重组腺病毒介导反义c-myc基因对人肝癌细胞系的治疗作用

目的：探讨重组腺病毒介导反义ｃ－ｍｙｃ基因（Ａｄ－ＡＳｍｙｃ）治疗人肝癌细胞的作用。方法：观察Ａｄ－ＡＳｍｙｃ对人肝癌细胞系的转导效率,通过细胞生长曲线、克隆形成实验、ＤＮＡ片段化分析、ＲＴ－ＰＣＲ、裸鼠皮下移植瘤治疗实验,分析Ａｄ－ＡＳｍｙｃ对人肝癌细胞系Ｂｅｌ－７４０２、ＱＳＧ－７７０１、ＳＭＭＣ－７７２１和ＨＣＣ－９２０４细胞生长和ｃ－ｍｙｃ基因表达及裸鼠肿瘤生长的抑制作用。结果：Ａｄ－ＡＳｍｙｃ可高效转导人肝癌细胞系,抑制细胞生长;转染细胞克隆形成能力降低,克隆成活率为对照组的５３．９％～６９．１％,ｃ－ｍｙｃ基因表达下降;Ａｄ－ＡＳｍｙｃ处理肝癌细胞,ＤＮＡ凝胶电泳出现明显的梯形条带,瘤内注射Ａｄ－ＡＳｍｙｃ可抑制裸鼠皮下移植瘤生长。结论：重组腺病毒介导的反义ｃ－ｍｙｃ基因转移,有可能成为肝癌基因治疗     

腺病毒介导RA538基因转移及其对肿瘤的抑制作用

目的:RA538是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因,本研究探讨了其抗癌作用.方法:利用腺病毒介导基因转移观察对肿瘤细胞的抑制效应.结果:通过重组体腺病毒将RA538基因转导到人肺腺癌细胞系(GLC-82)和人结肠癌细胞系(HCY)中,获得较高的转导效率,显示出较明显的抑制肿瘤生长作用,抑制率分别为77.2%和77.9%,并能降低两细胞系体内肿瘤形成能力.流式细胞计数、DNA片段化分析及TUNEL检测证实RA538可诱导肿瘤细胞发生凋亡.Westem blot分析表明,RA538具有明显下调c-myc基因表达的作用,结论:研究结果提示,RA538是一个较广谱的抑癌基因,可以作为肿瘤基因治疗的一个新目的基因,具有良好的应用前景.     

乳腺肿瘤癌基因c—erbB—2,c—myc的表达及其临床意义

应用免疫组织化学方法，研究６１例乳腺良、恶性病变ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｃ－ｍｙｃ的癌基因的表达情况。４６例乳腺癌中ｃ－ｅｒｂＢ－２和ｃ－ｍｙｃ阳性率分别为５０％（２３／４６）和４５．７％（２１／４６）１５例乳腺良性病变中阳性率分别为６．７％（１／１５）和５３．５％（８／１５）。     

胃原发癌和淋巴地转移癌细胞中bcl—2和c—myc基因蛋白表达的研究

为探讨ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ基因蛋白在胃原发癌与转移癌中的表达特点,应用ＳＰ免疫组织化学方法,对８０例胃癌３６例相庆淋巴转移癌细胞进行ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的检测,并对２种基因的生物学和临床病理意义进行研究和探讨。结果发现ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的阳性表达率在３５例胃原发癌中分别为３１．４％、５７．１％,在淋巴结转移癌中分别为６８．６％、３１．４％,ｂｃｌ－２在淋巴结转移癌中的表达率     

反义转染细胞HL^R60—9的c—myc基因表达及其生物大分子的…

作者构建了体外能双向转录ｃ－ｍｙｃ基因的重组质粒ＰＧＣ，以制备ＲＮＡ探针用于检测ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ转染细胞ＨＬ＾Ｒ６０－９的ｃ－ｍｙｃ及反义ＲＮＡ表达，结果显示，Ｃｄ＾２＋诱导的ＨＬ＾Ｒ６０－９细胞的ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ表达随Ｃｄ＾２＋浓度及作用时间的增加而增强，但ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达在诱导过程中逐渐减少，两者变化呈镜相关系。免疫组化法未能检出ｃ－ｍｙｃＰ６２蛋白的表达，＾３Ｈ－ＴｄＲ，＾３Ｈ     

细胞凋亡过程中c—fos,p53和c—myc基因的表达

目的：本文主要研究细胞凋亡研究中ｃ－ｆｏｓ，ｐ５３和ｃ－ｍｙｃ等基因的表达，方法：经８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ诱导人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞凋亡，应用原位杂交技术对ｃ－ｆｏｓｐ５３和ｃ－ｍｙｃ基因的表达进行检测，结果：经过诱导的试验组和不经诱导的对照组ｃ－ｆｏｓｐ５３和ｃ－ｍｙｃ基因的表达差异有显著性（Ｐ〈０．００１）。结论：提示这些基因在细胞凋亡的发生发展过程中起着重要的作用。     

腺病毒介导的RA538基因转移及其对人结肠癌细胞HCT的抑瘤作用

目的　进一步研究ＲＡ５３８ 对人结肠癌细胞系的生物学效应,选用介导ＲＡ５３８ 重组体腺病毒,观察其对人结肠癌细胞系ＨＣＴ 的作用。方法　通过重组体腺病毒将ＲＡ５３８ 基因转导到人结肠癌细胞系ＨＣＴ 中,观察转染ＲＡ５３８ 基因后的肿瘤细胞生长情况。经流式细胞仪、ＤＮＡ 片段化分析及ＴＵＮＥＬ 检测分析抑瘤机制。结果　由重组体腺病毒ＡｄＲＡ５３８ 介导基因ＲＡ５３８ 转导在ＨＣＴ 获得较高的转导效率, ＭＯＩ 为１００ 时可使８０ ％ 细胞转染,并显示对肿瘤细胞生长有明显的抑制作用,抑制率为７４ ％ 。裸鼠皮下注射ＲＡ５３８ 处理的ＨＣＴ 细胞肿瘤形成能力为２０ ％ 。ＤＮＡ 片段化分析、ＴＵＮＥＬ 和流式细胞仪检测,结果证明ＲＡ５３８诱导肿瘤细胞发生凋亡。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析表明,ＲＡ５３８ 具有明显下调ｃｍ ｙｃ 基因表达的作用。结论　ＲＡ５３８ 对人结肠肿瘤细胞有抑制生长和诱导凋亡的作用,可以作为结肠肿瘤基因治疗的１ 种新的治疗基因。     

喉癌p16,c—myc及PCNA表达的临床病理研究

探讨ｐ１６、ｃ－ｍｙｃ及ＰＣＮＡ在喉癌发病中的作用。方法应用ＳＡＢＣ免疫组化技术,检测４０例喉鳞癌手术标本中Ｐ１６、ｃ－ｍｙｃ及ＰＣＮＡ的表达,对三者表达与喉癌发生部位,临床分期,组织学分级和临床复发之关系进行探讨。     

Slp2反义真核表达载体的构建及功能研究

背景与目的 肺癌相关基因的研究一直是研究的热门课题，S1p2基因是通过cDNA微阵列技术筛选出的肺癌差异表达基因之一，本研究旨在对S1p2基因在肺癌细胞系中的表达及其功能进行初步研究。方法 提取肺癌细胞系A549、GLC-82、NCI-H446、NCI-H460的细胞总RNA，用RT-PCR方法检测肺癌细胞系中S1p2基因mRNA水平的表达；构建S1p2反义基因，通过离子脂质体将克隆的S1p2反义基因导入肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460，用半定量RT-PCR检测转染目的基因对肺癌细胞系S1p2表达的影响；通过四唑盐比色法绘制细胞生长曲线以及流式细胞分析、软琼脂细胞克隆形成试验，观测转染S1p2反义基因对肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460生长速度、细胞周期以及细胞增殖能力的影响。结果 在4个肺癌细胞系中，S1p2基因均为阳性表达；转染S1p2反义基因后的肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460的细胞生长速度明显减慢；在流式细胞分析直方图上表现为G2期的细胞增多，并曾在转染目的基因的NCI-H446细胞流式直方图中观察到了位于G0／G1期左侧的“亚Gt峰”的出现；转染S1p2反义基因后肺癌细胞系的软琼脂培养细胞克隆形成率明显低于未转染细胞。结论 S1p2基因与肺癌细胞的生长、增殖力密切相关，有必要进行深入研究和探讨。     

安吖啶诱导白血病细胞程序化死亡及bcl—2表达的研究

目的探讨安吖啶诱导不同分化阶段的人急性粒白血病细胞株ＨＬ－６０（ＡＭＬ２）及ＮＢ４细胞（ＡＭＬ３）程序化死亡的作用。方法应用光镜、ＤＮＡ电泳及流式细胞术检测程序化死亡细胞,应用免疫组化法检测ｂｃｌ－２基因表达。结果１～２０μｇ／ｍｌ的安吖啶作用６～１２小时后,ＮＢ４细胞的形态学改变较ＨＬ－６０细胞更明显;ＮＢ４细胞的ＤＮＡ梯带较ＨＬ－６０细胞明显;流式细胞术检测ＮＢ４程序化死亡细胞数较ＨＬ－６０细胞多;ＨＬ－６０细胞ｂｃｌ－２蛋白的平均水平明显高于ＮＢ４细胞。结论ＨＬ－６０细胞对安吖啶诱导程序化死亡作用的敏感性较低,可能与ｂｃｌ－２基因高表达有关。     

伴神经内分泌分化非小细胞肺癌中p53、bcl-2及c-myc的表达

目的 研究伴神经内分泌（neuroendocrine,NE)分化的非小细胞肺癌（NSCLC）中p53、bcl-2和c-myc的特异性表达。方法 随机搜集60例手术切除的NSCLC石蜡标本，采用免疫组化S－P法检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、嗜铬颗粒蛋白A(CgA)、突触素（Syn)及p53,bcl-2,c-myc基因蛋白的表达。结果 NSCLC中NSE、CgA、Syn的阳性表达率分别为45．00％（27／60）、13．33％（8／60）、31．67％（19／60）。结合三者的表达确定伴有NE分化的占41．67％（25／60）；NE分化与肺癌的分化程度有密切关系（P＜0．05）；伴神经内分泌分化非小细胞肺癌（NSCLC－NE）的转移率较高，临床分期较高。NSCLC－NE中bcl-2、p53和c-myc的阳性表达率分别为68．00％（17／25）、80．00％（20／25）和68．00％（17／25），其中bcl-2,p53的表达与NE分化有密切关系（P＜0．05）。结论 NSCLC中有相当一部分伴有NE分化，NSCLC－NE具有与其它NSCLC不同的生物学特性。NSCLC－NE中可以检测到高表达的bcl-2蛋白、突变型p53蛋白，p53突变导致的bcl-2／Bax的失衡在NSCLC－NE的发生和发展中可能起重要作用。     

反义bcl-2基因转染对单核白血病细胞存活及化疗耐受能力的影响

目的：探讨ｂｃｌ－２反义核酸在单核白血病细胞系Ｕ９３７细胞中的作用,以丰富ｂｃｌ－２及其反义核酸调控肿瘤细胞凋亡的资料。方法：将反义ｂｃｌ－２基因表达载体ｐＬＸＳＮ／ａｓ－ｂｃｌ－２转染于Ｕ９３７细胞,建立Ｕ９３７／ａｓ－ｂｃｌ－２细胞模型,利用流式细胞技术模型细胞ｂｃｌ－２的表达水平。通过细胞计数观察模型细胞在正常培养条件下和有化疗药物Ａｒａ－Ｃ或三     

携带反义c-myc的重组腺病毒安全性研究

目的　研究携带反义c myc的重组腺病毒 (Ad ASmyc)潜在的副作用 ,评价其安全性 ,为其进一步进入临床试验提供依据。方法　用Ad ASmyc感染HeLa细胞 ,制备细胞提取液后反复两次感染HeLa细胞 ,观察Ad ASmyc的繁殖、扩增 ,以及对HeLa细胞的作用 ,RT PCR检测其DNA的转录 ;确定Ad ASmyc对作为正常细胞的人胚肺二倍体细胞 2BS的感染能力 ,绘制细胞生长曲线 ,观察Ad ASmyc对正常细胞的毒性 ;给Balb/c小鼠腹腔注射重组腺病毒后 ,每日观察一般状况 ,化验肝、肾功能 ,PCR检测Ad ASmyc在重要脏器中的分布 ,显微镜观察重要脏器的病理学变化。结果　Ad ASmyc是一复制缺陷型腺病毒 ,它能高效感染 2BS细胞 ,但并不影响其生长 ,小鼠体内应用后 ,无急性毒性症状发生 ,在肝、肾、胃、脾内可检测到腺病毒的分布。但在注射 10 9pfu第 6天、第 12天的小鼠肝组织内可观察到轻微炎症。结论　Ad ASmyc应用是安全的 ,可以进入临床试验。     

胃癌和癌旁粘膜组织中bcl—2和c—myc蛋白的表达及意义

目的：探讨bcl-2和c-myc基因蛋白在胃癌发生,发展过程中的变化。方法对80例胃癌及癌旁组织标本进行S－P免疫组织染色。结果bcl-2、c-myc及两者共同阳性表达率在胃癌组织中分别为46．3％、67．5％、37．5％,在癌旁移行粘膜中分别为68．05、84．0％、68．0％;在受侵粘膜中分别为3．6％、67．9％、3．65;在癌旁伴癌前病变粘膜中分别为57．1％、82．1％、57．1％;在癌旁不伴癌病变粘膜中分别为0、41．7％、0。其中bcl-2单独表达或与c-myc共同表达率及表达强度在胃癌、移行粘膜、伴癌前病变癌旁膜均显著高于受侵粘膜和不伴癌前病变粘膜（P＜0．01）,c-myc在癌变前即表达增高,且距越近,表达率越高。bcl-2和c-myc蛋白表达在癌旁伴癌前病变粘膜和移行粘膜呈正相关（γ=0．517,γ=0．636,P＜0．05）。结论在胃粘膜癌变过程,中bcl-2和c-myc基因蛋白具有协同作用,可能bcl-2表达增高比c-myc的意义更大。联合检测bcl-2、c-myc基因蛋白对于胃癌的早诊断具有一定的实用价值。     

p53、p27、bcl-2在非小细胞肺癌中表达的研究

目的　研究p53、p2 7、bcl 2三种基因蛋白与非小细胞肺癌 (NSCLC)临床病理特征的关系。方法　应用S P免疫组化法检测 76例手术切除NSCLC标本中三种基因蛋白的表达。结果　 76例标本中 2 8例(36 .84% )p53过度表达 ,34例 (44.74% )p2 7过度表达 ,37例bcl 2过度表达 (48.68% ) ,7例患者p53、p2 7、bcl 2均过度表达。p53阳性表达率随分化程度降低而升高 ,bcl 2和p2 7阳性表达率随分化程度降低而降低 ,且高、低分化组间均有显著性差异 (P <0 .0 5)。但是三种蛋白阳性表达率均与肺癌组织学类型、淋巴结转移及病理分期无明显关系 (P >0 .0 5)。结论　p53、p2 7和bcl 2基因过度表达可能与NSCLC的发生、发展有关