脂肪因子补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3对胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞胰岛素信号通路影响的研究

目的 观察脂肪因子补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)对IR的3T3-L1脂肪细胞胰岛素信号通路的影响. 方法 以软脂酸培养构建IR的3T3-L1脂肪细胞模型,分为对照组、CTRP3(10、50、250 ng/ml)干预组及CTRP3(250 ng/ml)+渥曼青霉素(Wortmannin)[磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂]干预组.以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量,以Western blot检测PI3K及蛋白激酶B[PKB(ser437)]蛋白相对表达量. 结果 与对照组相比,CTRP3干预组(10、50、250 ng/ml)葡萄糖消耗量分别增加了22.1％、42.9％及76.6％(P均＜0.01),PI3K蛋白相对表达量分别增加了62.5％、100.0％及137.5％(P均＜0.01),PKB(ser437)蛋白相对表达量分别增加了46.4％、160.7％及192.9％(P均＜0.01);与CTRP3(250 ng/ml)干预组相比,CTRP3 (250 ng/ml) +Wortmannin干预组葡萄糖消耗量下降53.2％ (P＜0.01),PI3K及PKB(ser437)蛋白相对表达量分别下降了43.4％及56.1％(P均＜0.01). 结论 脂肪因子CTRP3可能通过改善胰岛素信号转导增加IR的3T3-L1脂肪细胞IS.     

补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3与急性冠脉综合征的关系

目的 研究补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3（C1q tumor necrosis factor related proteins-3,CTRP3）在急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者中的表达及作用。方法 检测ACS患者206例和稳定型心绞痛（stable angina pectoris,SAP）患者208例血浆中CTRP3。结果 与SAP相比,ACS患者血浆CTRP3和脂联素（adiponectin,APN）显著降低（P<0.01）。校正年龄和性别后,CTRP3与血糖(r=-0.121,P<0.01),高敏C反应蛋白(high sensitive C-reactive protein,hsCRP)(r=-0.152,P<0.01)负相关。与高密度脂蛋白胆固醇(r=0.112,P<0.01)和脂联素(r=0.136,P<0.01)正相关。多因素logistic回归分析发现:与高三分位数CTRP3组相比,中三分位数CTRP3组OR值5.08（95%可信区间,1.69-13.43）,低三分位数OR值8.17（95%可信区间,2.36-28.36）。结论 CTRP3与ACS有关联。     

冠心病患者侧支循环程度与血浆补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白及胰岛素抵抗的相关性研究

目的:检测不同侧支循环的冠心病患者补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白(CTRP1)的表达水平,探讨CTRP1表达水平与侧支循环程度、疾病严重程度及胰岛素抵抗的相关性。方法:选择82例在本院心内科进行选择性冠状动脉造影的患者,分析其侧支循环的形成情况。依据造影结果,以Rentrop评级标准评判患者的侧支循环,将患者分为:侧支循环不良组(CCB)47例;侧支循环良好组(CCW)35例。冠状动脉造影排除冠心病的患者为对照组(NC)37例;以Gensini计分方法评价冠状动脉病变的严重程度。分别检测各组患者血浆CTRP1表达水平,空腹血糖(FBG),空腹胰岛素(FINS),白细胞介素-6(IL-6),以及各组患者的临床资料,包括:TG,TC,HDL-C,LDL-C,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)等。检测Rentrop分级、Gensini评分和CTRP1表达水平与各指标的相关性,及以CTRP1为因变量分析其危险因素。结果:CCB组,CCW组与NC组比较,各检测指标均差异有统计学意义(P0.05);Rentrop分级与血浆CTRP1表达水平,FBG,HOMA-IR,TG,IL-6及Gensini评分负相关,差异有统计学意义(P0.05);Gensini评分与CTRP1,FBG,HOMA-IR,TG,IL-6呈正相关,差异有统计学意义(P0.05);血浆CTRP1表达水平与TC,HOMA-IR,IL-6呈正相关,差异有统计学意义(P0.05);采用多元逐步回归分析CTRP1表达水平的危险因素为HOMA-IR,IL-6,差异有统计学意义(P0.05)。结论:冠心病患者血浆CTRP1表达水平与侧支循环程度以及胰岛素抵抗相关。     

补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1与脂联素水平的关系

目的探讨健康老年人、2型糖尿病(T2DM)老年患者、T2DM合并冠心病(CHD)老年患者及CHD老年患者补体C1q肿瘤坏死因子(TNF)相关蛋白1(CTRP1)与脂联素(ADPN)水平及其关系。方法采用酶联免疫法(ELISA)测定各组患者血清CTRP1及ADPN的水平。将患者分为对照组(n=42);T2DM组(n=30);并发症组(n=32);CHD组(n=31);定义对照组、CHD组为非糖尿病(DM)组;T2DM组、并发症组为DM组。结果 DM组血清CTRP1水平明显高于非DM组。DM组CTRP1水平与ADPN水平呈负相关关系。结论 CTRP1与T2DM有关。本实验结果支持目前关于CTRP1为ADPN有效补充的观点。     

性激素对3T3-L1脂肪细胞Visfatin表达的影响

目的 观察雌二醇、睾酮和孕酮对3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA和蛋白表达的影响.方法 10-8mol/L～ 10-6 mol/L 雌二醇、睾酮或孕酮作用于3T3-L1成熟脂肪细胞和前脂肪细胞,孵育过夜后收集细胞,分别采用RT-PCR和Westem blot检测Visfatin mRNA和蛋白的表达情况.结果 在3T3-L1成熟脂肪细胞,与对照组相比,雌二醇和睾酮分别使Visfatin mRNA表达增加24％(1.74±0.31比1.40 ±0.18,P＜0.05)和28％(1.65±0.90比1.29±0.69,P＜0.05);而孕酮不影响成熟脂肪细胞Visfatin mRNA表达.雌二醇轻度增加成熟脂肪细胞Visfatin蛋白表达,但无统计学差异;10-6 mol/L睾酮使成熟脂肪细胞Visfatin蛋白表达增加134％(0.61±0.40比0.26±0.05,P＜0.05).与雌二醇和睾酮不同,孕酮使成熟脂肪细胞Visfatin蛋白表达下调32％(0.19±0.02比0.28±0.02,P＜0.05).在前脂肪细胞,与对照组相比,10-7 mol/L和10-6mol/L雌二醇使Visfatin mRNA表达增加70％(1.04±0.38比0.61±0.16,P＜0.01)和123％(1.36±0.41比0.61±0.16,P＜0.01);睾酮使Visfatin mRNA表达增加76％(1.02±0.24比0.58±0.36,P＜0.05);孕酮使前脂肪细胞Visfatin mRNA表达增加2.6倍(1.53±1.01比0.42 ±0.14,P＜0.05).结论 性激素通过促进或抑制脂肪细胞Visfatin基因或蛋白的表达,参与调节上述激素引起的脂肪细胞胰岛素抵抗的病理生理过程.     

补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1与动脉粥样硬化风险因素

脂肪组织是机体能量的储存器官。近年研究表明脂肪细胞是重要的内分泌器官,可以分泌一系列细胞因子,参与体内的物质代谢及免疫炎症反应。补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1（CTRP1）是新近发现的脂肪细胞因子,与高血压、糖脂代谢紊乱及肥胖有关。本文对近年有关CTRP1分子生物学特性及其与动脉粥样硬化风险因素的研究现状综述如下。     

C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3在心血管疾病中的研究进展

C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3是新近发现的C1q肿瘤坏死因子相关蛋白家族中的一员。近年来发现它在糖脂代谢、动脉粥样硬化、肥胖、高血压、促进缺血心肌新生血管形成等心血管疾病方面发挥作用。文章将对C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3在心血管疾病方面的研究进展做一综述。     

肿瘤坏死因子α和罗格列酮对30T3-L1细胞分化过程中蛋白酪氨酸磷酸酶1B表达的影响

目的 观察3T3-L1前脂肪细胞分化过程中蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）蛋白水平的变化以及肿瘤坏死因子α（TNF—α）和罗格列酮在前脂肪细胞分化过程中对PTP1B表达的影响，探讨PTP1B在脂肪细胞分化中的作用。方法 体外培养3T3-L1前脂肪细胞，分别采用3组诱导剂（完全诱导剂：3-异丁基-1-甲基黄嘌呤＋地塞米松＋胰岛素，C组），完全诱导剂加20μg/LTNF—α（CT组），完全诱导剂加10^-5mol／L罗格列酮（CR组）诱导脂肪细胞分化，以Western印迹方法检测各组脂肪细胞分化过程中PTP1B蛋白表达变化。结果 3组中PTP1B蛋白均表现为在前脂肪细胞中（第1天）表达最高，随着脂肪细胞分化成熟表达逐步降低，至第10天降至最低；与C组相比，CT组中脂肪细胞分化较为迟缓，其分化后期（第7～10天）PTP1B蛋白表达水平较C组显著增高；而CR组则表现为脂肪细胞分化活跃，其分化后期（第7～10天）PTP1B蛋白表达水平较C组显著降低。结论 在脂肪细胞分化成熟过程中PTP1B蛋白表达呈降低趋势：TNF—α及罗格列酮影响脂肪细胞胰岛素敏感性的作用可能与其调控PTP1B的表达有关。     

葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞内脏脂肪素mRNA表达的影响

目的研究不同浓度葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞中内脏脂肪素（Visfatin）mRNA表达的影响。方法通过real—time RT-PCR方法检测不同浓度葡萄糖和胰岛素培养下3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA的表达。结果葡萄糖增加了3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA的表达;胰岛素降低其表达。结论葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞中Visfatin mRNA的表达有凋控作用。     

C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9与心血管疾病关系的研究进展

正心血管疾病是目前导致人类死亡的主要病因之一,肥胖作为心血管疾病的重要危险因素,可导致脂肪组织分泌功能紊乱,加重罹患心血管疾病的风险[1]。脂肪因子主要由脂肪组织合成和分泌,包括脂联素(adiponectin,APN)、C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白(C1q/TNF-related proteins,CTRPs)家族、瘦素(leptin)、抵抗素(resistin)等,可参与炎症反应、糖类及     

氯化钴诱导低氧上调3T3-L1脂肪细胞单核细胞趋化蛋白1的表达

研究氯化钴体外模拟低氧对小鼠3T3-L1脂肪细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响.体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并将其诱导分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定脂肪细胞分化程度和脂质积聚情况.氯化钴化学模拟脂肪细胞低氧环境,采用实时荧光定量PCR与蛋白免疫印迹法检测低氧诱导因子-1α的mRNA和蛋白水平;采用实时荧光定量PCR与酶联免疫吸附法检测单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白水平,并对两者的蛋白水平进行相关性分析.氯化钴处理分化成熟的3T3-L1脂肪细胞后,低氧诱导因子-1α在mRNA及蛋白水平均显著上调;同时发现单核细胞趋化蛋白1 mRNA的表达水平和培养液中单核细胞趋化蛋白1蛋白的分泌水平均升高,且低氧诱导因子-1α与单核细胞趋化蛋白1蛋白水平呈现线性相关( r=0.864,P＜0.01).氯化钴诱导低氧上调3T3-L1脂肪细胞单核细胞趋化蛋白1的表达,参与脂肪组织慢性低度炎症的发生.     

TNF-α和吡格列酮对3T3-L1脂肪细胞adiponutrin mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）和吡格列酮（PIO）对3T3-L1脂肪细胞中，脂肪滋养蛋白（adiponutrinADPN） mRNA表达的影响及时间效应。方法用100Fmol／L的PIO和100ng／ml的TNE-α处理不同阶段的3T3-L1脂肪细胞，RT-PCR检测ADPN的表达水平。结果在分化过程中和分化成熟的3T3-L1细胞中，TNF-α均增加ADPN的表达，PIO则可明显抑制其mRNA的表达。结论PIO和TNF-α可影响3T3-L1脂肪细胞的ADPN的表达。     

小檗碱对3T3-L1脂肪细胞内脂素表达的影响

目的观察小檗碱对3T3-L1脂肪细胞内脂素（visfatin）表达的影响和探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的机制。方法采用RT—PCR法检测不同浓度小檗碱和不同作用时间后，3T3-L1脂肪细胞内脂素mRNA的表达，并以Western印迹方法检测其蛋白水平的表达。结果0～10μmol／L小檗碱剂量依赖性地增加内脂素mRNA的表达，其中10μmol／L时最明显，是空白对照组的4．96倍，其后随着小檗碱浓度的进一步增加，内脂素mRNA的表达反而降低；10μmol／L的小檗碱作用3h后内脂素mRNA的表达开始明显增强，至作用12h时表达增强最明显，是基础组的4．57倍，随着作用时间的延长内脂素mRNA的表达虽然有所下降，但到48h时内脂素mRNA的表达仍比空白对照组明显增高；5、10、20μmol／L的小檗碱均可使内脂素蛋白的表达增加1．13、2．46、2．34倍，与空白对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论在一定浓度范围内小檗碱可剂量和时间依赖性地促进离体脂肪细胞内脂素mRNA及蛋白表达。小檗碱对内脂素表达的调节作用可能是其改善机体胰岛素抵抗、降低血糖的机制之一。     

Diverse regulation of full-length and truncated growth hormone receptor expression in 3T3-L1 adipocytes

Two truncated forms of growth hormone (GH) receptor (GHR), 1–277 and 1–279, were reported to be normally produced in human tissues by alternative splicing in exon 9 and its boundary. We found previously that GHR-277 exerts a dominant-negative effect on full-length GHR (GHR-fl)-mediated GH signaling causing short stature. The existence of truncated GHRs (hGHR-tr) in normal tissues suggests that hGHR-tr may play a physiological role in regulation of GH action at the cellular level. To clarify the physiological significance of GHR-tr and the regulation mechanism of GHR-tr expression, we examined the expression of mouse GHR-tr (mGHR-tr) mRNA in mouse adipocyte 3T3-L1 cells, comparing with that of mouse GHR-fl (mGHR-fl). The mRNAs of two mGHR-tr, mGHR-282 and mGHR-280, were detected by RT-PCR methods using specific primers. Although the mGHR-282 and mGHR-280 mRNA levels were approximately 100 times lower than that of mGHR-fl in mature 3T3-L1 cells, quantitative analysis by competitive RT-PCR methods revealed that the mRNA levels of mGHR-280 in 3T3-L1 cells were transiently reduced and thereafter increased during differentiation from preadipocyte to adipocyte. In contrast, the mRNA levels of mGHR-fl were increased in parallel with the progress of differentiation. Stimulation by GH of differentiated 3T3-L1 mature adipocytes resulted in dose-dependent increases of the mRNA of both mGHR-fl and mGHR-282, whereas it caused a paradoxical decrease of the mRNA of mGHR-280 stimulated by high concentration of GH. These findings suggest that the expressions of truncated mGHRs were regulated in a different manner from that of mGHR-fl, thereby modulating GH action in murine adipocytes.     

尿路上皮癌相关基因1对3T3-L1脂肪细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶信号通路的影响

目的：观察长链非编码RNA（lncRNA）尿路上皮癌相关基因1（UCA?1）对3T3?L1脂肪细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路及糖代谢的影响。方法通过转染UCA?1过表达质粒或UCA?1特异性siRNA干预3T3?L1脂肪细胞中UCA?1的水平,western blotting检测Akt信号通路相关蛋白磷酸化水平的变化,通过2?脱氧?3H?D?葡萄糖掺入法检测细胞的葡萄糖摄取能力。两组之间比较用t检验,多组之间比较采用单因素方差分析。结果随着3T3?L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,UCA?1的mRNA水平逐渐升高,第6天时为诱导前的（3.48±0.09）倍（t=12.093,P<0.01）;过表达UCA?1可增加3T3?L1脂肪细胞中Akt及FOXO1的磷酸化水平[分别为p?AKT（S473）：2338±59比1103±42;p?AKT（T308）：3565±45比1524±34,p?FOXO1：2190±31比912±21,t=16.390、13.025、10.544,均P<0.01];而利用特异性siRNA沉默UCA?1,可降低细胞中Akt及FOXO1的磷酸化水平[分别为p?AKT（S473）：540±34比1090±22;p?AKT（T308）：805±18比1409±26;p?FOXO1：459±31比2444±29,t=11.045、9.527、16.899,均P<0.01];未给予胰岛素刺激时,过表达UCA?1可增加细胞的葡萄糖摄取能力（2.21±0.09）倍（t=5.922,P<0.05）,沉默UCA?1可使细胞的葡萄糖摄取能力降低66%以上（t=5.557,P<0.05）;而给予胰岛素刺激时,过表达UCA?1可增加细胞的葡萄糖摄取能力（3.25±0.12）倍（t=5.709,P<0.05）,沉默UCA?1可使细胞的葡萄糖摄取能力降低77%以上（t=6.567,P<0.05）。结论 UCA?1可激活3T3?L1脂肪细胞Akt信号通路,并促进其葡萄糖摄取能力。     

胰岛素、葡萄糖对3T3-L1脂肪细胞脂肪水孔蛋白表达的调节

利用半定量RT PCR技术及Western印迹法研究胰岛素、葡萄糖对成熟脂肪细胞脂肪水孔蛋白 (AQPap)基因表达的影响。结果表明 ,胰岛素对AQPap的表达具有抑制作用 ;而高浓度葡萄糖则对AQPap的表达具有促进作用     

Interleukin-18 enhances glucose uptake in 3T3-L1 adipocytes

In order to characterize the potential causative effects of interleukin-18 (IL-18) on insulin resistance, we measured glucose uptake in 3T3-L1 adipocytes treated with mouse recombinant IL-18. IL-18 surprisingly enhanced, rather than reduced insulin-mediated glucose uptake in adipocytes. Moreover IL-18 could counteract the glucose uptake suppression caused by tumor necrosis factor α in 3T3-L1 adipocytes. The mechanism dissection showed that the IL-18 upregulated phosphorylated Akt and downregulated phosphorylated P38 MAPK. These findings indicated that the elevated serum IL-18 levels in obesity and diabetes might be a compensatory response to insulin resistance.     

Insulin stimulates IGFBP-2 expression in 3T3-L1 adipocytes through the PI3K/mTOR pathway

Insulin-like growth factor binding protein 2 (IGFBP-2) has been implicated in the etiology of several diseases, including the metabolic syndrome. Although IGFBP-2 derives mostly from the liver, recent evidence in mice and humans indicate that aging and obesity are associated with altered IGFBP-2 levels in white adipocytes. The present study was aimed at determining the mechanisms that control IGFBP-2 expression in mature adipocytes. IGFBP-2 mRNA and protein expression in serum-deprived 3T3-L1 adipocytes were twofold increased by acute insulin treatment. Co-treatments with the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitor wortmannin or the mammalian target of rapamycin (mTOR) inhibitor rapamycin blunted the effects of insulin. Coherently, IGFBP-2 mRNA levels were robustly increased in adipocytes lacking either TSC2 or 4E-BP1. Insulin triggered the recruitment of CAAT/enhancer binding protein α (C/EBPα) to the IGFBP-2 proximal promoter. These findings suggest that insulin upregulates IGFBP-2 expression through a PI3K/mTOR/C/EBPα pathway in white adipocytes.