某院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因检测及分型

目的了解某院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生的超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）基因型。方法采用表型确证试验测定并收集该院产ESBLs大肠埃希菌（40株）和肺炎克雷伯菌（20株）,提取质粒DNA。采用特异性引物扩增TEM、SHV和 CTX M系列基因,测序后进行序列分析。结果60株表型确证试验阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,聚合酶链反应（PCR）扩增均阳性,包括TEM、SHV、CTX M 3组和CTX M 9组4种基因型。大肠埃希菌中上述4种基因型阳性率分别为37.50%（15株）、2.50%（1株）、62.50%（25株）、50.00%（20株）;肺炎克雷伯菌上述4种基因型阳性率分别为40.00%（8株）、90.00%（18株）、65.00%（13株）、40.00%（8株）。100.00%的大肠埃希菌和80.00%的肺炎克雷伯菌产生blaCTX M,12.50%(5/40)的大肠埃希菌和25.00%(5/20)的肺炎克雷伯菌携带2种CTX M酶基因。23例TEM基因皆为TEM 1型;19例SHV型基因包括SHV 1型6株、SHV 11型6株、SHV 12型5株及SHV 25型2株,仅SHV 12为ESBLs基因,且均来源于肺炎克雷伯菌;66例CTX M型基因,其中CTX M 14在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为45.00%和35.00%,CTX M 55检出率均为35.00%,CTX M 15检出率分别为20.00%和15.00%,检出少量CTX M 3、CTX M 65、CTX M 101及CTX M 123基因型。结论该院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因型以CTX M 为主,其次为SHV 12。CTX M基因型中以CTX M 14最为常见,CTX M 101及CTX M 123型ESBLs为山东省首次检出。     

乌鲁木齐地区135株志贺氏菌耐药性调查

目的了解乌鲁木齐地区临床分离肠道致病菌中志贺氏茵的流行趋势及耐药情况,分析产生超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的流行特征及耐药表型和基因型别,为临床合理使用抗生素提供依据。方法志贺氏菌选择培养基采用四区划线法分离培养出135株志贺氏茵,参照Kirby—Bauer纸片扩散法检测其对23种抗生素的耐药性：采用纸片确认试验对多重耐药菌株进行ESBLs表型确证检测;采用聚合酶链式反应（PCR）检测CTX—M、SHV、TEM等耐药基因,对PCR产物测序,通过与美国GenBank核酸库已登录的序列作比对确定基因亚型。结果135株志贺氏菌感染患者中,男性占53．3％（72／135）,女性占46．7％（63／135）;高发季节为6—8月;25岁以下发病人数占总发病人数的71．9％（97／135）;对氨苄西林、氯霉素和复方磺胺甲噫唑的耐药率较高,分别达91．1％、68．1％、70．4％。有43株（31．9％）ESBLs表型检测阳性。PCR扩增结果表明,共有19株携带CTX．M基因,其中CTX．M．1群6株,CTX．M-9群13株;4株携带SHV基因;6株携带TEM基因。基因测序确定各基因型存在多种亚型。结论福氏志贺氏茵为本地区优势志贺氏茵。对某些抗生素存在高度耐药性。应引起临床重视。ESBLs耐药菌株以CTX．M型为主,流行亚型为CTX．M．14、CTX—M．15和TEM-1。产CTX．M-24志贺茵在乌鲁木齐属首次报告检出。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药性及基因分型 FREE

目的了解某院临床分离的产超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型。方法收集临床分离的肺炎克雷伯菌,采用美国临床实验室标准化委员会2005年推荐的方法进行ESBLs初筛及表型确证试验;K B纸片扩散法进行抗菌药物敏感性试验;聚合酶链反应（PCR）法分析产ESBLs菌株的基因类型。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌的检出率为62.22%（56/90）。产ESBLs菌仅对第三代头孢菌素与β 内酰胺酶抑制剂合剂、碳青霉烯类抗生素较敏感。基因型分析结果显示,产ESBLs肺炎克雷伯菌中SHV型、CTX M 1型、TEM型、CTX M 9型的检出率分别为69.64%、51.79%、37.50%、0.00%,同时携带2种、3种耐药基因的菌株分别占35.71%和14.28%。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药严重,基因型以SHV、CTX M 1为主     

老年患者中检出产ESBLs大肠埃希菌的耐药性和基因分型

目的了解本地区老年患者临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药基因型别和耐药性的变化情况。方法收集来自老年患者分离鉴定的大肠埃希菌株1 327株,通过K-B法作药敏试验,采用美国NC-CLS1999年推荐的抑制剂增强纸片法确认产ESBLs株,并对ESBLs进行初步基因分型。结果检出产ESBLs菌株702株,检出率为52.9%,产ESBLs大肠埃希菌对青霉素类、氨曲南及头孢菌素类抗生素耐药率为54.5%~100.0%;PCR初步分型结果：单独携带TEM型基因的占56.7%,单独携带SHV型基因的占15.0%,携带两种基因的占25.8%。结论产ESBLs大肠埃希菌检出率逐年上升,具有多重耐药的特点;产ESBLs大肠埃希菌主要携带TEM型和SHV型β-内酰胺酶基因,其中绝大部分为产TEM型β-内酰胺酶。     

湖南地区SHV型超广谱β-内酰胺酶的研究

目的 了解湖南地区产SHV型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的检出情况,确定其基因型,并对其流行病学特征进行研究.方法 收集、鉴定分离菌株,进行ESBLs检测;PCR扩增blaSHV基因;对PCR产物测序确定其基因型;并通过随机扩增多态性DNA(RAPD)进行菌株同源性分析.结果 171株多药耐药的肠杆菌科中共有26株菌携带blaSHV基因,PCR产物经测序共检出5种基因型:9株携带SHV-28、7株携带SHV12、7株携带SHV-1、2株携带SHV-11和1株携带SHV-5;RAPD结果显示,19株肺炎克雷伯菌有6种RAPD类型,5株阴沟肠杆菌分别为不同的RAPD类型.结论 SHV-12是湖南地区主要流行的SHV型ESBLs,并且在产SHV型β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌中存在菌株间的克隆传播,未发现产SHV型ESBLs的大肠埃希菌.     

住院患者产CTX-M型ESBLs和KPC的大肠埃希菌感染分布与耐药基因分析

目的了解住院患者产CTX M型超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）和碳青霉烯酶（KPC）大肠埃希菌感染的临床分布与耐药情况。方法收集某院2011-2012年临床送检标本分离的多重耐药大肠埃希菌,采用微量肉汤稀释法检测抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）;聚合酶链反应（PCR）扩增ESBLs和KPC基因,确定CTX M和KPC基因型别及MLST分型。结果48株多重耐药大肠埃希菌中单产ESBLs 45株（93.75%）,携带blaCTX M基因者44株（91.67%）,其中blaCTX M 1组基因20株（41.67%）、blaCTX M 9组基因32株（66.67%）,同时携带两组基因者8株（16.67%）。经基因测序确定的基因亚型有CTX M 14（65.91%,29/44）、CTX M 55（31.82%,14/44）、CTX M 15（11.36%,5/44）、CTX M 3（2.27%,1/44）、CTX M 24（2.27%,1/44）和CTX M 65（2.27%,1/44）,其中CTX M 14+CTX M 55（11.36%,5/44）、CTX M 14+CTX M 15（4.55%,2/44）和CTX M 55+CTX M 65（2.27%,1/44）。产ESBLs+KPC菌株中2株（4.17%）经PCR扩增均携带blaKPC和 blaCTX M基因,经测序分析1株为CTX M 14+KPC 2,1株为CTX M 3+KPC 2。ST131 （53.66%）是主要的MLST型别,检测到ST648、ST405、ST167、ST1193等ST型。 结论该院大肠埃希菌产ESBLs基因型中CTX M 14、CTX M 55和CTX M 15亚型最常见,存在多种不同亚型;ST131是主要的MLST型别,检测到产KPC 2型碳青霉烯酶菌。     

多药耐药肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的研究医院感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的主要耐药基因型并进行序列分析。方法收集临床住院患者产ESBLs肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和变形菌属,通过改良Hodge试验、EDTA双纸片增效试验、分别测定KPC、金属酶;聚合酶链反应(PCR)检测其耐药基因、分析PCR产物序列并在GenBank中比对分析,总结产ESBLs细菌同源性的和变异情况。结果肺炎克雷伯菌中CTX型占85.0%,TEM型占77.0%,SHV型占15.0%;大肠埃希菌中3种基因型比较均衡,其中CTX占100.0%,SHV型和TEM型均为83.0%;变形菌属中TEM型占100.0%,CTX型占40.0%,未检出SHV型;同时还有携带金属酶和碳青酶烯酶的细菌检出。结论医院多药耐药肠杆菌科细菌产ESBLs耐药基因主要以CTX和TEM为主。     

阴沟肠杆菌流行菌株产超广谱β-内酰胺酶分析

目的研究江苏苏中地区阴沟肠杆菌流行株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的状况。方法采用改良的双纸片法(MDDT)进行ESBLs的初筛;以ESBLs引物(CTX-M、CTXM-1、CTX-M-2、CTX-M-9、SHV、TEM、VEB、PER型)进行PCR扩增,对扩增产物进行序列分析。结果MDDT初筛结果证明该菌株产超广谱β-内酰胺酶,CTX-M型ESBLs引物有扩增产物,序列分析表明该株阴沟肠杆菌携带CTX-M-3型ESBLs。结论江苏苏中地区阴沟肠杆菌流行株产CTX-M-3型ESBLs,是造成该流行株对三代头孢菌素耐药的重要原因。     

呼吸系统不动杆菌感染的多重耐药性与耐药基因的检测

目的　检测引起呼吸系统感染的不动杆菌多重耐药性及耐药基因。方法　采用标准的纸片扩散法 (KirbyBauer法 )检测不动杆菌对 16种抗生素耐药状况 ,用单纸片扩散法检测ESBLs表型 ,并用PCR方法对多重耐药菌株进行超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)TEM、SHV、OXA、IMP、CTX M耐药基因的检测。结果　 10 8株不动杆菌中77.78%对 >2种的抗生素具有耐药性 ,其中有 8株菌对 15种抗菌药物均耐药 ;10 8株不动杆菌检出ESBLs表型阳性 2株 ,且均为多重耐药菌株 ;2株ESBLs表型阳性的耐药基因为TEM型 ,扩增产物长 5 35bp ,SHV、OXA、IMP、CTX M耐药基因均未检出。结论　不动杆菌对抗生素已产生明显多重耐性药 ,对有些常规使用的抗生素正向耐药方面转变 ,山东济南地区不动杆菌的ESBLs耐药基因可见TEM型。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因检测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌临床分离株中β-内酰胺酶(bla)基因流行状况。方法采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的的表型筛选与确证试验检测ESBLs,应用PCR扩增产ESBLs菌株bla(TEM)、bla(SHV)、bla(CTX-M)基因,并对PCR阳性产物进行克隆后测序确定其基因亚型。结果 46株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,基因检出率分别为bla(TEM)11株,占23.9%;bla(SHV)13株,占28.3%;bla(CTX-M)43株,占93.5%;携带1种bla基因菌株21株,占45.7%;携带2种20株,占43.5%;携带3种3株,占6.5%;全部菌株bla(TEM)基因测序结果均为TEM-1亚型,bla(SHV)基因为SHV-11、12、28亚型;部分菌株bla(CTX-M)基因测序结果为CTX-M-15、24、38亚型。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌中ESBLs基因型以CTX-M型为主,其次为SHV型,部分菌株同时携带广谱β-内酰胺酶基因TEM-1或SHV-11;监测产ESBLs细菌β-内酰胺酶基因流行状况,有助于指导临床合理应用抗生素。     

产ESBLs大肠埃希菌CTX—M型耐药基因分析

目的了解某院CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）在大肠埃希菌中的检出率，并确定其基因型。方法对该院2005年1—12月临床送检标本中分离的197株大肠埃希菌进行ESBLs表型确证试验和接合试验；采用聚合酶链反应（PCR）检测CTX-M酶基因型，对PCR产物测序并确定其基因型。结果197株大肠埃希菌中有104株（52．79％）ESBLs表型检测阳性，其中91株符合供体菌标准，64株（70．33％）接合成功，接合子均确证产ESBLS。PCR扩增结果示104株产ESBLs大肠埃希菌中共有98株（94．23％）携带CTX-M型基因，其中38株（36．54％）检出blaCTX-M-1组基因，69株（66．35％）检出blaCTX-M-9组基因。64株接合子中共有51株（79．69％）携带CTX-M型基因，其中18株（28．13％）检出blaCTX-M-1组基因，35株（54．69％）检出blaCTX-M-9组基因。基因测序确定存在CTX-M-22、CTX-M-28、CTX-M-15、CTX-M-14、CTX-M-27五种基因亚型，以CTX-M-14为主。结论该院大肠埃希菌产ESBLs和耐药质粒水平传播情况严重，产ESBLs细菌基因型以CTX-M-9组的CTX-M-14亚型为主，同时存在CTX-M-22、CTX-M-28、CTX-M-15和CTX-M-27等多种亚型。     

革兰阴性杆菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶调查研究（首次发现产blaCTX-M-14的斯氏普罗威登斯菌）

目的调查某院临床分离的革兰阴性（G^-）杆菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）株的流行情况，并确定其基因型。方法收集2004年10月--2005年7月临床标本分离的多重耐药G^-杆菌233株，按美国临床实验室标准化研究所（CLSI）推荐的方法进行ESBLs表型确证试验，聚合酶链反应（PCR）法对表型阳性株进一步进行CTX-M酶基因型的扩增，对PCR产物测序并确定其基因型。结果从大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、弗劳地柠檬酸杆菌和斯氏普罗威登斯菌中检出CTX-M型ESBLs，首次从斯氏普罗威登斯菌中检出CTX-M-14型ESBLs。结论该地区多种G肠杆菌科细菌携带CTX-M型ESBLs，斯氏普罗威登斯菌也能产生CTX-M型ESBLs。     

微生物检验中革兰氏阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶检测结果分析

目的通过对骨创伤患者分泌物所分离的克雷伯菌属、大肠埃希菌和其他肠杆菌科超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的临床微生物检验,研究该酶介导的耐药性能及其在临床上的应用。方法收集骨创伤患者分泌物分离的耐氨苄西林的克雷伯菌属、大肠埃希菌40株,以NCCLs推荐的初筛,Etest法操作,表型确证试验。结果其中有14株即35％的细菌被确认产出ESBLs,其中9株确认试验与Etest均阳性,产ESBEs的克雷伯菌属检出率为50％,大肠埃希菌的检出率为30．4％,其他肠杆菌科细菌检出率为33．3％。结论大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌属于产出超广谱β-内酰胺酶的重要菌株,但是其他肠杆菌科细菌的检出率也在上升,尤其是不能忽略检测阴沟杆菌。头孢噻肟（CTX）是本地区超广谱β-内酰胺酶筛选的最佳底物。     

应用多重PCR在肠杆菌科细菌中检测blaTEM、blaSHV、blaOXA 1基因

目的应用多重聚合酶链反应（PCR）法在肠杆菌科细菌中检测blaTEM、blaSHV、blaOXA 1基因。方法收集2004年10月-2005年7月湖南地区中南大学3所附属医院临床标本分离的多重耐药肠杆菌科细菌171株，以美国临床实验室标准化研究所（CLSI）规定的方法进行超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）表型确证试验，多重PCR进一步进行blaTEM、blaSHV、blaOXA 1三种耐药基因的检测。结果171株多重耐药的肠杆菌科细菌中，142株（83.04%）ESBLs表型检测阳性，经多重PCR扩增，105株获得阳性结果。根据扩增片段大小判断：检出携带blaTEM菌株85株，携带blaSHV菌株26株，携带blaOXA 1菌株10株，其中15株菌同时携带多种耐药基因。结论多重PCR可以快速、准确地检测出ESBLs表型阳性肠杆菌科细菌是否携带blaTEM、blaSHV、blaOXA 1基因。     

广州地区革兰阴性杆菌CTX-M和OXA型广谱β-内酰胺酶基因分型研究

目的调查广州地区临床分离的革兰阴性杆菌中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和OXA型广谱β-内酰胺酶(beta-lactamase,Bla)的主要基因型别及其流行情况.方法按照NCCLS 2001年标准筛选广州地区临床分离菌株的ESBLs表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增法和DNA测序法进行ESBLs基因序列分析.结果PCR扩增结果显示,CTX-M1、CTX-M2、CTX-M9群和OXA的总阳性率在本地区临床分离的临床检测ESBLs阳性的革兰阴性杆菌中分别为9.96%、0、35.5%和1.6%,同时检出≥两种ESBLs基因的菌株数64株,阳性率为5.9%;序列分析进一步证实了CTX-M型ESBLs的具体型别,包括CTX-M-3、CTX-M-22、CTX-M-9、CTX-M-14、CTX-M-17、CTX-M-18、CTX-M-21、CTX-M-24、TOHO-2和TOHO-3,其比例分别为3.23%、3.7%、4.99%、3.32%、2.21%、3.69%、2.95%、4.43%、1.85%和1.48%;其中以CTX-M-9和CTX-M-24阳性率较高;在本地区只检出1种OXA型Bla-OXA-2/PSE-2(1.38%,15/1084);另外,还检出了8株无法具体归类的CTX-M-9型ESBLs,占0.74%;CTX-M型基因主要分布于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,分别占42.8%和36.3%,而OXA基因则主要分布于铜绿假单胞菌中,占80%.结论本地区CTX-M类ESBLs也较为常见,其中尤以CTX-M-9和CTX-M-24为主,暂无CTX-M2群ESBLs,可能存在1种或多种新的CTX-M型ESBLs.     

2株产气肠杆菌临床株对厄他培南耐药机制的研究

目的研究2株产气肠杆菌临床株Ea293和Ea2880对厄他培南耐药的机制。方法采用微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),应用K-B法检测菌株对美罗培南、亚胺培南及厄他培南的耐药性,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;聚合酶链反应(PCR)扩增碳青霉烯酶基因(KPC,IMP-1、2组,VIM)和广谱及超广谱β-内酰胺酶基因(TEM,SHV,CTXM-1、2、9组ESBI.s),并进行序列分析;十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行细菌外膜蛋白分析,并对外膜蛋白基因OmpE36进行PCR扩增及序列分析。结果药物敏感试验显示,产气肠杆菌Ea293和Ea2880均对厄他培南耐药。PCR扩增4种碳青霉烯酶基因和5种广谱及超广谱β-内酰胺酶基因,仅Ea2880的SHV和CTX-M-9组ESBLs基因阳性,SHV基因的PCR产物测序为SHV-11型广谱酶。细菌外膜蛋白SDS-PAGE结果显示,与碳青霉烯类抗生素敏感的产气肠杆菌Eal885相比,Ea293和Ea2880均缺失42 kD左右的条带,即OmpE36。PCR扩增外膜蛋白基因OmpE36,Ea2880可见预期片段,DNA序列分析显示其与GenBank公布的产气肠杆菌标准株ATCC 13048的相似性为87%,氨基酸序列的相似性亦为87%;而Ea293未扩增出预期片段。结论产气肠杆菌临床株Ea293与Ea2880对厄他培南耐药的主要原因可能是外膜蛋白基因OmpE36缺失,同时Ea2880可能还有CTX-M-9组ESBLs参与。     

重症监护病房患者产超广谱β-内酰胺酶细菌感染的耐药性研究

目的了解我院重症监护病房(ICU)感染患者标本中肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的现状,为ICU抗感染化疗提供用药依据. 方法对我院8年来ICU送检标本中分离的 563株肠杆菌科细菌采用双纸片法筛选试验及确证试验检测ESBLs,并用K-B纸片法进行药敏试验. 结果 563株肠杆菌科细菌中检出产ESBLs菌 115株,检出率20.4%;肺炎克雷伯菌的产酶率26.1%,高于大肠埃希菌18.9%的产酶率;肠杆菌、柠檬酸杆菌、变形菌及摩根菌均检出产ESBLs菌株;产ESBLs菌株对15种常用抗菌药物的敏感性明显低于不产ESBLs的菌株;亚胺培南对产ESBLs细菌仍具有很高的抗菌活性. 结论我院ICU送检标本中分离的产ESBLs细菌比例高,应引起足够重视.