膀胱癌BIU-87细胞靶向超声纳米脂质微泡造影剂的制备及体外超声成像

目的制备具有膀胱癌BIU-87细胞靶向结合的超声纳米脂质微泡造影剂,并观察体外靶向能力、检测其对细胞增殖的影响和体外超声成像效果。方法通过机械振动法制备纳米脂质微泡,用生物素-亲和素桥接法将NYZL1连接到纳米脂质微泡的表面制备靶向纳米脂质微泡造影剂,利用倒置显微镜观察其一般特性,Zate检测仪检测粒径大小和表面电荷,使用倒置显微镜来观察其体外靶向效果,用MTT法检测其不同浓度对细胞增殖的影响,使用超声诊断仪观察体外显影效果。结果膀胱癌BIU-87细胞靶向超声纳米脂质微泡呈圆形,分布均匀,无聚集;在体外靶向实验中,靶向纳米脂质微泡造影剂能高效特异性的结合在膀胱癌BIU-87细胞表面并沿细胞表面规则排列;不同浓度下两种微泡对细胞增殖无明显变化(P0.05);体外超声成像实验中,靶向纳米微泡呈点状细密高回声。结论本实验成功制备膀胱癌BIU-87细胞超声纳米脂质微泡造影剂,能够在体外与膀胱癌BIU-87细胞特异性地靶向结合,两种微泡对细胞生长无明显影响且体外超声显像效果良好。     

双靶向整合素αvβ3及VEGFR2微泡造影剂的制备及其对肝癌细胞寻靶能力的分析

本研究采用生物素亲和素法将整合素αvβ3及VEGFR2抗体与Usphere微泡结合,制备双靶向整合素αvβ3及VEGFR2微泡造影剂。制备成功的双靶向整合素αvβ3及VEGFR2微泡分布均匀,平均粒径（1 205.06±103.70）nm,电位（-27.0±3.0）mV。将微泡与MHCC-97H肝癌细胞共孵育,免疫荧光...     

载吲哚菁绿超声微泡造影剂活体近红外荧光显像兔淋巴结

目的制备载吲哚菁绿的聚乳酸羟基乙酸（ICG-PLGA）超声微泡造影剂并检测其特性,观察以之进行活体近红外荧光显像兔淋巴结的效果。方法用双乳化法制备ICG-PLGA超声微泡造影剂,行光镜、扫描电镜、粒径检测检查,观察其形态及大小;用分光光度法绘制吲哚菁绿的标准曲线,计算造影剂中吲哚菁绿的载药量和包封率。对3只正常大白兔经足垫注射该造影剂,观察活体近红外荧光显像兔腘窝淋巴结的效果。结果 ICG-PLGA超声微泡造影剂为淡绿色乳液,光镜和电镜下形态规则,表面光滑,大小均匀;活体近红外荧光成像能清晰显示兔腘窝淋巴结。结论 ICG-PLGA超声微泡造影剂具备荧光成像的特征,具有高敏感性,可作为荧光成像的示踪剂。     

双靶向整合素αvβ3及VEGFR2微泡造影剂的制备及其对肝癌细胞寻靶能力的分析

本研究采用生物素亲和素法将整合素αvβ3及VEGFR2抗体与Usphere微泡结合, 制备双靶向整合素αvβ3及VEGFR2微泡造影剂。制备成功的双靶向整合素αvβ3及VEGFR2微泡分布均匀, 平均粒径(1 205.06±103.70)nm, 电位(-27.0±3.0)mV。将微泡与MHCC-97H肝癌细胞共孵育, 免疫荧光法检测显示双靶向微泡组微泡荧光与细胞核DAPI荧光强度比值显著高于单靶向微泡组和非靶向微泡组(P<0.05)。提示本研究成功制备双靶向整合素αvβ3及VEGFR2微泡造影剂, 可与MHCC-97H细胞特异性结合, 可作为一种监测肿瘤生长的分子影像探针。     

靶向整合素αvβ3羟基乙酸共聚物造影剂对肿瘤血管的超声分子显像

目的评价靶向整合素αvβ3羟基乙酸共聚物（PLGA）造影剂对裸鼠肿瘤新生血管的超声分子显像能力。方法采用共价连接-碳二亚胺法制备出靶向整合素αvβ3的RGD-PLGA高分子造影剂,并用激光共聚焦鉴定其连接情况。建立裸鼠卵巢癌SKOV-3模型,分别经尾静脉注射靶向整合素αvβ3的RGD-PLGA造影剂（RGD-PLGA组）和PLGA普通造影剂（PLGA组）进行造影检查。记录造影情况,绘制时间一强度曲线,并对两组造影剂的持续时间和峰值强度进行统计学分析;然后对造影40min后的图像进行数字减影和彩色编码,直观观察两种造影剂的强度差异。结果成功制备出靶向整合素αvβ3的RGD-PLGA高分子造影剂。RGD-PLGA组较PLGA组持续显影时间延长,峰值强度提高。对造影40min后的图像进行数字减影和彩色编码,可直观观察到RGD-PLGA组较PLGA组增强更明显。结论靶向整合素αvβ3 RGD-PLGA造影剂较普通PLGA造影剂有较好的造影效果。     

制备人血白蛋白改良载紫杉醇纳米微泡及其特性的实验观察

目的探讨人血白蛋白（HSA）改良载紫杉醇纳米微泡的制备,并观察其性能表征。方法采用薄膜分散法及机械振荡法制备HSA改良的载紫杉醇微泡,观察其外观、形态,检测其粒径大小、分布、Zeta电位及包封率;行CEUS观察兔髂动脉的显影情况。结果HSA改良载紫杉醇纳米微泡外观为乳白色混悬液,光镜下其分布均匀,呈圆球状,平均粒径为（772．9土6．2）nm,表面电位（一13．2士0．3）mV,浓度为（8．64士1．38）×10。／ml;其包封率为（93．51±2．07）％,高于未加入HSA的载紫杉醇纳米微泡[（84．88士4．14）％,P＜0．05]。经外周静脉注射HSA改良载紫杉醇纳米微泡后,兔髂动脉超声增强显影。结论HSA改良载紫杉醇纳米微泡理化性质稳定,药物包封率高,可达到动脉增强显影效果。     

叶酸受体靶向高分子相变超声造影剂的制备及体外寻靶实验研究

目的制备一种叶酸受体靶向的相变超声造影剂,观察其体外细胞靶向效果及超声显影情况。方法采用单乳化法制备包裹液态氟碳的高分子纳米微球,通过碳二亚胺法连接叶酸配体制备叶酸受体靶向的相变超声造影剂,以人卵巢癌SKOV3细胞验证其体外细胞靶向性能,以高强度聚焦超声(HIFU)体外辐照实验观察其超声显影情况。结果所制备叶酸受体靶向高分子相变超声造影剂平均粒径为(229.13±13.46)nm,体外细胞寻靶实验显示靶向造影剂与SKOV3细胞大量结合,而普通造影剂组与游离叶酸干预组未见明显特异性结合。造影剂溶液经一定功率HIFU辐照后,超声显影效果较辐照前明显增强。结论成功制备了叶酸受体靶向包裹液态氟碳的高分子造影剂,对高表达叶酸受体的SKOV3细胞具有良好靶向性,并具备HIFU辐照后增强超声显影的特性,有望成为卵巢癌靶向显影与治疗的理想分子探针。     

制备叶酸受体靶向载阿霉素/黑色素多功能造影剂及体外超声/光声显像

目的制备叶酸受体靶向载阿霉素/黑色素的多功能造影剂,评估其基本特性、体外细胞靶向能力、超声和光声显像效果以及对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖活力的影响。方法采用单乳化法和冷冻干燥减压充入C3F8气体的方法制备叶酸受体靶向载阿霉素/黑色素多功能造影剂,以马尔文激光仪检测其平均粒径及表面电位,应用紫外-可见光分光光度法测量阿霉素载药量,于凝胶模型中观察其体外超声、光声增强显影能力,以人乳腺癌MDA-MB-231细胞验证其体外细胞靶向能力和细胞增殖活力的影响。结果叶酸受体靶向载阿霉素/黑色素脂质多功能造影剂平均粒径为(659.60±27.56)nm,Zeta电位为(-38.90±4.00)mV,阿霉素载药率为85.72μg/mg。叶酸受体靶向造影剂大量聚集在MDA-MB-231细胞表面,具有较好的体外超声、光声显像能力,对MDA-MB-231细胞增殖有显著抑制作用。结论叶酸受体靶向载阿霉素/黑色素多功能造影剂是集靶向治疗、超声和光声多模态显像于一体的多功能造影剂,有望成为乳腺癌精准显像和治疗的理想分子探针。     

纳米级全氟丙烷脂质超声微泡造影剂的制备

目的 研制一种新型的直径在纳米级的全氟丙烷脂质超声微泡造影剂,检测其物理特征,探讨并验证其最佳制备条件.方法 以混合的半合成磷脂和全氟丙烷作基本原料,司盘60和吐温80为膜稳定剂,以高剪切分散法制备纳米级超声微泡造影剂.荧光显微镜观察形态分布特点,激光粒度分析仪检测其粒径分布.经均匀设计法及多元回归分析探索各制备条件对超声微泡粒径的影响.结果 经多元回归分析得出高剪切速度和高剪切时间对超声微泡粒径有显著性影响,最优制备条件为:高剪切速度为6档;高剪切时间为8 min;DPPC浓度20 mg/50 ml;T80/S60比值为1,该条件下制备的超声微泡分散均匀、浓度较高,平均粒径为(335±5)nnl.结论 最优条件高剪切分散法制备的超声微泡造影剂粒径分布在208%416 mn之间,是一种达到纳米级的新型超声微泡造影剂.     

包裹液态氟碳高分子纳米球相变及体外超声显影

目的制备一种新型纳米级超声造影剂——液态氟碳（PFP）高分子纳米球,观察其物理特性、体外热致相变、声致相变及体外超声显影效果。方法采用乳化一蒸发法（单乳化法）制备包裹PFP的MPEG-PLGA纳米球（P-NP）,以光镜观察纳米球形态分布,以纳米粒度及Zeta电位分析仪检测纳米球粒径和电位;在显微镜上放置加热板实时观察P-NP的相变情况;于体外应用低强度聚焦超声（LIFU）仪辐照后,观察其超声显影效果。结果所制备的包裹PFP的高分子纳米球外观为乳白色混悬液,形态规则,呈球包球形;平均粒径为（393．2±40．7）nm,平均电位为（-5．23±8．69）mV;加热板显示的温度约为42．6℃时,光镜下显示纳米球开始转变为微气泡,且随着温度增高,所产生的气泡逐渐增多;体外行LIFU辐照后,在超声基波和谐波模式下可观察到显影明显增强。结论成功制备了PFP高分子纳米球,其粒径小、稳定性好,体外经LIFU仪辐照后可增强超声显影,有望成为一种新型超声造影剂。     

Livin靶向ASODN对前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响

目的：合成Livin靶向的反义核苷酸（ASODN）,观察其对前列腺癌PC3细胞凋亡和增殖等生物学特性的影响。方法：合成全硫代磷酸化修饰的LivinASODN并通过脂质体转染前列腺癌PC3细胞。采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,采用RT—PCR检测转染后Livin基因mRNA的表达情况,采用流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡效应,采用体内成瘤实验比较细胞在裸鼠体内成瘤性的变化,采用激酶法测定Caspase-3活性的变化。结果：LivinASODN转染PC3细胞后,与对照组相比,实验组细胞内LivinmRNA的表达水平下调（P〈O．01）;细胞的增殖受到显著抑制（P〈O．01）;细胞凋亡率明显增高（P〈O．01）;肿瘤细胞在荷瘤鼠体内的成瘤体积小于对照组（P〈O．05）;Caspase-3活性明显增加（P〈0．05）。结论：靶向Livin基因的ASODN干扰了前列腺癌PC3细胞中Livin基因的表达,抑制了细胞的增殖并诱导其凋亡,延缓了肿瘤细胞的生长。     

金纳米团簇标记PLGA支架的研究

目的探讨金纳米团簇用于示踪可降解高分子支架的可行性,为非侵入成像方式监测体内组织工程支架降解提供方法和思路。方法用氯金酸和牛血清白蛋白(BSA)为原料合成金纳米团簇(Au Nanoclusters,Au NCs),进行相关表征及细胞毒性检测。以Au NCs标记聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),制备Au NCs/PLGA支架,扫描电镜检测支架表面结构,荧光及CT扫描检测支架特性。将支架植入裸鼠皮下,应用荧光成像及Micro-CT扫描,以观测支架在体内的情况。结果合成的Au NCs具有荧光特性,无细胞毒性;纳米团簇标记的PLGA支架保持荧光特性,同时在CT扫描中可显影;Au NCs/PLGA支架可以在裸鼠皮下通过荧光成像及Micro-CT扫描来示踪。结论 Au NCs可作为组织工程支架的示踪剂,为非侵入成像方式监测体内高分子组织工程支架降解情况提供可能。     

NK4基因转染对前列腺癌DU145细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

研究HGF拮抗剂NK4在前列腺癌中的作用。将包含NK4cDNA的表达载体pBudCE4．1-EGFP-NK4转染到DU145细胞中。体外实验检测白分泌的NK4对肿瘤细胞增殖、迁移、转移及凋亡的影响。体内实验裸鼠分为三组,分别皮下种植DUl45、空质粒转染的Dul45和NK4转染的DUl45细胞,检测皮下肿瘤的大小、细胞凋亡及细胞增殖情况。体外实验结果显示转染NK4的DUl45细胞可以分泌NK4蛋白。自分泌的NK4抑制HGF诱导的肿瘤细胞增殖、迁移及转移,促进凋亡（P〈0．01）。NK4可以调节HGF受体c－Met及其下游ERKl与Akt1／2蛋白的活性。体内实验显示,NK4转染DUl45细胞组的肿瘤生长及细胞增殖受到抑制,同时肿瘤细胞凋亡增加。本实验显示包含NK4cDNA的表达载体转染前列腺癌细胞可以有效地调节肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡。NK4作用于HGF／c－Met可以作为前列腺癌治疗的一个有效靶点。     

ShRNA靶向沉默FGFR3基因对人肝癌细胞Huh7增殖和迁移的影响

目的:研究成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)对肝癌细胞株Huh7增殖和迁移能力的影响。方法:以靶向沉默FGFR3的shRNA慢病毒表达载体、delta8.9和VSVG三质粒共转染293T细胞来包装慢病毒颗粒。选择Huh7细胞转导慢病毒载体。通过细胞增殖实验(CCK-8法)和transwell实验,分别评估沉默FGFR3对Huh7肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。裸鼠分别皮下注射pSilencer-FGFR3-shRNA1#组和pSilencer-NC组Huh7细胞后,监测肿瘤生长。Western印迹法检测下游信号蛋白p-AKT和p-ERK。结果:与NC组比较,RNAi组的细胞增殖能力显著下降(P     

载铁液固相变型PLGA植入物原位磁感应热消融裸鼠SKOV3人卵巢癌

目的制备载铁的液固相变型聚乳酸一羟基乙酸（PLGA）原位植入物（Fe-ISFIs）,观察其在超高频交变磁场下对裸鼠SKOV3人卵巢癌的消融效果。方法制备含铁质量分数40％的Fe-ISFIs,测定不同量（50、25μl）Fe-ISFIs相变后在交变磁场中5min内温度的变化,然后注入不同量（50、25肛1）Fe-ISFIs于离体牛肝中,置于交变磁场中不同时间（1、2、3、5rain）,观察牛肝消融直径,并选取最佳治疗方案。取9只荷SKOV3人卵巢癌裸鼠,于超声引导下向瘤内局部注射50肛lFe—ISFIs,之后分为2组：第1组6只裸鼠于交变磁场中照射3min,第2组3只裸鼠不进行磁性照射。治疗完成后第1组中任选3只、第2组选1只裸鼠处死,并取下肿瘤行HE及TTC染色,每日肉眼观察其余裸鼠肿瘤生长情况。结果体外加热实验结果显示,遇水发生液固相变后的Fe-ISFIs在交变磁场中温度逐渐增高,50μlFe-ISFIs较25μlFe-ISFIs加热效果显著;牛肝消融实验观察到50μlFe-ISFIs在3min内消融直径可达（1．18±0．18）cm,而25肛1Fe-ISFIs加热效果较差,5min内消融直径只有（0．94±0．10）cm;TTC染色结果显示经交变磁场照射治疗后部分肿瘤消融完全,但仍存在消融不全的肿瘤。HE染色见肿瘤组织坏死征象,肿瘤细胞出现核固缩或消失;肉眼观察第1组中肿瘤于治疗后第2天肿瘤组织开始脱落、结痂,约14天创面逐渐愈合,肿瘤组织消失（完全消融的肿瘤）;第2组中肿瘤随时间而逐渐增大。结论Fe—ISFIs结合超高频交变磁场能够在较短时间内有效消融裸鼠SKOV3人卵巢癌。     

超声辐照联合微泡消融活体犬心肌

目的探讨低能量超声辐照联合微泡消融活体犬心肌的可行性。方法将20只杂种犬随机分为超声联合微泡组(US+MB组)、单纯超声组(US组)、单纯微泡组(MB组)和对照组,每组5只。在心腔内超声(ICE)监控下,将自制多功能ICE导管送入犬左心室。对US+MB组犬于左心室前壁注射0.1ml微泡,以0.3 W/cm2声能对注射部位辐照30s;US组以相同条件辐照,但不注射微泡;MB组仅注射微泡;对照组仅插入导管,不进行其他处理。术后第3天处死动物,进行心脏形态学及组织学观察。结果肉眼见US+MB组微泡注射部位心肌出现苍白色消融灶,镜下见心肌细胞核固缩、核碎裂等特征;US组、MB组及对照组动物心脏形态学及组织学均未见明显异常。结论微泡能提高超声消融效果,实现低能量超声消融心肌组织,减少心内膜损伤,提高心肌消融的安全性。     

近红外荧光分子成像在裸鼠卵巢癌移植瘤模型中的应用

目的观察近红外荧光吲哚七甲川菁染料IR-783在裸鼠卵巢癌移植瘤模型中对肿瘤的特异靶向作用。方法采用卵巢癌细胞株SKOV-3创建卵巢癌裸鼠模型,将IR-783注入15只裸鼠体内,之后采用MaestroTM2.10活体成像系统分别在30min、1h、6h、24h、48h观察染料的肿瘤特异靶向作用及其在荷瘤裸鼠体内的代谢分布。结果图像分析软件测得肿瘤平均体积(16.34±3.35)cm3,游标卡尺测得为(15.56±1.85)cm3(P=0.79);注射后30minIR-783主要分布于肝脏、心脏、肾脏和肺,6h肿瘤荧光强度达到峰值,注射后48h肿瘤部位仍存在少量荧光信号。结论近红外荧光染料IR-783可无创、准确、直观地反映裸鼠卵巢癌移植瘤的生长。     

~（125）I在乳腺肿瘤中对内皮抑素的作用及机制研究

目的：研究125I粒子对乳腺肿瘤组织内皮抑素（ES）表达水平的影响,探讨125I粒子对抑肿瘤血管生长基因的作用及其分子生物学机制。方法：建立人类乳腺癌MCF-7细胞株的裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤鼠分两组：对照组,植入空载粒子;实验组：植入125I粒子。粒子植入后当对照组瘤体平均长径约为15～20mm时,处死荷瘤小鼠,标本分别冻存和固定,用半定量RT-PCR、Western blotting印迹及免疫组化染色方法检测ES的mRNA及其蛋白表达水平。结果：实验组中肿瘤组织及癌旁组织的ES的mRNA及其蛋白表达明显升高,与对照组相比,差异有显著性意义（P〈0.01）。两组肿瘤中正常组织ES的mRNA及其蛋白的表达变化不明显,无显著性差异（P〉0.05）。结论：125I粒子促进乳腺肿瘤组织抑肿瘤血管生长因子ESmRNA及其蛋白水平的表达。     

Human prostate cancer cells and xenografts are targeted and destroyed through luteinizing hormone releasing hormone receptors

BACKGROUND: A conjugate of a lytic peptide, hecate, and a 15-amino acid segment of the beta-chain of chorionic gonadotropin (CG) destroyed human prostate xenografts in nude mice by targeting LH receptors. Since these xenografts also express LHRH receptors, we prepared a LHRH-hecate conjugate and tested its ability to destroy PC-3 cells in vitro and in vivo. MATERIALS AND METHODS: LHRH-hecate was added to cultures of PC-3, BRF 41 T, DU145, and LNCaP cells in the presence and absence of steroids. PC-3 xenografts were established in nude male mice, which were treated with LHRH-hecate. RESULTS: Injections of LHRH-hecate resulted in tumor growth arrest and marked reduction of tumor burden (62.2 mg/g body weight in saline controls vs. 10.5 mg/g body weight in treated mice; P < 0.0001); unconjugated LHRH and hecate had no effect on tumor burden and tumor viability (48.5 mg/g body weight in LHRH treated animals vs. 63.2 mg/g body weight in hecate treated mice). Marked tumor necrosis occurred in conjugate treated mice. Removal of steroids from the culture media decreased the sensitivity of LNCaP and PC-3 cells to the LHRH-hecate; adding estrogen restored the sensitivity. CONCLUSIONS: LHRH-hecate may be effective in treating hormone dependent and independent prostate cancers.     

食管癌细胞MUC1过表达对5-氟尿嘧啶及顺铂化疗效果的影响

目的探讨食管癌细胞MUC1过表达对5-氟尿嘧啶及顺铂化疗效果的影响。方法构建MUC1过表达及稳定沉默食管癌细胞株,建立食管癌细胞裸鼠移植瘤模型;顺铂（8mg／kg,d1,d7）及5-氟尿嘧啶（20mg／kg,d1～d6）腹腔注射,测量肿瘤体积及裸鼠体重,绘制生长曲线及体重曲线;计算肿瘤抑瘤率。结果顺铂与5-氟尿嘧啶均能抑制MUC1过表达食管癌移植瘤的生长,裸鼠体重及肿瘤体积与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,且顺铂的抑制效应更明显（P〈0．05）;在MUC1稳定沉默裸鼠无明显的抑制效应。结论顺铂与5-氟尿嘧啶都能抑制MUC1过表达食管癌移植瘤的生长,顺铂的抑制效应更明显,同时对体重的影响也更明显。