家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用

目的 研究家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用. 方法 在体外培养的JEC和A375肿瘤细胞中分别加入0.02%、0.1%、0.5%、2.5%和12.5%浓度的抗菌蛋白,用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡,计算细胞凋亡指数;HE及AO染色法观察凋亡细胞形态.对照组采用不含抗菌蛋白的等量培养基. 结果 JEC细胞的凋亡指数/增殖指数(AI/PI)随浓度的增加而递增,2.5%抗菌蛋白组和12.5%抗菌蛋白组PI及凋亡率明显升高, G0/G1期下降.对A375细胞,12.5%抗菌蛋白组的G2/M期、S期、G0/G1期、G2/M期、AI/PI及PI与对照组的差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论 家蝇幼虫抗菌蛋白可能通过诱导细胞凋亡来抑制JEC细胞生长;其对A375细胞的抑制可能是通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而发挥作用.     

家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用

目的研究家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用。方法在体外培养的JEC和A375肿瘤细胞中分别加入0.02%、0.1%、0.5%、2.5%和12.5%浓度的抗菌蛋白,用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡,计算细胞凋亡指数;HE及AO染色法观察凋亡细胞形态。对照组采用不含抗菌蛋白的等量培养基。结果JEC细胞的凋亡指数/增殖指数(AI/PI)随浓度的增加而递增,2.5%抗菌蛋白组和12.5%抗菌蛋白组PI及凋亡率明显升高,G0/G1期下降。对A375细胞,12.5%抗菌蛋白组的G2/M期、S期、G0/G1期、G2/M期、AI/PI及PI与对照组的差异均有统计学意义(P<0.01)。结论家蝇幼虫抗菌蛋白可能通过诱导细胞凋亡来抑制JEC细胞生长;其对A375细胞的抑制可能是通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而发挥作用。     

诱导家蝇幼虫产生抗菌物质的实验研究

目的对家蝇体内的抗菌物质进行研究。方法通过喂菌及超声诱导家蝇幼虫产生抗菌物质,采用比浊法对家蝇体内抗菌物质的活性进行测定。结果家蝇经诱导后产生的抗菌物质具有较好的杀菌效果,但对不同细菌所产生的杀菌效果有一定差别。结论研究结果可为进一步纯化和分析家蝇体内的抗菌蛋白奠定了基础。     

针刺诱导家蝇幼虫抗菌物质的动态观察

目的观察家蝇幼虫经针刺损伤并感染金黄色葡萄球菌后,家蝇幼虫抗菌物质的动态表达效果。方法室内饲养的家蝇3龄幼虫,经针刺损伤感染金黄色葡萄球菌后,分别于第0、12、24、36、48、60小时记录幼虫存活率,并提取其血淋巴,以溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌作指示菌,采用平板法做抑菌试验,37℃恒温24 h观察抑菌圈,并以抑菌圈直径表示抗菌活力的大小,取诱导后高峰时间产生的抗菌物质进行抑菌实验,探讨家蝇抗菌物质诱导产生的规律。结果针刺损伤感染金黄色葡萄球菌后,家蝇幼虫存活率逐渐降低,提取的血淋巴对溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活力峰均出现在诱导后48 h。结论针刺损伤感染金黄色葡萄球菌处理法可诱导家蝇产生抗菌物质,在诱导后48 h收集血淋巴最为适宜。     

大肠杆菌诱导家蝇抗菌物质的研究

目的　对家蝇体内的抗菌物质进行研究。方法　用大肠杆菌诱导家蝇三龄幼虫 ,采用抑菌圈法 ,对家蝇体内抗菌物质的诱导效果及其活性进行研究。以SDS PAGE法分离家蝇的抗菌蛋白。结果　诱导产生的家蝇抗菌物质其活力高峰出现于第 48h。诱导后第 48h血淋巴稀释 10 0倍 ,对大肠杆菌的致死率仍达 12 % ;其抗菌物质对动、植物病原菌有广谱的抗菌活性 ,同时 ,未经诱导的家蝇幼虫也具有抗菌活性。SDS PAGE电泳分析表明 ,外源诱导能增强原有抗菌物质的表达量 ,并能激活新的蛋白产生。结论　为进一步纯化和生化分析家蝇体内的抗菌蛋白提供了新的依据。     

不同诱导源诱导家蝇抗菌物质的动力学研究

目的 比较不同诱导源诱导家蝇血淋巴中产生抗菌物质的动力学变化及抗菌活动。方法 采用抑菌圈法。以＾６０Ｃｏγ射线，活的大肠杆菌及热灭活的金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和生物盐水为诱导源，均能诱导出家蝇血淋巴中的抗菌物质。结果 不同诱导源诱导家蝇产生抗菌物质的活性大小不同，达到最大活性的时间不同，抗菌特性亦有差异。经热灭活细菌诱导的抗菌物质抗菌活性大，抗菌种类多。同时，未经诱导的家蝇血淋巴也有抗菌活性。结论     

家蝇幼虫Defensin成熟蛋白序列的克隆及在原核中的表达

目的 克隆家蝇幼虫defensin成熟蛋白编码序列并在大肠杆菌中表达，为进一步的研究该基因的功能奠定基础。方法 以家蝇幼虫cDNA文库为模板扩增出defensin基因的成熟蛋白全长编码序列，构建重组原核表达载体pGEX／MDEF，转化的克隆(质粒)通过筛选并测序鉴定。重组的pGEX／MDEF在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，SDS-PAGE鉴定其表达情况和分子质量并用抗鼠GST单抗作western blot杂交进一步鉴定融合蛋白的表达。结果 以家蝇幼虫cDNA文库扩增出一条长约为140bp的cDNA片段，经测序证实其为defensin基因成熟蛋白的编码序列，它编码含40个氨基酸的蛋白质，预测其分子质量单位为4kD。被成功克隆入pGEX-4T-1载体的家蝇幼虫defensin基因的cDNA，在重组大肠杆菌BL21(DE3)中诱导可大量生成相对分子质量30KD融合蛋白。结论 成功构建了家蝇幼虫defensin基因原核表达载体，且其成熟蛋白的编码序列在大肠杆菌高效表达。为下一步表达蛋白纯化，以及研究其生物活性提供了材料。     

滞育家蝇幼虫糖的变化

目的观察家蝇幼虫滞育前后血淋巴中总糖、海藻糖、糖原的变化,探讨家蝇幼虫滞育发生的生化机制。方法低温诱导家蝇幼虫滞育,用蒽酮比色法测定滞育10d、15d、20d组及非滞育组血淋巴总糖、海藻糖、糖原的含量。结果滞育组与非滞育组比较,(1)家蝇幼虫血淋巴总糖含量滞育10d组显著升高,15d组、20d组则降低。(2)血淋巴海藻糖含量滞育10d组、20d组明显升高,15d组差异无显著性。(3)血淋巴糖原含量滞育10d组、15d组降低,20d组则升高。结论家蝇滞育幼虫的糖醇积累型属于海藻糖积累型。     

不同诱导源诱导家蝇抗菌物质的动力学研究

目的　比较不同诱导源诱导家蝇血淋巴中产生抗菌物质的动力学变化及抗菌活性。方法　采用抑菌圈法。以６０Ｃｏγ射线,活的大肠杆菌及热灭活的金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和生理盐水为诱导源,均能诱导出家蝇血淋巴中的抗菌物质。结果　不同诱导源诱导家蝇产生抗菌物质的活性大小不同,达到最大活性的时间不同,抗菌特性亦有差异。经热灭活细菌诱导的抗菌物质抗菌活性大,抗菌种类多。同时,未经诱导的家蝇血淋巴也有抗菌活性。结论　抗菌物质具有潜在的应用价值。     

白花蛇舌草体外诱导人肝癌HEPG2细胞凋亡的初步研究

目的：初步探讨白花蛇舌草对人肝癌HEPG2细胞的增殖抑制作用。方法：制备白花蛇舌草水提取液,体外培养人肝癌HEPG2细胞,MTT法体外细胞毒实验,琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡。结果：白花蛇舌草浓度在10-80mg／mL时,抑制人肝癌HEPG2细胞生长,且随着剂量的增加抑制作用增强,电泳图片显示DNA梯形降解带纹。结论：白花蛇舌草通过诱导细胞凋亡对人肝癌HEPG2细胞具有增殖抑制作用。     

三氧化二砷抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖及诱导凋亡的初步研究

目的：探讨三氧化二砷（AS2O3)抑制神经母细胞瘤SK－N－SH细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法：①采用MTT法测定不同浓度的As2O3在不同时间对SK－N－SH细胞增殖的抑制率；②用TUNEL－POD法检测不同浓度的As2O3诱导SK－N－SH细胞凋亡的情况。结果：①各浓度组As2O3均可抑制SK－N－SH细胞增殖，而且延长作用时间比增加作用浓度更能增强药物的抑制作用；②两个浓度的As2O3均可诱导SK－N－SH细胞凋亡，且凋亡指数与浓度高低有关。结论：As2O3可以通过诱导神经母细胞瘤SK－N－SH细胞凋亡而抑制其增殖，有一定的临床应用价值。     

埃托啡诱导神经细胞凋亡的实验研究

应用ＭＴＴ比色法观察埃托啡，吗啡等对神经线细胞细胞株ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞增殖代谢的影响，同时采用ＴＵＮＥＬ原位细胞凋技术，观察上述药物有无诱发ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞凋亡的作用。提示埃托啡诱导神经细胞凋亡的途径可能不通过阿片受体。     

桂枝茯苓丸诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡的研究

目的：探讨桂枝茯苓丸对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法：用桂枝茯苓丸处理HO8910细胞，采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态学改变，以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果：在桂枝茯苓丸作用下，HO8910细胞呈凋亡改变，DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时，细胞周期发生特定的改变。结论：桂枝茯苓丸能抑制卵巢癌细胞增殖，能诱导卵巢癌细胞凋亡。     

丙戊酸钠抑制NB4细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)对NB4细胞的作用.方法:台盼蓝细胞计数检测不同浓度VPA对NB4细胞增殖的抑制作用,应用流式细胞术检测VPA作用后NB4细胞CD11b的表达,用DNA梯形片段电泳分析细胞凋亡.结果:VPA能显著抑制NB4细胞的增殖(P＜0.01),VPA处理NB4细胞72h时的半数抑制浓度(IC50)为1.17mmol/L;VPA组NB4细胞髓系分化抗原CD11b表达水平明显高于对照组(P＜0.05);NB4细胞经不同浓度VPA处理48h后,出现典型的凋亡细胞所具有的梯形DNA条带.结论:VPA能抑制NB4细胞增殖,诱导细胞分化和凋亡.     

灭幼脲对淡色库蚊幼虫发育的影响

在淡色库蚊发育过程中,用半数致死浓度的灭幼脲处理其二令幼虫,让其发育到四令,再用双向电泳分析受处理的幼虫蛋白和正常二令、四令幼虫蛋白。经比较发现受处理的幼虫的蛋白组份明显少于正常;其多肽点分布与正常相似,但不同于二令幼虫。这提示灭幼脲能抑制幼虫蛋白合成及其生长,但似乎不能抑制其发育。     

紫杉醇诱导9L胶质瘤细胞凋亡的体外实验研究

目的：通过体外实验探讨紫杉醇对恶性胶质瘤９Ｌ细胞株有否凋亡诱导作用。方法：在经ＭＴＴ比色法测试到紫杉醇对９Ｌ细胞具有细胞毒作用的前提下,进一步通过形态学观察,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪来检测其细胞毒作用是否与诱导细胞凋亡有关。结果：紫杉醇对９Ｌ细胞具显著细胞毒作用;０１μｍｏｌ／Ｌ紫杉醇作用下９Ｌ细胞分裂主要被阻滞在Ｇ２／Ｍ期,并在第７２ｈ出现凋亡细胞峰,此时培养细胞ＨＥ染色表现出典型的凋亡细胞形态特征,抽提其ＤＮＡ做琼脂糖凝胶电泳显示凋亡特有的ＤＮＡ“阶梯”。结论：紫杉醇具有抗胶质瘤作用,其机制与诱导细胞凋亡有关,通过进一步的体内实验,可为其最终广泛应用于临床脑胶质瘤病人提供充分的理论依据。     

胃癌细胞凋亡相关基因研究进展

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,死亡率很高。胃癌的发生是细胞凋亡与增殖调控失衡的结果。现综述细胞凋亡相关基因在胃癌的发生、发展、转归和治疗中的地位及其应用前景。     

Bcl-2蛋白在蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸诱导的体外神经细胞退化中的作用

目的:在体外水平条件下,探讨抗凋亡蛋白Bcl-2在蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸所诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)样神经细胞退化中是否具有细胞保护的作用.方法:以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y作为体外神经细胞研究材料,采用脂质体介导重组质粒pEGFP-N1-Bcl-2瞬时转染细胞的方法,造成神经细胞外源性过表达Bcl-2蛋白与绿色荧光蛋白的融合蛋白,以荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白显示转染阳性细胞,再用冈田酸处理转染细胞,通过DNA荧光染料染色法显示细胞凋亡核形,显微镜下计数细胞测定凋亡率.结果:①冈田酸剂量依赖性地引起SH-SY5Y细胞凋亡,DNA荧光染料染色显示,80nmol冈田酸作用24h引起该种细胞出现多量核浓聚、核碎裂的凋亡核形;②脂质体介导pEGFP-N1-Bcl-2和空质粒pEGFP-N1瞬时转染SH-SY5Y细胞,细胞分别过表达Bcl-2-绿色荧光蛋白的融合蛋白和绿色荧光蛋白,前者主要分布于近核的胞质,而后者则在胞质和胞核中均有分布;200nmol经典促凋亡剂星形孢菌素处理细胞24h,Bcl-2重组质粒转染组的细胞凋亡率显著低于空质粒转染组的细胞凋亡率(P＜0.01);③80nmol冈田酸处理细胞24h,Bcl-2重组质粒转染组的细胞凋亡率显著低于空质粒转染组的细胞凋亡率(P<0.05).结论:冈田酸能引起体外培养神经细胞SH-SY5Y发生凋亡性退化,Bcl-2重组质粒瞬时转染引起该种细胞过表达具有抗凋亡活性的融合蛋白Bcl-2-绿色荧光蛋白,Bcl-2过表达能部分抑制冈田酸所致SH-SY5Y细胞退化,这提示Bcl-2在冈田酸所致阿尔茨海默病样神经细胞退化过程中可能具有细胞保护作用.