抗恶性疟原虫全虫单克隆抗体的制备和鉴定

为建立分泌抗恶性疟原虫全虫单克隆抗体杂交瘤细胞株，研制简易、敏感、特异的快速诊断恶性疟试剂盒。本用恶性疟原虫全虫抗原免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞融合，用ELISA法筛选分泌抗体的阳性杂交瘤细胞克隆，测定单抗的效价和Ig亚类，并用SDS-PAGE、Western印迹、IFAT和IPA等方法对单抗进行鉴定。结果，获得4株(2H6，2A3，3B1和2C12)分泌抗恶性疟原虫单抗的杂交瘤细胞克隆，均属IgG类。其中2H6克隆产生的抗体滴度最高《腹水效价达1：32000)．属IgG1亚类。与伯氏疟愿虫、弓形虫无交卫反应；Western印迹分析显示2H6能被约：130、63、41、33和20kDa等抗原蛋白所识别,IFAT和IPA分析显示，2H6单抗的抗原主要定位于裂殖子、滋养体和裂殖体的表膜部分。从而提示所制备的抗恶性疟原虫全虫杂交癌细胞株能分越高滴度的抗体，其中2H6是针对恶性疟原虫裂殖于表面蛋白的特异性单抗，可用于怒性疟快速诊断试剂盘的研制。     

噬菌体随机肽库分析HIV-1 p24抗原表位

目的：利用噬菌体随机肽库分析抗HIV－1核心区抗原p24单抗体在抗原上的识别位点。方法：用抗HIV－1 p24单抗2C7和3H10作为筛选分子，对噬菌体肽库进行生物洗（biopanning)，并通过DN测序、ELISA效价测定等对所获得的噬菌休克隆进行鉴定，最后对合成的7肽位点通过间接ELISA及免疫抑制试验进行血清学分析。结果：序列分析结果表明，单抗2C7和3H10在HIV－1 p24上的抗原识别表位的保守序列分别为DHPXPXX和XXXXKAF。分别合成这2个7肽氨基酸序列P－C1（DHPSPWG）和P－H3（SPWLKAFGGS），并分析其免疫学结合特性，结果表明与P－H3相比，单抗2C7的抗原识别表位P－C1的固相结合特性较好，固相P－C1检测血样，13份抗HIV阳性本中，12份为阳性（检出率为92．3％），19份抗HIV阴性样本中，仅1份为假阳性结果（特异性为94．7％），与P－C1相比，单抗3H10的抗原表位P－H3的固相结合能力极差，但液相结合活性较好，血样与P－H3的抑制试验表明，13份抗HIV阳性样本中12份样本对P－H3的抑制率大于60％（12／13），而9份抗HIV阴性样本中仅1份对P－H3的抑制率大于50％，结论：用抗HIV－1 p24单抗筛选噬菌体随机肽库，获得单抗在p24抗原上的识别表位的氨基酸序列，血清学结果表明这2个抗原表位存在于p24自然抗原上，在抗HIV－1的感染检测中具有潜在的应用价值。     

自制免疫胶体金层析条检测恶性疟原虫的初步研究

目的：建立一种简易快速，适合于基层使用的自测式免疫胶体金层析（GICA）法用于恶性疟原虫的检测。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHpf)单抗2A5，并以另外4株单抗作为包被抗体，制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条，探索最佳配对模式及估计最低检测量，以镜检和PCR法为对照，用GICA条检测门诊“四热”病人血样，评价其敏感性和特异性，并对其稳定性进行了初步研究，结果：GICA检测重组LDHpf，最低检测量为1ng，以镜检法和PCR法为标准，GICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为88．37％和86．67％，GICA与镜检法的符合率均为91．55％，并且当虫体密度＞200个／μl时，GICA的敏感性为100％，GICA条在4℃下可保存3个月以上。结论：GICA检测恶性疟原虫简易快速，灵敏度高，无需特殊仪器设备，有望成为一种恶性疟原虫快速免疫诊断试剂盒。     

人乳腺癌雌激素受体的免疫组织化学测定

一、材料和方法人乳腺癌标本由上海市房地产管理局职工医院、瑞金医院和市第九医院收集，贮于一SOC；6－7［3H］－E2购自中科院原子核研究所；DAB和兔一PAP－IgG均为Sigma公司产品；兔抗小鼠IgG和羊抗兔IgG均为上海生物制品研究所产品；抗人乳腺癌雌激素受体（ER）单抗（IH12）为本所研制[1]。PAP免疫级化法：将冻存的标本作厚SPin冰冻切片，室温放置10分钟，3．7％福马林固定15分钟，浸入甲醇和丙酮各3分钟，10％小牛血清封闭15分钟，分别滴加ER单抗（1H12腹水1：10）和无关腹水（阴性对照）、PBS（空白对照），湿盒内1小时…     

常见心脏标志物在急性心肌梗死早期诊断的应用价值探讨

目的 检测疑似心肌梗死病人早期血清中CK、CK-MB、cTnI、MYO的浓度，探讨这些标志物在心梗早期诊断中的价值。方法 选取本院心内科因胸痛收治的怀疑心梗的病人97例，在胸痛9h内取样进行血请心肌标志物的检测，按WHO标准分为AMI组和非AMI对照组。结果 AMI组血清CK、CK-MB、cTnI、MYO的浓度均高于非AMI组（P〈0．01），其中CK对AMI的诊断的特异性为66．3％，敏感性为75．32％；CK-MB的特异性为71．62％，敏感性为89．24％；cTnI的特异性为94．32％，敏感性为85．62％；MYO的特异性为96．21％，敏感性为86．21％。结论 在常见心肌标志物中，cTnI对AMI的诊断特异性最高，而敏感性则是CK-MB最高，cTnI和CK-MB应作为心肌损伤的早期标志物联合检测。以提高急性心肌梗死的早期诊断特异性和敏感性。     

多重PCR归化法平行检测HBV和HCV的研究

目的：建立一种多重PCR归化法并应用于对HBV、HCV平行检测。方法：利用PCR反应5′端允许添加非互补序列的原理，运用内外两对引物，经过2轮扩增，使目的产物均带上共有序列，再以共有序列为引物进行扩增，实现多重扩增。比较和筛选四种核酸提取方法。运用正交优化法，优化并确定最佳扩增条件。对28份血标本进行对比试验，并进行质量评价。结果：归化多重PCR方法对于HBV、HCV病毒合并感染患者的诊断敏感性为83.5%，诊断特异性为70.0%，诊断指数为153．3％，诊断效率为72．2％；对HBsAg阳性患者的HBV DNA的诊断敏感性为78．6％，诊断特异性为80．0％，诊断指数为158．6％，诊断效率为79．2％。对抗－HCV阳性患者的HCV RNA的诊断敏感性为75．0％，诊断特异性为90．0％，诊断指数为165．0％，诊断效率为83．3％。结论：多重PCR归化法在多基因扩增或多种病原体的同时平行检测领域具有较大应用潜力。该方法实用、准确、可靠，对HBV HCV的防治具有实际意义。     

碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体ELISA微量检测技术

目的：用本室制备的单克隆抗体建立间接ELISA检测微量bFGF的技术。方法：将抗重组牛碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的杂交瘤细胞株，经再克隆化，选择高亲和力的抗bFGF杂交瘤细胞2H2。用Protein A亲和层析法对2H2腹水型单抗进行纯化。结果：用2H2 mAb建立了高灵敏度的间接、竞争ELISA检测bFGF方法，灵敏度分别达到10和1．0pg/孔，并用间接ELISA检测神经胶质瘤细胞SWO-38上清中的bFGF含量。结论：为实验研究和临床应用提供了微量bFGF的检测方法。     

检测日本血吸虫感染者血清中特异性IgG4的诊断价值

为评价日本血吸虫感染者血清中特异性IgG4的诊断和疗效价值,本研究以SEA为抗原,胶体金．抗人IgG4单抗结合物为检测标记物,以金标免疫渗滤法（DIGFA）检测急性和慢性血吸虫病患者治疗前后血清中特异性IgG4抗体。结果显示,急性和慢性血吸虫病病人血清中IgG4阳性率分别为90．9％（30／33）和98．0％（98／100）;检测非疫区健康者血清及其他寄生虫（包括肺吸虫、华支睾吸虫、囊虫等）感染者血清共235人份,未有阳性出现（特异性为100％）;检测急性血吸虫病病人治疗后6个月和12个月血清,IgG4抗体的阴转率分别为52．0％（13／25）和87．5％（21／24）,均明显高于IgG阴转率;检测血吸虫病病人治后6个月血清,慢性病人与急性病人IgG4抗体阴转率无差异。结果表明DIGFA法检测病人血清特异性IgG4诊断血吸虫病敏感性高,与IgG相比有更高的特异性,具有一定的疗效考核价值。     

抗SARS病毒N蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

目的 制备抗SARS病毒N蛋白的单克隆抗体并研究其初步应用。方法 用基因重组N蛋白免疫小鼠，取免疫后的鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选分泌抗SAPS病毒N蛋白单克隆抗体细胞株。将阳性细胞株接种小鼠腹腔制备单克隆抗体腹水并对抗体进行纯化，分析纯化抗体的相对亲和力。选择亲和力较高的抗体制备检测SARS病毒抗原的酶联免疫诊断试剂，并对其敏感性和特异性进行分析。结果 共获得11株单克隆抗体细胞株，其中3株单抗与N蛋白具有较高的亲和力，4株纯化单抗与N蛋白反应很弱，其余4株单抗介于两者之间。用亲和力较高的单抗制备检测SARS病毒抗原的诊断试剂，其敏感性可达31PFU／ml，而且与其他呼吸道病毒无交叉反应。结论 该试剂特异性较好，可用于SARS病毒抗原的检测，其敏感性仍需用临床急性期样品进行评价。     

套式/多重PCR检测疟疾感染的应用研究

目的了解标签引物-套式/多重PCR技术在检测疟疾感染中的现场应用价值。方法随机采取我省疟疾流行区有发热症状的居民及家庭成员的耳垂血79份,同时制作厚血片和滤纸血样本各1份,用标签引物-套式/多重PCR检测所采集滤纸血样本中的疟原虫,并与镜检法进行比较。结果79份样本中,用标签引物-套式/多重PCR技术检出间日疟原虫阳性6例,镜检初检出10例间日疟原虫阳性,经复查血片后有4例排除了疟疾感染。镜检复核阳性的6例样本PCR均为阳性。以镜检复核为标准,两法阳性和阴性符合率为100%。结论标签引物-套式/多重PCR检测疟疾感染具高度敏感性和特异性,对疟疾鉴别诊断和明确诊断具有重要价值。     

用双盲法观察单克隆抗体对乙型脑炎患者的疗效

本文报道将高中和活性的鼠源性JEV-McAb2H4、2F2、mC3腹水等量混合后,经辛酸-饱和硫酸铵沉淀提纯,按卫生部生物制品标准化委员会审定的“人用鼠源性单抗制备及质量控制要点”鉴定,各项指标基本符合人体内使用要求。1989年7～9月份在西安市传染病院、儿童医院、第四军医大学     

组织型纤溶酶原激活物单克隆抗体研制及其特性鉴定

目的:应用t-PA单克隆抗体建立ELISA法检测t-PA含量以及研究t-PA功能和结构的关系.方法:运用杂交瘤技术研制5株t-PA单克隆抗体,进行较系统的免疫特性的鉴定.结果:5株单抗特异性高,与u-PA、PLG、Fg、Fb、BSA均无交叉反应;亲和力强,1H4＞3C10＞5H10＞4E6＞4C6;腹水效价5×10-6～1×10-7;免疫球蛋白亚类为IgG1和IgG2a;5株抗体中,3C10和1H4可明显抑制t-PA活性,而5H10、4E6、4C6则对t-PA活性无明显影响.结论:为进一步应用这些单抗作为研究手段提供了基础.     

淋病球菌单克隆抗体的制备和特性的研究

应用杂交瘤技术筛选出２株淋球菌特异性单克隆抗体Ｎｇ４（ＩｇＧ２ａ）和Ｎｇ１８（ＩｇＧ３）有可能用于淋病的实验诊断．２株单抗的腹水效价可达１０７，抗原识别位点为淋球菌外膜蛋白约３５ｋＤ的糖蛋白成分．在免疫荧光实验中，２株单抗可与不同型淋球菌标准株反应，不与有关的细菌和真菌交叉。     

抗狂犬病病毒CVS-11株单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗狂犬病毒单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病毒抗原检测方法奠定基础.方法 将狂犬病病毒CVS-11株纯化浓缩后免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经细胞克隆和间接ELISA筛选,获得稳定分泌抗狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株.小鼠腹腔注射法制备大量单克隆抗体并测定腹水效价,用G蛋白亲和层析柱进行纯化,间接ELISA法和间接荧光法鉴定单克隆抗体的类型、特异性及敏感性.结果 细胞融合率达100%,经克隆筛选获4株稳定分泌抗狂犬病病毒抗体的杂交瘤细胞株,其腹水效价分别为1×104,1×105,1×104和1×105;4株单抗均为IgG类型且特异性好.结论 制备的单抗具有良好特异性和敏感性.     

CT引导下腹膜活检对不明原因腹水的诊断价值

目的：探讨CT引导下经皮腹膜穿刺活检对原因不明腹水的诊断价值 方法：在CT引导下对不明原因腹水患者增厚的腹膜穿刺活检并行病理组织学检查。6例患者共行7次穿刺，每次取2-3块腹膜壁层组织。结果：6例中经活检明确腹水原因，其中经病理证实结核性腹膜炎3例，转移性腺癌2例；另1例无明确意义（大致正常腹膜组织）。结论：经皮腹膜穿刺活检对不明原因腹水的诊断，特别是对结核性腹膜炎和腹膜肿瘤的鉴别诊断具有重要的价值。     

细粒棘球蚴AgB亚单位基因的联合表达和血清学评价

目的为进一步提高AgB抗原在诊断中的敏感性和特异性,将细粒棘球蚴AgB1和AgB2两个亚单位基因在同一载体中进行联合表达,并对联合表达的重组抗原和单基因表达的AgB1、AgB2在血清抗体检测中的差异进行比较研究。方法在表达载体PET32a中构建AgB1＋AgB2（AgBs）联合基因的重组质粒,用ELISA检测重组抗原与病人血清的反应性。结果构建了AgBs重组质粒,经测序证实插入的联合基因片段序列正确。AgBs重组质粒表达的融合蛋白分子量为38kDa,为不溶性蛋白。联合表达抗原AgBs对细粒棘球蚴病（CE）血清的敏感性为84．4％,特异性为80．5％;单基因表达的AgB1和AgB2的敏感性分别为75．6％和57．8％,特异性分别为72．6％和91．2％。结论成功构建了AgB亚单位联合表达基因,联合表达的AgBs抗原对CE血清的诊断价值优于单基因表达的AgB1或AgB2抗原。     

血清腹水白蛋白梯度对腹水分类的鉴别价值

目的 探讨血清腹水白蛋白梯度（SAAG）对腹水病因的鉴别价值。方法 选取我院住院或门诊的腹水患者66例，按腹水的发生机制分为门静脉高压组（A组）和非门静脉高压组（B组），分别测定SAAG、腹水总蛋白（AFTP）、腹水／血清总蛋白比值（A／S）、腹水乳酸脱氢酶（LDH），并对结果进行统计学处理。结果 门静脉高压组SAAG值为19．17±5．36，非门静脉高压组SAAG值为8．24±2．76，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。SAAG指标的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确率依次为94．59％、86．21％、89．74％、92．59％和90．91％．而AFTP、LDH、A／S的准确性依次为77．27％、65．15％、65．15％。结论 SAAG与门静脉高压存在着相关性：SAAG在鉴别门静脉高压性腹水与非门静脉高压性腹水时优于传统的渗漏出液指标，对鉴别门静脉高压性和非门静脉高压性腹水具有重要的临床价值。     

抗克伦特罗单克隆抗体杂交瘤的建立及其分泌单抗的免疫学特性鉴定

目的 :建立抗克伦特罗 (CL)单克隆抗体杂交瘤细胞系 ,制备CL单克隆抗体 ,并鉴定其免疫学特性。方法 :用重氮化法将半抗原CL偶联于载体蛋白BSA ,形成结合抗原BSA CL ;以BSA CL免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术建立分泌CL单克隆抗体细胞株 ;用体内诱生腹水法生产CL单抗 ,硫酸钠盐析法提纯。应用抗小鼠同种型抗体测定单抗的同种型 ,用竞争性ELISA和胶体金膜层析试验测定CL单抗的反应特异性和反应动力学。结果 :筛选出C 4G1、C 2H6、C 2D6和C 4C94株高敏感性和高特异性杂交瘤生产单抗 ,其单抗的间接ELISA效价分别为 5× 10 -5、3× 10 -4、6× 10 -4、2× 10 -5;同种型分别为IgG1/κ、IgG1/κ、IgG2a/κ、IgG2a/λ。C 4G1的亲和力常数K =1 6 8× 10 8L/mol,C 2H6的亲和力常数K =1 3× 10 8L/mol。经WestGold蛋白质印迹鉴定单抗与CL特异性结合。C 4G1单抗对CL的半数抑制浓度 (IC50 )为 7 94ng/ml,对沙丁胺醇 (Sb)的IC50 为 10 0 0ng/ml,对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的IC50 均≥ 6 4 0 0ng/ml;C 4G1单抗与Sb的交叉反应性为0 79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 12 % ,而与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。结论 :用单克隆抗体杂交瘤技术     

结核、血吸虫抗体快速联检方法的建立与应用

目的创建一种新的结核、血吸虫抗体快速联合检测方法,并评价其在疾病预防中的潜在应用价值。方法以血吸虫虫卵可溶性抗原（SEA）和结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露糖（LAM）作为检测用抗原,分别点样在硝酸纤维素膜上,以胶体金-蛋白A结合物为检测标记物,采用自行设计的垂直流检测装置为抗原抗体反应体系．建立结核抗体、血吸虫抗体快速联合检测的金标免疫渗滤法（TB／Sj—DIGFA）;用TB／Sj—DIGFA检测肺结核病人、血吸虫病人、健康人及流动人口血清样本,以敏感性、特异性等指标考核其诊断价值及应用价值。结果TB／Sj—DIGFA检测36份肺结核病人血清和40份血吸虫病人血清的敏感性分别为94．4％（34／36）和100％（40／40）;检测50人份健康人血清,对结核病和血吸虫病的特异性分别为80．0％（40／50）和100％（50／50）。应用新创建的TB／Sj-DIGFA方法调查3120流动人口,查出结核抗体阳性675份,阳性率为21．6％（675／3120）,血吸虫抗体阳性38人份．阳性率为1．22％（38／3120）。结论TB／Sj—DIGFA检测结核和血吸虫抗体具有较高的敏感性和特异性。该方法一次操作可同时完成结核和血吸虫2项特异性抗体测定,检测效率高,可节省大量人力和物力。     

磁共振胆胰管成像联合肿瘤标记物CA19—9在胆管癌诊断中的价值

目的：探讨磁共振胆胰管成像（MRCP）联合肿瘤标记物CA19－9在胆管癌中的诊断价值。方法：回顾性分析26例手术及病理主实为胆管癌和22例胆道良性疾病病人的术前MRCP影像特点，并结合血清肿瘤标记物CA19－9的检测进行评价。结果：MRCP诊断的敏感性为88％，特异性为84％，阳性预测值为85％，阳性似然比为5．5；CA19－9的敏感性为82％，特异性为79％，阳性预测值为84％，阳性似然比为3．9。联合诊断的敏感性为92％，特异性为88％，阳性预测值为96％，阳性似然比为7．7。结论：MRCP联合血清CA19－9的检测，提高了对胆管癌诊断的准确性。