日本血吸虫成虫及虫卵可溶性抗原的早期诊断分子筛选

为获取有效的日本血吸虫病早期诊断靶抗原分子。以感染前和感染后2周、4周、6周兔混合血清以及急性、慢性日本血吸虫病人和正常人血清,用Westernblot对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)和虫卵可溶性抗原(SEA)进行了全面的分析与筛选。SEA140kDa和AWA54kDa、21kDa、20kDa分子出现最早,能被感染后2周兔血清所识别;SEA69kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA72kDa、45kDa、34kDa、15kDa相继能被感染后4周兔血清所识别;其中SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa与病人血清反应同6周兔血清反应效果相仿,均为免疫反应主带,且在SDS-PAGE上有对应的蛋白主带,具有潜在的早期诊断价值。进一步对SEA进行抗体类型的分析,发现SEA能刺激机体产生IgG、IgM和IgA反应,其中SEA50kDa、45kDa、38kDa三个抗原分子均能被IgG、IgM、IgA三种抗体所识别,且均为反应主带;SEA140kDa以IgM反应带最深;SEA100kDa反应带仅出现于病人血清,以IgM反应最强,且其与IgM反应带在急性病人血清明显深于慢性病人血清,表明针对IgM的SEA100kDa分子也具有一定的早期诊断和区分病程的价值。SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa和针对IgM的SEA100kDa分子是具有潜在早期诊断价值的优势靶抗原分子。     

日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原54kD等抗原保护力的鉴定

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制得的日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原ＳＩＥＡ ５４ＫＤ抗原免疫小鼠,用尾蚴击感染后,其肝内的总虫卵成熟卵的比例与对照组小鼠比较有显著的减少。ＳＩＥＡ５４ＫＤ抗原分子地的免疫有很强抗雌虫生殖和抗胚胎发育效果,因此可望作为日本血吸虫抗病疫苗修选分子。     

日本血吸虫未成熟虫卵卵壳的超微结构

应用透射电镜和扫描电镜观察了日本血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍ）未成熟虫卵卵壳的超微结构。初产期和胚胎期虫卵卵壳形态结构相似，均有形态多样的微管道贯通卵壳内外，管道内含一些分泌颗粒，管壁由单位膜构成；致密的微棘沿卵壳均匀分布，微棘纵切呈长三角形，横切呈星形，中央有小空腔；卵壳由电子密度低且较厚的外层和电子密度高且较薄的内层构成；卵壳表面有丰富的网样纤维基质。推测卵壳的微管道、微棘和网样纤维基质的形成时期是同步的，皆在雌虫卵模内形成。本文讨论了微管道的结构、功能与意义。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原对实验性自身免疫性脑脊髓炎的预防保护研究

血吸虫虫卵诱发的肝脏虫卵肉芽肿的免疫病理机制是以Th2为主的免疫反应，这种免疫环境给宿主和寄主提供了一种共生的条件。而实验性自身免疫性脑脊髓炎（豇虹）是多发性硬化（MS）的经典动物模型，是以Th1为主的细胞免疫介导的自身免疫性疾病。纠正体内的这种Th1／Th2反应之间的平衡是多年来治疗者们致力的目标，尽管临床上有新的药物不断问世，MS的治疗仍不令人乐观。曼氏血吸虫虫卵已成功用于Th1为主的自身免疫性疾病，其机制探讨仍在进一步的研究中。我们利用日本血吸虫的可溶性虫卵抗原（SEA）探讨其对EAE的预防保护价值，并从临床行为学和组织病理学探讨其对EAE的保护作用。     

用斑点试验检测血吸虫虫卵抗原的进一步研究

<正> 研究表明,血吸虫卵具有强免疫原性,对检测抗体诊断血吸虫病具有重要意义。为此我们曾采用细胞杂交瘤技术制备了一株高效价的单克隆抗体SM21-3,该抗体能识别分子量20～67KD多个重复表位的虫卵抗原;标记过氧化物酶后,用于夹心法ELISA,     

日本血吸虫成虫抗原和虫卵抗原检测先天性感染仔兔血清抗体的动态变化

目的　观察仔兔血清抗体动态变化 ,探讨家兔日本血吸虫病垂直传播的体液免疫反应规律。方法　 5只怀孕晚期母兔分别人工感染 5 0 0条日本血吸虫尾蚴 只 ,仔兔出生后 4 3d起每隔 2周采血收集血清 ,至仔兔发育成熟 (约出生后113d)。分别运用日本血吸虫成虫抗原 (AWA)和可溶性虫卵抗原 (SEA) ,ELISA法检测血清中特异性IgG、IgM抗体 ,观察动态变化。结果　仔兔先天性感染率为 6 0 % (12 2 0 ) ,其中 5只双性感染 ,7只单性感染。 2 0只仔兔 ,抗AWA IgG、抗AWA IgM抗体检测始终呈阴性 ;抗SEA IgG检测 ,5只双性感染仔兔有 4只于出生后 5 7d起陆续呈阳性 ,其余 16只始终为阴性 ;2 0只仔兔抗SEA IgM也始终呈阴性。结论　先天性感染日本血吸虫病的仔兔呈低免疫应答状态 ,可能存在免疫耐受     

血吸虫虫卵抗原诱导的日本血吸虫感染小鼠IFN—γ及IL…

本研究调查了日本血吸虫感染的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞的ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４ｍＲＮＡ转录，于感染后０，３，５，８，１０和１２周摘取小鼠脾脏，将脾细胞置于含ＳＥＡ或ＣｏｎＡ的培养基中培养，然后提取脾细胞总ＲＮＡ，通过逆转录后ｃＤＮＡ的扩增，分析ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４的ｍＲＮＡ水平，ＲＮＡ模板同时进行β－ａｃｔｉｎ的逆转录的扩增，扩增产物被用作ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４扩增的标准对照，在ＳＥＡ或ＣｏｎＡ诱导的未感     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的诊断价值

为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原（sjAWA67)对血吸虫病的诊断价值。本研究通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔。进行常规ELISA检测。结果对急,慢性血吸虫病患血清的检出率分别为100%和95%,与正常人血清,肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的变叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45.7%,75.0%和90.09%。表明SjAWA67蛋白具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

血吸虫病再感染易感性相关抗原的免疫学鉴定

采用Western blot技术．用再感染易感组血清和拮抗组血清对AWA进行免疫识别．为寻找评价人群再感染易感性的诊断抗原和疫苗候选分子提供有价值的信息。结果显示，拮抗组IgG对36kDs和拮抗组IgE对69kDa处条带强烈识别；易感组IgG4对47、32和25kDa处条带强烈识别。结果提示，36kDa和69kDa可能与诱导机体产生针对再感染抗力的免疫应答有关，47、32和25kDa可能与“封闭性抗体”产生有关。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原的电泳分析

本文报道日本血吸虫 SEA电泳分析的初步资料,PAGE的区带模式以及鉴定血清学抗原的方法。日本血吸虫 SEA的 PAGE谱十分复杂,有 12条氨基黑染色带,5条 PAS染色带,二者都能染色的有二条。日本血吸虫SEA有三种主要血清学抗原,其中二种是糖蛋白,一种是不含糖的蛋白质。以上结果表明,日本血吸虫 SEA的电泳分析结果与曼氏血吸虫 SEA的十分相似。     

抗日本血吸虫SEA纳米抗体制备与分析

利用制备的日本血吸虫虫卵抗原(SEA),免疫健康双峰驼Bactrian camel,分离其外周血淋巴细胞提取总RNA,利用RT-PCR扩增骆驼重链抗体IgG可变区(VHH)基因片段,将VHH片段与载体pMECS连接后电转入大肠杆菌TG1构建纳米抗体文库.经亲和筛选、phage-ELISA以及测序分析后,挑取阳性克隆,抽提质粒,电转入大肠杆菌WK6诱导表达纳米抗体.通过间接ELISA分析纳米抗体VHH-1的敏感性和特异性.结果显示,纳米抗体文库容量为2.3 ×108,测序分析显示,所获得的纳米抗体文库具有良好的多态性.经NI-NTA和AKTA纯化后获得高纯度纳米抗体.ELISA分析表明所获得的纳米抗体VHH-1具有较好的敏感性和特异性.为进一步开展纳米抗体在日本血吸虫诊治研究中的应用奠定一定基础.     

ABC-抗CSA系统作为检测日本血吸虫病循环抗原探针建立和初步应用

本文建立了一种以吸附在硝酸纤维素纸上的日本血吸虫循环抗原为靶子,用生物素化的抗虫源性和虫卵源性的高效特异的多克隆抗体为探针检测血吸虫循坏抗原的方法。该法利用生物素一亲和素的多级放大作用,并用聚丙烯酰胺凝胶颗粒浓缩血清及解离复合物等方法来提高敏感性。显示这种探针阳性率高、假阳性率低用于诊断具有较好的敏感性和特异性。该探针与DNA探针比较具有简便、快速、不需特殊仪器等优点,可望成为确诊病人和考核疗效的工具。     

日本血吸虫新基因的发现及其功能的初步预测

本文运用表达序列标签（expressed sequence tags,EST)法筛选日本血吸虫（中国大陆株）成虫cDNA文库,获得50个日本血吸虫EST片段,经过测序后将EST序列送入EMBL和NCBI,Genbank进行同源性分析并登录。为寻找新的抗血吸虫疫苗候选分子,化疗药物及具有我国自主知识产权的血吸虫功能基因奠定工作基础。     

日本血吸虫rSj26GST疫苗抑制小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的效果观察

目的:日本血吸虫rSj26GST疫苗抑制小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的效果观察。方法:将含有rSj26GST编码基因的菌株E.coliBL21/p ET28a涂布LB/Kana/IPTG/X-gal平板,培养、收集细菌、超声碎菌、分离、纯化,分别取5μL进行SDS-PAGE,观察纯化结果,采用BCA法测定重组蛋白的浓度。45只BALB/c小鼠随机分为2组:A组(感染对照组):于第0周每鼠经背部皮下多点注射50μL PBS及等体积福氏完全佐剂(CFA),第2、第4周每鼠皮下多点加强注射50μLPBS加等体积福氏不完全佐剂(IFA);B组(rSj26GST组),同A组,唯将PBS改为50μg(50μL)rSj26GST。上述两组分别于末次免疫2周后每鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(30±2)条。C组(正常对照组):未作任何处理。攻击感染45 d剖杀小鼠,测量肝脏单个虫卵肉芽肿的大小,采用ELISA测定血清透明质酸及层黏连蛋白含量。结果:rSj26GST疫苗组小鼠虫卵肉芽肿的直径为(191.6±26.3)μm,显著小于感染对照组的(267.7±28.6)μm(P0.05)。透明质酸和层黏连蛋白水平,rSj26GST疫苗组明显低于感染对照组(P0.05),两者均高于正常对照组。结论:rSj26GST疫苗具有一定的抗虫卵肉芽肿及降低免疫病理损伤作用。     

从基因水平对IL-5与IL-10在日本血吸虫感染小鼠中作用的探讨

本研究对日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外在SEA与ConA诱导下产生的IL-5和IL-102种细胞因子从mRNA转录水平进行研究,以探索这2种细胞因子mRNA转录水平的动态变化与肉芽肿形成与调节的可能性.日本血吸虫尾蚴感染雄性BALB/C小鼠后,分别于感染后3周、5周、8周、10周和12周取小鼠脾脏,制备脾细胞单细胞悬液并于含ConA或SEA的培养基中培养后提取脾细胞总RNA.RT-PCR及凝胶分析法被用来分析总RNA样品中IL-5及IL-10mRNA转录水平.研究结果显示,未感染和感染3周小鼠脾细胞均无IL-5和IL-10的表达,感染后第5周的小鼠脾细胞出现IL-5特异性条带,感染后第8周IL-5表达明显增强,感染后第10周IL-5mRNA转录水平下降,感染后第12周未能检测到IL-5表达,表明IL-5表达的动态变化与肉芽肿的形成、发展及调节相平行.IL-10mRNA转录也于感染后第5周出现,但感染后第8周、第10周、第12周与第5周相比,IL-10的表达水平并无明显改变,显示IL-10mRNA转录水平并未随着肉芽肿的调节而变化.本研究结果提示IL-5可能在肉芽肿形成和调节过程中可能起重要作用;而IL-10可能并未直接参与肉芽肿的调节,但其转录可能与防止宿主过度肉芽肿炎症反应有关.     

抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA).用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡,水稀释法制备IgY抗体,以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体(IgY-E)和兔抗IgG抗体(IgG-E)分别作为检测抗体,IgY抗体和兔抗...