重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠成骨细胞增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

目的 观察胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响，探讨IGF-Ⅰ对骨代谢影响的可能机制。方法 不同浓度rhIGF-Ⅰ刺激体外培养的大鼠成骨细胞，采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖能力；肿瘤坏死因子α（TNF-α单独或与rhIGF-Ⅰ共同刺激成骨细胞，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率；rhIGF-Ⅰ刺激成骨细胞，免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果 一定浓度IGF-Ⅰ能明显增加成骨细胞数量（P〈0．05），在0．1～100ng／ml这种作用与IGF-Ⅰ的浓度呈正相关；TNF-α在0．1～100ng/ml浓度范围内呈剂量依赖性地促进成骨细胞凋亡（P〈0．05），并使S期细胞减少（P〈0．05），而IGF-Ⅰ能抑制，TNF-α对成骨细胞的促凋亡作用（P〈0．05）；经IGF-Ⅰ的刺激，成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达明显高于对照组（P〈0．05）。结论 IGF-Ⅰ对大鼠成骨细胞有明显的促增殖作用，在0．1～100ng/ml之间呈浓度依赖性，IGF-Ⅰ能抑制，TNF-α诱导的大鼠成骨细胞凋亡，IGF-Ⅰ能促进大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成。     

胰岛素样生长因子-1对甲状旁腺激素介导成骨细胞增殖及成骨活性的影响

目的：通过构建乳鼠颅盖骨成骨细胞分离培养与鉴定方法,研究胰岛素样生长因子－1（Insulin－like growth factor－1,IGF－1）及IGF－1联合重组人甲状旁腺激素1－34（recombinant human parathyroid hormone 1－34,rhPTH1－34）对成骨细胞增殖及I型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法培养乳鼠成骨细胞,并观察其形态及功能,以原代培养乳鼠成骨细胞为实验模型,分空白组、PTH组、IGF－1组及不同浓度IGF－1作用的PTH介导的成骨细胞组（0、10、50、100 ng／L）。通过不同剂量的胰岛素样生长因子－1（0、10、50、100 ng／L）联合10－9 mol／L重组人甲状旁腺素刺激体外培养的成骨细胞,用噻唑蓝（ MTT）法检测细胞的增殖能力,RT－PCR法检测成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达。结果 PTH和IGF－1均可促进成骨细胞增殖;IGF－1联合PTH可以促进成骨细胞增殖,且具有剂量依赖性。 PTH联合IGF－1使成骨细胞增殖能力增强、I型胶原蛋白mRNA表达增强。 IGF－1可以促进成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达,且具有剂量依赖性。 IGF－1可以促进成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达,且具有剂量依赖性。结论 PTH与IGF－1均可刺激成骨细胞增殖和分化,IGF－1可促进PTH对成骨细胞的分化、增殖。两者合用其作用增强,有协同促进作用。     

胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡的影响

目的 了解胰岛素样生长因子I(IGF-I)对缺血缺氧致心肌细胞凋亡的影响,探讨其调控机制.方法 分离培养SD乳鼠的心肌细胞.于制备缺血缺氧心肌细胞模型(缺血缺氧组)前1 h,用IGF-I(200μg/L)进行干预(干预组),以缺血缺氧组致伤前测定结果为正常对照(对照组).观察不同时相点心肌细胞凋亡的吸光度(A)值、线粒体膜电位变化及磷酸化Akt蛋白表达变化.结果 对照组心肌细胞凋亡A值为0.18±0.03;缺血缺氧后1、3、6、12 h分别为0.33±0.05、0.61 ±0.06、1.17±0.08、2.25±0.11,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);干预组上述时相点的A值分别为0.26±0.04、0.49±0.05、0.84±0.06、1.63±0.09,与缺血缺氧组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).缺血缺氧6、12 h,心肌细胞线粒体膜电位荧光强度较对照组40.2±10.1下降,分别为18.7±5.1、6.3±1.9(P＜0.01),干预组较缺血缺氧组相对增高,分别为28.8±6.2、12.5±3.1(P＜0.05).与对照组比较,其余各组缺血缺氧后6 h磷酸化Akt蛋白表达量增加.结论 IGF-I对缺血缺氧心肌细胞具有抗凋亡作用,其机制可能与IGF-I激活磷脂酰肌醇3-激酶/Akt、增加磷酸化Akt表达、减少细胞色素c的释放有关.     

胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长影响的实验研究

目的:探讨胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长增殖的影响.方法:采用酶消化法获取兔骨膜成骨细胞,取第三代成骨细胞与0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml的胰岛素样生长因子-1共同体外培养,在第1～7d观察细胞的形态、生长特点,MTT法测定细胞增殖情况,并通过细胞计数绘制细胞生长曲线.结果:不同浓度的胰岛素样生长因子-1对成骨细胞的生长增殖与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01),各浓度之间对成骨细胞的生长增殖亦存在显著性差异(P＜0.05).结论:胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长增殖具有促进作用,在0.1～10ng/ml范围内此种作用与浓度呈正相关.     

血小板衍生性生长因子(PDGF)与胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)对成骨细胞增殖及分化的影响

目的探讨PDGF与IGF-Ⅰ对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响。方法将兔成骨细胞分别与PDGF(10ng/ml),IGF-Ⅰ(100ng/ml),PDGF(10ng/ml)+IGF-Ⅰ(100ng/ml)共同培养,于1、3、5d分别进行3H-TdR、3H-Proline的掺入量以及碱性磷酸酶合成量的检测。结果PDGF与IGF-1联合应用对3H-TdR、3H-Proline的掺入量与单独使用因子组、对照组相比,在各个时段均存在显著性差异(P<0.01);PDGF与IGF-1联合应用对碱性磷酸酶合成量与对照组、PDGF组相比有显著性差异(P<0.01),与IGF-1组相比,未见明显差异(P>0.05)。结论PDGF与IGF-Ⅰ联合应用可显著促进成骨细胞DNA、胶原蛋白、碱性磷酸酶的合成,对促进成骨细胞的增殖与分化功能具有协同作用。     

瘦素对成骨细胞增殖及Collagen I和Cbfa1 mRNA表达的影响

目的 研究瘦素在体外对原代培养乳鼠颅盖骨成骨细胞增殖及对CollagenI(I型胶原蛋白)和Cbfa1 mRNA表达的影响.方法 培养乳鼠成骨细胞,以乳鼠成骨细胞为体外实验模型,采用MTT法检测不同浓度瘦素(0、40、80和160 ng/ml)作用于成骨细胞后的增殖情况;通过RT-PCR方法检测不同浓度瘦素对CollagenI和Cbfa1 mRNA的表达的影响.结果 瘦素作用于成骨细胞后,可促进其增值,OD值显著增加(P<0.01);瘦素增加CollagenI和Cbfa1 mRNA的表达,呈剂量效应关系.结论 瘦素促进成骨细胞增殖,同时通过调节CollagenI和Cbfa1的表达,促进成骨细胞分化,进而促进骨形成.     

胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长影响的实验研究

目的探讨胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长增殖的影响.方法采用酶消化法获取兔骨膜成骨细胞,取第三代成骨细胞与0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml的胰岛素样生长因子-1共同体外培养,在第1～7d观察细胞的形态、生长特点,MTT法测定细胞增殖情况,并通过细胞计数绘制细胞生长曲线.结果不同浓度的胰岛素样生长因子-1对成骨细胞的生长增殖与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01),各浓度之间对成骨细胞的生长增殖亦存在显著性差异(P＜0.05).结论胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长增殖具有促进作用,在0.1～10ng/ml范围内此种作用与浓度呈正相关.     

神经肽对大鼠成骨细胞胰岛素样生长因子-1及其受体基因表达的影响

目的观察神经肽类物质降钙素基因相关肽（CGRP）、P物质（SP）在鼠成骨细胞表面受体的分布，探讨神经肽对大鼠成骨细胞胰岛素样生长因子（IGF）-1和胰岛素样生长因子1型受体（IGF-1R）基因表达的调控作用。方法取出生1d的Wistar大鼠颅盖骨成骨细胞进行体外原代和传代培养，应用免疫组织化学技术检测体外培养的鼠成骨细胞表面神经肽受体的分布情况，用不同浓度的CGRP和SP分别对传代成骨细胞处理6、12和24h，原位杂交技术检测观察成骨细胞二种目的基因（IGF-1、IGF-1R）的mRNA表达强度变化以及时间效应和剂量．效应的关系。结果（1）大鼠成骨细胞表面有CGRP、SP受体表达。（2）CGRP可以刺激成骨细胞IGF-1mRNA表达，以10^-8mol／L作用12h最为明显。CGRP亦能够上调成骨细胞IGF一1RmRNA表达，而且维持时间达24h具有明显的剂量时间依赖性。（3）SP可以刺激成骨细胞IGF-1mRNA表达，以10^-6mol／L作用12h最为明显。SP亦能够上调成骨细胞IGF-1RmRNA表达，而且维持时间达24h具有明显的剂量时间依赖性。结论神经肽CGRP，SP通过增强IGF-1的自分泌作用即诱导内源性IGF基因表达来间接地调节成骨细胞活性，从而发挥成骨效应。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子对人成骨细胞生长及增殖的影响

目的研究酸性成纤维细胞生长因子(acidfibroblastgrowthfactoraFGF)对成骨细胞生长及增殖的影响。方法取人胚胎颅盖骨骨内膜,利用组织块培养法进行成骨细胞原代培养,DMEM-F12培养液传代、扩增培养,以细胞形态学、细胞形成钙结节的能力及碱性磷酸酶活性鉴定成骨细胞。应用光镜、电镜、MTT法及流式细胞仪检测,分别从细胞形态、细胞生长及增殖特性分析不同浓度的aFGF对人成骨细胞生长和增殖的影响。结果10～100ng/mlaFGF可明显促进成骨细胞生长、增殖使S期细胞数增加,但高浓度aFGF(>1μg/ml)对成骨细胞生长具有抑制作用。结论aFGF对体外培养的人成骨细胞具有促生长和增殖作用,其有效浓度为10～100ng/ml。     

Immunoelectron microscopy of osteonectin and type I collagen in osteoblasts and bone matrix

Summary The pathway of production, secretion, and extracellular deposition of type I collagen and osteonectin was studied by immunoelectron microscopy using respective polyclonal antibodies. Protein A gold and immunogold methods yielded to similar results in human callus tissue used as a model of bone formation. The intracellular distribution of osteonectin in active osteoblasts is found as a faint immunolabeling of vesicular Golgi fields and some lamellae of rough endoplasmic reticulum. A more intensive labeling occurs in opaque cytoplasmic vesicles pointing to the process of secretion as some of the vesicles are connected with the basal cell membrane. Our type I collagen antibody did not label the respective intracellular compartments. Extracellulary, the type I collagen antibody showed a continuous labeling from the immature subcellular osteoid to the mineralized bone. Osteonectin antibodies were bound first to the deeper layer of osteoid maturation with intensity increasing below the mineralization front. Osteonectin is thought to be associated with mineralization of bone matrix.     

当归挥发油对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及Ⅲ型胶原合成的影响

目的探讨当归挥发油对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞，用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性，用流式细胞术分析细胞周期及凋亡，用放射免疫法测定胶原合成。结果低浓度（≤4mg／L）当归挥发油促进细胞增殖（P〈0．05），降低G0/G1期细胞且增加S期细胞（P〈0．05），降低凋亡率（P〈0．05），而高浓度（≥16mg／L）时抑制增殖（P〈0．05），增加G0/G1期细胞且减少S期细胞（P〈0．05），增加凋亡率（P〈0．05）。当归挥发油呈剂量和时问依赖性抑制细胞合成胶原（P〈0．05或0．01）。结论当归挥发油对人脐静脉内皮细胞的增殖呈低浓度刺激高浓度抑制的双向调节作用，但对胶原合成呈抑制效应。     

Parathyroid hormone blocks the stimulatory effect of insulin-like growth factor—I on collagen synthesis in cultured 21-day fetal rat calvariae

We examined the interaction of parathyroid hormone (PTH) and recombinant human insulin-like growth factor I (IGF-I) on collagen synthesis in 21-day fetal rat calvariae as assessed by measuring the incorporation of [³H]proline into collagenase-digestible protein. After 96 hours of culture, 10 nM PTH antagonized the stimulation of collagen synthesis and partially blocked the increase in dry weight produced by 10 nM IGF-I. The effect of PTH to block IGF-I stimulated collagen synthesis was observed in the central bone of calvariae and was mimicked by forskolin and phorbol 12myristate 13-acetate, but not by 1,25-dihydroxyvitamin D₃, transforming growth factor- or dexamethasone. Our data are consistent with the concept that the direct effect of PTH is to inhibit basal CDP labeling and fully oppose IGF-I stimulated CDP labeling. The finding that this effect of PTH is mimicked by forskolin and PMA suggests that this block in IGF-I stimulation of CDP labeling involves both cAMP and protein kinase C mediated pathways.     

左旋肉毒碱对人成骨细胞增殖和凋亡的影响

目的观察左旋肉毒碱(L-carnitine,L-C)对人成骨细胞增殖和凋亡的作用。方法以3H掺入法(3H-TdR)测定左旋肉毒碱对人成骨细胞增殖的影响;以吖啶橙/溴化乙啶染色和细胞凋亡ELISA(酶联免疫吸附法)试剂盒测定左旋肉毒碱对人成骨细胞凋亡的影响;以免疫印记法检测左旋肉毒碱干预前后活化型Caspase-3、-9蛋白质表达水平的改变。结果10~100mmol/L左旋肉毒碱能促进人成骨细胞增殖。吖啶橙/溴乙啶染色法示100mmol/L左旋肉毒碱干预使人成骨细胞凋亡细胞明显减少。ELISA结果示10~100mmol/L左旋肉毒碱干预可显著抑制人成骨细胞凋亡。10~100mmol/L左旋肉毒碱干预可抑制无血清饥饿诱导的人成骨细胞caspase-3、9活化增加。结论左旋肉毒碱促进人成骨细胞增殖,并通过下调Caspase-3、-9的活化抑制人成骨细胞凋亡。     

牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用的可能机制。方法 用噻唑蓝MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡，吖啶噔活体染色观察细胞凋亡形态，免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测cjn,cfos表达。结果 在5－50mmol/L浓度范围内牛磺酸能剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖，可使G0－G1期细胞增多，S期细胞减少，并能明显抑制c-jun,c-fos的表达（P＜0．01），而牛磺酸并不诱导系膜细胞的凋亡。结论 牛磺酸可显著抑制系膜细胞增殖，使系膜细胞阻滞于G0－G1期；牛磺酸对系膜细胞增殖的抑制作用与其抑制c-jun,c-fos的表达有关。牛磺酸对系膜细胞凋亡无诱导作用。     

骨碎补含药血清对成骨细胞增殖、成骨的影响

目的研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨的影响。方法取乳鼠颅骨,利用二型胶原酶反复消化,离心,提取成骨细胞。利用骨碎补含药血清干预,分别测定细胞增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量等,研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨分化及其抗氧化性的影响;结果用含药血清干预,测定增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、钙化结节量均高于空白对照组。结论骨碎补含药血清可以促进成骨细胞的增殖、成骨分化及其增强其抗氧化性。     

当归挥发油对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响

目的:探讨当归挥发油对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响。方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,用流式细胞术分析细胞周期及凋亡,用放射免疫法测定胶原合成。结果:1mg/L、4mg/L和16mg/L当归挥发油组与对照组相比G0/G1期细胞、G2/M期减少,显著增加了S期细胞(P<0.05)。凋亡率随当归挥发油浓度增大逐渐增大(P<0.05)。当归挥发油呈剂量和时间依赖性抑制细胞合成胶原(P<0.05或0.01)。结论:当归挥发油抑制成纤维细胞的增殖和胶原合成。