硬皮病皮损中转化生长因子β1和结缔组织生长因子的检测及其意义

硬皮病是以皮肤及各种内脏器官纤维化为特征的结缔组织疾病,其病因和发病机制尚未明确.为探讨硬皮病的病因及发病机制,人们进行了大量研究,结果表明本病与种族、地域分布、自身抗体、细胞因子以及基因遗传等密切相关.目前研究的热点是细胞因子与本病的相关性.     

β-转化生长因子对硬皮病成纤维细胞影响的研究进展

系统性硬皮病患者的成纤维细胞胶原合成增多、分解减少是导致皮肤、肺脏等组织纤维硬化的主要过程。此过程中 ,β-转化生长因子是刺激成纤维细胞合成胶原的重要因子 ,它通过与成纤维细胞胞膜上的受体相结合 ,激活Smad蛋白信号转导途径 ,将信息传导至细胞核内 ,激活转录因子上调Ⅰ型胶原的基因转录和翻译。同时 ,β-转化生长因子的作用也受到其他细胞因子的影响 ,最终因各种因子的失衡导致疾病的发生和发展。     

β—转化生长因子对硬皮病成纤维细胞影响的研究进展

系统性硬皮病患者的成纤维细胞胶原合成增多、分解减少是导致皮肤、肺脏等组织纤维硬化的主要过程。此过程中，β－转化生长因子是刺激成纤维细胞合成胶原的重要因子，它通过与成纤维细胞胞膜上的受体相结合，激活Smad蛋白信号转导途径，将信息传导至细胞核内，激活转录因子上调I型胶原的基因转录和翻译。同时，β－转化生长因子的作用也受到其他细胞因子的影响，最终因各种因子的失衡导致疾病的发生和发展。     

硬皮病患者皮损转化生长因子β1、β2 mRNA的表达

目的 探讨转化生长因子(TGF)β1和β2在硬皮病发病中的作用。方法 采用原位逆转录聚合酶链反应技术检测17例硬皮病患者皮损中TGF-β1、β2mRNA的原位表达情况,并以10例正常人皮肤组织作为对照。结果 TGF-β1mRNA在硬皮病组表达阳性率和表达程度均高于对照组(P<0.05);TGF-β2mRNA在硬皮病组表达阳性率和表达程度与对照组相近(P>0.05);硬皮病皮损中TGF-β1mRNA表达阳性率和表达程度均高于TGF-β2mRNA(P<0.05).结论 TGF-β1mRNA在硬皮病皮损中高度表达,提示其在硬皮病病理纤维化的形成过程中起一定作用。     

阿维A对系统性硬皮病患者血清转化生长因子-β1的影响

系统性硬皮病(systemic sclerosis,SSc)是一种以皮肤及各系统胶原纤维进行性硬化为特征的结缔组织疾病.转化生长因子(tansforming growth factor,TGF)β1在SSc发病中起重要作用.     

系统性硬皮病患者成纤维细胞转化生长因子β 1与Ⅰ型胶原mRNA表达的研究

目的探讨系统性硬皮病成纤维细胞自身分泌的转化生长因子(TGF)β1是否影响Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)mRNA表达。方法采用核酸原位杂交和免疫印迹法分别测定培养的硬皮病和正常人成纤维细胞中COL1A1mRNA的表达和TGF-β1蛋白质的含量。结果硬皮病组成纤维细胞COL1A1mRNA(A值x±s为905.09±20.36)表达较对照组354.17±30.89明显增高。硬皮病组和对照组成纤维细胞的COL1A1mRNA表达均存在异质性,硬皮病组COL1A1mRNA高表达的成纤维细胞数x±s为27.33%±4.63%明显高于对照3.67%±1.20%,而对照组低COL1A1mRNA表达的成纤维细胞数62.33%±3.53%明显高于硬皮病组14.33%±4.91%。硬皮病组内各细胞株间,高、中、低胶原表达的细胞数差异无显著性。硬皮病组和对照组成纤维细胞中TGF-β1蛋白质表达差异无显著性。结论硬皮病成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达增多,这种表达增多与成纤维细胞自身合成TGF-β1的水平可能无关。     

1320nm激光对成纤维细胞增殖和分泌碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子β1的影响

目的 探讨非剥脱性1320nm激光对体外培养的人真皮成纤维细胞增殖和分泌碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子(TGF-β1)的影响.方法 体外培养人真皮成纤维细胞,用1320nm波长激光15J/cm²,20J/cm²和24J/cm²三个能量分别照射3次.于照射后0、24、48和72 h ELISA法检测上清液bFGF和TGF-β1的分泌水平,并计算细胞总数.结果 20J/cm²以上能量激光照射后成纤维细胞计数增加,与未照射的对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).激光照射后bFGF分泌的量,在20J/cm²和24J/cm²能量组增加,尤以20J/cm²为著,24 h达高峰(P<0.01),与对照组比较,差异有统计学意义.TGF-β1分泌的量在照射的各能量组均下降,能量越高,下降越明显,24h达峰谷,与对照组比较,高能量组P<0.01,其他2个能量组P<0.05.结论 1320nm波长激光使成纤维细胞分裂增殖加速,并促进bFGF分泌,抑制TGF-β1分泌.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中转化生长因子-β1和结缔组织生长因子mRNA表达水平的研究

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及临床意义.方法:采集SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs)提取总RNA,利用SYBR Green Ⅰ实时反转录荧光定量PCR的方法,以β肌动蛋向(β-actin)为内对照基因,检测每组中TGF-β1和CTGF mRNA的相对表达水平.结果:①活动期SLE患者PBMCs中TGF-β1和CTGF表达显著高于非活动期及正常对照组,CTGF在正常对照组和非活动期SEE患者的表达无明显差异;②肾损害组SLE患者TGF-β1和CTGF表达明显高于无肾损害组和正常对照组;③未治疗组SLE患者TGF-β1的表达高于治疗组和正常对照组.经糖皮质激素治疗后TGF-β1表达水平明显下降,而CTGF在治疗组和未治疗组的表达无差异.结论:TGF-β1和CTGF在SLE发病和发展过程中起重要作用,检测PBMCs中TGF-β1和CTGF的表达可作为疾病活动、病情判断的指标之一,检测PBMCs中TGF-β1的表达可作为观察治疗效果的指标之一.     

尖锐湿疣损害中转化生长因子α、β1的表达

目的：探讨TGF－α、β1在尖锐湿疣（CA）发病机制中的作用。方法：免疫免疫组化SP法检测30例CA损害中TGF－α、β1的原位表达，并以20例健康男性正常包皮组织作为对照。结果：两组TGF－α、β1表达率均相同；CA组TGF－α、β1表达阳性者中的表达程度分别显著高于对照组（P＜0．001）；其过度表达率也分别明显高于对照组（P＜0．005）。结论：CA组织细胞可合成及分泌较多的TGF－α、β1，作为中间介质在CA发病中发挥致细胞增生的作用。     

结缔组织生长因子与硬皮病关系的研究进展

硬皮病病因不清,由转化生长因子β诱导产生的结缔组织生长因子在其发病机制中起重要作用.结缔组织生长因子可通过整合素介导的信号途径,使成纤维细胞获得趋化活性及有丝分裂活性,导致胶原合成增多,并与动脉内膜增殖及血栓形成相关.结缔组织生长因子表达的调控与其启动子上的Smad结合位点及转化生长因子β反应元件密切相关.     

血小板衍生生长因子在硬皮病成纤维细胞的表达

血小板衍生生长因子(platelet-de-rivedgrowthfactor,PDGF)是参与纤维化形成的主要因子[1],近年国外研究发现在硬皮病皮损处PDGF蛋白表达增高[2]。我们采用Northern杂交方法检测了培养硬皮病皮损成纤维细胞PDGF-B链mRNA的表达,现报道如下。一、材料和方法主要试剂:PDGF-B链cDNA探针,β-actincDNA探针,购自ATCC(Americantypeculturecollection),随机引物试剂盒购自美国Promega公司。研究对象:病例为北京医科大学第一医院确诊的局限性硬皮病3例、系统性硬皮病1例,诊断符合美国风湿病协会的标准。男1例,女3例,年龄21～56岁,病程0…     

血小板衍生生长因子受体在硬皮病皮损的表达

目的　探讨血小板衍生生长因子 (PDGF)在硬皮病发病中的作用。方法　选用特异性多克隆抗体以免疫组化方法检测了 8例硬皮病患者和 9例正常皮肤标本 PDGF受体的表达。结果　研究发现PDGF受体 α和 β亚单位在 8例硬皮病患者皮损表达均明显增高 ,而 9例正常皮肤中仅少数标本呈微弱表达 ,此差异经统计学检验显示有显著性意义 (P<0 .0 5 )。结论　 PDGF受体 α和 β亚单位表达的增高可能与硬皮病纤维化的形成相关。     

RNA干扰对系统性硬化病皮肤成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 研究RNA干扰对系统性硬化病(SS)皮肤成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达水平的影响.方法 设计4个针对CTGF的特异性小干扰RNA(siRNA)及一个非特异性siRNA.体外转录获得siRNA,将siRNA用6-羧基荧光素(FAM)标记后瞬时转染至原代培养的SS患者皮肤成纤维细胞;转染48h后,以RT-PCR及蛋白印迹法分别检测CTGF mRNA及蛋白量的变化.结果 转染了4个特异性siRNA的成纤维细胞中CTGF mRNA水平均有不同程度下调(P<0.001),抑制效果由强至弱为,siRNA742>siRNA828>siRNA578>siRNA948.蛋白印迹则显示有3个siRNA能使CTGF蛋白表达水平不同程度下调(P<0.001),其中siRNA742的抑制效应最强.结论 RNA干扰能显著抑制SS成纤维细胞CTGF的表达.     

己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、胶原合成及转化生长因子-β1表达的影响北大核心CSCD

目的探讨己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、胶原合成及转化生长因子（TGF）-β1表达的影响。方法取人瘢痕疙瘩及正常皮肤组织培养的第5～8代成纤维细胞,在含有0．1—3g／L己酮可可碱的环境中培养。应用噻唑蓝（M1Tr）法检测成纤维细胞增殖,双抗体夹心-ELISA法测定TGF—β1表达,RT—PCR检测I、Ⅲ型前胶原mRNA表达。结果0．1～2g／L己酮可可碱能明显抑制瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞的增殖,呈明显的量效一时效关系,抑制作用在浓度2g／L时达到最高。浓度为0．5～2g／L时己酮可可碱能降低瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞TGF—B1表达,1或2g／L时己酮可可碱能降低瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞I、Ⅲ型前胶原mRNA表达。结论己酮可可碱对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞的增殖、TGF—β1以及I、Ⅲ型前胶原表达均有明显的抑制作用。     

阿维A酸对系统性硬皮病患者成纤维细胞增殖及分泌TGF—β1的影响

目的：确定阿维A酸对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞增殖及分泌转化生长因子β1（TGF-β1）的影响。方法：原代培养系统性硬皮病（SSc）患者皮肤成纤维细胞（FB），使用不同浓度的阿维A酸作用48h，四甲基偶氮唑盐（M1T）方法及ELISA法测定阿维A酸对成纤维细胞增殖及分泌TGF-β1的影响。结果：阿维A酸可明显抑制患者皮肤成纤维细胞的增殖，显著减少成纤维细胞TGF-β1的分泌，并具有浓度依赖性。与空白对照组相比，差异有显著性（P〈0．05）。结论：阿维A酸对SSc皮肤成纤维细胞的增殖及TGF—β1的分泌均有显著抑制作用，为其治疗硬皮病提供了理论基础。     

积雪苷体外对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨积雪苷体外对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和对结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法 取手术切除的瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞的原代培养,加入不同浓度积雪苷,观察细胞的形态变化,MTT法检测细胞活性,免疫组化和Western印迹法检测积雪苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响。结果 细胞形态学观察显示,经不同浓度积雪苷处理的成纤维细胞呈现明显的抑制及凋亡征象。积雪苷在1 ～ 100 mg/L范围内,在24、48、72 h时积雪苷浓度与细胞活性抑制率均呈正相关,r分别为0.95、0.90和0.92,P值均 ＜ 0.01;且各浓度不同时间段细胞活性抑制率间单因素方差分析,P值均 ＜ 0.01。瘢痕疙瘩成纤维细胞中CTGF呈强阳性表达,而经积雪苷处理瘢痕疙瘩成纤维细胞48 h后,CTGF表达有所减弱,每100个成纤维细胞中CTGF表达阳性细胞数均值未加药组为73个,1 mg/L积雪苷组为54个,10 mg/L积雪苷组为46个,未加药组与1 mg/L、10 mg/L积雪苷组比较,差异均有统计学意义（t值分别为4.34和6.26,P值均 ＜ 0.01）;1 mg/L积雪苷组与10 mg/L积雪苷组比较,差异亦有统计学意义（t = 1.95,P ＜ 0.05）。Western印迹显示,积雪苷作用48 h后,成纤维细胞中CTGF的表达量比未加药的细胞明显减弱,且表达量随药物剂量的加大有递减趋势。结论 积雪苷能有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和结缔组织生长因子的表达。     

血管内皮生长因子和转化生长因子β1在尖锐湿疣组织中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和转化生长因子β1(transforminggrowthfactorbeta1,TGFβ1)在尖锐湿疣(condylomaacuminatum,CA)组织中的表达及其可能作用。方法:观察并定量计数27例CA病变组织的血管数,应用逆转录(RT)-PCR和免疫组化方法检测VEGF和TGFβ1的表达情况,同时以17例正常包皮组织作为对照。结果:CA组织的血管数比正常包皮组织明显增多(t=5.059,P<0.01);VEGF和TGFβ1的mRNA在CA的表达水平分别为0.880±0.054、1.136±0.145;而二者在正常包皮组织内表达水平分别为0.448±0.095、0.784±0.085(P<0.05);VEGF和TGFβ1在CA组织除角质层外的表皮全层细胞均有强表达,正常包皮组织中为弱表达,且主要位于基底层细胞;VEGF和TGFβ1的表达呈显著正相关(r=0.792,P<0.001)。结论:CA组织细胞可产生并分泌较多的TGFβ1和VEGF,两者可能与CA组织中的血管生成有关。     

ERK信号通路及转化生长因子-β1在强脉冲光对成纤维细胞增殖影响中的作用

目的:探讨强脉冲光对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖的影响及其相关机制.方法:分离培养人正常皮肤成纤维细胞,采用不同能最强脉冲光照射细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTF)法检测各组细胞增殖情况,蛋白质免疫印迹法测定磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)变化,ELISA法检测转化生长因子(TGF)-β1分泌变化.在抑制剂干预研究中,应用ERK抑制剂PD98059、强脉冲光+PD98059分别处理成纤维细胞,观察细胞增殖及磷酸化ERK的变化.结果:与未照射组比较,10、18、27、36 J/cm2的强脉冲光对成纤维细胞增殖无影响(P>0.05),当能量为72 J/cmz时,成纤维细胞的增殖活性明显增强(P<0.05),磷酸化ERK表达明显减少,TGF-β1分泌显著增加(P<0.05);ERK抑制剂PD98059能明显抑制成纤维细胞的增殖和降低磷酸化ERK水平.结论:72 J/cm2强脉冲光可促进成纤维细胞增殖,其机制是通过促进TGF-β1分泌,而不是通过ERK信号通路.     

转化生长因子β1在尖锐湿疣损害中的表达

转化生长因子β₁(TGF-β₁)具有诱导组织细胞生长及转化作用。为了探讨TGF-β₁在尖锐湿疣(CA)发病中致细胞增生的作用,我们采用免疫组化SP法检测30例CA患者皮损中TGF-β₁的原位表达,并以20例健康男性正常包皮组织作为对照。