CpG寡脱氧核苷酸增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答

目的 :探讨CpG寡脱氧核苷酸 (ODN)增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答效果。方法 :选用环磷酰胺 (CTX)所致免疫抑制模型小鼠 ,以乙肝疫苗和 2 0 μgCpGODN联合或单独左胫前肌肌注免疫C5 7BL/6小鼠。 2wk后以同样剂量加强免疫 1次 ,再过 3wk后摘除眼球取血 ,用ELISA法检测抗 HBsIgG抗体和IL 12的水平。同时 ,无菌取脾脏做HE染色 ,观察脾脏淋巴细胞的数量和细胞核的变化。结果 :CpGODN与疫苗联合注射组产生的绝对抗体量比单独注射疫苗组提高 1倍 ;注射组产生IL 12的水平较单独注射疫苗组也有明显升高。光镜下各组脾脏淋巴细胞的变化如下 :正常对照组脾脏可见大量的淋巴细胞 ;与正常对照组相比较 ,CTX组的淋巴细胞明显稀少 ;而CTX加CpG组的淋巴细胞数明显增多 ,细胞核也明显增大。结论 :CpGODN能增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答     

铝佐剂吸附CpG ODN增强重组乙肝疫苗免疫效应

目的探索新佐剂CpG ODN在重组乙肝疫苗中的免疫效应及吸附状态。方法 CpG ODN佐剂与重组乙肝疫苗混合免疫小鼠,收集小鼠血清检测。通过免疫小鼠后的体液和细胞免疫应答水平来评价双佐剂乙肝疫苗对重组乙肝疫苗的增强作用。CpG ODN佐剂与乙肝疫苗在不同温度条件下混合吸附,计算在不同吸附时间下CpG ODN佐剂在乙肝疫苗中的吸附率。结果CpG ODN佐剂可以提高重组乙肝疫苗在体液及细胞中的免疫效果。CpG ODN佐剂在室温条件下1 h即可在乙肝疫苗中达到吸附平衡,于2~8℃放置5 d的条件下其吸附率约在50%左右。结论 CpG ODN能够增加乙肝疫苗的免疫应答,其免疫效果可提高5倍以上。     

CpG ODN增强乙型肝炎表面抗原免疫小鼠的抗体产生

目的：探讨合成含CpG基序的寡核苷酸（CpG ODN)对重组乙型肝炎表面抗原（rHBsAg)及乙型肝炎疫苗增强小鼠特异性抗体产生的效应。方法：采用非纯系（Km)及纯系（Balb/c)小鼠作为免疫对象，经后腱胫骨前肌免疫2次，ELISA法检测血清乙型肝炎表面抗体（抗－HBs)效价。结果：加CpG ODN组，其抗-HBs效价均较单独注射rHBsAg和疫苗组明显增高，持续时间长，且纯系鼠的抗体效价明显高于非纯系鼠。结论：CpG ODN对小鼠抗－HBs产生具有增强作用，具与疫苗中的铝佐剂有协同效应。     

CpG ODN增强乙肝疫苗在老年小鼠中的免疫应答

目的：探讨CpG ODN对老年小鼠的体液和细胞免疫应答的增强作用。方法：选用老年C57BL／6小鼠，将乙肝疫苗和10μg、20μg CpG ODN同时或单独肌注到小鼠体内，两周后以同样剂量加强免疫一次，再过3周后摘除眼球取血，用EILSA方法检测抗HBs16；抗体和IL-12；无菌取脾脏作HE染色，观察脾脏淋巴细胞变化。结果：10μg和20μg CpG ODN与疫苗同时注射组产生的抗体绝对量分别是单独注射疫苗组的3倍和4倍；产生的IL-12水平较对照组有明显升高，且20μg比10μCpG组产生的IL-12水平更高。光镜下各组的脾脏淋巴细胞的变化如下：正常老年鼠组脾脏淋巴细胞较正常青年鼠组明显稀少；老年鼠 10μgCpG组脾脏淋巴细胞较正常老年鼠组有了明显增加，且细胞核也明显增大；20μgCpG组增加的更加明显。结论：CpG ODN能增强乙肝疫苗在老年小鼠中的体液和细胞免疫应答。     

CpG ODN对rHBsAg免疫小鼠淋巴细胞增殖反应的影响

目的：进一步探讨以合成含CpG基序的寡核苷酸（CpG ODN）作为免疫增强剂与重组乙型肝炎表面抗原（rHBsAg）联合免疫小鼠,观察其淋巴细胞增殖反应效应.方法：经后腿胫骨前肌初次免疫BALB/c小鼠两周后加强免疫1次;MTT和3H-TdR掺入法分别检测免疫小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞增殖反应.结果：加CpG ODN组与单纯注射抗原及疫苗组相比,淋巴细胞增殖反应显著增强.而且,除胸腺特异性增殖中的CpG加疫苗组和疫苗组外,其他各实验组与对照组相比,淋巴细胞增殖反应也都显著增强.结论：CpG ODN能够明显刺激小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞增殖反应,显示出强而有效的免疫增强效应,有望成为一种新型的免疫佐剂.     

CpG ODN佐剂促进HBsAg疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的探讨

目的 探讨cpG ODN对重组乙型肝炎表面抗原（HBsAg）诱导小鼠细胞免疫应答的影响。方法HBsAg和HBsAg＋CpG ODN分别肌肉注射免疫Balb／c小鼠后,从淋巴组织（脾和淋巴结）和非淋巴组织（肺）分离淋巴细胞,体外经HBsAg抗原刺激后,利用ELISA检测细胞培养液中IFN-γ的水平,再利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ^＋细胞的频率,分析IFN-7^＋细胞亚群。结果对照组和HBsAg免疫组IFN-γ产生的水平很低,当HBsAg加强免疫1～2次后,IFN-γ表达仍然没有明显升高;而CpG ODN＋HBsAg免疫1次或加强免疫后,CpG显著促进HBsAg诱导的IFN-γ产生。进一研究结果表明CpG促进HBsAg诱导淋巴器官和非淋巴器官内CD4^＋和CD8^＋T细胞IFN-γ的表达。结论CpG免疫佐剂不仅能诱导细胞免疫应答同时也诱导体液免疫应答,提示CpG ODN可以用于HBsAg预防和治疗性佐剂。     

CpG ODN的体外免疫活性及其作为乙肝疫苗佐剂的研究新进展

为了增强乙肝疫苗的免疫效力,开发研制新型疫苗佐剂是当前国内外学者研究的热点之一。近年来的研究表明：含CpG基序的寡脱氧核苷酸（CpG ODN）在体外实验中,对人和鼠的多种免疫细胞有活化作用;在动物实验中,CpG ODN不仅可增强乙肝疫苗的体液免疫应答,还可增强其细胞免疫应答,这正是铝佐剂所达不到的,且CpG ODN与铝佐剂具有协同效应,今后可考虑双佐剂联合乙肝疫苗接种,能提高接种人群的应答率,刺激机体产生更有效的保护作用;动物实验还显示,CpG ODN能增强HBV转基因小鼠对乙肝疫苗的免疫应答和抗病毒效应,说明乙肝疫苗辅以CpG ODN可望作为临床上免疫治疗慢性HBV感染的可行性途径;Ⅰ期临床试验表明CpG ODN对人体较安全。     

CpG ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展

随着对含有CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)的结构、功能以及作用机理的深入研究，CpG ODN已经应用于疾病的治疗和预防等许多方面。本文就CpG ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展做一综述。     

CpG ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展

随着对含有CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)的结构、功能以及作用机理的深入研究,CpGODN已经应用于疾病的治疗和预防等许多方面。本文就CpG ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展做一综述     

CpG ODN的免疫剌激机制

非甲基化CpGODN的免疫增强作用已经为许多研究所证实,CpGODN作为一种新型的免疫刺激剂,主要剌激多种免疫活性细胞分泌细胞因子,使机体产生快速的细胞免疫及体液免疫。CpGODN的特殊结构诱导激活细胞信号转导网络系统,介导了其免疫剌激活性及调节作用模式。     

CpG ODN生物学活性和免疫作用的研究进展

CpG ODN为人工合成的含胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸,能与Toll样受体9(TLR9)结合而发挥作用.CpG ODN能直接或间接激活树突状细胞、单核细胞和巨噬细胞以及B淋巴细胞、NK细胞、T淋巴细胞等,使之分泌许多生物活性因子和细胞因子,从而在感染性疾病和肿瘤的免疫治疗中发挥重要作用.     

体外筛选对猪具有免疫刺激活性的CpG ODN

设计并筛选对猪具有最佳免疫刺激活性的CpGODN。文献报道 ,设计并合成了 38条CpGODN。用猪PBMC体外增殖实验 ,3 H 胸腺嘧啶 (3 H TdR )掺入法测定刺激指数 ,用SPSS软件对数值进行统计学分析 ;用双抗体夹心ELISA检测PBMC培养上清中的IFN γ和IL 2的量 ,来评价CpGODN对猪的免疫学作用。结果表明 ,多数CpGODN能够刺激猪PBMC的增殖 ,并促进其分泌IFN γ ,但IL 2分泌的量均未显著增加。其中 ,含有三个GTCGTT基序ODN 2 0 0 6刺激猪PBMC增殖的作用最强 ,刺激指数达 6 2 ,但仅能诱生低水平的IFN γ ;具有磷酸二酯键 /硫代磷酸二酯键混合骨架及 3’端polyG尾的ODND1 9具有中等程度的促猪PBMC增殖的作用 ,刺激指数为 4 2 ,但诱导PBMC分泌IFN γ比阴性对照增加了 5倍。ODND1 9和ODN 2 0 0 6对猪具有不同的免疫学效应 ,这为进一步研究适用于不同病原体的猪用疫苗佐剂提供了实验参考     

包裹天然骨架CpG ODN和HBsAg的非磷脂脂质体疫苗的免疫效果

非磷脂脂质体NovasomeR○(Np )是由Brij5 2、胆固醇和油酸组成 ,可作为同时传递佐剂和抗原的载体。我们将HBsAg与天然骨架CpGODN (phosphodiesterCpGODN ,pdCpGODN )包裹于Np后免疫BALB/c小鼠 ,检测其免疫效果。结果显示 ,包裹pdCpGODN和HBsAg的Np在小鼠中诱导了很高滴度的抗 HBs抗体产生并诱生了HBsAgS2 8 3 9特异性的CTL ,而铝佐剂组和仅包裹HBsAg的Np组诱生的抗体滴度较低 ,未检测到CTL活力。抗体亚类分析结果表明包裹pdCpGODN和HBsAg的Np诱生的免疫应答类型与pdCpGODN剂量有关 ,较低剂量 (2 4 μgpdCpGODN )诱生的为IgG2a为主的Th1型应答 ,而较高剂量(4 7μgpdCpGODN )诱生的是Th1/Th2混合型应答。铝佐剂和仅包裹HBsAg的Np组诱生的是以IgG1为主的Th2型应答。此外 ,包裹pdCpGODN和HBsAg的Np免疫小鼠脾淋巴细胞在体外HBsAg刺激培养后特异性增殖并分泌高水平的IFN γ。这些结果表明包裹pdCpGODN和HBsAg的Np能增强HBsAg的免疫原性 ,诱生体液 /细胞免疫均衡应答 ,有可能发展为慢性乙肝的治疗性疫苗     

双氢青蒿素对CpG ODN诱导小鼠RAW264.7细胞释放细胞因子的影响

目的：观察双氢青蒿素对CpG ODN诱导小鼠RAW264．7细胞释放细胞因子的影响。方法：体外培养小鼠RAW264．7细胞．用CpG ODN刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF-α、IL-6,用不同浓度双氢青蒿素进行拮抗,ELISA法检测培养上清中促炎细胞因子的含量．结果：双氢青蒿素可抑制CpG ODN刺激小鼠RAW264．7细胞释放TNF—α和IL-6,并呈一定的量效关系,其中对IL-6最大抑制率可达到66．5％,而对TNF—α释放的最大抑制率仅为7．2％,其影响细胞因子释放的作用与细胞毒作用无关。结论：双氢青篙素呈浓度依赖性地抑制CpG ODN刺激小鼠RAW264．7细胞释放TNF—α和IL-6,但对TNF—α的影响较小。     

CpG DNA的免疫学作用及其应用

CpG基序是以未甲基化CpG为核心的的寡聚脱氧核苷酸，对人及动物具有强烈的免疫刺激功能。CpGDNA可以直接激活抗原递呈细胞，诱导其产生IL-12、TNF—α等Th1型细胞因子；还可以间接刺激NK细胞分泌IFN-γ。鉴于它可优势诱导Th1为主的免疫应答，现已成为目前免疫佐剂研究的热点之一。本文对CpG DNA的免疫学作用及应用研究作一综述。     

CpG ODN促进树突状细胞成熟的实验研究

目的：研究CpG ODN对小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow—derived dendritic cells,BMDC)分化成熟的影响。方法：以含非甲基化CpG基序的寡核苷酸(unmethylated CpG motif containing oligonucleotides,CpG ODN)刺激BMDC，流式细胞术检测DC膜表面CD80表达，ELISA检测DC分泌IL-l2水平，MTT法测定CpG ODN活化的DC刺激T细胞培殖能力。结果：CpG ODN可显著刺激DC表达CD80，分泌IL-l2，增强DC刺激T细胞增殖的能力。结论：CpG ODN可以有效促进DC的功能成熟。     

CpG ODN对rHBsAg免疫小鼠Th1/Th2型免疫应答的影响

目的：初步探讨CpC寡脱氧核苷酸(CpG ODN)与重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)联合免疫小鼠的Th1／Th2型免疫应答效应。方法：BALB／c小鼠经后腿胫骨前肌免疫2次，ELISA法检测血清乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)IgG亚类IgG2a/IgG1的比值；生物活性法检测脾细胞诱生上清中的IFN-γ和IL-2含量；ABC-ELISA法检测小鼠血清中IL-4、IL-10及IL-12含量。结果：加CpG ODN组与单独注射rHBsAg组相比：抗-HBs IgG亚类IgG2a／IgG1比值明显高；Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的表达增强，抑制Th2型细胞因子IL-4和IL-10的产生。结论：CpCODN能够明显增强rHBsAg免疫小鼠Th1型抗体亚类IgG2a的产生，并且诱导Th1型细胞因子的表达，抑制Th2型细胞因子的表达。     

一种B型CpG ODN对乙肝疫苗的免疫佐剂作用

目的 研究一种本室设计的B型CpG ODN(BW006)作为乙肝疫苗佐剂的可行性.方法 以琼脂糖凝胶电泳法对BW006的质量进行初步检定;H3-掺人法检测BW006对小鼠脾细胞的刺激作用;乙肝疫苗与BW006联合免疫Balb/c小鼠,并用ELISA法检测小鼠血清中的HBsAb水平.结果 BW006的纯度和完整性符合实验要求,并能显著的刺激小鼠脾细胞的增生,同乙肝疫莳联用后能够明显增强乙肝疫苗的免疫效果.结论 BW006对乙肝疫苗有较强的免疫佐剂作用.     

纳米颗粒包裹CpG序列对猪副伤寒疫苗接种小鼠免疫应答的影响

本实验制备聚乙交酯丙交酯(PLG)纳米颗粒,比较了阳离子PLG纳米颗粒和脂质体作为包装分子包裹pUC18-CpG质粒对猪副伤寒疫苗接种小鼠体液IgG和特异抗体滴度、脾脏淋巴细胞增殖和白细胞介素-2诱生活性的影响。实验结果发现:与裸pUC18-CpG质粒接种小鼠比较,阳离子纳米颗粒包裹pUC18-CpG质粒能显著提高免疫小鼠IgG含量和特异抗沙门氏菌抗体滴度,增强淋巴细胞增殖活性及白细胞介素-2的诱生活性;同阳离子脂质体作为包装分子的细胞和体液免疫佐剂效应相似或较强。证明阳离子PLG纳米颗粒包装能显著提高裸CpG质粒的免疫增强活性。     

CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用

目的:研究CpG2216佐剂对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗诱导的细胞免疫应答的作用。方法:重组RSV疫苗G1F/M2与CpG2216佐剂混合,或与CpG2216及常规佐剂Al(OH)3混合,鼻腔(i.n.)或腹腔注射(i.p.)免疫BALB/c小鼠三次,最后一次免疫后2周杀小鼠,取脾细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾细胞特异性杀伤活性;用ELISPOT法检测分泌IFNγ-和IL-4的细胞;用流式细胞仪检测CD4+/CD8+效应及LDH记忆细胞。结果:与G1F/M2相比,CpG+G1F/M2鼻腔或腹腔注射免疫均诱导了显著的杀伤活性;而且G1F/M2+Al+CpG(i.p.)诱导的杀伤活性显著高于CpG+G1F/M2(i.p.)。ELISPOT结果显示:CpG+G1F/M2鼻腔免疫和腹腔注射免疫组的分泌IFNγ-和IL-4的淋巴细胞数量明显多于G1F/M2组;CpG+Al+G1F/M2(i.p.)组的细胞数显著多于CpG+G1F/M2(i.p.)组;且各组分泌IFNγ-的淋巴细胞数显著多于分泌IL-4的淋巴细胞,即均诱导了Th1型优势应答,有利于宿主抗病毒。流式细胞仪检测结果表明:CpG+G1F/M2(i.n.)仅诱导CD44+单阳性的细胞,而CpG+G1F/M2(i.p.)和CpG+Al+G1F/M2(i.p.)既诱导产生了CD44+单阳性细胞,也产生了CD44+CD62L+双阳性的记忆细胞。结论:CpG2216作为RSV重组疫苗G1F/M2的佐剂,可显著增强细胞免疫应答。