嘌呤受体P2X7对视网膜毛细血管周细胞凋亡的影响

目的：探讨嘌呤受体P2X7在体外培养大鼠视网膜毛细血管周细胞上的功能意义。 方法：利用显微镜下观察结合TUNEL 计数法分别测定P2 X7激动剂BzATP和拮抗剂OxATP对体外培养的正常视网膜毛细血管周细胞以及糖尿病大鼠视网膜毛细血管周细胞存活率的影响。 结果：P2 X 7受体激动后可介导视网膜毛细血管周细胞死亡,糖尿病大鼠视网膜毛细血管周细胞较正常视网膜毛细血管周细胞,在同等激动剂浓度下或在同样的时间点,能引起更多的细胞凋亡。而拮抗剂OxATP 可以明显减轻BzATP对视网膜毛细血管周细胞的毒性作用,提高其存活率。 结论：P2 X 7受体活性对视网膜毛细血管周细胞凋亡有一定调控作用。     

P2X7受体对缺氧诱发小鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的：：探讨嘌呤受体P2X7对缺氧诱发小鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响。方法：以小鼠视网膜神经节细胞株RGC-5为研究对象,按照不同处理因素将细胞随机分为4组：正常对照组( G1)、缺氧组( G2)、缺氧+激动剂( BzATP )组( G3)、缺氧+拮抗剂(BBG)组(G4);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的存活率;用Annxin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内cleave-caspase-3和cleave-PARP蛋白的表达。结果：与正常对照组相比, RGC-5细胞经缺氧处理后,细胞存活率明显降低;凋亡率显著升高;细胞内 cleave-caspase-3和cleave-PARP蛋白表达增加;P2X7受体激动剂BzATP能明显加重缺氧诱发的细胞凋亡,而BBG预处理可以显著拮抗缺氧所致的细胞凋亡。结论：缺氧能激活视网膜神经节细胞嘌呤受体P2X7,并参与视网膜神经节细胞的凋亡。     

糖尿病早期大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡研究

目的：研究早期糖尿病视网膜病变大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡及其特征。方法：腹腔内注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。应用PAS染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记（TUNEL）法标记和透镜观察进行研究。结果：在糖尿病3月和6月,可见周细胞和内皮细胞鬼影;周细胞和内皮细胞核异染色质聚集靠边并随病程进展而加重;被TUNEL法标记的细胞核染色质分布不均,表现为环形核、新月形核等。结论：早期糖尿病视网膜病变大鼠视网膜毛细血管周细胞丧失的性质为细胞凋亡,内皮细胞亦存在凋亡。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶在视网膜毛细血管周细胞凋亡中的活性及意义

目的探讨糖基化终产物（AGE）在糖尿病视网膜病变（DR）发生中的作用。方法培养的牛视网膜毛细血管周细胞分别与不同浓度（0．47、1．88、7．50μmol／L）的AGE共同培养4d后,分别检测细胞凋亡、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-3）活性及caspase-3抑制剂Z—DEVD-fmk对周细胞凋亡及凋亡调节基因Bcl-2／Bax比率的影响。结果AGE能以剂量依赖的方式诱导培养的牛视网膜毛细血管周细胞凋亡（r=0．867,P〈0．01）、增加细胞内caspase-3的活性,而选择性caspase-3抑制剂Z—DEVD—fmk能明显抑制AGE作用下的周细胞凋亡及提高凋亡调节基因Bcl-2／Bax的比率。结论凋亡是DR中视网膜毛细血管周细胞选择性丧失的机制之一,caspase-3活性的增加是AGE诱导周细胞发生凋亡的关键因素。     

早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡及其特征

目的：研究早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡及其特征。方法：腹腔内注射链脲佐菌素诱导40只糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组（CON）、糖尿病1月组（DM1）、3月组（DM3）、6月组（DM6）。应用PAS染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记（TUNEL）法标记和染射电镜观察进行研究。结果：于糖尿病3月和6月组,见周细胞和内皮细胞鬼影。周细胞和内皮细胞核异染色质聚集靠边,并随病程进展而加重。被TUNEL法标记的细胞核染色质分布不均,表现为环形核、新月形核等。结论：早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管周细胞丧失的性质为细胞凋亡,内皮细胞亦存在调亡。     

糖尿病视网膜毛细血管周细胞凋亡分子生物学机制的研究进展

随着糖尿病视网膜病变研究的进展,已证实糖尿病视网膜毛细血管周细胞的丧失是由细胞凋亡所引起的。糖尿病患者体内血糖水平的增加使视网膜毛细血管周细胞内氧自由基产生增加,导致DNA修复酶聚ADP核糖多聚酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)激活、线粒体内细胞色素C(cytochrome C,CytC)的释放激活半胱天冬酶(caspase)家族、周细胞内Ca2 浓度增加、激活核转录因子-κB(the nuclear factor-κB,NF-κB),从而引起细胞凋亡。糖尿病患者由于糖化血红蛋白的增多等原因,视网膜长期处于低氧状态。低氧则引起视网膜毛细血管周细胞DNA损伤、氧自由基的产生增加、细胞凋亡抑制基因Bcl-2的低表达,导致细胞凋亡。糖尿病患者体内高血糖水平和继发形成的糖基化终末产物(advancedglycation end-products,AGEs)都能够使视网膜毛细血管周细胞的Bax基因高表达与Bcl-2基因的表达减少,引起促凋亡、抗凋亡基因比例失衡,导致细胞凋亡。色素上皮衍生因子(pig-ment epithelium-derivedfactor,PDEF)可以增加视网膜毛细血管周细胞内谷胱苷肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)mRNA转录水平,阻止高糖引起的视网膜毛细血管周细胞内氧自由基的增加,因而具有细胞凋亡作用。糖尿病患者体内PDEF水平的降低,导致了视网膜毛细血管周细胞凋亡的发生。     

糖尿病视网膜病变时血管周细胞的凋亡

周细胞因其自身特点,能够维持血管的稳定性,并能够控制内皮细胞的增殖。周细胞的缺失是糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)主要特征之一。当发生DR时,毛细血管周细胞的凋亡途径被激活。人们对周细胞增殖与凋亡机制的研究不断深入,将会从毛细血管周细胞方面找到更多DR治疗的切入点。     

恒定性及波动性高糖对牛视网膜周细胞凋亡的影响

目的探讨恒定性高糖及不同频率的波动性高糖对原代培养的牛视网膜周细胞增生、细胞周期及凋亡的影响。方法以体外培养3代近融合的牛视网膜毛细血管周细胞为对象，分别在对照组（5．5mmol／L）、恒定性高糖组（25mmol／L）及不同波动频率的高糖组（5．5mmol／L与25mmol／L交替，频率分别为6h和24h）中孵育6d，采用MTT比色法观察周细胞增生情况；流式细胞术观察周细胞周期情况；TUNEL法检测培养后周细胞的凋亡率。结果周细胞增生受抑制，周期阻滞，出现典型的细胞凋亡特征。恒定性高糖组的作用高于波动性高糖组（P〈0．05）；波动性高糖组内波动频率越高作用越明显（P〈0．05）。结论恒定性高糖较波动性高糖可能具有更强的抑制周细胞增生、周期阻滞及诱导凋亡作用，波动组间波动频率高者比频率低者作用更明显。     

微血管周细胞及其与糖尿病视网膜病变

概述了微血管周细胞的命名、定位、形态、常见标记物及来源;介绍了周细胞在微血管的生理、病理活动中所起的重要作用;总结了周细胞与糖尿病视网膜病变的相关性.深化对周细胞的认识是未来微血管疾病研究的方向,亦是挑战.     

黄芪提取物对体外高糖培养牛视网膜毛细血管周细胞的影响

目的:观察中药黄芪提取物对体外高糖培养牛视网膜毛细血管周细胞(pericyte,PC)的影响.方法:在体外高糖(20mmol/L)培养2d的第3代周细胞中加入不同浓度的黄芪提取物,继续培养2d,用MTT比色法,测定每组的吸光度值(A值),根据A值计算抑制率.另在周细胞中加入0.4g/L黄芪提取物,2d后收集细胞,用流式细胞仪测定凋亡细胞百分率.结果:黄芪提取物0.0256～10 000 mg/L浓度组对高糖培养周细胞的增殖有促进作用,其A值与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05).在周细胞以20mmol/L葡萄糖培养48h后,加入400mg/L黄芪提取物组的细胞凋亡百分率低于空白对照组和模型组(12.2%±1.5% vs 7.30%±2.0%,18.6%±2.1%P＜0.05).结论:黄芪能抑制周细胞凋亡,提高体外高糖培养视网膜毛细血管周细胞的存活力.     

周细胞与糖尿病视网膜病变

随着对周细胞生理，生化的研究进展，研究者们发现视网膜细血管周细胞与糖尿病视网膜病变的关系越来越密切，通过对周细胞的研究有助于阐明糖尿病视网膜病变的发病机理，从而为防治糖尿病视网膜病变提供一种新的思路。     

Nogo受体在早期糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用

目的:探讨Nogo受体(nogo receptor,NgR)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用及机制。方法:链脲佐菌素诱导SD大鼠DM模型,实验分4组,对照组;DM组;siNgR组:DM大鼠玻璃体内给予NgR反义核苷酸序列;siRNA空白组:DM大鼠玻璃体内给予阴性核苷酸序列。1mo后TUNEL染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡,试剂盒检测视网膜丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western-blot检测视网膜NgR及caspase-3含量。结果:对照组、DM组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为3.74±0.49,7.21±0.96,6.41±1.34及4.02±0.53nmol/mg prot。与对照组相比,DM组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡增加,NgR及caspase-3表达上调,MDA含量升高(P<0.05),而siNgR组视网膜RGC数量、NgR及caspase-3表达、MDA含量较对照组均无明显变化(P>0.05)。结论:NgR表达增加是糖尿病RGC凋亡的重要原因之一,其机制可能与NgR诱导视网膜氧化应激、上调caspase-3表达有关。     

高糖及不同幅度高糖波动下牛视网膜毛细血管周细胞增生与凋亡的研究

目的分析不同浓度葡萄糖培养下的牛视网膜毛细血管周细胞增生、细胞周期改变及凋亡与葡萄糖浓度及高糖波动幅度的相关性，并对比同一水平下恒定高糖与高糖波动对周细胞作用的强度。方法以体外培养3代近融合的牛视网膜毛细血管周细胞为对象。分另q在不同浓度高糖（15mmol·L^-1、25mmol·L^-1、35mmol·L^-1）、不同幅度的高糖波动（5．5／15mmol·L^-1、5．5／25mmol·L^-1、5．5／35mmol·L^-1）及对照组（5、5mmol·L^-1）下孵育7d，采用MTT比色法观察周细胞增生情况；流式细胞术观察周细胞细胞周期变化情况；TUNEL法检测培养后周细胞的凋亡率。结果（1）高糖及高糖波动抑制周细胞增生，与葡萄糖浓度及高糖波动幅度呈正相关（P〈0．01），同一水平下持续高糖组作用强于高糖波动组（P〈0.05）；（2）高糖及高糖波动阻滞用细胞周期，使G0／G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少，G2／M细胞比例无明显改变；（3）高糖及高糖波动诱导周细胞凋亡，高糖各组凋亡率分别为23．78％、37．22％．48．73％，而高糖波动组分别为15．53％、28．73％、39.14％，与对照组的4.25%相比差异有显著性意义（P〈0.01）且周细胞凋亡率与高糖的浓度呈正相差（P〈0.01）；与高糖波动幅度呈正相关（P〈0.01）；同一水平下持续高糖组作用强于高糖波动组（P〈0.05）。结论同一水平下恒定高糖较高糖波动可能具有更强的周细胞增生抑制，周期阻滞及诱导凋亡作用，这些作用可能与葡萄糖浓度及波动的幅度正相关。【眼科新进展2007；27（2）：87-90]     

周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、胶质细胞及巨噬细胞增殖的影响

目的观察体外培养的视网膜周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。方法MTT法测定不同稀释度的周细胞条件培养液对色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。结果随着周细胞条件培养液稀释度的增加,其对上述细胞的抑制生长作用亦越明显。结论周细胞的缺失将导致色素细胞、巨噬细胞及胶质细胞的增殖,细胞间相互作用对于糖尿病视网膜病变的发生和发展是非常重要的。     

细胞凋亡在STZ诱导糖尿病大鼠早期视网膜病变中的作用机制

目的观察链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠早期视网膜细胞凋亡情况及血管形态变化,分析细胞凋亡在糖尿病早期的作用机制。方法Wistar大鼠随机分为实验组及对照组各28只,实验组一次性腹腔注射1%STZ诱发糖尿病模型,成模后4、8、16、24周行视网膜形态学检测,TUNEL法原位检测凋亡细胞。结果实验组大鼠早期视网膜血管无明显变化,24周时出现内界膜水肿,各层细胞排列不整,视网膜部分血管管径粗细不一。TUNEL阳性细胞最早于发病4周时出现在视网膜神经节细胞（RGCs）,数量呈时间信赖性,至24周时涉及到内核层的双极细胞、血管内皮细胞、周细胞等,凋亡指数与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）。视神经节细胞层的凋亡指数明显高于内核层细胞（P〈0.05）。结论糖尿病所致的视网膜凋亡的损伤要远远早于微血管病变的发生,对抗凋亡的发生机制有可能成为预防及治疗糖尿病视网膜病变（DR）的新策略。