肾气虚型体外受精-胚胎移植患者卵巢颗粒细胞基因表达研究

目的:利用基因组学技术观察肾气虚证不孕患者与正常女性卵巢颗粒细胞的差异基因,进一步筛选差异基因并行基因功能分析,以期找到中医理论在不孕方面的科学依据。方法:选取肾气虚证的行体外受精-胚胎移植(IVFET)的不孕患者33例作为肾气虚组,选取33例因男方因素行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI-ET)的正常女性作为正常对照组。所有患者均在取卵日提取成熟卵泡颗粒细胞RNA,运用高通量测序技术分析,研究肾气虚组与正常对照组的基因表达的差异。结果:1肾气虚组和正常对照组间的卵巢颗粒细胞存在差异表达基因。2差异表达因共395条,其中,肾气虚组比正常对照组表达水平上调的有304条,表达水平下调的有91条。涉及细胞凋亡、信号转导、炎症反应,生物合成,免疫调节应答等39个生物学途径,其中涉及细胞凋亡的基因BCL2L12,BCL2L12P1,BCL2L13,BAX,P53AIP1有明显变化。结论:1基因高通量测序技术是研究肾气虚证不孕相关基因的一种理想的技术方法。2开展肾气虚证不孕患者与正常女性基因表达谱的比较研究,可以为中医学经典理论提供现代基因分子水平层次的科学依据。     

右归配方颗粒对肾阳虚型体外受精－胚胎移植患者卵巢颗粒细胞基因表达谱的影响

目的从基因组学角度探讨温肾阳中药对肾阳虚型体外受精-胚胎移植（in vitro fertilizationembryo transfer,IVF-ET）患者卵巢颗粒细胞基因表达谱的影响。方法 72例行IVF治疗的肾阳虚患者按照随机数字表法分为治疗组（36例）和对照组（36例）,治疗组服用右归配方颗粒联合促性腺激素（gonadotropin,Gn）,对照组服用安慰剂联合Gn,两组均在IVF治疗前连续用药3个周期。两组采用超排卵长方案治疗后,行穿刺取卵术。利用基因高通量测序技术对两组患者卵巢颗粒细胞基因表达谱进行分析,研究两组患者基因表达谱的差异,并对差异基因行基因本体（gene ontology,GO）分析和京东基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路分析。结果通过对两组患者卵巢颗粒细胞基因表达谱的分析,共筛选到391个差异表达基因,其中上调基因238个,下调基因153个。差异表达基因参与的富集的分子功能是：与细胞增殖、凋亡有关的细胞周期调节蛋白,蛋白质泛素化,微管、微丝等细胞骨架的构建,线粒体及能量相关功能的因子,激素合成调节因子等;参与的通路是能量代谢通路和转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）信号通路。结论两组患者卵巢颗粒细胞基因表达谱存在明显差异,差异表达基因所涉及的生物学过程与肾阳虚导致的生殖细胞增殖、凋亡紊乱,线粒体产生能量过程受阻等有相关性。     

肾阴虚证和肾阳虚证血浆蛋白质表达谱的比较研究

目的 本研究通过对肾阴虚证和肾阳虚证共同的血浆蛋白差异表达进行研究,挖掘肾虚证的本质。方法 对肾阴虚证、肾阳虚证和健康正常人进行蛋白芯片表达谱的比较研究。结果 选取典型肾阴虚证5例、肾阳虚证5例、正常健康人6例进行蛋白芯片检测,与正常健康人对比,获得2组间共同表达上调的差异蛋白BMP-5。结论 肾阴虚、肾阳虚证之间存在着共同的差异蛋白,这可能是2者均有肾虚的表现有关,这为探讨肾虚证的发生机制,特别是在蛋白水平的改变提供了依据。     

补肾中药对肾虚不孕患者卵巢颗粒细胞基因表达干预的研究

目的:运用基因高通量测序技术,研究补肾中药二至天癸颗粒治疗肾虚不孕患者,与安慰剂组比较用药后患者卵巢颗粒细胞基因表达的差异,研究补肾中药二至天癸颗粒对肾虚不孕患者卵巢颗粒细胞基因表达的影响,在基因水平上探讨二至天癸颗粒对肾虚不孕患者产生疗效的作用机制。方法:1选取临床上接受IVF-ET治疗的肾虚不孕患者66例,按照随机数字表法分成治疗组33例,对照组33例。2两组均在IVF治疗前两个周期及治疗当周期服用药物,治疗组服用二至天癸颗粒,对照组服用安慰剂颗粒;两组均采用目前IVF治疗中常规应用的控制性超排卵方案长方案,在取卵日收集废弃的卵巢颗粒细胞并提取RNA。运用基因高通量测序技术Hiseq 2000分析,比较治疗组与对照组的基因表达的差异。3结合bowtie2软件分析,并使用检索互联网生物学公共数据库提供的检索程序对差异表达基因进行分析,最后对差异表达基因进行GO注释,并利用KEGG作pathway析。结果:1治疗组与对照组患者的卵巢颗粒细胞存在表达差异基因,获得表达差异基因共422条(P0.05)。其中,治疗组较对照组表达水平上调(FC2)的有103条,表达水平下(FC0.5)的有319条。2将差异表达基因按功能分析进行大体分类,涉及细胞凋亡、生物合成等方面。结论:1基因高通量测序技术是研究中药对人体作用的一种理想的技术方法。2补肾中药可以影响肾虚不孕患者的基因表达,这为补肾中药改善生殖功能作用的机制提供基因水平上的理论依据。     

左归丸加减对卵巢储备功能降低肾阴虚证不孕患者体外受精-胚胎移植治疗的影响

目的探讨左归丸加减在卵巢储备功能降低(DOR)肾阴虚证不孕患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗中的应用价值。方法回顾性分析2016年1月-2018年6月上海交通大学医学院附属第九人民医院辅助生殖科行IVF-ET治疗至少2个促排卵周期的20例DOR患者的临床资料。第1周期(未使用左归丸加减)为中药处理前组(52周期);之后予左归丸加减口服至少3个月(中药持续干预),再次进入促排卵周期为中药处理组(46周期)。比较患者2个周期促排卵结局。结果经左归丸加减治疗后,再次接受IVF-ET治疗可获得有效胚胎的周期比率由28.3%升至57.6%(P<0.05)。治疗前后周期的促性腺激素(Gn)用量、促排天数、治疗结束直径≥10 mm卵泡数、治疗结束直径≥14 mm卵泡数、获卵数(率)、成熟卵数(率)、受精卵数(率)及可用胚胎数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论左归丸加减可提高DOR肾阴虚证不孕患者获得有效胚胎的周期比率,在一定程度上提高IVF-ET治疗效率。     

肾阳虚、肾阴虚证大鼠模型的建立与稳定性观察

<正>中医证候动物模型的建立与研究是连接中医基础和临床的枢纽,是深化对证候实质认识的重要方法之一,同时也是筛选有效中药、药物作用机制深入研究的关键手段之一。所以,寻找既符合中医学理论,又真实反映临床证候特征,且具有较好稳定性和重复性的动物模型以满足中医药研究的需求,是中医证候动物模型研究的重要任务[1]。大量外源性肾上腺皮质激素的补充可抑制体内促肾上腺皮质激素的释放,进而反馈使得内源性类固醇激     

肾阳虚证基因表达谱的研究进展

肾阳虚证的本质一直是中医的研究重点,基因芯片技术为肾阳虚证的微观整体研究开辟了一个前所未有的领域。肾阳虚证动物模型的基因表达谱研究主要包括肾阳虚证皮质酮大鼠和肾阳虚证"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠的基因表达谱研究。临床肾阳虚证基因表达谱研究包括肾阳虚体质青少年差异表达基因研究、肾阳虚骨关节炎基因表达研究、典型肾阳虚家系基因表达研究、老龄肾阳虚证基因表达谱研究。针对肾阳虚证基因表达谱的研究现状,提出了一些自己的思路和看法。     

基于不同年龄段肾虚不孕女性miRNA表达谱的"七七理论"研究

目的:基于microRNA (miRNA)测序技术分析不同年龄段肾虚不孕女性卵巢颗粒细胞(GC)差异表达的miRNA,探究七七理论的科学内涵.方法:回顾性收集于山东中医药大学附属医院生殖中心行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的符合入组标准的患者,按年龄分为年轻组及中、高龄组,每组50例,比较各组患者促性腺激素(G...     

骨关节炎肾阳虚证个案的温针疗效及基因表达谱研究

目的　观察温针治疗骨关节炎肾阳虚证患者的临床疗效 ,并以基因芯片研究温针疗效的基因表达谱。方法　筛选出符合西医骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者 1例 ,温针治疗 2周 ,治疗前后取血、提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程 ,获得差异基因表达谱。结果　温针对此例患者的治疗作用达到显效 ,对基因表达的影响涉及免疫、基础代谢、肌肉运动、生长发育和信息传导等多个方面。结论　温针治疗肾阳虚型骨关节炎疗效确切 ;应用基因芯片技术能够同时半定量地研究数千条基因的表达状态 ,可以从微观基因水平研究针刺的整体机制 ,并从分子水平判定其疗效 ,为探讨针灸的作用机制开辟新途径。     

电针对痰湿型多囊卵巢综合征患者体外受精结局及差异基因表达的影响

目的 基于基因组学对痰湿型多囊卵巢综合征（PCOS）患者进行差异基因筛选,探讨电针治疗对痰湿型PCOS患者体外受精-胚胎移植（IVF-ET）结局及差异基因表达的影响。方法 随机选取拟行IVF-ET 10例痰湿型PCOS患者和10例单纯因男性因素不孕女性。收集两组患者卵巢颗粒细胞,并提取RNA,采用高通量测序技术分析基因表达谱,筛选差异表达基因并进行验证。选择痰湿型PCOS患者60例,按随机数字表法分为电针治疗组和对照组,每组30例。两组患者分别接受电针治疗和伪针刺激,每周2次,至扳机日。收集卵巢颗粒细胞,运用实时荧光定量PCR技术验证痰湿型PCOS差异基因的表达。比较两组患者的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、受精率、优质胚胎率和临床妊娠率。结果 （1）与单纯因男方因素不孕女性比较,痰湿型PCOS患者共检测到596个差异表达的基因（P<0.05）,其中血栓反应蛋白-1(THBS1)等433个基因表达上调（FC>2）,葡萄糖转运蛋白4型（GLUT4）等163个基因表达下调（FC<0.5）。（2）两组患者受精率和临床妊娠率比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。电...     

肾阴虚不孕症卵泡液代谢组学研究

目的从卵泡液代谢角度探寻不孕症肾阴虚证的证候物质基础。方法采用超高液相色谱-高分辨质谱联用仪对行体外受精-胚胎移植/单精子卵泡浆内显微注射-胚胎移植(IVF-ET/ICSI-ET)的高龄(年龄≥35岁)肾阴虚卵巢低反应(POR)患者42例以及同时仅因男方因素行IVF-ET/ICSI-ET的健康女性(年龄<35岁)58例进行卵泡液代谢组学分析,比较两组的差异代谢物。同时记录患者基础窦卵泡计数(bAFC)、基础卵泡刺激素(bFSH)、促性腺激素(Gn)天数、Gn用量、HCG日E2水平及HCG日14 mm以上卵子数,同时记录患者获卵数、MⅡ卵子的数目、可用胚胎数、优胚数,计算获卵率、ICSI受精率、2PN卵裂率、可用胚胎率及优胚率。结果(1)与对照组比较,POR组患者bAFC、HCG日E2水平及HCG日14 mm以上卵子数降低(P<0.05,P<0.01),bFSH水平及HMG用量增加(P<0.05,P<0.01),两组HMG使用时间比较,差异无统计学意义(P>0.05),POR组获卵数、MⅡ卵子数、可用胚胎数以及优胚数降低(P<0.01),MⅡ卵率、IVF受精率以及2PN卵裂率也降低(P<0.05,P<0.01);两组获卵率、ICSI受精率、可用胚胎率及优胚率比较,差异无统计学意义(P>0.05);(2)本研究发现与肾阴虚型不孕症相关的潜在生物标志物有30种,其中上调的有9种,包括L-苯丙氨酸、脯氨酸、尿苷二磷酸、LysoPC(18∶1)等;下调的代谢物有21种,包括6-氧代己酸酯、亚油酸酯、油酸、花生四烯酸、DHA、25-羟基维生素D3、强啡肽A、LysoPC(20∶3)等。结论高龄肾阴虚POR患者与健康人群相比,卵巢储备和反应、卵子数目和质量均降低;高龄POR肾阴虚证与健康女性的之间的卵泡液差异代谢物可能对肾阴虚不孕症的诊断和治疗奠定了一定的物质基础。     

肾阳虚证患者血液生化、免疫指标与基因表达谱结果的对比研究

目的:对比研究肾阳虚寒证患者血液生化、免疫指标以及差异基因表达谱的临床应用价值。方法:针对一个典型肾阳虚家系15个成员,运用现代检测技术进行血液生化、免疫学指标检测,同时采用人类Oligo芯片杂交技术对其外周血单个核细胞的差异基因表达谱进行分析研究。结果:虽然每个成员分别出现了2-8项异常血液学指标,但整体而言,该家系肾阳虚患者与正常人之间在糖、蛋白质、脂类代谢上和体液、细胞免疫方面无明显差异(P>0.l);而5张芯片的杂交结果显示,共有53个基因反复出现在差异基因表达谱之中,这些基因可能在肾阳虚寒证的发生发展中起着关键性作用。结论:常规血液生化、免疫学指标对肾阳虚寒证的参考意义不太大,而芯片检测技术以及由此获得的差异表达基因谱在中医证候研究中具有潜在的临床应用价值。     

白细胞介素-8与肾阴虚证相关性的探讨

用IL-8的生物学作用对肾阴虚证各症状及实验室改变进行解释,探讨二者的相关性,为肾阴虚证本质的研究提供了方向。     

六味地黄汤治疗2型糖尿病肾阴虚证与非肾阴虚证的临床实验研究

目的:探讨六味地黄汤治疗2型糖尿病肾阴虚证与非肾阴虚证的疗效及与神经内分泌免疫(NEI)网络调节的相关性。方法:选择2型糖尿病患者80例,其中肾阴虚证组和非肾阴虚证组各40例;在肾阴虚证组和非肾阴虚证组内随机分配为实验组及对照组各20例;实验组给予六味地黄汤煎剂口服,对照组给予优降糖口服,疗程4周;观察临床症状、糖尿病疗效指标和NEI网络变化。结果:六味地黄汤对肾阴虚证和非肾阴虚证的2型糖尿病患者的NEI网络调节均有影响,但对肾阴虚证组的影响较大;六味地黄汤对2型糖尿病肾阴虚证组患者的综合疗效、降低血糖的效果均优于西药对照组和非肾阴虚证的实验组。结论:六味地黄汤所适用的糖尿病病证主要是肾阴虚证;六味地黄汤通过多靶点作用于NEI网络调节进而对不同疾病的肾阴虚证发挥治疗作用可能是其异病同治的关键所在。     

脾肾阴虚证模型大鼠自由基损伤的比较研究

探讨实验性脾、肾阴虚模型大鼠自由基损伤的差异性.方法采用经典方法分别复制了脾阴虚证和肾阴虚证动物模型.观察并对比了两种模型大鼠和相应治疗组的脂质过氧化物(LPO)和谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)、心肌黄酶(DTD)、超氧化物岐化酶(SOD)活性的变化.结果脾、肾阴虚模型大鼠LPO升高,三种抗氧化酶活性均下降,且组间差异显著.滋脾阴和补肾阴药物具有降低LPO,升高抗氧化酶活性的作用.结论脂质过氧化损伤是脾、肾阴虚证形成的共同病理生理基础.     

中西医结合治疗肾阳虚型不孕症63例

目的:观察中西医结合治疗肾阳虚型不孕的临床疗效.方法:将126例肾阳虚型排卵障碍所致不孕随机分为对照组和治疗组各63例,对照组采用单纯西药治疗,治疗组在对照组基础上服用复方玄驹胶囊,两组均6个月为1个疗程.结果:治疗组显效率为68.25％,有效率为95.24％.对照组显效率为39.68％,有效率为61.90％,两组比较有显著性差异.结论:中西医结合治疗肾阳虚型排卵障碍疗效确切,值得临床推广使用.     

肝肾阳虚证患者心理健康状况分析

分析肝肾阳虚证患者的心理健康状况。方法：运用心理学量表SAS、SDS、SCL-90对肝肾阳虚证患者进行评估,并与相应的全国常模比较。结果：SAS、SDS总分及SCL-90中的躯体化、强迫、抑郁、焦虑、敌对性、恐怖、偏执、精神病性等8个因子的评分均高于相应的全国常模;有68．4％患者存在抑郁,其中35．5％为中重度抑郁症状;有55．2％患者存在焦虑症状,其中19．7％为中重度焦虑症状。结论：精神／心理症状尤其抑郁症状是肝肾阳虚证的突出临床表现。     

不孕症（卵巢储备功能减退）的中西医结合诊疗方案

卵巢储备功能减退（DOR）是导致育龄女性生育障碍的重要原因,随着我国高龄女性生育需求增加,DOR的诊治面临更加严峻的挑战。提高卵巢储备功能、保护女性生育能力已成为生殖医学领域研究的热点和难点问题。DOR属中医学“月经先期”“月经后期”“月经先后不定期”“月经过少”“闭经”“不孕症”等范畴,其主要病机为肾精亏虚、冲任失调。中医药治疗DOR具有一定优势,尤其在不孕患者接受体外受精-胚胎移植（IVF-ET）过程中,中西医结合诊疗可以更好地改善患者卵巢功能和IVF-ET结局。本方案旨在进一步规范DOR的中医、中西医结合诊疗,充分发挥中医药的治疗优势,提高临床疗效,促进女性生育健康。     

右归丸对围绝经期综合征/肾阳虚证基因表达谱的影响

目的:研究右归丸对围绝经期综合征肾阳虚证基因表达谱治疗前后的异同。方法:以围绝经期综合征肾阳虚证患者为对象,服用右归丸一个月,应用基因芯片技术,分析治疗前后围绝经期综合征肾阳虚证基因表达谱;结合SAM软件对差异表达基因进行筛选并分析。结果:经核酸定量分析仪检测,6例患者RNA的OD260/OD280比值在1.90~1.98,经琼脂糖凝胶电泳检测,28s和18 s条带清晰,28 s条带约是18 s条带的2倍,说明RNA完整性较好;治疗前后基因表达谱存在明显的差异,表达有差异的基因共81条,ratio值≤0.5的基因62条;ratio值≥2的基因19条,下调基因大于70%,获得基因主要是与免疫应答、代谢通路、信号通路、氧化应激、细胞因子相关基因等,差异表达基因的信号值区为治疗前与治疗后两大类,说明与临床治疗结果符合。结论:围绝经期综合征肾阳虚证患者通过右归丸治疗后,下调基因超过70%,且主要与多种代谢途径密切相关。     

中医治疗肾阳虚不孕症用药规律的现代文献挖掘

【目的】 探讨现代文献中不孕症肾阳虚证的中药用药规律。【方法】 检索中国知网（CNKI）、万方数据库（Wanfang Data）、维普中文科技期刊数据（VIP）3个数据库中近20年来中医治疗不孕症肾阳虚证的文献,建立不孕症方药数据库,采用中医传承计算平台（V3.0）进行相应的中药用药频次分析、性味归经分析、中药功效分析、核心药物分析、组方关联分析与聚类分析等。【结果】 共纳入205首复方,涉及中药308味,总用药频次为2 456次。单味中药用药频次最高的为当归,其次为菟丝子、香附、川芎、白芍、枸杞子、丹参等。治疗不孕症肾阳虚证多采用温性药及甘味药;药味主要归肝经,其次为肾经、脾经、心经、肺经等。中药功效频次统计分析显示共涉及16种功效,频次排前3位的为补虚类、活血化瘀类、理气类。共涉及核心药物9味,强关联药物组合16个,由此进一步推演出核心候选方共3首。【结论】 临床治疗不孕症肾阳虚证应重视肝、肾、脾的调理;可大量选用补阴之药,以滋补阴血,再佐以补肾阳之药;可采用滋肾阴、补肾阳、养肝血、活血化瘀、疏肝理气等药物治疗。应善于“阴中求阳”,选用滋肾阴、补肾阳、养肝血、活血化瘀、疏肝理气往往能取得较好的疗效。