酪氨酸激酶受体B与脑源性神经营养因子mRNA在鼻咽癌中的定量表达

目的研究酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptors B,TrkB）及其配体脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophin factor,BDNF）在鼻咽癌中的表达及其与鼻咽癌生物学行为的关系。方法采用实时荧光PCR的方法对57例鼻咽癌组织、20例鼻咽炎性黏膜组织中的TrkB、BDNF进行检测。结果实时荧光PCR结果为TrkB、BDNF在鼻咽癌组织中表达显著高于鼻咽炎性黏膜组织（P〈0．05）。TrkB表达随鼻咽癌临床浸润程度的升高,淋巴结转移的发生而上调（P〈0．05）。BDNF在有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者（P〈0．05）。TrkB的表达强度与BDNF有正相关的关系（rs=0．281,P〈0．05）。结论表明TrkB和BDNF在鼻咽癌的浸润和转移机制中起着重要作用,特异性阻断TrkB／BDNF信号传导通路,将为临床治疗鼻咽癌找到新的突破点。     

酪氨酸激酶受体B和脑源性神经生长因子与头颈肿瘤

酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptors,TrkB）信号传导通路在肿瘤的发生、发展过程起到重要的调控作用。脑源性神经生长因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）与TrkB结合,是激活TrkB信号传导通路最主要的途径。研究发现多种恶性肿瘤中有TrkB及BDNF过度表达且与肿瘤预后相关。本文就TrkB及BDNF在头颈肿瘤中的研究进展做一综述。     

脑源性神经营养因子促进鼻咽癌细胞CNE-2迁移的分子机制

目的 检测脑源性神经营养因子BDNF对鼻咽癌细胞CNE-2迁移过程的影响,以探讨BDNF对无TrkB表达的鼻咽癌细胞促进迁移的作用及其机制.方法 应用免疫印迹方法检测CNE-2细胞BDNF和TrkB蛋白的表达,采用细胞划痕实验检测BDNF对CNE-2细胞迁移能力的影响.结果 CNE-2细胞中高表达BDNF但不表达TrkB.BDNF依然能够促进CNE-2细胞迁移而且具有剂量依赖性,其中25 ng/mL BDNF促细胞迁移的作用具有明显的统计学差异(P＜0.01).K252a抑制Trk激酶活性不影响BDNF促细胞迁移作用(P＜0.01).结论 BDNF在不表达其高亲和力受体TrkB的鼻咽癌细胞中依然能够发挥促细胞迁移的作用,而且这一作用的机制很可能是通过其他受体及通路进行介导的.     

长期注射水杨酸钠对大鼠听皮层酪氨酸受体激酶B及c－fos基因表达的影响

目的通过观察长期注射水杨酸钠后大鼠听皮层中酪氨酸受体激酶B(TrkB)及c-fos基因的表达,探讨其在水杨酸钠耳毒性机制中的作用。方法健康成年Wistar大鼠36只,分为正常组(不做任何处理)、慢性组(肌肉注射水杨酸钠175mg/kg,2次/天,时间间隔8小时,连续注射14天)、慢性恢复组(前期处理同慢性组,停药后恢复28天),每组12只。造模结束后各组大鼠均行听性脑干反应(ABR)检测,然后断头处死并迅速取出听皮层,运用实时荧光定量PCR技术及Western-blot技术分别检测三组大鼠听皮层中TrkB及c-fos的表达。结果正常组ABR反应阈为36±2.23dB SPL,慢性组反应阈升高为41.3±3.31dB SPL,与正常组比较,差异有显著统计学意义(P<0.01);慢性恢复组ABR反应阈为38.6±5.51dB SPL,与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。慢性组听皮层c-fos mRNA表达为1.24±0.09,蛋白的表达为0.70±0.12,慢性恢复组听皮层c-fos mRNA的表达为1.23±0.04,蛋白的表达为0.68±0.08,两组均高于正常组(分别为1.12±0.05、0.50±0.04),差异有统计学意义(P<0.01)。慢性组听皮层TrkB mRNA表达为1.26±0.10,蛋白的表达为1.85±0.17,慢性恢复组听皮层TrkB mRNA表达为1.23±0.07,蛋白的表达为1.80±0.08,均高于正常组(分别为1.11±0.03,1.53±0.16),差异有统计学意义(P<0.05)。结论长期注射水杨酸钠后大鼠听皮层c-fos基因表达升高,可能与听觉中枢神经活动增强有关;长期注射水杨酸钠可能通过上调大鼠听皮层TrkB的表达,增强听皮层神经营养因子的功能促进听皮层功能重塑。     

表皮生长因子受体在鼻咽癌中的表达及意义

目的探讨表皮生长因子受体与细胞增殖、转化的关系。方法采用免疫组化ABC法检测24例正常鼻咽黏膜上皮及60例鼻咽癌组织表皮生长因子受体的表达情况。结果表皮生长因子受体在鼻咽癌组织中呈异质性表达,其阳性率明显高于正常黏膜组织(P<0.05),且表达情况与颈淋巴结转移及预后存在相关性。结论表皮生长因子受体在鼻咽癌组织中的表达水平可作为评估鼻咽癌细胞增殖状态、颈淋巴结转移情况及病人预后的一项参考指标。     

TrKB与VEGF在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、酪氨酸激酶B(TrKB)在鼻咽癌(NPC)组织中的表达并比较两者表达的相关性及分析与肿瘤临床特征的关系。方法采用免疫组化方法检测经活检确诊为NPC的患者55例及鼻咽炎组织30例中VEGF、TrKB蛋白表达水平,比较二两者表达差异。根据患者年龄和性别、肿瘤临床分型、原发灶大小、淋巴结转移和有无远处转移将病例分组,应用双变量相关Pearson检验分析研究VEGF、TrKB表达与肿瘤临床病理特征之间的关系。结果①VEGF蛋白于肿瘤细胞浆及血管内皮细胞浆中均表达,TrKB蛋白阳性表达绝大多数位于细胞浆内。在55例NPC患者中,45例TrKB阳性表达,阳性表达率为81.8%;47例VEGF阳性表达,阳性表达率为85.4%。30例鼻咽炎中,只有3例TrKB阳性表达,阳性表达率为10.0%;5例VEGF阳性表达,阳性表达率为16.7%。肿瘤组织中TrKB、VEGF阳性表达率明显高于鼻咽炎组织（P<0.05）,NPC组织中VEGF与TrKB表达有明显相关性（R=0.716,P<0.01）;②VEGF蛋白表达与NPC的临床分期(P=0.002)、肿瘤的直径大小(P=0.009)及有无淋巴结转移(P=0.001)明显相关,与患者性别、年龄、有无远处转移无关（P＞0.05）。TrKB蛋白表达与临床分期(P=0.00)、肿瘤的直径大小(P=0.00)、有无淋巴结转移（P=0.006）明显相关,与患者性别、年龄、有无远处转移无关（P＞0.05）。结论VEGF、TrKB在NPC组织中表达增加,可能与NPC的发生发展有关。TrKB可能与NPC血管形成有关。 （     

脑源性神经营养因子及其受体在变应性鼻炎鼻黏膜中的表达

目的 探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)及其受体酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase B,TrkB)在变应性鼻炎发病中的作用.方法 采用6～8周健康SD大鼠,随机分成实验组20只和对照组10只,以卵清蛋白致敏激发制成变应性鼻炎模型,免疫组化染色检测鼻黏膜中BDNF及TrkB的表达及分布.结果 BDNF及TrkB在实验组和对照组大鼠鼻黏膜中主要表达在鼻黏膜上皮细胞、腺细胞及导管细胞和固有层炎性细胞的胞质内及部分腺细胞胞核内:实验组和对照组鼻黏膜中BDNF的积分光密度(integrated optical density,iOD)值分别为77344.17±8567.02和54124.82±18515(P<0.05),TrkB的iOD值分别为93087.57±17001.97和74914.78±15895.92(P<0.05),均具有显著性差异.BDNF与TrkB呈正相关(rs=0.589,P<0.01).结论 BDNF与变应性鼻炎的发生有着密切的联系,可能主要通过与TrkB结合而参与变应性鼻炎的发生、发展.     

鼻咽癌细胞株C666-1细胞中酪氨酸激酶受体B的表达与抗失巢凋亡的关系

目的 探讨酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)对鼻咽癌细胞系C666-1失巢凋亡特性的影响和调控.方法 用反转录聚合酶链反应(PT-PCR)以及蛋白质印迹法检测培养的C666-1细胞中TrkB以及其配体脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达.采用TrkB的抑制剂K252a以及其配体BDNF分别作用于C666-1细胞,采用软琼脂集落形成实验观察细胞的集落形成能力以及悬浮培养后用活细胞计数kit-8(cell counting kit-8,CCK-8)法和膜联蛋白V碘化丙啶(annexin V-propidium iodinate,Annexin V-PI)双染色法检测对细胞的增殖和凋亡的影响.通过蛋白质印迹法观察TrkB、BDNF、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(serine threonine kinase,Akt)等蛋白在实验前后的表达变化的情况.结果 培养的C666-1细胞表达TrkB及BDNF.C666-1细胞受K252a作用后在软琼脂中集落细胞数减少,而在BDNF作用下集落细胞数增加.在悬浮培养状态,K252a对C666-1细胞的增殖具有抑制作用,经K252a作用后C666-1细胞的TrkB表达下调,并同时下调磷酸化的Akt蛋白(p-Akt);而BDNF作用后,内源性BDNF表达增强,且TrkB和p-Akt的表达上调.结论 TrkB具有抑制鼻咽癌细胞C666-1失巢凋亡的作用,K252a能够抑制TrkB的表达从而诱导凋亡,是具有潜力的酪氨酸激酶抑制剂.     

神经营养素-3在内耳听觉损伤实验研究的应用

神经营养素家族（NGFs）成员包括神经生长因子（neurotrophin growth factor,NGF）、脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）、神经营养素-3 （neurotrophin-3, NT-3）、神经营养素-4/5（NT-4/5）、神经营养素-6（NT-6）等,它们在结构和功能上密切相关,在核酸和氨基酸序列上有很多同源性.NGFs是由神经所支配的靶组织、细胞或胶质细胞等产生的、能促进中枢和外周神经元分化、生长和存活的活性蛋白因子,在中枢和外周神经系统发育和正常生理功能维持及减轻神经损伤中起着重要的作用.这种作用是通过酪氨酸激酶受体（tyrosine kinases receptpr,Trk）来实现的.在对内耳听觉损伤的保护作用中,以NT-3的保护作用最为显著[1～3],引起众多学者的重视.本文对NT-3对内耳的保护作用作一综述.     

抑癌基因PTEN在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的 :检测抑癌基因PTEN在鼻咽癌组织的表达缺失情况 ,探讨PTEN与鼻咽癌发生发展之间的关系。方法 :采用免疫组织化学SABC染色法观察鼻咽癌旁正常组织和鼻咽癌组织中PTEN蛋白的表达 ,并分析其与病理组织类型、病理分级和临床分期的关系。结果 :PTEN在鼻咽癌旁正常组织的表达缺失率 (13.3% )低于鼻咽癌组织的表达缺失率 (47.8% ) ,其差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;鼻咽鳞状细胞癌PTEN的表达缺失率(5 8.1% )高于分化型和非分化型非角化癌 (30 .8% ) ;高、中、低分化的鼻咽鳞状细胞癌中 ,PTEN的表达缺失率依次递增 (分别为 2 5 .0 %、6 3.2 %、83.3% ) ;鼻咽癌临床Ⅲ～Ⅳ期的PTEN的表达缺失率 (78.1% )高于临床Ⅰ～Ⅱ期 (2 1.6 % )。结论 :PTEN在鼻咽癌的发生及发展过程中有表达缺失 ,且与病理类型、病理分级、临床分期有关。     

鼻咽癌患者血清血管生长素水平的临床意义初探

目的:分析血管形成素(ANG)在鼻咽癌(NPC)患者血循环中的含量及其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定42例NPC患者(NPC组)和30例健康者(对照组)血清ANG水平。结果:NPC组治疗前血清ANG水平为(371.4±123.5)μg/L,显著高于对照组的(292.5±74.2)μg/L(P<0.01),且血清ANG水平随着NPC临床分期的增加而升高(P<0.05);治疗后血清ANG水平为(340.6±112.4)μg/L,比治疗前明显降低(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。结论:NPC患者血清ANG水平升高,且其升高的程度与肿瘤的进展有关。     

组织蛋白酶B在鼻咽癌患者组织和血清中的表达及临床意义

目的 通过测定组织蛋白酶B （Capthesin B）在鼻咽癌组织和血清标本中的表达量,探讨Capthesin B作为评估鼻咽癌患者治疗预后的可行性。方法 收集长沙金域医学检验中心2019年8月—2020年2月50例鼻咽癌组织和癌旁正常组织标本,免疫组织化学（IHC）检测组织标本Capthesin B表达,比较分析蛋白表达差异。收集湖南省肿瘤医院2019年7月—2020年3月106例鼻咽癌患者治疗前、治疗后及40例健康体检者的血清标本,ELISA试验检测血清Capthesin B浓度,并比较分析3组间的血清Capthesin B浓度。结果 IHC结果显示,鼻咽癌组织Capthesin B阳性率显著高于癌旁正常组织（P< 0.001）。ELISA结果表明,鼻咽癌患者血清Capthesin B 1.23（0.64,2.27） ng/mL显著高于健康体检组的（0.98 ±0.49） ng/mL （P< 0.05）,鼻咽癌患者治疗后血清Capthesin B 0.69（0.39,1.42） ng/mL显著低于治疗前的1.23（0.64,2.27） ng/mL （P<0.001）。TNM分期III、IV患者血清Capthesin B （2.09 ±1.50） ng/mL显著高于I、II期患者的1.14（0.60,2.12） ng/mL,提示Capthesin B水平与TNM分期显著相关（P<0.05）。鼻咽癌颈淋巴结转移组血清Capthesin B （2.63±1.67） ng/mL显著高于未转移组的1.10（0.59,2.14） ng/mL （P<0.01）,提示Capthesin B与转移相关。工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）为0.670（P<0.001）,提示血清Capthesin B可作为鼻咽癌疗效预测的参考指标。结论 鼻咽癌组织Capthesin B高表达和患者血清Capthesin B浓度明显升高,治疗后其浓度降低,提示Capthesin B与鼻咽癌发生发展密切相关。Capthesin B与肿瘤淋巴结转移及TNM分期呈正相关,提示Capthesin B可作为鼻咽癌治疗预后的参考指标。     

增强型胸苷激酶基因表达载体的构建及其杀伤鼻咽癌细胞的实验研究

目的 探讨改良构建人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit promoter,hTERT)启动子及巨细胞病毒原核(cytomegalovirus,CMV)增强子联合调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(thymidine kinase,TK)的增强型表达载体在鼻咽癌细胞体内外实验中的靶向杀伤效应及体内应用的安全性评价.方法 以pGL3-basic空载体为模板,分别酶切连接hTERT启动子、CMV增强子及TK基因构建靶向性增强型表达载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTERTp-CMV(以hTERT单启动子调控TK基因表达载体作为对照组),转染端粒酶阳性的人鼻咽癌5-8F细胞及用做对照组的人乳腺癌MCF-7细胞和端粒酶阴性的正常人脐静脉内皮细胞ECV-304,分别采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达差异、实时荧光定量PCR检测转染后TK基因mRNA表达差异、TeloChaser法检测上述细胞中的端粒酶活性、四甲基偶氮唑蓝(MTt)联合Boyden小室实验分析增强型载体对鼻咽癌细胞增殖及侵袭抑制的作用.将鼻咽癌细胞接种于裸鼠腋部皮下,构建裸鼠鼻咽癌移植瘤模型,研究增强型载体对裸鼠移植瘤的体内生长抑制作用及对全身的毒副反应情况.结果 ①成功改良构建hTERT/CMV双调控TK基因的增强型表达载体.②转染增强型载体组及单启动子载体组的鼻咽癌5-8F细胞均有绿色荧光表达,但前者荧光数量及强度均较后者强,对照组端粒酶阳性的乳腺癌细胞也有很强的荧光表达,而ECV-304细胞几乎无绿色荧光表达.实时荧光定量PCR结果显示,增强型载体组的TK基因mRNA表达量是单启动子组的2-5倍.③ TeloChaser法结果显示,两种肿瘤细胞(5-8F细胞、MCF-7细胞)端粒酶活性均为阳性,正常对照ECV-304细胞端粒酶活性为阴性.④MTT联合Boyden小室侵袭实验结果显示,增强型表达载体对5-8F细胞体外增殖及侵袭力均有明显抑制作用.相对细胞存活率为37.0%,较对照组明显低(P<0.01).⑤体内实验结果显示,增强型靶向表达载体对裸鼠鼻咽癌移植瘤生长具有明显抑制作用,抑瘤率达56.3%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),而裸鼠肝肾病理检查未发现明显损害.结论 以hTERT/CMV双调控机制介导TK基因的增强型表达载体能够高效、靶向杀伤鼻咽癌细胞及移植瘤,实验动物体内应用无明显毒副作用.     

鼻咽癌血清新蝶呤水平检测及其意义

目的 :探讨血清新蝶呤与鼻咽癌的关系及临床意义。方法 :采用 EL ISA竞争法检测 5 4例初治鼻咽低分化鳞癌 (鼻咽癌组 )治疗前、后及 32例健康成人 (对照组 )的血清新蝶呤水平。结果 :鼻咽癌组新蝶呤浓度明显高于对照组 (P <0 .0 1)。各 TNM分期之间新蝶呤水平无差异 (P >0 .0 5 )。无淋巴结转移者血清新蝶呤浓度低于有淋巴结转移者 (P <0 .0 5 )。治疗后新蝶呤水平比治疗前明显降低 (P <0 .0 1) ,但仍比对照组高 (P <0 .0 1) ;治疗后 6个月病灶全消者新蝶呤水平仍维持较低水平而病灶部分残留者复又上升 (P <0 .0 1)。结论 :鼻咽癌病理发生过程中可能存在着巨噬细胞介导的细胞免疫过激或免疫应答异常 ;血清新蝶呤水平动态观察可作为鼻咽癌病情评估和疗效监测的一项客观指标。     

早幼粒细胞性白血病基因蛋白在喉癌和鼻咽癌中的表达及意义

目的：探讨早幼粒细胞性白血病基因（PML）蛋白在喉癌和鼻咽癌组织中的表达及意义。方法：运用免疫组织化学SP法检测56例喉癌和34例鼻咽癌患者术后石蜡标本中PML蛋白的表达水平,分析其与肿瘤病理分级和T分级、淋巴结转移的关系。结果：①在不同病理分级的喉癌组织中,PML蛋白表达水平随着肿瘤恶性程度的升高而降低（P〈0．05）;②在不同T分级的喉癌和鼻咽癌组织中,PML蛋白表达水平随着肿瘤的发展而降低（P〈0．05）;③与喉癌组织相比,鼻咽癌组织中PML蛋白表达相对较低（P〈0．05）;④在有无淋巴组织转移的鼻咽癌组织和喉癌组织中PML蛋白表达均差异无统计学意义。结论：PML蛋白与喉癌和鼻咽癌的病理分级和T分级的关系密切,提示PML在抑制肿瘤生长中可起到一定的作用。在肿瘤的转移方面,PML所起作用较小。     

鼻咽癌组织中转移抑制基因和血管内皮生长因子蛋白表达及其临床意义

目的 探讨转移抑制基因（non—metastatic gene-23-H1，nm23-H1）和血管内皮生长因子（vessel endothelium growth factor，VEGF）蛋白表达与鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）预后的相关性。方法 对108例鼻咽癌放疗前活检标本进行检测，应用免疫组织化学技术检测nm23-H1和VEGF基因蛋白在鼻咽癌组织中的表达情况，并分析两基因的表达与鼻咽癌分期、放疗敏感性、生存率、转移及复发之间的关系。结果 鼻咽癌组织中nm23-H1和VEGF蛋白阳性表达率分别为48．1％和59．3％。单因素分析表明，鼻咽癌分期、淋巴转移、生存率及远处转移与nm23-H1蛋白低表达均有密切关系，而VEGF的高表达则与鼻咽癌的分期、淋巴转移、放疗敏感性、生存率及复发均有密切关系。nm23-H1蛋白表达与VEGF表达呈负相关（r=-0．577，P〈0．05）。结论 nm23-H1蛋白低表达和VEGF高表达对判断病变进展，预测放疗敏感性，生存率及转移和复发有重要参考价值。     

鼻咽癌患者血清sICAM-1、sCD4及sCD8的表达及其意义

目的:探讨鼻咽癌患者外周血清可溶性CD4(sCD4)、可溶性CD8(sCD8)和可溶性ICAM—1(sICAM—1)的表达及其意义。方法:采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测54例鼻咽癌患者治疗前、后血清sICAM一1、sCD4与sCD8水平。结果:鼻咽癌患者血清sICAM—1、sCD4及sCD8水平明显增高,与对照组比较,差异有极显著性意义(均P<0.01),血清sICAM—1浓度与TNM分期及淋巴结转移有关(均P<0.05),而sCD4、sCD8水平与淋巴结转移无关(均P>0.05);放疗终sCD4、sCD8与sICAM—1水平比放疗前明显降低(均P<0.01),但仍比对照组高(均P<0.01);放疗后6个月肿瘤全消组血清sICAM—1、sCD4与sCD8继续保持较低水平,与放疗前比较,差异有极显著性意义(均P<0.01);肿瘤残留组血清sICAM—1、sCD4与sCD8浓度出现不同程度回升,其中sICAM—1水平与肿瘤全消组比较,差异有极显著性意义(P<0.01),sCD4、sCD8浓度接近治疗前水平(均P>0.05),但比肿瘤全消组高(均P<0.05)。结论:鼻咽癌存在与sICAM—1表达相关的细胞免疫应答异常,血清sI—cAM—1、sCD4与sCD8的水平检测可作为鼻咽癌病情评估、疗效监测及随访的血清学指标。