照,运用流式细胞术、Western blotting技术等检测了MtFt对SH-SY5Y肿瘤细胞增殖的影响及铁代谢相关蛋白转铁蛋白受体1 （TfR1）,铁蛋白和细胞周期相关蛋白（cyclin）及其依赖性激酶（CDK）、cyclinD1、CDK4、cyclinE、CDK2的表达变化。结果 MtFt过表达通过调节细胞内铁代谢显著抑制了神经肿瘤细胞SH-SY5Y的增殖,与对照组相比,MtFt-SY5Y细胞增殖速度慢了近4倍。MtFt造成了细胞质内铁缺乏, TfR1表达显著上调,而铁蛋白H 亚基（H-ferritin）显著下调。同时 cyclinD1与CDK2蛋白表达显著降低,cyclinE蛋白表达显著上升,CDK4蛋白表达无显著性差异。结论 MtFt过表达能够显著抑制神经肿瘤细胞的生长,其机制可能是通过调节细胞内铁代谢,从而影响细胞周期相关蛋白及其周期蛋白激酶的表达。     

1α,25（OH）2D3通过阻滞细胞周期抑制胃癌细胞系增殖简

 目的 研究1α,25(OH) 2D3对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响,并探讨其相关的作用机制。方法 BGC-823和SGC-7901胃癌细胞株分别给予终浓度为10-10~10-7mol/L的1α,25(OH) 2D3处理72h,用MTT法检测细胞抑制率;用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-qPCR技术检测细胞周期相关基因P21、cyclinD1、cyclinE1和CDK6 mRNA表达。 结果1α,25(OH) 2D3对胃癌细胞的增殖抑制率具有浓度依赖性, 1α,25(OH) 2D3干预导致BGC-823和SGC-7901细胞株G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低 (P<0.05); 1α,25(OH) 2D3干预后,BGC-823和SGC-7901胃癌细胞P21 mRNA表达升高(P<0.01),而cyclinD1、cyclinE1和CDK6 mRNA表达降低(P<0.01)。结论 1α,25(OH) 2D3抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,可能与上调P21,下调cyclinD1、cyclinE1和CDK6的表达有关。     

Roles of Cx43 and AKAP95 in ovarian cancer tissues in G1/S phase

Objective: The purpose of this study was to investigate the expression of A-kinase anchor protein 95 (AKAP95), cell cycle protein E1 (cyclinE1) and D1 (cyclinD1), and gap junction protein connexin 43 (Cx43) in ovarian cancer tissues, the relationship between four proteins and clinicopathologic parameters, and the correlation between these proteins. Methods: The expression of proteins in 54 cases of ovarian cancer tissues was detected by immunohistochemical method. Results: The positive expression rates of AKAP95, cyclinD1 and cyclinE1 in ovarian cancer tissues were 72.22%, 66.67% and 79.63%, respectively, which were higher than that of ovarian pericarcinoma tissues expressing as 33.33%, 25% and 8.30% (P<0.05). The positive expression rate of Cx43 in ovarian cancer tissues was 40.74%, which was lower than that of ovarian pericarcinoma tissues expressing as 75%; respectively, and the difference was statistically significant between groups (P<0.05). The expression of cyclinD1 in ovarian cancer tissues was related to the histologic type (P<0.05) while it showed no correlation with the degree of differentiation (P>0.05). Additionally, the expression of AKAP95, Cx43 and cyclinE1 in ovarian cancer tissues showed no correlation with the degree of differentiation or the histologic type (P>0.05). Protein expressions of AKAP95, Cx43 and cyclinE1 were correlated with each other (P<0.05), and the expressions of cyclinD1, cyclinE1 and Cx43 were also correlated with each other (P<0.05). However, AKAP95 and cyclinD1 showed no correlation (P>0.05). Conclusion: AKAP95, cyclinD1 and cyclinE1 play an important role in promoting the process of ovarian cancer formation. The tumor inhibitory effects of Cx43 protein on the pathogenesis of ovarian cancer were weakened. The expression of cyclinD1 in ovarian cancer tissues is related to the histologic type while it shows no correlation with the degree of differentiation. Additionally, the expression of AKAP95, Cx43 and cyclinE1 in ovarian cancer tissues shows no correlation with the degree of differentiation or the histologic type. AKAP95 expression is correlated with Cx43 and cyclinE1 expression; Cx43 expression is correlated with AKAP95, cyclinD1 and cyclinE1 expression; cyclinE1 expression is correlated with AKAP95, Cx43, cyclinD1 expression; cyclinD1 expression is correlated with Cx43 and cyclinE1 expression, while AKAP95 and cyclinD1 show no correlation.     

p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长及周期相关基因的影响

目的探讨抑癌基因p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长以及周期相关基因cyclinD1、cyclinE、CDK2和CDK4表达的影响.方法将正义的p53真核表达载体导人MCF-7细胞,获得稳定表达正义p53的细胞模型,并经PCR和Western blot鉴定.分析了细胞的各种生长特性包括生长曲线、血清依赖、单细胞克隆形成、软琼脂成集落等;利用TdR双阻断法同步化细胞,流式细胞术分析了细胞周期;Western blot检测了其他周期相关基因的表达.结果p53的高表达可以使细胞的生长速度减慢、血清依赖性增加、单细胞克隆成集落能力降低、非锚定依赖性生长能力减弱,S期的进程减缓,一定程度上抑制cyclinD1和CDK2的表达,cyclinE和CDK4的表达未见明显变化.结论抑癌基因p53的表达能够抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长,并可能通过阻抑cyclinD1和CDK2的表达而阻抑细胞周期S期进程,实现其调节功能.     

Coronarin D suppresses proliferation,invasion and migration of glioma cells via activating JNK signaling pathway

Coronarin D (CD) is one of the primary components of the Hedychium coronarium rhizomes and possesses strong anticancer effects via preventing cell growth in many cancer cells. The study was aimed to explore the molecular mechanisms underlying effects of CD on proliferation, invasion and migration of gliomas cells. Gliomas cell lines U251 was employed for detecting cells viability and proliferation by Cell Counting Kit-8 assay and colony formation assay. In addition, scratch wound healing and transwell assays were performed for the analysis of U251 cells invasion and migration respectively. Furthermore, the expression of p-Akt/Akt, p-p38/p38, p-ERK/ERK, p-JNK/JNK, p-STAT3/STAT3, cyclinE, cyclinD1, CTGF, MMP-2 and MMP-9 were measured by Western blotting. CD could suppress proliferation, invasion and migration of glioma cells and induced reduction of cyclinE, cyclinD1, CTGF, MMP-2 and MMP-9 expression via activating JNK signaling pathway. CD treatment suppressed expression of p-AKT, p38, and ERK and elevated expression of p-JNK in concentration- and time-dependent manners. Moreover, CD significantly induced reduction of phosphorylated STAT3 expression. Exposure of cells to the JNK-specific inhibitor SP600125 reduced the cytotoxicity effects of CD, combination of CD and SP600125 corrected overexpression of phosphorylated JNK and reduction of phosphorylated STAT3. Pretreatment of SP600125 also improves gliomas cells viability and invasion. The results revealed that CD may remarkably suppress gliomas cell growth through JNK and STAT3 signaling. In present study, these findings revealed that CD induces suppression of cell viability in gliomas cells and possesses therapeutic effect on gliomas.