重组改构人肿瘤坏死因子对人胃癌细胞的药效学及其机制研究

背景:重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)与原型TNF-α相比具有高抗肿瘤活性和低毒性的特点。目的:研究注射用rmhTNF对人胃癌细胞的药效学及其机制。方法:体外培养人胃癌细胞株BGC-823和人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12,分别以不同浓度的rmhTNF和rhTNF-α进行处理,以MTT实验、软琼脂克隆形成实验、TUNEL染色和流式细胞术分析细胞增殖、凋亡情况和细胞周期分布;以蛋白质印迹法检测BGC-823细胞凋亡相关蛋白表达;以免疫共沉淀技术检测rmhTNF与死亡受体5(DR5)间的相互作用。建立BGC-823细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分别予rmhTNF、rhTNF-α、5-氟尿嘧啶和0.9%NaCl溶液腹腔内注射,以CD34免疫组化染色检测移植瘤组织微血管密度(MVD)。结果:rmhTNF和rhTNF-α对BGC-823和HUVEC-12细胞均有抑制增殖和诱导凋亡作用,并能使G0/G1期细胞进入S期,rmhTNF的作用强于rhTNF-α(P0.05)。rmhTNF组移植瘤组织MVD显著低于其他各组(P0.05)。rmhTNF能使BGC-823细胞procaspase-3、Bax表达上调,Bcl-2表达下调,并能与DR5相互作用。结论:rmhTNF对人胃癌细胞具有抑制增殖、诱导凋亡、影响细胞周期分布和抑制肿瘤血管形成的作用,其机制可能为rmhTNF与DR5结合,从而改变细胞内凋亡相关蛋白水平。     

重组改构人肿瘤坏死因子胸腔灌注治疗恶性胸腔积液临床观察

目的 观察胸腔灌注重组改构人肿瘤坏死因子治疗恶性胸腔积液的疗效。方法 对32例恶性胸腔积液患者经胸腔引流管将重组改构人肿瘤坏死因子注入胸腔内治疗。结果 CR5例，PR21例，NC6例。有效率81．2％。结论 该方法操作简单，副作用少，能有效控制恶性胸腔积液。     

人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因转染对肿瘤坏死因子α诱导肝细胞凋亡的影响

TNFα能诱导肝细胞凋亡,其过度表达是肝衰竭发生发展过程中的一个重要因素。可溶性TNFα受体1（sTNFR1）可中和TNFα的部分毒性作用。为有效抑制TNFα诱导的细胞凋亡以及治疗肝衰竭,我们拟构建sTNFR1的真核表达载体,并将重组质粒pcDNA3-1（-）sTNFR 1瞬时转染QSG7701细胞,研究其对TNFα诱导细胞凋亡的抑制作用。[第一段]     

雌激素对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的 观察17β-雌二醇(E2)及肿瘤坏死因子(TNFα)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响.方法 将HUVEC分为4组,空白对照组、TNFα(40 μg/L)组、TNFα(40 μg/L)加E2(1 μmol/L)和E2(10 μmol/L)组,各组细胞经维持液培养48 h使细胞生长同步,加入相应药物培养24 h后收获细胞.采用免疫组化方法测定bcl-2蛋白表达及流式细胞仪测定细胞凋亡发生百分率.结果 TNFα诱导的细胞凋亡发生率较正常对照组明显增多(P＜0.001),bcl-2蛋白表达少,DNA直方图上可见高大的凋亡峰,而雌激素干预后凋亡发生率明显降低(P＜0.001),bcl-2蛋白表达增加.结论 E2可增加bcl-2蛋白的表达,抑制TNFα诱导的人内皮细胞细胞凋亡的发生率,维持内皮细胞结构和功能的完整,可能为其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

重组人肿瘤坏死因子调节端粒酶活性的体外研究

目的：研究重组人肿瘤坏死因子（rhTNF)对端粒酶活性的调节作用,方法：将不同浓度rhTNF加入肝癌细胞株HepG2和HepG1-6细胞,以TRAP－ELISA方法测定其端粒酶活性,采用Liofect脂质体转染法将携带端粒酶催化亚单位一端酶逆转录酶（hTERT)启动力质粒转染至肝癌细胞株HepG2细胞,2h后加入不同浓度的rhTNF,孵育48h后,分别检测其报告基因萤虫素酶活性,结果：在10－1000IU／ml浓度范围内,rhTNF可抑制端粒酶活性,同时在浓度范围内,rhTNF可显著抑hTERT启动子的表达,其抑制作用与rhTNF剂量呈正相关,结论：rhTNF杀伤肿瘤细胞的机制可能与其抑hTERT的表达有关。     

结核病人肿瘤坏死因子与细胞凋亡在治疗中的运用

目前,结核病仍然是世界范围内影响重大的公共健康问题,估计世界人口中1／3受到结核分支杆菌(Mtb)的感染。结核分支杆菌的主要感染途径是通过肺,是肺结核的病原。由于结核杆菌耐药株的出现和扩散,结核病正受到越来越多的重视。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人胃癌耐药细胞凋亡的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)是最近发现的肿瘤坏死因子 (TNF)家族新成员 ,因其独特结构和作用特点 ,有可能成为临床上重要的抗肿瘤因子[1] 。许多研究证实 ,TRAIL可诱导许多恶性肿瘤细胞凋亡 ,包括血液系统恶性肿瘤细胞、乳腺癌等[2 ,3 ] 。我们在另一实验中已证实TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡 ,现进一步研究TRAIL体外诱导胃癌耐药细胞的凋亡作用 ,为临床上解决胃癌多药耐药这一难题提供新的思路和方法。一、材料和方法1.材料 :SGC790 1 VCR胃癌耐药细胞引自第四军医大学西京医院消化病研究所 ,为SGC 790 1胃癌细胞经长…     

肿瘤坏死因子—α诱导体外培养大鼠肝细胞凋亡的作用

目的 了解肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）对体外培养大鼠肝细胞凋亡的作用。方法 在半乳糖胺（ＧａＩＮ）或放线菌素Ｄ（ＡｃｔＤ）致敏情况下,加入ＴＮＦ－α,通过光镜、电镜及ＤＮＡ电泳等方法,观察ＴＮＦ－α对体外培养肝细胞凋亡的作用。结果 在大鼠注射ＧａｌＮ后分离肝细胞加入ＴＮＦ－α,ＡＬＴ上升,电镜下可见细胞坏死及凋亡;给正常鼠肝细胞ＡｃｔＤ加入ＴＮＦ－α,光镜下出现典型凋亡细胞,ＤＮＡ电泳出现凋亡的     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其在脑缺血中的作用

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)在缺血等病理状态下被诱导,并介导脑缺血后的神经元凋亡.了解TRAIL在缺血脑组织中的上调机制,有望开发出新的卒中治疗方法.     

肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体与缺血性卒中

肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子超家族成员,可选择性诱导肿瘤细胞凋亡。近年来的研究表明,缺血后脑组织中可见TRAIL表达,并在神经元凋亡中起重要作用。     

重组人结缔组织生长因子对人成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响

目的 研究重组人结缔组织生长因子(rCTGF)对人成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响.方法 用rCTGF干预体外培养的人成骨细胞,采用[3H]-TdR掺入法检测人成骨细胞增殖率,α-磷酸萘酚法测定细胞内碱性磷酸酶活性变化,放射免疫法测定骨钙素含量的变化,Western印迹法检测Ⅰ型胶原表达的变化,应用流式细胞仪检测rCTGF埘成骨细胞凋亡的影响.结果 rCTGF呈剂量依赖性促进人成骨细胞增殖,200 ng/ml rCTGF达最大效应;rCrrGF干预显著促进人成骨细胞分化,rCTGF旱剂量依赖性增加Ⅰ型胶原、骨钙素表达及碱件磷酸酶活性;rCTGF干预可显著减少成骨细胞凋亡.结论 rCTGF可显著促进人成骨细胞增殖、分化,并抑制人成骨细胞凋亡.     

Phase-I trial of intravenous continuous infusion of tumor necrosis factor in advanced metastatic carcinomas

Summary Fifteen patients with advanced metastatic adenocarcinomas were treated in a phase-I study with continuous intravenous 24h infusion of recombinant tumor necrosis factor (TNF-) in order to determine the maximum tolerated dose (MTD) and associated side-effects. Patients received 40–400 g/m² TNF- once (arm A) or twice (arm B) weekly for a scheduled treatment period of 2 months. The observed systemic side-effects resembled those reported for interferons and included fever, chills, fatigue, headaches, myalgias, thrombocytopenia, prostration, and malaise. Dose-limiting toxicities, resulting in a median MTD of 200 g/m² for 24h, were fever, chills, fatique, myalgias, and thrombocytopenia. Out of 15 patients, 11 showed tumor progression, and 3 sustained in no change for over 2 months of treatment. A minor response was seen in 1 patient with a colorectal carcinoma and liver metastases. To reduce side-effects, patients were treated either with paracetamol or indomethacin. Higher MTDs were observed in patients treated with indomethacin. No detectable plasma TNF- levels or TNF antibodies were measured under therapy (plasma TNF-<20 pg/ml). We conclude that TNF- appears to have some antineoplastic activity in patients with adenocarcinomas since 4 patients remained in no change or showed a minor response.     

阿霉素抑制人子宫内膜癌细胞生长机制探讨

为探讨阿霉素（DOX）抑制人子宫内膜癌细胞生长的分子机制。用不同浓度的DOX处理体外培养的HHUA细胞，利用台盼蓝染色记数活细胞数；光镜观察凋亡细胞形态学改变；琼脂糖凝胶电泳检测梯状DNA条带；流式细胞仪分析测定凋亡细胞百分率；Western Blot分析Ｂax蛋白和Ｂcl-2蛋白表达。结果显示，ＤＯＸ浓度为２０、５０μg/ml时，活细胞数显著减少（Ｐ＜０.０５）；ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳显示曲型的梯状条带；ＤＯＸ作用后６小时Bax蛋白表达开始增强，而Ｂcl-2蛋白表达不变。提示ＤＯＸ能够诱导ＨＨＵＡ细胞凋亡，其诱导细胞凋亡可能与Ｂax介导的凋亡凋节通路活化有关。     

Bcl-xl阻断肿瘤坏死因子α诱导的caspase 8活化及细胞凋亡

目的探讨BCl-xl对肿瘤坏死因子α(TNFα)介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡的影响。方法将iκBα负性突变体质粒pmiκB与绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒pEGFP-Cl，pmiκB、DBcl-xl／HA与pEGFP-Cl分别共转染HeLa细胞；将pBcl-xl／HA转染核因子κB(NFκB)／p65基因敲除的p65／MEF细胞，并用嘌呤霉素筛选及westernblot鉴定获得稳定表达Bcl-xl的细胞系p65／／Bcl-xlMEF。用TNFα处理HeI。a／miκB、IteLa／miκB／Bcl-xl细胞以及p65／MEF、p65／／Bcl-xlMEF细胞，并在冠微镜下观察细胞形态变化、台盼蓝染色计算死亡细胞以检测各组细胞凋亡情况；采用western blot检测凋亡信号通路中caspase8活化及腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解情况。结果单独转染pmiκB的HeLa细胞，TNFα诱导的细胞凋亡明显，表现为细胞变圆、脱落、死亡，而PBCl-xl／HA与PmiκB共转染的HeLa细胞，TNFα处理后未见细胞凋亡。P65／MEF细胞经TNIrα处理发生凋亡，该作用在TNFα处理后4h即可出现，处理12h后绌胞死亡率为90％，而在表达Bcl-xl的p65／／Bcl-xlMEF细胞，TNFα处理24h也未见细胞凋亡或死亡发生。Westernblot检测表明单独转染pmiκB的HeLa细胞，TNFα诱导了caspase8裂解活化及PARP裂解，而pBcl-xl／HA与pmiκB共转染、表达Bcl-xl的HeLa细胞，TNFα诱导的caspase8裂解活化及PARP裂解被阻断。结论在NFκB被抑制的实验细胞系统，Bcl-xl能阻断TNFα介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡，这对于进一步研究TNFα相关疾病发生机制及治疗措施有重要价值。     

异欧前胡素对人胃癌BGC-823细胞的凋亡诱导作用的研究

目的探讨异欧前胡素对人胃癌BGC-823细胞的凋亡诱导作用。方法以体外培养人胃癌BGC-823细胞和裸鼠荷人胃癌模型为观察对象,采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法观察异欧前胡素对人胃癌BGC-823细胞的增殖存活率及诱导凋亡能力的影响,并且通过裸鼠成瘤实验观察异欧前胡素对BGC-823细胞的增殖生长情况。结果人胃癌BGC-823细胞系的增殖存活率随着异欧前胡素浓度的提高或者处理时间的增加呈下降趋势,增殖存活率与异欧前胡素呈剂量-时间依赖性;异欧前胡素可以明显诱导BGC-823细胞发生凋亡,且在一定范围内随着异欧前胡素浓度的提高,凋亡率也随之升高;有效剂量的异欧前胡素瘤体内注射能够缩小裸鼠瘤体体积,增加瘤体抑制率,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论异欧前胡素能够有效抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖并诱导其凋亡,抑制胃癌细胞移植瘤的生长,但对于其具体的调控机制有待进一步研究。     

肿瘤坏死因子受体和Fas在乙型肝炎肝细胞凋亡中的意义

目的研究肿瘤坏死因子1型受体(TNFR1)和Fas在乙型肝炎肝细胞凋亡中的意义.方法用免疫组织化学方法和原位末端标记技术(TUNEL试验)检测70例各型乙型肝炎患者肝组织TNFR1、Fas的表达和肝细胞凋亡情况.结果不同类型乙型肝炎肝细胞均有TNFR1和Fas表达,其表达程度与组织学类型相关(P＜0.05).TNFR1在细胞浆和细胞膜的分布相似,而Fas主要在细胞浆分布,TNFR1与Fas在肝细胞上的表达无明显关系(P＞0.05).不同类型肝炎肝细胞凋亡与病变程度密切相关,Fas的表达与肝细胞凋亡也有密切关系(P＜0.005),但TNFR1的表达强弱与肝细胞凋亡程度不呈正比(P＞0.05).在46例中度以上肝细胞凋亡患者中,同时伴有单纯TNFR1中度以上阳性者有4例(8.7%),同时伴有单纯Fas抗原中度以上阳性者有12例(26.1%),而同时伴有TNFR1和Fas抗原均为中度以上阳性者有28例(60.9%),另有2例患者TNFR1和Fas在肝细胞均无明显表达(4.35%).结论在乙型肝炎肝细胞凋亡中,Fas似较TNFR1的作用更重要;TNFR1和Fas在肝细胞的同时表达可能对肝细胞凋亡有相加作用.     

Understanding the role of tumor necrosis factor inhibition in ankylosing spondylitis

BACKGROUND: Ankylosing spondylitis (AS) is a chronic inflammatory disorder that affects approximately 350,000 patients in the United States. Over time, the spinal and peripheral joint involvement of AS may cause severe disability and functional limitations. Research in the molecular and cellular events of AS has uncovered a distinct role for the proinflammatory cytokine, tumor necrosis factor (TNF), in the pathogenesis of this disease. OBJECTIVES: This article reviews the role of TNF in the pathogenesis of AS and evaluates new therapeutic options for the disease. METHODS: Literature searches were conducted and various studies were reviewed and evaluated from the perspective of study design and validity of conclusions. Data are presented from animal studies and human clinical trials designed to test the efficacy of TNF inhibition in AS. RESULTS: The TNF inhibitors etanercept and infliximab not only demonstrate a significant reduction in the signs and symptoms of AS but also improve quality of life while reducing serious toxicities. Etanercept is the first TNF inhibitor to be approved by the United States Food and Drug Administration (FDA) for use in the treatment of AS and has recently been approved in the European Union. Infliximab has also been approved for use in the European Union. CONCLUSIONS: Early treatment with TNF inhibitors in patients with RA has been shown to result in significant improvements in disability, pain, and joint scores compared with delayed treatment. Ongoing trials are currently investigating whether these agents can halt or delay disease progression in patients with AS. RELEVANCE: Understanding the role of TNF inhibition in AS has led to new therapies that offer improved function and less disability for many patients suffering from this disease.     

重组腺病毒AdCat对血管平滑肌细胞

目的探讨腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响.方法用含过氧化氢酶基因的重组腺病毒(AdCat)转染人血管平滑肌细胞,采用Western blot 方法检测血管平滑肌细胞过氧化氢酶的表达,应用细胞计数方法观察血管平滑肌细胞的增殖活性,应用流式细胞术和Hoechst 33258 染色等方法对血管平滑肌细胞的凋亡进行研究.结果Western blot显示AdCat转染后血管平滑肌细胞过氧化氢酶表达明显增多;细胞计数显示AdCat组明显抑制细胞增殖,与阴性对照组、空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞术显示AdCat组与阴性对照组、空白对照组比较凋亡率明显增加(P<0.01).经Hoechst 33258染色后,AdCat组凋亡细胞明显多于空白对照组.结论重组腺病毒AdCat转染导致血管平滑肌细胞过氧化氢酶过度表达,抑制血管平滑肌细胞的增殖,促进血管平滑肌细胞的凋亡.