荧光定量PCR检测HBV—DNA的临床意义

本文采用荧光定量ＰＣＲ法对本院临床和门诊血清标本2 0 0份进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定 ,探讨ＨＢＶ ＤＮＡ含量与肝病变发展的关系。1　材料和方法1 1　材料　标本取自确诊或怀疑乙肝的患者及无症状体检者 ,共检测 2 0 0例。试剂∶荧光定量ＨＢＶ ＤＮＡ试剂盒由匹基公司提供。仪器∶ＰＥ5 70 0ＰＣＲ仪。1 2　方法　ＨＢＶ ＤＮＡ定量分析采用荧光定量ＰＣＲ法。按操作说明书进行。1 3　统计学方法　各组ＨＢＶ ＤＮＡ含量均数比较采用ｔ检验。遇有阴性结果不参加平均值的统计。2　结果2 1　ＨＢＶ ＤＮＡ、ＦＱ ＰＣＲ标准曲线　ＨＢＶ …     

杂交酶联定量PCR检测HBV DNA的初步应用

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)ＤＮＡ定量检测已越来越受到临床的重视[1～3] 。我们采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)杂交定量检测试剂测定乙型肝炎 (乙肝 )患者血清ＨＢＶＤＮＡ含量 ,并且对检测试剂作初步评价和临床应用观察 ,现报道如下。材料和方法一、检测对象乙型肝炎患者 5 3 8例 ,男 40 2例 ,女 1 3 6例 ,平均年龄 3 5岁。二、ＨＢＶＰＣＲ杂交酶联定量检测1 .试剂　由上海浩源生物科技有限公司提供 ,按说明书操作。2 .仪器　ＢＩＯ -ＲＡＤ5 5 0型酶标仪 ,ＭＪ - 1 0 0热循环仪。结果一、扩增效率由于ＰＣＲ反应的定量结果与ＰＣＲ平均效率直接有…     

246份母—脐血配对HBV检测结果与分析

我们收集了 2 4 6份母 脐配对血进行ＨＢＶ血清标志物及ＤＮＡ定量检测 ,结果报告如下。1　材料与方法1 1　标本来源　 2 4 6份母 脐配对血均来自 1999年 11月至 2 0 0 0年 6月本院产科住院产妇静脉血及所产新生儿脐带血 ,分离血清置 - 2 0℃冰箱内保存。对ＨＢｓＡｇ阳性的母血 ,无论其对应脐血ＨＢＶ血清标志物结果怎样 ,均进一步用荧光定量ＰＣＲ(ＦＱ ＰＣＲ)检测ＨＢＶ ＤＮＡ。1 2　试剂与方法　ＨＢＶ Ｍ检测使用科华公司试剂盒按说明书操作。ＦＱ ＨＢＶＤＮＡ试剂购自复星公司。用ＰＥ5 70 0荧光定量扩增仪 ,结果自动测出。1 3　结…     

斑点杂交与荧光定量PCR检测血清HBV-DNA的临床意义

ＨＢＶ ＤＮＡ是一种十分重要的ＨＢＶ感染标志 ,是直接反映ＨＢＶ的存在、病毒活动性复制与具有传染性的标志 ,对于确定ＨＢＶ感染的诊断有重要价值[1] 。目前ＨＢＶ感染的基因诊断技术已从定性发展到定量[2 ] 。斑点杂交定性检测不能直接反映病毒负荷量。近年来 ,荧光定量ＰＣＲ逐渐应用于临床检测ＨＢＶ ＤＮＡ。通过对 10 5例慢性乙型肝炎患者用斑点杂交与荧光定量ＰＣＲ两种方法同时进行血清ＨＢＶ ＤＮＡ检测 ,以了解两种方法的一致性 ,探讨两者的临床应用价值及问题。1　材料和方法1.1　研究对象　 2 0 0 1年 3至 7月间中山医科大学…     

乙肝患者血清中HBV DNA含量的测定及其意义

乙型肝炎病毒感染的诊断主要依赖于血清特异抗原抗体和ＨＢＶＤＮＡ的检测。我们用定量ＰＣＲ方法检测乙肝患者血清ＨＢＶＤＮＡ ,以探讨不同免疫标志的乙肝患者血清中ＨＢＶＤＮＡ含量及其意义。1　材料和方法1 1　研究对象　对象为本院 1999年 3月～ 1999年 5月住院及门诊的乙型肝炎患者 43例 ,全部乙肝病例均为临床确诊的乙型肝炎患者。年龄在 19岁～ 5 0岁 ,其中男 2 5例 ,女18例。另选择 7例体格检查后乙肝五项血清标志全阴性 ,肝功能正常作为对照。血清采用经高压灭菌的 1 5ｍｌＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管分装 ,于 - 2 0℃冻存待检。1 2　…     

乙肝指标在急、慢性肝炎中临床意义的差异

本文用荧光定量ＰＣＲ方法检测血清中的乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)ＤＮＡ[1] ,以研究乙肝指标在急、慢性肝炎中临床意义的差异。1　临床材料1 .1　一般资料 　急性乙肝患者 1 2 5例 ,男 1 0 4例、女 2 1例 ,年龄 1 2～ 60岁。慢性乙肝患者 2 1 6例 ,男 1 74例、女 4 2例 ,年龄 5～ 69岁。均为 1 999年 1 2月～ 2 0 0 0年 1 1月保定市传染病医院住院病人 ,符合 2 0 0 0年第1 0次全国病毒性肝炎学术会议修订的诊断标准。1 .2　血清学检查 　全部病人均清晨空腹采静脉血 ,分离血清 ,用ＥＬＩＳＡ法检测乙肝两对半 ,由化验室专业人员操作。1 .3　荧…     

AmplisensorPCR定量测定血清中乙型肝炎病毒核酸

我们用信号引物能量转移法 (ＡｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒＰＣＲ)定量检测了乙型肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ ,并与ＨＢＶ血清标志物(ＨＢＶＭ)关系作一比较。1　材料和方法1 1　研究对象　 97例乙型肝炎患者均是 1998年 11月～1999年 3月我院住院患者 ,男 80例、女 17例。年龄 18～71岁。按 1995年 (北京 )全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准 ,急性肝炎 (ＡＨ) 14例 ,慢性肝炎 (ＣＨ) 75例 (其中慢性轻度 41例、中度 2 4例、重度 10例 ) ,肝炎后肝硬化 8例。另选 10例体检健康人作对照。分别留取标本同步检测血清标志物及采用Ａｍｐｌｉ…     

乙肝患者血清HBV DNA检出率分析

探讨ＰＣＲ技术测定ＨＢＶ ＤＮＡ的临床应用价值。用ＰＣＲ法与ＥＬＩＳＡ法测定乙国清标志物。结果表明ＨＢＶ ＤＮＡ在乙肝患者血清平均检出率５４．８％。人为ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率与乙现毒所处的临床阶段,基因的整合与突变及抗病毒药物的应用相关。     

聚合酶链反应检测血透患者血清中HBV DNA的临床意义

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了４２例维持性血液透析患者血清标本的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，以评价ＰＣＲ技术在调查透析中心ＨＢＶ感染的流行病学方面的应用价值。结果在４２例标本中有１７例ＨＢＶＤＮＡ阳性（４０．５％），与常规血清标志物相比较，ＨＢｓＡｇ阳性者其ＨＢＶＤＮＡ阳性率为６０．９％，而全部血清标志物均阴性者其ＨＢＶＤＮＡ阳性率为１３．３％。提示：ＰＣＲ方法是监测中心透析ＨＢＶ传染的更灵敏、更可靠手段。它也是对ＨＢＶ变异类型的鉴别及疗效评价方面的一个重要方法。     

荧光定量PCR方法检测乙肝病毒DNA实验条件的研究

乙肝病毒血清标志物 (ＨＢＶ -Ｍ)检测是目前诊断乙型肝炎最常用的指标 ,即俗称的“两对半”。主要反映人体对乙肝病毒 (ＨＢＶ)的免疫反应状态 ,由于不同血清标志模式反映不同的临床意义 ,非传染病专业的医师很难准确掌握。因此采用简单快捷的诊断指标对乙肝早期诊断、准确判断乙肝患者的带毒状态具有重要意义。定量检测ＨＢＶＤＮＡ是衡量乙肝传染性的最精确的指标 ,是确定ＨＢＶ感染不同复制状态的非常有价值的检测手段。荧光定量ＰＣＲ(ＦＱ -ＰＣＲ)克服了常规ＰＣＲ假阳性率高的缺点 ,实现对ＨＢＶＤＮＡ的定量检测 ,可为乙型肝炎提供…     

实时荧光定量PCR法检测血清HBV DNA的临床意义

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染可引起多种类型的急慢性肝病 ,包括从轻的无症状ＨＢｓＡｇ携带者 (ＡＳＣ)到严重的重型肝炎 ,最终可形成肝硬化和肝细胞癌(ＨＣＣ) [1] 。ＨＢＶ复制启动乙型肝炎病变活动。ＨＢＶＤＮＡ是ＨＢＶ感染和复制最直接、特异和灵敏的指标。作者等采用实时荧光定量聚合酶链反应 (ＦＱ ＰＣＲ)法 ,观察不同临床类型ＨＢＶ感染者ＨＢＶＤＮＡ水平 ,探讨其与临床的关系及诊断意义。1　临床资料1.1　病例选择　 4 75例ＨＢＶ感染者为 2 0 0 0年 3月至 2 0 0 0年 12月本院门诊和住院病人。其中男 371例 ,女 10 4例 ,平均年龄…     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的数量和免疫指标,以指导临床。方法设计合成了ＨＢＶＦＱＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本。结果经ＦＱＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原、ｅ抗原、ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢＶＤＮＡ也全部阳性,平均ＨＢＶＤＮＡ拷贝数为１．１×１０８／ｍｌ;９８例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性的标本,其阳性率为７３％（７１例）,平均拷贝数为８．６×１０５／ｍｌ,而常规ＰＣＲ只有３３％的阳性率;６７例ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性标本的平均拷贝数为２．３×１０５／ｍｌ。结论能够避免ＰＣＲ后处理导致的假阳性污染,并实现准确定量。ＦＱＰＣＲ可以检测ＨＢＶ的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。     

慢性乙型肝炎患者胃镜检查的意义

1　资料与方法　1.1　病例选择　 33例慢性乙型肝炎患者均为 1999年 10月～ 2 0 0 1年 10月在我院传染科门诊及住院患者 ,其中男性 19例 ,女性 14例 ,年龄 15岁～ 6 0岁 ,诊断均按 1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的方案为标准。其中轻度 10例 ,中度18例 ,重度 5例 ,血清ＨＢＶＭ检测、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ或抗 -ＨＢｅ ,抗 -ＨＢｃ阳性。ＨＢＶＤＮＡ检测为采静脉血用美国Ｒｏｃｈｅ诊断有限公司生产的定量ＰＣＲ仪检测 ,结果阳性 2 8例 ,阴性 5例。Ｂ超检查均无门脉高压症表现。1.2　仪器和方法　胃镜为日本产Ｏｌｙｍ…     

用PCR检测慢性乙肝患者唾液、尿液中HBV－DNA

用ＰＣＲ检测慢性乙肝患者唾液、尿液中ＨＢＶ－ＤＮＡ龚希平，徐乾（南京市钟阜医院，２１００７０）本文通过应用ＰＣＲ技术对慢性乙肝患者的唾液、尿液进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测，以了解唾液、尿液中ＨＢＶ－ＤＮＡ的确切情况及其传染性如何，并就其临床意义作了一些探...     

PCR检测血清中HBVDNA

ＰＣＲ检测血清中ＨＢＶＤＮＡ罗仁福，陈秀珍（内江市二医院，四川内江６４１００３）笔者建立的ＰＣＲ方法可检出血清中ｌｆｇＨＢＶＤＮＡ，应用这一新技术检测了一批慢性肝炎及肝癌病人血清中的ＨＢＶＤＮＡ，并观察了其临床意义。１材料和方法１．１１２例临床诊断为...     

PEG沉淀提取法在提取HBV DNA中的应用

血浆ＨＢＶ核酸模板提取质量对ＨＢＶＤＮＡ定量检测起重要作用。本文参照文献[1] 建立了ＰＥＧ沉淀提取制备ＨＢＶ核酸模板方法 ,并用于ＨＢＶＤＮＡ荧光定量ＰＣＲ检测。1　材料与方法1.1　标本　本院门诊及住院乙型肝炎患者 ,用ＰＣＲ专用管收集血液 ,ＥＤＴＡ抗凝 ,分离血浆 ,置 - 2 0℃保存或当日检测。1.2　试剂　沉淀剂由ＰＥＧ 6 0 0 0和氯化钠及水配制而成 ;裂解液由ＮＰ40配制而成 ;ＨＢＶＤＮＡ荧光定量试剂由本科研制 ;磁颗粒核酸提取试剂盒购自Ｒｏｃｈｅ公司。1.3　ＰＥＧ沉淀提取法　取血浆样本 10 0 μｌ加入等量沉淀剂 ,混…     

肝病患者中抗—TTV—IgG和TTV DNA检测的临床意义

为研究ＴＴ病毒 (ＴＴＶ)在肝病患者中的感染状况 ,我们对 12 7例各类肝病患者进行了抗 ＴＴＶ ＩｇＧ及ＴＴＶＤＮＡ检测。一、材料和方法1.对象　 12 7例肝病患者为按 2 0 0 0年 9月西安全国传染病寄生虫病、肝病学分会制订的标准诊断的本院住院病人 ,其中乙型肝炎 84例、甲型肝炎 5例、丙型肝炎 3例、戊型肝炎 5例、非甲非戊型肝炎 30例。南通市血站的 2 0名献血员作为对照。2 .方法　ＴＴＶＤＮＡ检测采用套式ＰＣＲ法 ,抗 ＴＴＶ ＩｇＧＨＤＶ Ｍ采用ＥＩＡ法 (北京医科大学肝病研究所试剂 ) ,抗 ＨＡＶ ＩｇＭ、ＨＢＶＭ、抗 ＨＣ…     

肝癌患者HBV血清标志物与HBV DNA检测的临床意义

为了解肝癌患者乙型肝炎病毒血清标志物 (ＨＢＶＭ )与ＨＢＶＤＮＡ情况 ,我们对 6 8例肝癌患者进行了观察 ,现将结果报告如下。一、对象和方法1.对象　经确诊的肝癌患者 6 8例 ,男 6 1例 ,女 7例 ,年龄 2 8～ 83岁。2 .方法　所有病例均抽取静脉血 ,分离血清用酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)进行ＨＢＶＭ (ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｓ、抗 ＨＢｅ、抗 ＨＢｃ)检测 ,试剂由上海实业科华生物技术有限公司提供 ;ＨＢＶＤＮＡ用聚合酶链反应 (ＰＣＲ) ＥＬＩＳＡ法检测 ,试剂由上海浩源生物制品有限公司提供 ;所有操作步骤按说明书…     

单纯慢性乙型肝炎病毒感染者HBV DNA水平与临床

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ )感染慢性化主要是因为乙型肝炎病毒在体内持续复制引起。近年作者运用定量聚合酶链反应(ＰＣＲ)方法测定不同类型慢性ＨＢＶ感染患者的血清ＨＢＶＤＮＡ拷贝数 ,报告如下。1　资料与方法1.1　病例资料　本组 32 6例慢性ＨＢＶ感染者 ,均为我院 1995～ 1999年门诊和住院患者 ,其中男 189例 ,女 137例 ,年龄 18～2 5岁 ,平均 34.2岁 ,抗 ＨＢＣ均为阳性 ,均未进行过抗病毒治疗和免疫治疗。诊断按照 1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准 ,无症状ＨＢＶ携带者 (ＡＳＣ) 6 2例 ;慢性乙型肝炎 (ＣＨＢ) 2 47…     

利用实时定量PCR检测TTV DNA含量

为了评价健康人群与肝病病人之间血清ＴＴＶＤＮＡ水平的差异 ,本文建立实时ＰＣＲ检测 (ＲｅａｌｔｉｍｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎＰＣＲ ,ＲＴＤ ＰＣＲ)系统对感染ＨＣＶ的病人和感染ＴＴＶ的志愿献血员(ＢＤＳ)中的血清ＴＴＶＤＮＡ水平进行定量 ,并判定ＴＴＶ数量与肝损害严重性之间的关系。作者分析 78份感染ＨＣＶ而ＨＢＳＡｇ为阴性的病人血清样本 (63份血清ＡＬＴ升高 ,1 5份正常 )。对照组为 70份ＢＤＳ 血样 ,其ＴＴＶ为阳性而ＨＩＶ、ＨＢＶ及ＨＣＶ为阴性 ,ＡＬＴ正常。所有样本贮存于 - 80℃备测。制备 2对引物和探针设置于 5’未…