褪黑素对谷氨酸所致大鼠神经细胞Ca~(2+)内流的影响

目的 :研究褪黑素对谷氨酸引起的神经细胞Ca2 +内流的抑制作用。方法 :用Ca2 +敏感荧光指示剂Fura -2/AM负载大鼠脑细胞 ,测定神经细胞内游离Ca2 +浓度。结果 :谷氨酸500μmol/L可促进Ca2 +内流 ,显著增加细胞内游离Ca2 +浓度 (P<0. 01) ;应用褪黑素10 -5mol/L后可显著抑制Ca2 +内流 ,降低细胞内游离Ca2 +浓度 (P<0. 01)。结论 :褪黑素可通过抑制谷氨酸引起的Ca2 +内流保护神经细胞。     

肥胖 2型糖尿病模型 OLETF大鼠不同病程阶段肝脏水通道蛋白 9 mRNA的表达

目的 观察肥胖2型糖尿病模型OLETF大鼠在不同糖尿病病程阶段肝脏组织水通道蛋白9(AQP 9)mRNA表达的变化,探讨AQP 9在肥胖及糖尿病发病中的作用.方法 取OLETF大鼠30只为实验组,同种系的非糖尿病LETO大鼠18只为正常对照组.8周(基线)时两组大鼠分别处死6只.然后将OLETF大鼠分为未治疗组(OLETF组)12只及盐酸二甲双胍治疗组(OLETF/M组)12只.分别观察每组大鼠在8周、18周、28周时的体质量、血清三酰甘油、胆固醇,行葡萄糖耐量试验测定血糖与胰岛素水平,用Real-time PCR测定肝脏组织AQP9 mRNA的表达.结果 OLETF组在18周均患糖尿病,28周的血糖水平与18周大致相当,随周龄增加其体质量、血糖、胰岛素、血清三酰甘油、胆固醇均明显增高.肝脏组织AQP 9 mRNA表达在8周、18周及28周龄分别是同周龄LETO组的0.9倍,1.0倍及0.7倍.OLETF/M组在18周均患糖尿病,但血糖水平低于OLETF组;28周血糖均恢复为糖耐量异常.OLETF/M组的体质量、胰岛素水平与OLETF组差异无统计学意义,三酰甘油、胆固醇水平较OLETF组低.肝脏组织AQP 9 mRNA表达在8周、18周及28周龄分别是同周龄LETO组的0.9倍,0.6倍及0.5倍.结论 OLETF大鼠随周龄增加,肥胖、高脂血症、胰岛素抵抗加重,血糖增高.OLETF组和OLETF/M组的肝脏组织的AQP 9 mRNA表达均呈先上调后下调的趋势,提示脂肪分解先增强后减弱.OLETF/M组肝脏组织AQP 9的mRNA表达水平均较同周龄OLETF组低.盐酸二甲双胍可以改善OLETF/M组大鼠的糖脂代谢紊乱并抑制肝脏AQP 9 mRNA的表达.肝脏AQP 9在肥胖和糖尿病的病程中起一定的作用.     

人参皂苷Rg_2对培养心肌细胞内游离Ca~(2+)含量的影响

众所周知 ,Ca2 + 在心肌的舒缩过程中具有调控作用 ,文献[1] 曾研究了人参皂苷Rg2 对休克动物心功能的改善作用 ,该作用是否与Ca2 + 有关 ,故观察了Rg2 对体外培养心肌细胞内游离Ca2 + 含量的影响。1　材料与方法　　药物 :人参皂苷Rg2 (Rg2 )由吉林省中医中药研究院制备 ,纯度为 98 5 % ,Fura 2 /AM和DME/F12培养基购自Sigma公司。动物 :新生 4d的Wistar大鼠乳鼠 ,由中山医科大学实验动物中心提供。心肌细胞培养参照文献[2 ] 进行 ,取乳鼠心肌 ,用胰蛋白酶反复消化 ,制成单细胞悬液。用DME/F12培养液调细胞浓度 ,接种培养皿 ,形成…     

谷氨酸触发大鼠大脑皮质神经元Ca~(2+)内流与PTK的关系

目的　研究谷氨酸 (glutamate,Glu)触发大鼠大脑皮质神经元Ca2 + 内流特性 ,蛋白酪氨酸激酶 (PTK)抑制剂genistein及蛋白酪氨酸磷酸酶 (PTP)抑制剂vanadate对其影响 ,揭示PTK与Glu触发大鼠大脑皮质神经元Ca2 + 内流的内在联系。方法　采用Fura 2 /AM荧光测定胞浆Ca2 + 变化技术 ,在原代培养的大鼠大脑皮质神经元上观察药物对Glu触发Ca2 + 内流的影响。结果　Glu触发的Ca2 + 内流不受电压依赖性钙通道 (VDCC)阻断剂尼莫地平影响 ,亦不受非VDCC阻断剂SK&F96 36 5影响 ,但可被PTK抑制剂genis tein抑制 ,被PTP抑制剂vanadate增强。genistein(1～ 30μmol·L-1)呈浓度依赖性抑制Glu触发的Ca2 + 内流。vana date则浓度依赖性增强Glu触发的Ca2 + 内流。结论　对尼莫地平敏感的VDCC及对SK&F96 36 5敏感的非VDCC没有参与Glu触发的Ca2 + 内流。PTK激活参与了Glu触发的Ca2 + 内流     

慢性染铅对小鼠海马Ca~(2+)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的通过检测海马Ca2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)基因表达来探讨慢性铅中毒影响学习记忆的分子机制。方法小鼠交配后,通过饮水饲以2.4,4.8和9.6mmol·L-1醋酸铅。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。6周后用逆转录聚合酶链反应法观察各组小鼠海马CaMKⅡmRNA的表达。结果3个染铅组小鼠CaMKⅡmRNA水平均明显降低,并具有浓度效应关系。结论铅致CaMKⅡ基因表达水平下降。     

Ca~(2+)运动对α_1-肾上腺素受体引起内源性ClC-3氯通道表达的作用

目的　研究Ca2 +运动对α1 肾上腺素受体引起ClC 3氯通道表达的作用。方法　在A10细胞上 ,用RT PCR和Westernblot检测ClC 3mRNA和蛋白质表达情况。结果　苯肾上腺素 ( 10 μmol·L-1)和thapsigargin( 0 1μmol·L-1)可促进ClC 3mRNA和蛋白质的表达 ;SK&F963 65 ( 10 μmol·L-1)和genistein( 10 μmol·L-1)可抑制苯肾上腺素引起的ClC 3的表达 ,nifedipine( 10 μmol·L-1)无此作用。结论　在A10细胞上 ,通过钙池操纵性Ca2 +通道 (SOCC)的Ca2 +内流参与了α1 肾上腺素受体引起的内源性ClC 3氯通道的表达 ,而通过电压依赖性Ca2 +通道 (VDCC)的Ca2 +内流可能与此无关。蛋白酪氨酸激酶参与了ClC 3氯通道的表达     

妊娠期糖尿病大鼠胎膜中水通道蛋白4 mRNA的表达

目的研究水通道蛋白4(AQP4) mRNA在妊娠期糖尿病大鼠胎膜中的表达,探求AQP4在妊娠期糖尿病大鼠胎膜中的表达情况及影响胎膜通透性变化的可能机制。方法分别选取妊娠期糖尿病(实验组)及正常妊娠大鼠(对照组)各30只,在妊娠19d时于无菌条件下留取约1.0cm×1.0cm胎膜2块,采用RT-PCR反应检测胎膜中AQP4 mRNA的表达。结果 2组均有AQP4 mRNA表达。AQP4在2组中表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 AQP4 mRNA在大鼠孕足月胎膜中有表达,胎膜中AQP的分子结构、表达的强弱及在细胞中的分布位置共同参与水平衡的调控。     

妊娠期糖尿病大鼠胎膜中水通道蛋白8mRNA的表达

目的探讨在影响妊娠期糖尿病大鼠胎膜通透性方面的可能机制。方法选取造模成功的妊娠期糖尿病大鼠(模型组)和正常妊娠大鼠(对照组)各30只,在妊娠19d时于无菌条件下留取大小1.0cm×1.0cm胎膜2块,采用RT-PCR反应检测胎膜中AQP8mRNA的表达。结果 2组大鼠胎膜上均有AQP8mRNA的表达,且AQP8mRNA在模型组大鼠胎膜上的表达明显低于对照组(P<0.05)。结论水通道蛋白8mRNA在孕足月大鼠胎膜有表达,其在妊娠期糖尿病大鼠胎膜中的表达降低可能参与了羊水量异常的调控。     

溺死大鼠肺组织水通道蛋白5mRNA的表达

目的观察溺死大鼠肺组织中水通道蛋白5 mRNA(AQP-5 mRNA)的变化。方法建立大鼠溺死模型,提取实验组及对照组肺组织的总RNA,反转录合成cDNA第一条链,以cDNA作为模板,通过特异性上下游引物实时荧光定量聚合酶链反应(Real Time PCR)检测cDNA的拷贝数,选取管家基因核糖体蛋白L32为参比基因,对扩增结果进行相对定量分析。结果溺死大鼠肺组织中AQP-5 mRNA表达量较对照组显著下降且差异具有统计学意义。结论AQP-5基因在大鼠淡水溺死时表达下调有阳性意义,实时荧光定量检测溺死肺组织中AQP-5 mRNA敏感而准确,可望用于法医学鉴定生前溺死和死后抛尸入水。     

蛋白酪氨酸激酶抑制剂对脑血管平滑肌细胞Ca~(2+)池操纵性Ca~(2+)内流的影响

目的　研究蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂对牛脑血管平滑肌细胞 (CSMC)Ca2 + 池操纵性Ca2 + 内流的影响。方法　采用培养的CSMC ,在生物荧光双波长影像分析系统用Fura 2 /Am荧光探针测定单个细胞内游离Ca2 + 浓度。结果　 (1)蛋白酪氨酸激酶抑制剂 (genistein ,2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低内皮素 1(ET 1,10 -7mol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为5 6%± 2 .9%、2 5 6%± 3 9%、48 9%± 3 7% ;蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂 (vanadate ,2 ,4,8μmol·L-1)能浓度依赖性升高CPA刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,增加比率分别为8 2 %± 3 9%、18 8%± 4 9%、46 6%± 6 9% ;(2 ) genistein(2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低ATP(10 μmol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为 6 7%±2 6%、2 4 6%± 6 5 %、5 1 3 %± 6 9% ;vanadate (2 ,4,8μmol·L-1)能浓度依赖性升高ATP刺激引起的CSMCCa2 +内流 ,增加比率分别为 4 8%± 2 0 %、2 8 5 %± 4 6%、49 6%± 3 3 % ;(3 ) genistein (2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低环匹阿尼酸 (Cyclopiazonicacid ,CPA ,10 μmol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为 6 5 %± 3 0 %、2 2 5 %± 5 2 %、     

桑精胶囊对2型糖尿病大鼠靶组织IRS-1表达及丝氨酸磷酸化水平的影响

目的:观察桑精胶囊对2型糖尿病大鼠脂肪和骨骼肌组织胰岛素受体底物1(insulin receptor substrat1,IRS-1)蛋白表达及其丝氨酸磷酸化水平的影响,探讨其治疗2型糖尿病的分子机制。方法:采用尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(strepto-zotocin,STZ)加高脂高热卡饲料喂养的方法建立2型糖尿病(type2diabetes mellitus,T2DM)大鼠模型,将造模动物随机分为模型组、二甲双胍组和桑精胶囊组,另设正常对照组。药物干预8周后,用免疫沉淀和Western印迹方法检测脂肪和骨骼肌组织胰岛素刺激前和胰岛素刺激后IRS-1表达水平和丝氨酸磷酸化水平。结果:与模型组比较,桑精胶囊组胰岛素刺激前和胰岛素刺激后脂肪和骨骼肌组织中IRS-1蛋白表达均增高,IRS-1丝氨酸磷酸化水平均显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:桑精胶囊对2型糖尿病的治疗效应可能与提高脂肪和骨骼肌组织中IRS-1蛋白表达并抑制其丝氨酸磷酸化水平有关。     

过氧化氢对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的:研究过氧化氢(H2O2)对单个大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(Ica,L)的影响。方法:用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞;用标准的全细胞膜片钳技术记录钙通道电流,观察5mmol·L-1H2O2引起单个大鼠心室肌细胞Ica,L改变。结果:在5mmol·L-1H2O2作用下,大鼠心室肌细胞Ica,L峰值电流密度从4.89±0.52pA/pF增加至9.80±0.65pA/pF(P<0.05,n=10),电流-电压曲线下移,但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变;H2O2对Ica,L激活时间常数-电压曲线无明显影响,但可使其灭活时间常数-电压曲线明显向上移;H2O2对Ica,L稳态激活曲线无明显改变,但可使其稳态失活曲线明显左移,V0.5从(-26.85±5.3)mV左移至(-37.20±4.5)mV(P<0.05,n=5)。结论:H2O2可以增加大鼠心肌细胞Ica,L,且使其失活明显减慢。     

雷米普利对舒张眭心力衰竭大鼠心房肌L型钙通道的影响．

目的观察雷米普利对舒张性心力衰竭（DHF）大鼠模型心房肌细胞L型钙通道的影响。方法腹主动脉缩窄术建立DHF大鼠模型,随机分为DHF组及雷米普利大、中、小剂量组,另设对照组。全细胞膜片钳检测心房肌细胞L型钙通道电流（ICa—L）;RT—PCR检测L型钙通道上Cav1.2mRNA的表达;Western blot检测钙调控相关蛋白LTCC的表达。结果与对照组比较,DHF组大鼠心房肌细胞ICa—L电流密度峰值、Cav1.2mRNA表达及钙调蛋白LTCC的表达明显降低（P〈0．05）;与DHF组比较,雷米普利组心房肌细胞ICa—L电流密度峰值明显增加、Cav1-2mRNA及钙调控蛋白LTCC的表达增加（P〈0．05）,且剂量越大增加越明显。结论雷米普利能上调舒张性心力衰竭大鼠心房肌ICa—L电流密度峰值,增加Cav1.2mRNA及钙调控蛋白LTCC的表达,对DHF大鼠有治疗作用．其机制与调控心房肌细胞L型钙通道的功能有关。     

火把花根片对哮喘大鼠气管平滑肌细胞L型钙通道的作用

目的　探讨火把花根片对哮喘大鼠气管平滑肌细胞L型钙通道 [L typecalcium (L LCa)channel]的作用。方法　将♂Wistar大鼠分为正常对照组、哮喘组、火把花根片(Huobahuagentablet,HBT)治疗组及地塞米松 (dexametha sone,DXM )治疗组共 4组 ,分别给予相应的处理 ,观测大鼠支气管平滑肌细胞L LCa在正常时 ,哮喘发作时 ,以及给予HBT及DXM治疗后的变化。结果　火把花根片治疗后的哮喘大鼠的L LCa与哮喘组以及正常对照组大鼠通道开放概率相比差异均有显著性 (P <0 0 5 )。哮喘组通道L LCa开放时间常数 (τO1和τO2 )延长 ,关闭时间常数 (τc1和τc2 )缩短 ,与正常对照组相比差异有显著性 (P <0 0 5 )。火把花根片与地塞米松治疗后的哮喘大鼠的L LCa与哮喘组相比通道开放时间常数缩短 ,关闭时间常数延长。结论　哮喘大鼠L LCa的活动明显增强。经火把花根片治疗后L LCa活动有所减弱 ,表现为通道开放时间常数缩短 ,关闭时间常数延长。提示火把花根片与地塞米松均可明显抑制哮喘大鼠的L LCa的活动 ;HBT与DXM均可逆转哮喘大鼠L LCa动力学的改变。     

大明胶囊对大鼠心肌梗死预防性保护作用的研究

目的观察大明胶囊对大鼠心肌梗死的预防性保护作用。方法对大鼠预防性给予大明胶囊1wk后,结扎其左冠脉前降支造成心肌梗死。通过测量心肌梗死面积,观察心肌酶学指标、病理形态学和组织超微结构的改变,评价大明胶囊对心肌梗死的预防性保护作用。结果心梗染色面积和心肌酶学指标显示(与模型组相比),大明胶囊灌胃后心肌梗死面积减少(P<0.05),乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的含量降低(P<0.05)。心肌形态学和超微结构显示,大明胶囊减轻了左冠脉前降支结扎所造成的心肌损伤。结论通过心梗面积、心肌酶学指标、形态学和超微结构的观察,大明胶囊能预防性保护心肌梗死所造成的损伤。这提示大明胶囊可能应用于心肌梗死治疗。     

氟哌啶醇致新西兰兔QT间期延长及其对L型钙通道mRNA表达水平的影响

目的观察不同剂量氟哌啶醇对新西兰兔心电图QT间期的影响及其对L型钙通道mRNA表达水平的影响。方法采用体表心电图技术,通过BL-410生物机能实验系统动态记录Ⅱ导联心电图的变化,观察不同剂量氟哌啶醇对新西兰兔心电图的影响。提取心肌组织总RNA,采用RT-PCR方法,观察氟哌啶醇对L型钙通道mRNA表达水平的影响。结果氟哌啶醇能引起的QT间期延长,剂量越大延长越明显。氟哌啶醇对QT间期的影响主要发生在给药后0～120min,360min后基本恢复正常。RT-PCR结果显示氟哌啶醇使L型钙通道mRNA表达水平明显增高。结论氟哌啶醇可使QT间期延长,其机制可能与增强L型钙通道mRNA表达有关,从而增加发生室性心律失常的潜在危险性。     

维格列汀伍用丹参舒心胶囊对早期2型糖尿病患者肺功能的影响

目的 观察维格列汀联合丹参舒心胶囊对早期二甲双胍单药治疗不佳的2型糖尿病(T2DM)患者肺功能的影响,并对其有效性及安全性进行评价.方法 选择早期(无微血管病变)经二甲双胍单药治疗且效果不佳的T2DM患者74例,随机分为观察组(n=38)和对照组(n=36),选择同期体检健康40例为健康组.对照组予二甲双胍(1000 mg、2次/d)、银杏叶提取物片(40 mg、3次/d)、甲钴胺(0.5 mg、2次/d)等口服治疗,观察组予二甲双胍500 mg、3次/d)、维格列汀(50 mg、2次/d)、银杏叶提取物片(40 mg、3次/d)+丹参舒心胶囊(0.4 g、2次/d)、甲钴胺(0.5 mg、2次/d)口服治疗.治疗前记录3组血糖及肺功能等基本资料.T2DM患者连续治疗24周后观察2组治疗后空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 hPG)、体重指数(BMI)与肺功能[肺活量(VC%)、用力肺活量(FVC%)、1 s用力呼气流量(FEV1%)、最大呼气峰流速(PEF%)、最大自主通气量(MVV%)、肺总量(TCL%)、一秒率(FEV1/FVC%)、肺一氧化碳弥散量(DLCO%)、肺单位体积一氧化碳弥散量(DLCO/VA%)]的变化情况,记录治疗过程中的不良反应.结果 治疗前T2DM患者的FBG、2 hPG、BMI均高于健康组(P<0.05),肺功能各项指标均低于健康组(P<0.05).治疗后T2DM两组FBG、2 hPG均低于治疗前(P<0.05),但2组FBG、2 hPG及BMI治疗前后比较差异均无统计学意义(P>0.05).治疗后2组肺功能均优于治疗前(P<0.05),治疗后观察组肺功能优于对照组(P<0.05).结论 T2DM患者早期即出现肺功能下降,维格列汀联合丹参舒心胶囊在控制血糖的同时能较好改善患者的肺功能,且安全可靠,不增加体重.     

PTP-1B及其抑制剂与2型糖尿病的研究现状

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B (PTP-1B)是蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族中的一员,在胰岛素信号转导途径中发挥重要作用.经研究发现,PTP-1B与2型糖尿病的发生、发展有密切关系. 本文按PTP-1B 小分子抑制剂的结构类别对近年来文献报道的代表性小分子PTP-1B 抑制剂进行综述.表明深入研究PTP-1B及其有效的抑制剂对于2型糖尿病治疗具有良好的发展前景.     

胰岛素泵治疗对2型糖尿病患者同型半胱氨酸、C反应蛋白的影响

目的：探讨胰岛素泵治疗对2型糖尿病患者同型半胱氨酸（HCY）、C反应蛋白（CRP）的影响。方法选择确诊为2型糖尿病的患者52例为糖尿病组,同期在本院健康体检者30例为对照组。检测两组受试者的HCY、CRP水平。持续皮下胰岛素输注治疗6 d后再次检测血清HCY、CRP水平,进行比较分析。结果糖尿病组HCY及CRP水平明显高于对照组（P〈0.05）,胰岛素泵治疗后血清HCY、CRP水平低于治疗前（P〈0.05）,血清HCY与CRP呈显著正相关（r=0.649,P〈0.05）。结论 HCY和CRP是糖尿病血管并发症的危险因素,持续皮下胰岛素输注治疗可改善HCY和CRP水平。