EGb761对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

本实验用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ,观察银杏叶提取物的标准制剂 EGb76 1(含 2 4 %黄酮甙和 6 %萜烯 )对细胞凋亡以及脑缺血后脑组织病理变化的影响。1　材料与方法1.1　实验动物分组　健康 Wistar大鼠 2 0只 ,体重 2 5 0～ 30 0 g,随机分为假手术组 (A组 ) ,脑缺血再灌注组 (B组 ) ,生理盐水组治疗组 (C组 ) ,EGb76 1治疗组 (D组 ) ,每组 5只。1.2　实验方法　线栓法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型 ,假手术组仅分离血管 ,不插尼龙线。 D组于实验前 3d开始灌胃给 EGb76 1(Ginaton) ,15 0 mg/ kg,每日 2次 ,术前 1h灌…     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后CAD表达与细胞凋亡的关系

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血半暗带 Caspase-3激活的 DNA酶 (CAD)基因的表达变化与细胞凋亡的关系。方法　线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO)及再通模型。应用 RT-PCR技术检测MCAO再通后不同时相缺血半暗带皮质 CAD基因的表达 ,同时利用 TU NEL法观察对应区域细胞凋亡的动态变化规律。结果　脑缺血再灌注 6h,半暗带皮质 CAD m RNA显著升高 ,密度比值为 0 .74± 0 .0 4,再灌注 2 4h达到高峰 (1.13± 0 .11)。对应各时相均可见神经细胞凋亡 ,凋亡细胞以再灌注 48h组为最高 (113 .10± 13 .88)。结论　脑缺血再灌注可致 CAD基因表达上调 ,可能参与了缺血后神经细胞凋亡过程     

丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP10表达的影响

目的研究丁苯酞干预对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时点脑组织中热休克蛋白10(HSP10)表达的影响,并探讨丁苯酞对缺血性脑血管病保护作用的机制。方法采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作大鼠前脑缺血再灌注模型;H&E染色和NSE免疫组化染色神经元,观察脑组织的形态变化和记数各组神经元数目;免疫组织化学检测对照组、缺血再灌注组及丁苯酞干预组大鼠脑组织HSP10的表达水平变化。结果脑缺血再灌注后丁苯酞干预组及缺血再灌注组HSP10表达水平于再灌注后6h开始上调,3d达到高峰,丁苯酞干预组各时间点HSP10阳性表达指数均高于缺血再灌注组,丁苯酞干预组脑组织的损伤程度明显轻于脑缺血再灌注组(P<0.05)。结论丁苯酞可能通过上调大鼠缺血再灌注损伤后脑组织HSP10的表达,从而抑制前脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡,减少神经元死亡,减轻缺血再灌注后脑组织的损伤。     

丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后的Fas／FasL蛋白表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注损伤后Fas和FasI。蛋白的表达和丁笨酞保护作用的机制。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组和丁苯酞组;应用尼氏染色显示存活神经元,末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEI。）方法检测程序化死亡细胞;免疫组织化学法观察脑缺血再灌注后6h、1d、3d、7d四个时间点脑组织中Fas和FasI．蛋白的表达变化。结果丁苯酞组皮层存活神经元数量多于缺血再灌注组,TUNEI．阳性细胞数减少,丁苯酞组在再灌注后各时间点的Fas和FasL阳性细胞数较缺血再灌注组少,差异均有统计学意义。结论丁苯酞可能通过抑制Fas／FasL蛋白的表达,从而减少神经元凋亡,减轻缺血再灌注后脑组织的损伤。     

丁苯酞对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑程序性凋亡因子-5表达的影响

目的研究丁苯酞对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后程序性细胞凋亡因子-5表达的影响。方法健康雄性SD大鼠132只,随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、缺血再灌注治疗组,后两者再分别分为再灌注6h、24h、48h、3d、7d共5个亚组,每亚组12只。应用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,治疗组造模成功后即刻给予丁苯酞80mg／（kg·d）灌胃,余各大鼠给予同剂量生理盐水灌胃。在相应时间点评定神经功能缺损评分,TTC染色法测定脑梗死体积,免疫组化法测定缺血脑组织PDCD-5的表达,TUNEL法测定凋亡细胞。结果假手术组未见梗死灶,偶有凋亡细胞,少见PDCD-5的表达;模型组及治疗组均可见梗死灶及凋亡细胞,有PDCD-5的表达;治疗组在对应时间点较模型组梗死灶小,凋亡细胞少,PDCD-5的表达少。结论丁苯酞对局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能是通过减少PDCD-5的表达抑制细胞凋亡。     

丁苯酞对大鼠局灶性脑缺血再灌注后NF-κB与p38MAPK表达的影响

目的探讨丁苯酞(NBP)注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)损伤后核转录因子-κB(NF-κB)与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法清洁级健康SD大鼠100只,根据随机分组法分成5组:假手术组(Sham组)、I/R组、NBP小剂量组(20mg·Lkg~(-1))、NBP中剂量组(40mg·Lkg~(-1))和NBP大剂量组(80mg·Lkg~(-1))各20只。采用Zea-longa线栓法制作大鼠局灶性IR模型,使用TTC染色法检测各组大鼠的脑梗死体积,苏木精-伊红染色法检测各组大鼠的脑梗死病理变化,利用Western blotting方法检测各组大鼠的NF-κB与p38MAPK表达以及NBP组大鼠经不同剂量NBP处理后的NF-κB与p38MAPK表达。结果 NBP组和IR组脑梗死体积明显高于Sham组,NBP组明显低于I/R组(P<0.05)。I/R组和Sham组相比,细胞排列紊乱,细胞数目减少,细胞间隙增宽,甚至严重的出现核固缩。I/R组和NBP组比Sham组中的p-NF-κB与p-p38MAPK表达升高(P<0.05)。结论 NBP能够抑制大鼠脑组织中磷酸化NF-B和磷酸化p38MAPK蛋白水平增加,减轻脑I/R损伤。     

3-CP对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用

目的探讨3-CP对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。方法采用血管内尼龙线栓塞法建立大鼠局灶性脑缺血模型,脑缺血和再灌注通过激光多普勒监测局部脑血流来证实。所有动物均缺血1h再灌注24h,动物分为4组:实验一组(3-CP100m g/kg;n=6),实验二组(3-CP10m g/kg;n=6),实验三组(3-CP1m g/kg;n=6)和对照组(0.9%生理盐水,n=5)。3-CP和生理盐水均在再灌注开始1m in内注射入血管。脑梗塞体积用TTC染色法显示,用图象分析软件计算梗塞体积。结果实验一、二、三组和对照组脑梗塞体积分别为(44.4±16.5)m m3、(39.5±20.3)m m3、(107.0±18.3)m m3和(146.0±63.6)m m3,实验一、二组和对照组相比,相差显著(P<0.01)。结论100m g/kg3-CP和10m g/kg3-CP剂量的3-CP对大鼠局灶性脑缺血模型中再灌注损伤有神经保护作用。     

丁苯酞治疗大鼠脑缺血再灌注损伤作用机制的研究

丁苯酞软商品名为恩必普,其化学名称为消旋-3-正丁基苯酞,由石药集团恩必普药业有限公司生产,是我国拥有自主知识产权的国家一类新药.国内外有关丁苯酞注射液神经保护作用的大部分研究都集中在急性脑缺血模型,有关丁苯酞注射液作用于脑缺血再灌注模型的实验研究报道尚未见报道.     

腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Glu的影响

目的观察腺苷预处理后大鼠局灶性脑缺血再灌注区脑组织的兴奋性氨基酸含量,探讨腺苷预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法制作大鼠大脑中动脉缺血2h后再灌注损伤模型。SD(Sprague-Dewley)大鼠80只,随机分为正常对照组(N组)、假手术组(F组)、模型对照组(IR组)、腺苷预处理组(AP组),每组20只,依术后处死动物时间的不同,每组再分为4个亚组2h、6h、24h和72h组(N2、6、24、72h,F2、6、24、72h,IR2、6、24、72h,AP2、6、24、72h),每个亚组5只动物。采用组织匀浆法,观察腺苷预处理对缺血2h再灌注2h、6h、24h、72h的兴奋性氨基酸含量的影响。结果模型组缺血再灌注后2h较假手术组谷氨酸水平显著增高(P<0.05),随后逐渐下降,24h达正常;谷氨酸含量AP组中2h、6h亚组均小于IR相应亚组(P均<0.05),但大于N组和F组各相应亚组(P均<0.05);谷氨酸含量AP组中24h、72h亚组与IR、F组相应亚组无差异(P>0.05)。结论脑缺血再灌注后谷氨酸大量释放,可产生缺血再灌注损伤;腺苷预处理可减少脑缺血再灌注后谷氨酸的产生,可能是腺苷预处理脑保护作用的一些机制。     

大鼠局灶性脑缺血-再灌注后caspase-8和caspase-9 mRNA及蛋白质表达

1994年MacManus等[1]首先报告大鼠全脑缺血后存在神经元凋亡。近10年来,关于脑缺血后细胞凋亡机制的研究取得了巨大进展。已知脑缺血后可有多种基因被诱导表达,这些基因编码的蛋白质产物直接或间接参与了凋亡的调控。天     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂减少大鼠脑缺血模型caspase-3的表达

目的 :研究半胱氨酸蛋白酶caspase 3及calpain抑制剂干预治疗对大鼠局灶性脑缺血 /再灌注模型caspase 3表达的影响。方法 :大鼠随机分为经左侧侧脑室注射caspase 3抑制剂Ⅲ组 (DEVD组 )、calpain抑制剂Ⅰ组 (ALLN组 )、联合治疗组 (DEVD +ALLN组 )、溶剂二甲基亚砜对照组 (DMSO组 )以及左侧大脑中动脉缺血 /再灌注对照组 (MCAO组 ) ,诱导左侧大脑中动脉缺血 2h ,再灌注2 4或 48h ;再灌注 2 4h进行TTC染色观察梗死灶的形成情况 ;用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术 (TUNEL)检测鼠脑中的神经元凋亡情况 ;并分别通过原位杂交和免疫组化技术检测鼠脑中caspase 3mRNA及活性蛋白的表达。结果 :DMSO组的各项指标与MCAO组无明显差异 ;DEVD组或ALLN组缺血侧脑中细胞凋亡数、caspase 3mRNA及活性蛋白的表达均明显减少 ,联合治疗组作用更强。结论 :caspase 3与calpain抑制剂干预治疗可减少大鼠缺血再灌注脑区神经元凋亡和caspase 3的表达 ,从而产生神经保护作用 ,并具有潜在的临床应用价值。     

降纤酶对大鼠局灶脑缺血／再灌后caspase—3 mRNA表达和细胞凋亡的影响

目的:通过观察降纤酶对大鼠脑缺血损伤后半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达和细胞凋亡的影响,研究其对脑保护机制。方法:采用大鼠线栓法栓塞一侧大脑中动脉(MCAO)制作局灶脑缺血/再灌注模型,健康雄性Wistar大鼠144只,分为生理盐水组和降纤酶两组,用原位杂交和原位末端标记(TUNEL)方法,观察缺血0、1、3、6和24 h;缺血3 h再灌注3、6和24 h;缺血 6 h再灌注3、6和 24 h的caspase-3 mRNA的表达和 TUNEL染色阳性细胞数。结果:降纤酶保护组caspase-3 mRNA的表达和TUNEL染色阳性细胞数明显少于生理盐水组。结论:降纤酶可抑制大鼠脑缺血/再灌注后caspase-3 mRNA的表达和细胞凋亡。     

依达拉奉对脑缺血再灌注后FADD、caspase-8表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后Fas相关死亡域蛋白（FADD）、caspase-8蛋白的表达及依达拉奉对其的影响。方法用免疫组化法测定缺血2h后再灌注不同时相缺血半暗带FADD、caspase-8蛋白的表达。结果缺血半暗带皮质内FADD、caspase-8蛋白的表达于缺血再灌注后3h明显上升，再灌注12h达高峰（P〈0．01），至再灌后24h明显下降。依达拉奉能显著下调其表达（P〈0．01，P〈0．05）。结论脑缺血再灌注后缺血半暗带FADD、caspase-8蛋白的表达均明显增加，提示二者可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用．依达拉奉可能通过抑制其表达而达到脑保护的作用。     

丁苯酞软胶囊治疗急性脑梗死临床观察

目的观察丁苯酞软胶囊治疗急性脑梗死的临床疗效及安全性。方法 80例急性脑梗死患者随机分为对照组和丁苯酞治疗组,对照组给予拜阿司匹林、依达拉奉等治疗,丁苯酞治疗组在对照组的基础上加用丁苯酞软胶囊。在入院第1d、第7 d、第14 d、21 d及28 d进行NIHSS评分及日常生活能力评分,在第1天第14天及第28天检测肝功、肾功,血凝常规。结果 2组14 d、21 d、28 d的NIHSS评分、Barthel指数评分均较治疗前明显好转,观察组优于对照组,差异有显著性(P<0.01);而2组的血凝常规比较差异无显著性。结论丁苯酞治疗急性脑梗死能有效改善神经功能缺损。而相对安全,对肝、肾功、凝血功能无明显影响。可作为急性期脑梗死治疗安全有效的选择。     

丁苯酞治疗急性期后循环脑梗死的疗效观察

目的 观察丁苯肽治疗急性期后循环脑梗死的临床疗效.方法 选取80例急性期后循环脑梗死患者随机分为治疗组和对照组,对照组按脑血管病防治指南给予规范治疗,治疗组在规范治疗基础上加用丁苯肽软胶囊,分别在治疗第7天、14天用NIHSS和日常生活能力评分量表进行评分.结果 治疗组的NIHSS评分显著降低,日常生活能力显著提高,2组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丁苯肽治疗急性期后循环脑梗死有显著疗效.     

大鼠局灶性脑缺血再灌流后Caspase-3激活与神经元凋亡的关系

目的探讨Caspase-3与局灶性脑缺血后神经元凋亡的关系。方法局灶性脑缺血再灌流大鼠模型,按再灌流时间不同随机分为5组。用半定量RT-PCR观察了脑缺血后不同时程Caspase-3mRNA表达及四肽荧光底物法检测Caspase-3蛋白酶活性;用TUNEL方法检测不同时程细胞凋亡。结果脑缺血2h再灌流2h组Caspase-3mRNA水干即已升高(P＜0.05)),蛋白酶活性轻度升高,再灌流6h后两者均明显升高(P＜0.05);脑缺血再灌流后不同时程细胞凋亡具有与Caspase-3相似的变化趋势。结论提示脑缺血后细胞凋亡的发生与Caspase-3的激活有关。     

促红细胞生成素对大鼠局灶性脑缺血CAPSASE-3蛋白的影响

目的　研究促红细胞生成素 (erythropoietin ,rhEPO)在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中对Caspase - 3蛋白的影响 ,探讨rhEPO的脑保护机制。 方法　线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ,NISS染色观察缺血半暗区的病理形态变化 ,免疫组织化学方法检测活化的Caspase - 3的表达 ,TTC染色观察缺血损伤面积。结果　Caspase - 3阳性细胞在对照组脑组织内散在分布 ,缺血组和治疗组在大脑皮层较为密集。缺血组阳性细胞数显著高于对照组 (P<0 .0 1) ,治疗组阳性细胞数显著低于缺血组 (P <0 .0 1)。结论　Caspase- 3在大鼠局灶性脑缺血再灌注中活性显著增高 ,rhEPO能有效抑制Caspase - 3激活 ,从而抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中缺血损伤及细胞凋亡 ,在大鼠局灶性脑缺血再灌注中脑损伤中起到保护作用     

caspase-3在颞叶癫痫大鼠海马神经凋亡中作用的实验研究

目的构建癫痫模型大鼠海马凋亡神经元的cDNA文库,采用酵母三杂交技术从中寻找caspase-3潜在的酶切底物。方法制作海人藻酸大鼠癫痫模型,取其海马组织制作酵母三杂交cDNA文库,克隆获得caspase-3的P12、P17两亚基,然后分别定向插入同一pBridge质粒,构建caspase-3的酵母三杂交诱饵载体并进行验证,然后对所构建文库进行筛库。结果成功构建癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了caspase-3酵母三杂交诱饵载体,并通过caspase-3与eIF2α之间的相互作用验证,经筛库获得caspase-3的底物MIZ1。结论酵母三杂交技术可用于寻找caspase-3下游底物,从癫痫模型大鼠海马的cDNA文库中筛库获得caspase-3的底物MIZ1,为进一步研究caspase-3在癫痫发作引起的海马神经元损伤中的作用奠定了基础。     

caspase-3基因在脑缺血再灌流损伤中的动态表达

目的 :探讨caspase 3基因在缺血神经细胞死亡机制中的作用。方法 :采用大鼠大脑中动脉阻塞再灌流模型 (MCAO R) ,运用RT PCR和原位杂交技术观察缺血再灌流后caspase 3mRNA表达的时空分布动态变化 ,结合TUNEL技术观察其与凋亡的关系。结果 :脑缺血 3 0min再灌流 6h和缺血 2h再灌流 1h ,caspase 3mRNA在梗死边缘区的内侧诱导表达 ,并随着缺血时间或再灌流时间的延长而增强。caspase 3基因的表达与凋亡细胞的时空动态变化趋势基本一致。结论 :脑缺血损伤诱导caspase 3基因表达增强 ,caspase 3在介导神经细胞凋亡和缺血性脑损害中起关键作用     

dl-3n-butylphthalide prevents stroke via improvement of cerebral microvessels in RHRSP

The purpose of the study is to establish a model of cold-induced stroke in hypertensive rats, and to study the preventive effect of dl-3n-butylphthalide ( NBP ) on stroke. Stroke-prone renovascular hypertension(RHRSP) was created in Sprague-Dawley rats. The animals were assigned randomly to NBP, aspirin treated and vehicle control group, with administration of the medications for 7 days, and then subjected to cold treatment in an environmentally controlled chamber for 3 days to induce the occurrence of stroke. The incidence of stroke, the volume of the brain lesion, patency of the microvessels by FITC-dextran perfusion and the number of microvessels by immunohisochemical detection of vwF were investigated. Cold induced different types of stroke in RHRSP. The incidence of ischemic stroke and the volume of the infarct were decreased, and the perfused microvessels were increased with NBP pretreatment. Our data suggest that NBP prevents cold-induced ischemic stroke via improvement of cerebral microvessels.