慢性HBV感染患者血清IL-35含量和外周血Treg细胞的变化及意义

目的研究血清IL-35和外周血Treg细胞含量在慢性乙型肝炎（HBV）患者中的作用及意义。方法选取广东医学院附属厚街医院感染科慢性HBV感染患者40例[（其中慢性乙肝无症状携带者（AsC）8例,慢性乙肝轻、中度患者（CHB-LM）20例和慢性乙肝重型患者（CSHB）12例]作为实验组。同时选取本院体检科健康志愿者（HV）15例作为对照组。采用ELISA方法检测血清IL-35含量,流式细胞术检测外周血Treg细胞含量,Pearson相关分析两者的相关性。结果 HBV患者血清IL-35含量[（75.00±6.75）pg/ml]显著高于健康志愿者血清IL-35含量[（44.13±4.49）pg/ml],两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。CSHB组和CHB-LM组血清IL-35含量均明显高于AsC组（P〈0.05）;CSHB组和CHB-LM组间血清IL-35含量差异无统计学意义（P〉0.05）。HBV患者外周血Treg细胞含量[（6.45±0.42）%]显著高于健康志愿者外周血Treg细胞含量[（3.07±0.31）%],两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。CSHB组Treg细胞含量明显高于CHB-LM组和AsC组Treg细胞含量（P均〈0.05）。CHB-LM组Treg细胞含量明显高于AsC组Treg细胞含量（P〈0.05）。HBV患者血清IL-35含量与外周血Treg细胞含量呈正相关（P〈0.05）。结论血清IL-35和外周血Treg细胞含量在慢性乙型病毒性肝炎不同疾病阶段存在差异,可能在HBV发生、发展过程中发挥重要作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血髓系抑制性细胞的表型特征及其临床关联性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血髓系抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）在疾病进展中的临床意义。方法选取在广州市第八人民医院接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者16例及19例健康对照者,用流式细胞术检测外周血单核细胞（PBMC）中MDSCs的比例,并动态检测该比例在核苷（酸）类似物（NAs）抗病毒治疗12周、24周后的变化特征,用Spearman相关法分析MDSCs比例与血清HBV DNA载量、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆红素（TBIL）等指标之间的相关性。统计分析采用均数t检验,MDSCs水平采用单因素方差分析检验,P〈0.05为差异有统计学意义。结果慢性乙型肝炎患者外周血MDSCs表型为HLADR-/lowCD11b＋CD33＋的细胞群其主要为CD14＋的单核细胞型。其比例为（1.4±0.27）%,明显高于健康对照组（0.53±0.06）%,（P〈0.01）;抗病毒治疗12周后其比例为（1.33±0.26）%、24周后其比例为（1.82±0.48）%。MDSCs的比例与治疗前比较差异无统计学意义（P=0.778,P=0.452）。横断面比较分析结果显示MDSCs水平与HBV DNA无相关性（r=-0.14,P=0.60）,但与ALT（r=0.621,P=0.01）、AST（r=0.612,P=0.012）、TBIL（r=0.717,P=0.003）呈显著正相关。结论慢性乙型肝炎患者外周血MDSCs比例在一定程度上反映慢性乙型肝炎病情。     

慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞的表达及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血Th17细胞频率、血清IL-17水平及其与临床指标的相关性。方法采集29例CHB患者(CHB组)及17例健康体检者(对照组)外周血,采用流式细胞仪分析外周血Th17细胞频率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清IL-17水平及HBV标志物;荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清HBV DNA载量,同时进行肝功能检测。结果 CHB组患者外周血Th17细胞频率、血清IL-17水平高于对照组(P<0.05);CHB组患者外周血Th17细胞频率与其血清ALT水平正相关(r=0.582,P<0.01),而与血清HBV DNA载量无明显相关(r=-0.213,P>0.05)。结论 Th17细胞可能参与了CHB的发生、发展。     

两种检测方法分析慢性乙型肝炎患者血清白细胞介素-21水平的差异

目的比较两种常规免疫学检测方法检测慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者血清白细胞介素-21（IL-21）表达水平的差异。方法选择24例CHB患者（HBV DNA≥5 lg拷贝/ml、ALT≥40 U/L）以及12例健康献血者（HBsAg阴性、ALT〈40 U/L）,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）和细胞计数微球芯片技术（CBA）检测血清IL-21的水平,其中20份血清同时进行了两种方法检测。结果 ELISA法检测发现,CHB患者血清IL-21平均浓度为（96.4±9.2）ng/L,12例健康对照者为（27.9±7.5）ng/L,两组间差异有统计学意义（P=0.000 5）,HBeAg阳性[（88.9±9.3）ng/L,n=12]和HBeAg阴性[（103.9±16.0）ng/L,n=12]CHB患者血清IL-21浓度差异无统计学意义（P=0.665 0）,但均显著高于健康人群[（27.9±7.5）ng/L,n=12]（P=0.005 1,P=0.001 7）。ELISA法检测结果显著高于CBA法[（96.0±10.2）ng/Lvs（68.2±6.1）ng/L,P=0.013 0]。结论选择不同的方法检测血清IL-21浓度存在一定的差异;CHB患者血清高水平表达IL-21可能与慢性乙型肝炎的发病机制有关。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞细胞因子检测意义

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液中细胞因子的临床意义。方法采用免疫酶联免疫吸附技术双抗体夹心法检测30例慢性乙型肝炎患者和15例健康对照外周血单个核细胞IL-4、IL-10和IFN-γ的水平。结果CHB组PBMC培养上清分泌IL-4水平显著高于健康对照组（P〈0．05）,而IFN-γ水平则显著低于健康对照组（P〈0．01）;HBVDNA水平与IL-4水平呈正相关,与IFN-γ水平呈负相关。结论CHB存在异常细胞免疫应答,Th1／Th2水平失衡可能与HBV持续感染有关。     

替比夫定治疗乙型肝炎e抗原阳性慢性乙型肝炎48周疗效观察和安全性评价

目的观察比较替比夫定与阿德福韦酯治疗乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性慢性乙型肝炎（CHB）48周的疗效和安全性。方法将100例HBeAg阳性CHB患者按随机分组方法纳入治疗组（49例）和对照组（51例）。治疗组每天口服替比夫定600 mg,对照组每天口服阿德福韦酯10 mg,疗程均为48周。治疗前和治疗第12、24和48周分别检测血清乙型肝炎病毒DNA（HBV DNA）定量、血清乙型肝炎病毒（HBV）标志物和血清丙氨酸转氨酶（ALT）水平。比较两组48周时HBV DNA水平、HBV DNA转阴率、HBeAg血清转换率、ALT复常率和不良事件发生率。结果治疗48周时,治疗组的HBV DNA水平显著低于对照组[（2.94±0.58）vs（3.52±0.97）]（P〈0.01）,HBV DNA转阴率优于对照组（65.3%vs 41.2%）（P〈0.01）,HBeAg血清转换率无明显差异（18.4%vs 11.8%）（P〉0.05）,ALT复常率无明显差异（73.5%vs 68.6%）（P〉0.05）,不良事件发生率无明显差异（53.1%vs 52.9%）（P〉0.05）。结论对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者治疗48周,替比夫定对HBV的抑制效果优于阿德福韦酯,而血清HBeAg转换率、ALT复常率和不良反应发生率差异无统计学意义。     

表面抗原调节慢性乙肝患者树突状细胞免疫功能的研究

目的研究表面抗原（HBsAg）对慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血树突状细胞（DC）免疫功能的调节作用。方法采用体外细胞培养的方法培养30例CHB患者外周血DC,分为HBsAg组和无HBsAg组,培养7d后用流式细胞术检测各组DC的CD83及CD86的表达,MTT法检测DC对混合淋巴细胞的刺激作用,ELISA方法检测培养上清中IL-12及IL-6的含量。结果 HBsAg组CD83、CD86的表达量分别为（19±4）%和（49±9）%,无HBsAg组则分别为（12±4）%和（18±6）%（P均〈0.01）。HBsAg组和无HBsAg组的DC对混合淋巴细胞的刺激指数分别为（20±10）%和（7±4）%（P〈0.01）。HBsAg组的DC培养上清中IL-12、IL-6的含量分别为（111±68）ng/ml和（646±426）ng/ml,无HBsAg组分别为（38±12）ng/ml和（1843±235）ng/ml,差异均有统计学意义（P均〈0.01）。结论 HBsAg可增强CHB患者外周血DC提呈抗原、激活T淋巴细胞的功能,对DC分泌细胞因子的功能有调节作用。     

慢性HBV感染者外周血T细胞亚群研究

目的分析健康人及慢性HBV感染者T细胞亚群特点,探讨宿主细胞免疫功能与慢性HBV感染临床转归的关系。方法使用流式细胞仪检测30名健康人及137例各型HBV感染者外周血T细胞亚群。结果1．对照组与各型HBV感染者的外周血T细胞亚群比较：从慢性HBV携带（CHBVC）组、慢性乙型肝炎（CHB）组到肝炎后肝硬化（PHBC）组,患者外周血CD3^＋T、CD4^＋T和CD8^＋T绝对值呈逐渐下降趋势,显著低于对照组（P〈0．05）。PHBC组CD4^＋T/CD8^＋T比值显著高于对照组和CHBVC组（尸〈0．05）。2．不同程度CHB组间外周血T细胞亚群比较：从CHB（轻度）组、CHB（重度）组到慢性重型乙型肝炎（CSUB）组,患者CD3^＋F、CD4^＋T、CD8^＋T绝对值和CD4^＋T／CD8^＋T比值逐渐下降。CSHB组CD3^＋T、CD4^＋T和CD8^＋T绝对值显著低于CHB（轻度）组（P〈0．05）。结论HBV慢性感染机制复杂,不同的临床转归患者T细胞亚群状态不同。慢性HBV感染后,肝脏损害程度严重的患者T细胞亚群功能低下及紊乱程度明显。     

HBV持续感染患者调节性T细胞检测及其意义

目的研究调节性T细胞（Treg）在慢性乙型肝炎（CHB）发病机制中的作用,为寻找治疗CHB的新方法奠定基础。方法用流式细胞仪检测了75例CHB患者和30例慢性乙型肝炎病毒（HBV）携带者外周血中Treg含量,CHB患者中HBeAg阳性患者39例,HBeAg阴性患者36例,慢性HBV携带者中HBeAg阴性和HBeAg阳性患者各15例。并对其中23例CHB患者服用核苷（酸）类似物前后外周血Treg含量进行检测。结果 CHB患者外周血Treg含量明显高于慢性HBV携带者（P〈0.05）,而CHB和慢性HBV携带者中HBeAg阴性和HBeAg阳性患者外周血Treg含量均无明显差异（P〉0.05）。经核苷（酸）类似物治疗12周后,CHB患者外周血Treg含量较治疗前有所降低（P〈0.05）。结论 Treg在HBV致病机制中起一定的作用,体外调控Treg含量和功能可能为治疗HBV感染提供一个新的途径。     

慢性肝病患者HBV复制与IL-18水平变化的意义

目的为探讨慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者HBV复制对血清中细胞因子IL-18水平变化的影响及其临床意义。方法HBV复制应用聚合酶链；IL-18水平应用ELISA等方法对慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者外周血中的HBV—DNA、IL-18水平进行了平行测定，比较HBV复制与慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者IL-18水平的相关关系。结果慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者组的IL-18含量与正常健康对照组比较均明显升高（P〈0．05）。慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者HBV—DNA高复制组（HBV—DNA含量〉10）IL-18含量明显高于HBV—DNA阴性组（P〈0．05）；慢性乙型肝炎与肝炎肝硬化患者组之间IL-18含量比较无显著性差异（P〉0．05）。结论细胞因子IL-18活性在慢性乙型肝炎与肝炎肝硬化发生发展中具有一定作用；慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者HBV复制与血清中细胞因子IL-18水平变化具有一定的相关关系。因此，在临床上慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者检测外周血中HBV—DNA、IL-18水平对判断患者病情的发展变化、预后及指导治疗具有一定意义。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞数量与肝脏疾病慢性化进展关系的研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者（chornichepatitis B,CHB）外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞（regulatory Tcells,Treg）的数量与肝脏慢性疾病进展的关系。方法流式细胞术检测抗病毒治疗后45例CHB患者（根据B超将其分为3组,其中B超提示肝脏无异常改变的单纯CHB组15例,提示慢性肝病改变的CHB慢性肝病组15例,提示肝硬化改变的CHB肝硬化组15例）与B超均提示肝脏无异常改变的15例慢性乙型肝炎病毒携带者（asymptomic HBV carriers,ASCs）以及15例健康成年人（normal control,NC）对照外周血中CD4＋CD25＋ Treg的变化,并分析Treg与患者年龄,HBeAg定量,ALT、AST、TGF—β水平的相关性。结果外周血中CD4＋CD25＋Treg占CD4＋淋巴细胞的比例在抗病毒治疗后单纯CHB组为（4．03±1．36）％,与NC组（4．02±1．14）％相比差异尤显著性（t=0．0223,P〉0．05）,与ASCs组（5．26±1．25）％相比显著减少（t=-2．2872,P〈0．05）;CHB慢性肝病组为（5．65±2．01）％,CHB肝硬化组为（5．32±1．47）％,与NC组、单纯CHB组比显著增高（t值分别为3．0351、3．0129、2．4269、2．4046,均P〈0．05）与ASCs组相比差异无显著性（￡值分别为0．7257、0．1174,均P〉0．05）;CHB慢性肝病、肝硬化组间相比差异无显著性（t=0．6083,P〉0．05）。Treg的数量与年龄、AST、TGF—β1水平呈正相关（r分别为0．327、0．324、0．306,P分别为0．004、0．005、0．008）。结论Treg在低水平AST时CHB患者外周血中的数量的增高对抗病毒治疗后的CHB患者更能反映其肝脏慢性损伤程度,Treg可能参与了慢性HBV感染后肝脏疾病慢性化进展的过程。     

替比夫定对慢性乙型肝炎患者T细胞亚群的影响

目的探讨替比夫定对慢性乙型肝炎（CHB）患者细胞免疫功能的影响。方法采用流式细胞术检测40例CHB患者在服用替比夫定前后外周血T细胞亚群,同时检测32例健康体检者外周血T细胞亚群作为对照组。结果 CHB组较健康对照组CD3 T细胞、CD4 T细胞百分比以及CD4/CD8明显降低（P〈0.05）,CD8 T细胞百分比明显升高（P〈0.05）。CHB患者在使用替比夫定后,CD3 T细胞、CD4 T细胞百分比以及CD4/CD8有明显回升（P〈0.05）,CD8 T细胞百分比则出现明显下降（P〈0.05）。结论替比夫定可改善CHB患者的细胞免疫功能。     

急慢性乙型肝炎患者外周血调节性T细胞鉴定与临床意义分析

目的观察不同类型HBV感染患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)的频率和临床指标的相关性。方法采集72例慢性乙型肝炎患者(CHB)、16例急性乙型肝炎患者(AHB)、32例健康人的外周血,流式细胞仪分析Treg频率及Treg细胞表面和细胞内分子表达。所有病例及对照均经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBVDNA载量,同时进行肝功能检测。结果CD4+CD25highTreg表面高表达CD45RO,低表达CD45RA,细胞内高表达CTLA-4。比较Treg占CD4+T细胞频率,慢性乙型肝炎组(3·9%±1·4%)与正常对照(3·5%±0·7%)比较差异无统计学意义(P>0·05),但是明显高于急性乙型肝炎组(3·1%±0·9%)(P<0·05),急性乙型肝炎组与正常对照比较差异无统计学意义(P>0·05)。慢性乙型肝炎组Treg频率在高病毒载量组(HBVDNA>107拷贝/ml,4·5%±1·9%)明显高于低病毒载量组(HBVDNA<107拷贝/ml,3·4%±0·6%)和正常对照组,并与病毒载量成正相关(r=0·32,P<0·01)。8例随访急性乙型肝炎患者Treg频率在恢复期(6·0%±1·7%)明显高于急性期(3·0%±0·6%),配对t检验P<0·001。结论CD4+CD25highTreg在慢性乙型肝炎患者高病毒载量组明显升高,这提示Treg可能通过抑制细胞免疫反应影响病毒清除;Treg在急性肝炎早期较低,随后增高,可能与Treg在急性肝炎的不同发病阶段中所起的作用有关。     

乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化及临床意义

目的 观察不同类型乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染者外周血T淋巴细胞亚群变化特点.方法 对我院2013年6-11月门诊及住院的200例乙肝患者和50例健康对照者采用流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测外周血淋巴细胞（CD45＋）、T淋巴细胞（CD45＋CD3＋、CD45＋CD3＋CD4＋、CD45＋CD3＋CD8＋）、B淋巴细胞（CD45＋CD3-CD19＋）、NK淋巴细胞（CD45＋CD3-CD16＋56＋）百分比和细胞绝对计数.结果 急性乙型肝炎组T淋巴细胞总数、CD4＋和CD8＋T淋巴细胞数较健康对照组显著升高（P＜0.01）.慢性乙型肝炎组、肝硬化组和肝衰竭组：T淋巴细胞总数、CD4＋和CD8＋T淋巴细胞数、CD4＋/CD8＋比值均较健康对照组降低,其中肝衰竭组＜肝硬化组＜慢性乙型肝炎组.慢性乙型肝炎组CD4＋淋巴细胞百分比较健康对照组显著降低（P＜0.01）.肝硬化组CD4＋淋巴细胞百分比较慢性乙型肝炎组显著降低（P＜0.01）,CD8＋T淋巴细胞百分比显著升高（P＜0.01）.肝衰竭组T淋巴细胞和CD4＋T淋巴细胞百分比较肝硬化组显著降低（P＜0.01）.结论 乙型肝炎患者CD4＋T淋巴细胞持续降低,与疾病病程发展密切相关.     

慢性乙型肝炎患者外周血IL-7与细胞免疫的关系

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血IL-7含量与T淋巴细胞亚群、调节性T细胞百分比的关系,探究IL-7对慢性乙型肝炎细胞免疫作用的影响。方法慢性乙型肝炎患者组、慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带组、健康对照组,采用ELISA法检测受试者外周血IL-7含量,流式细胞仪技术检测外周血T淋巴细胞亚群和CD4+CD25+调节性T细胞百分比。结果 CHB组、HBV携带组、健康对照组外周血IL-7含量分别为(1.68±0.58)ng/mL、(3.83±0.62)ng/mL和(6.25±0.32)ng/mL,3组间存在显著性差异(P0.05);CHB组、HBV携带组、健康对照组外周血T细胞亚群CD4+T淋巴细胞分别为(31.3±3.3)%、(38.1±6.8)%、(43.2±9.4)%,CD8+T淋巴细胞分别为(24.8±5.2)%、(28.1±3.4)%、(30.5±8.6)%;CD4+CD25+调节性T细胞分别为(10.9±1.3)%、(7.4±1.0)%、(4.2±1.1)%。CHB组外周血IL-7明显低于HBV携带组及健康对照组,且与CD4+T细胞百分比呈负相关(r1=-0.58,P0.05),与CD8+T细胞百分比呈正相关(r2=0.63,P0.05),与CD4+CD25+调节性T细胞百分比呈负相关(r3=-0.43,P0.05)。结论 CHB患者外周血IL-7负调控调节性T细胞,对CD8+T细胞的细胞免疫有促进作用。     

慢性乙型肝炎及肝炎后肝硬化病人胆囊的B超改变

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）及乙肝后肝硬化（LC）病人胆囊B超声像改变及肝脏病变程度与胆囊病变的关系。方法对156例慢性乙型肝炎病人、乙肝后肝硬化病人和同期的246例非肝炎体检者进行胆囊B超检查,比较其胆囊病变情况。结果慢性乙型肝炎与乙肝后肝硬化组胆囊改变明显高于无肝炎病变的体检组（P〈0．01）,且其病变程度越重,胆囊病变的发生率越高,在统计学上有非常显著意义（P〈0．01）。结论慢性乙型肝炎及乙肝后肝硬化病人易并发胆囊病变。     

瞬时弹性成像系统在慢性HBV感染者肝纤维化诊断的研究

目的探讨瞬时弹性成像系统（FibroScan）在慢性HBV感染者肝纤维化诊断中的临床应用价值。方法随机抽取HBV感染者342例,包括无症状HBsAg携带者（ASC）115例,慢性乙型肝炎（CHB）200例,乙肝肝硬化（LC）27例,分析Stiffness值与肝功能、肝纤维化指标的相关性。结果Stiffness值与血清学检验指标进行多重线性回归分析,Stiffness值与HA、ALB、ALT、LN和T．BIL之间具有显著相关性（P〈0．05）。LC组Stiffness值显著高于CHB组和ASC组（P〈0．05）,CHB组Siffness值显著高于ASC组（P〈0．05）。结论FibroScan在慢性HBV感染者肝纤维化的诊断中有较高的临床应用价值。     

慢性乙型肝炎外周血自然杀伤细胞的变化及其与HLA-Cw基因型的关系

目的〓〖HTK〗探讨慢性乙型肝炎外周血自然杀伤细胞（NK细胞）和活化NK细胞数量的变化及其与HLA-Cw基因型的关系。〖HTW〗方法〓〖HTK〗采用流式细胞术检测30例急性乙型肝炎发病期患者、51例慢性乙型肝炎患者及41例正常对照外周血NK细胞和活化NK细胞的数量,并通过序列特异性寡核苷酸分型(PCR-SSO)技术进行HLA-Cw的基因分型。〖HTW〗结果〓〖HTK〗急性肝炎组的NK细胞和活化NK细胞的数量均较正常对照组增高［(22.62±3.70)% vs (19.03±4.91)%,(65.28±14.45)% vs (53.88±14.01)%,P＜0.05］,慢性乙型肝炎组的NK细胞和活化NK细胞的数量均较正常对照组降低［(14.36±1.07)% vs (19.03±4.91)%,(47.14±5.67)% vs (53.88±14.01)%,P＜0.05］,且急性肝炎组与慢性乙型肝炎组间差异有统计学意义（P＜0.01）;急性肝炎组与正常对照组间HLA-Cw位点各等位基因的基因型无统计学差异（P＞0.05）,HLA-Cw*03在慢性乙型肝炎组中基因频率明显高于正常对照组（P＜0.05）,且与活化NK细胞数量呈显著负相关（γ=-0.394,P＜ 0.05）。〖HTW〗结论〓〖HTK〗慢性乙型肝炎患者NK细胞功能低下,HLA-Cw*03基因型可能是通过影响NK细胞而导致HBV感染持续存在的原因之一。