曲古菌素A诱导淋巴瘤Raji细胞表达共刺激分子CD80及CD86的表达

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)诱导淋巴瘤细胞Raji细胞表达共刺激分子CD80和CD86及其与免疫应答的关系。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度TSA对Raji细胞的抑制作用,流式细胞仪检测150 nmol/L TSA作用Raji细胞后的细胞表达共刺激分子CD80和CD86及细胞活力,RT-PCR分析CD80 mRNA和CD86 mRNA表达情况。结果 TSA对Raji细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,150 nmol/L TSA作用后可上调Raji细胞表达CD80,并对Raji细胞有直接杀灭作用。结论 TSA可以诱导Raji细胞表达共刺激分子CD80,不表达CD86,促进细胞的免疫应答,为抗恶性血液病提供了一个新的免疫治疗方法。     

CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞体外增殖、分化作用的研究

目的探讨CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、分化的作用机制。方法以急性髓系白血病细胞株HL-60为研究对象,以ATRA为阳性对照,以同型抗体IgG2a为阴性对照,以HI44a作为实验组,应用台盼蓝拒染法检测HI44a对HL-60细胞增殖的影响,瑞氏染色法及流式细胞学检测HI44a对HL-60细胞分化的影响,RT-PCR方法检测HI44a处理HL-60细胞前后TGFβ1和TGFβR1基因表达变化,应用荧光定量RT-PCR法检测HI44a处理HL-60细胞前后髓系分化相关的细胞因子及受体信号通路(GM-CSFRα、OPN)基因表达变化,以及DNA序列分析法检测HI44a处理HL-60细胞前后OPN异构体表达改变。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测实验组与对照组培养上清液的OPN水平。结果经HI44a作用后,HL-60细胞增殖受抑;细胞形态变化表现为体积变大,核固缩,核浆比例降低,核仁减少,出现核分叶等特征;细胞表面分化抗原CD15表达上调;HL-60细胞的GM-CSFRα及TGFβ1 mRNA表达水平增高,而OPN mRNA表达水平降低,TGFβR1 mR-NA表达水平无变化;OPN序列分析结果表明HI44a作用后OPN的3种异构体的组成发生改变,HI44a处理后的OPN水平明显下降。结论 CD44抗体HI44a通过上调GM-CSFRα、TGFβ1及下调OPN mRNA表达水平,减少OPN的分泌,抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞分化。     

苦参碱类生物碱抗粒细胞和单核细胞性白血病的药理作用研究进展

苦参碱类生物碱对人红白血病K562细胞、TF-1细胞、急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞、NB4细胞、急性单核细胞白血病THP-1细胞、白血病KG1a干细胞、慢性粒细胞白血病细胞和辐射引起的骨髓造血畸变细胞等均有抑制增殖并诱导分化和凋亡的作用。其诱导分化和凋亡及抑制增殖的作用机制是多方面的,与下调原癌基因c-myc、β-链蛋白、生存素表达和端粒酶活性以及上调半胱天冬酶活性和白血病细胞表面分化抗原CD11b、CD15表达有关。苦参碱类生物碱上调白血病细胞表面自然杀伤细胞活化受体NKG2D的配体表达,能提高白血病细胞对自然杀伤细胞的敏感性。综述苦参碱类生物碱抗粒细胞和单核细胞性白血病的药理作用文献,并对其研究进展做了分析。     

熊果酸对HL-60细胞株凋亡及Bcl-2和bax表达的影响

目的探讨熊果酸(UA)抑制人急性髓性白血病细胞系(HL-60)细胞增殖和诱导凋亡作用,并观察Bcl-2和bax基因表达的影响。方法体外培养HL-60细胞。MTT比色法检测增殖活性;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期分布;Western Blot分析Bcl-2和bax基因表达。结果 UA显著抑制HL-60细胞增殖,呈浓度依赖性;UA呈浓度依赖性诱导HL-60细胞凋亡,明显阻滞于细胞周期G1期;UA以浓度依赖方式下调Bcl-2蛋白表达和上调bax蛋白表达。结论 UA抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡,其作用机制与下调Bcl-2上调bax蛋白表达相关。     

CD34阳性细胞内部结构观察

目的利用电子显微镜以及原子力显微镜观察比较健康人和初发急性髓细胞白血病患者来源的CD34阳性细胞内部结构。方法将健康人和初发急性髓细胞白血病(M2b)患者各1例骨髓中提纯出来的CD34阳性细胞制成树脂包埋块,利用超薄切片机切成厚度为60nm的薄片,分别进行透射电子显微镜和原子力显微镜观察。结果研究对象纯化前CD34阳性细胞平均比例为(1．63±0．25)％,纯化后的平均比例为(95±2．4)％。电子显微镜和原子力显微镜均可观察健康人和初发急性髓细胞白血病患者的CD34阳性细胞内部结构,不能发现两种来源细胞有特异性差别。当原子力显微镜成像范围在10μm×10μm时,可分辨出核仁和部分细胞质内线粒体等细胞器;当原子力显微镜成像范围在2μm×2μm时,细胞内部结构变模糊,被细小的树脂颗粒所掩盖,不能分辨细胞结构。结论电子显微镜和原子力显微镜均可观察细胞的内部结构,不能发现健康人和初发急性髓细胞白血病患者两组来源的CD34阳性细胞内部有特异性差别,原子力显微镜观测细胞内部结构效果并不优于电子显微镜。     

青藤碱对类风湿关节炎树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达的影响

目的观察中药单体青藤碱对体外培养类风湿关节炎(RA)树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达的影响。方法分离10例RA患者外周血单核细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组,采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4联合刺激,半定量逆转录聚合酶链反应检测CD80mRNA、CD86mRNA表达的改变。结果与空白对照组比较,经青藤碱高、中、低剂量干预的树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达减少(P<0.01或P<0.05),青藤碱3个剂量组之间比较表达存在差异(P<0.05)。结论青藤碱可能通过抑制树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA的表达,阻断对其T细胞的协同刺激而达到治疗RA的作用。     

ERK/MAPK信号转导途径在急性髓系白血病发病机制中的作用

目的:研究急性髓系白血病细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(M APK)的表达水平及其意义。方法:以急性髓系白血病细胞株HL-60细胞,31例初治急性髓系白血病(AM L)、14例AM L完全缓解(CR)和15例正常供髓者骨髓细胞为研究对象,应用流式细胞术检测磷酸化ERK 1/2信号分子的表达。结果:HL-60细胞,初治AM L、AM L-CR及正常骨髓细胞均表达磷酸化ERK 1/2,但表达水平不同。HL-60、初治AM L细胞与AM L-CR、正常细胞相比,磷酸化ERK 1/2表达水平均显著增高(P<0.05),高表达磷酸化ERK 1/2的初治AM L比例为80.6%(25/31)。结论:ERK/M APK信号途径的构成性激活在急性髓系白血病的发病中起重要作用。     

90例强直性脊柱炎活动期患者单核细胞中CD28、CD80、CD86表达的临床意义

目的探讨CD28、CD80、CD86在90例强直性脊柱炎患者外周血单核细胞中表达的临床意义。方法选择我院骨伤科2011年6月至2012年6月经相关检查确诊的强直性脊柱炎患者180例,其中活动期患者90例,稳定期患者90例,另选90例体健正常的人群做为对照组,提取外周血单核细胞,采用Taqman探针实时荧光定量PCR方法检测CD28、CD80、CD86的表达。结果强直性脊柱炎患者单核细胞CD28、CD80、CD86表达明显高于对照组,且活动期组患者高于稳定期组患者(P<0.01)。结论 CD28、CD80、CD86表达升高可增加强直性脊柱炎的发病率。     

8-硝基白杨素诱导HL-60细胞凋亡和抑制增殖与PTEN-Akt途径的相关性研究

目的 观察8-硝基白杨素(NOChR)抑制人急性髓性白血病细胞系(HL-60)细胞增殖和诱导凋亡的作用,并探讨其作用机制.方法 体外培养HL-60细胞;MTT比色法检测增殖活性;流式细胞术定量分析细胞凋亡程度;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.Western Blot分析HL-60细胞PTEN、P-Akt蛋白表达的影响.结果 NOChR可显著抑制HL-60细胞增殖,呈浓度依赖性,IC50为1.34 μmol;NOChR具有诱导HL-60细胞凋亡的作用,且呈浓度和时间依赖性.NOChR以浓度和时间依赖方式上调HL-60细胞PTEN蛋白的表达和抑制P-Akt蛋白的表达,其作用可被PPARγ特异性阻断剂GW9662(10μmol)预孵育拮抗.结论 NOChR诱导HL-60细胞凋亡作用与其活化PPARγ、上调PTEN蛋白表达、抑制Akt磷酸化相关.     

急性骨细胞白血病CD11b表达的临床意义

目的　研究急性髓细胞白血病（AML）CD11b表达的临床意义。方法　采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶复合物法（APAAP）,测定80例AML患者细胞膜表面CD11b的阳性表达。结果　CD11b     

曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(tri-chostatin A,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol.L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,Annex-inV/PI双染色体法检测凋亡显示,600 nmol.L-1TSA作用48h后,细胞凋亡率为42.6%。600 nmol.L-1曲古菌素A作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降为1.95±0.25、1.73±0.12和1.52±0.09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论曲古菌素A(trichosta-tin,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性下降,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。     

脐血CD3AK细胞和其培养上清诱导HL-60凋亡

目的:探讨脐血CD_3AK细胞和其培养上清(CM)诱导HL-60细胞凋亡的作用。方法:用细胞形态学观察,DNA琼脂糖电泳,原位末端标记法分别检测出HL-60自然凋亡与CD_3AK细胞诱导和CM诱导的HL-60细胞凋亡率。结果:HL-60细胞自然凋亡率为(4.60±2.17)%;CD_3AK细胞诱导HL-60细胞凋亡率为(21.35±4.46)%(t=6.80,P<0.01),CM诱导的HL-60细胞凋亡率为(33.08±5.12)%(t=8.26,P<0.01)。结论:脐血CD_3AK细胞和其培养上清能诱导HL-60凋亡。     

Modulation of costimulatory molecules CD80/CD86 on B cells and macrophages by stress proteins GroEL, GroES and DnaK

The aim of this study was to evaluate the effect of the Heat Shock Proteins GroES, GroEL and DnaK on the expression of the costimulatory molecules CD80/CD86 in B cells and macrophages. The interactions among these molecules are able to highly influence the immune response through the regulation of cytokine liberation which, on their own, are able to regulate the immunological response by a feedback mechanism. Our results showed that, on B cells, GroES and GroEL stimulated the expression of CD86 but did not induce the increase of the CD80 expression. CD86 peak expression showed a peak after 24-48 h of culture and decreased 60h after the stimulation. GroES and GroEL also stimulated the expression of CD80 and CD86 on macrophages. The same HSPs did not modify the expression of CD80 and CD86 on cells having characteristics of activated macrophages, the A-THP-1 cell line. DnaK did not induce any increase in the expression of CD80 and CD86 on lymphocytes or macrophages.     

卵巢癌细胞系SKOV3培养上清对巨噬细胞共刺激分子的影响

目的 研究卵巢癌细胞系SKOV3培养上清处理巨噬细胞后,巨噬细胞亚型的改变,以及CD80、CD86、CD40在不同巨噬细胞亚型上表达的差异.方法 Ficoll 密度梯度法分离健康成人外周血单个核细胞,GM-CSF诱导为巨噬细胞(M0)后,用对数生长期的SKOV3细胞培养上清处理14 d后,采用流式细胞术检测巨噬细胞亚型的改变及不同亚型细胞CD80、CD86和CD40的表达情况.结果 流式细胞术检测显示,用SKOV3细胞培养上清培养巨噬细胞14 d后,巨噬细胞主要向CD163-M2型巨噬细胞分化[M1/M2=(12.37±1.76)%/(22.23±2.21)%].CD163-M2型巨噬细胞CD40的表达较CD64-M1型显著降低,2组比较差异均有统计学意义(P<0.05);而CD80、CD86的表达无明显改变,2组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 SKOV3细胞培养上清刺激后的巨噬细胞向不同巨噬细胞亚型分化;M2型巨噬细胞较M1型巨噬细胞共刺激分子表达下调,提示这些共刺激分子在巨噬细胞的活化及免疫应答过程中很重要,可能与肿瘤细胞的免疫逃逸有关.     

Quercetin and trichostatin A cooperatively kill human leukemia cells

Quercetin (QU) and trichostatin A (TSA) are promising anticancer drugs. While QU mainly exerts its anticancer activity through scavenging reactive oxygen species (ROS), the anticancer activity of TSA was attributed to its inhibition on histone deacetylases (HDAC). In the present study it was investigated, whether the combination of QU and TSA could improve their anticancer activity against human leukemia cells (HL-60). The cytotoxicity of QU and TSA increased in a time and dose-dependent manner. QU (10, 20 and 40 microM) was able to diminish the ROS generation (indicated by the level of malondialdehyde, MDA) but showed no influence on the histone acetylation in HL-60 cells; on the contrary, TSA (20, 40, 80 and 160 nM) showed no inhibition on ROS generation but significantly increased the histone acetylation, indicating the possible role of both scavenging ROS and increasing histone acetylation in the induction of cell death in HL-60 cells. This conclusion was confirmed by the findings that the combinations of QU and TSA at different concentrations could not only diminish ROS generation, but also increase histone acetylation, and hence showed more significant cytotoxicity in HL-60 cells than either of its components. Collectively, the present data indicate that a combination of QU and TSA can cooperatively kill HL-60 cells through the combination of their activities of scavenging ROS and increasing histone acetylation.