人脐带Wharton胶来源间充质干细胞复合藻酸钠水凝胶构建组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损

目的探索以人脐带Wharton胶来源间充质干细胞(MSCs)作为种子细胞复合藻酸钠水凝胶(Alg)构建组织工程软骨,并观察以此修复兔全层关节软骨缺损的效果。方法体外分离培养人脐带Wharton胶来源MSCs,与藻酸钠水凝胶复合构建组织工程复合物,用于修复兔膝关节全层骨软骨缺损。根据关节软骨缺损修复方式的不同,实验分为三组:Alg+MSCs组以人脐带Wharton胶来源MSCs/藻酸钠水凝胶组织工程复合物修复骨软骨缺损; Alg组以单纯藻酸钠水凝胶修复骨软骨缺损;单纯缺损组旷置骨软骨缺损作为对照。术后3个月、6个月处死实验动物取材。根据Micro-CT、蕃红O染色、天狼猩红染色、ICRS大体观分、组织学评分及力学分析等结果评估兔膝关节骨软骨缺损修复效果。结果 Micro-CT扫描结果显示三组软骨下骨均得到不同程度重建,Alg+MSCs组效果显著优于其他两组;蕃红O染色、天狼猩红染色等病理学染色显示Alg+MSCs组获得透明软骨修复,其他两组修复组织主要为纤维软骨;力学分析结果显示Alg+MSCs组新生软骨力学强度接近正常关节软骨,明显优于其他两组,差异统计学意义(P<0. 05)。结论以人脐带Wharton胶来源MSCs作为种子细胞复合藻酸钠水凝胶构建组织工程软骨可成功修复兔膝关节骨软骨缺损。     

组织工程学技术修复关节软骨缺损研究进展

骨性关节炎或外伤等造成的关节软骨缺损是老年人关节疼痛的主要原因[1]。关节软骨自身修复能力十分有限,一旦发生关节软骨缺损,必须手术修复或重建。组织工程学技术是一种修复关节软骨缺损的新技术。现将应用组织工程学技术修复关节软骨缺损的相关问题综述如下。1种子细胞的获取种子细胞的获取是组织工程技术构建软骨的基础。理想的种子细胞应具备以下特点:1取材方便,对供体损伤小,来源充足;2体外培养增殖能力强,能持续保持细胞表型不变;3植入人体后能适应受区环境并保持或恢复原有细胞的功能。目前,最常用的种子细胞有间充质干细胞(MSCs)…     

松质骨骨基质明胶负载软骨细胞移植修复兔膝关节软骨缺损

目的 应用松质骨骨基质明胶(bone matrix gelatin，BMG)负载兔软骨细胞移植修复同种异体关节软骨缺损。方法 BMG载软骨细胞，体外培养12d后植入同种异体新西兰兔膝关节软骨缺损。对照组植入BMG或不作任何植入。移植前用胰蛋白酶处理关节软骨缺损。术后2、4、8、12、24周行解剖显微镜、组织学、电镜观察和免疫组织化学染色。结果 BMG术后8周降解。实验组术后24周关节软骨缺损以软骨组织修复，与周围软骨及软骨下骨愈合良好。Safranin-O、免疫组织化学染色证实其基质有蛋白多糖和Ⅱ型胶原，电镜观察表明修复组织软骨细胞及基质与正常关节软骨一致。BMG对照组以部分软骨组织修复，空白对照组以纤维组织修复。结论 松质骨BMG可作为软骨组织工程的天然细胞支架，其负载软骨细胞移植能修复同种异体兔关节软骨缺损。     

关节镜下镶嵌式自体骨软骨移植修复膝关节局限性软骨缺损（附19例报告）

目的评价关节镜下镶嵌式自体骨软骨移植修复膝关节局限性软骨缺损的临床疗效。方法对19例关节面局限性软骨缺损患者在关节镜下采用镶嵌式骨软骨移植术,将膝关节非负重关节面骨软骨条移植至膝关节负重面的病灶性软骨缺损处,术后行系统性康复治疗。结果术后随访〉12个月,所有患者膝关节活动良好,疼痛症状基本消失。采用HSS膝关节评分标准评价膝关节功能,优15例,良2例,优良率为89％。结论关节镜下镶嵌式自体骨软骨移植修复膝关节局限性软骨缺损疗效好,患者恢复快。     

Ⅱ型胶原移植修复关节软骨缺损过程中抗体水平的动态变化

目的建立检测Ⅱ型胶原抗体水平的间接法ELISA,研究猪Ⅱ型胶原移植修复兔关节软骨缺损过程中Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化。方法取28只新西兰大白兔,随机分成2组。所有动物均在股骨外髁钻直径5mm、深3mm的软骨缺损区,深达软骨下骨,其中实验组在缺损区植入Ⅱ型胶原;另一组不植入Ⅱ型胶原作为对照。术前及术后每隔2周收集血清直至第12周,采用间接法ELISA检测血清中Ⅱ型胶原抗体。结果实验组Ⅱ型胶原抗体水平术后与术前比较均差异无显著性(P>0.05);而对照组术后第8周抗体水平显著高于术前(P<0.05);实验组与对照组同期比较,两者差异均无显著性。结论关节软骨缺损可引起机体自身免疫反应,产生一定水平的Ⅱ型胶原抗体。Ⅱ型胶原移植不但可以促进关节软骨缺损的修复,还可以降低机体的自身免疫反应,减少抗体的产生。     

应用人胚软骨细胞修复关节软骨缺损的研究

目的了解应用人胚胎关节软骨细胞修复家兔膝关节软骨大面积深层缺损的效果,为临床上进一步应用人胚胎关节软骨细胞进行同种异体细胞移植的可行性提供佐证.方法将分离的人胚胎关节软骨细胞以天然胶原作为细胞外基质网架,进行体外三维培养1周后,植入家兔关节软骨大面积深层(5 mm×5 mm×4 mm)缺损处,对修复组织进行大体观察及组织学评估.结果移植术后12周,缺损部位平坦、光滑,已为类似关节软骨的半透明组织填充,修复组织与宿主关节软骨组织整合较好,界限模糊;移植术后24周,缺损表面为透明软骨填充,缺损深部的软骨下骨组织已经重建.结论人胚胎关节软骨细胞可以作为软骨组织工程的种子细胞用于修复关节软骨组织的缺损.     

应用同种异体组织工程软骨修复关节软骨缺损观察

目的用胶原蛋白和人血纤维蛋白混合物为载体支架在体外进行软骨细胞三维立体培养,构建人工软骨组织,利用此人工软骨修复关节软骨缺损。方法取2周龄兔关节软骨,经消化、分离的软骨细胞体外培养。培养第3周时,进行免疫组织化学分析;利用培养3周的人工软骨对异体成兔的关节软骨损伤进行修复。结果培养物内软骨细胞均得到较好存活,形成软骨陷窝,出现同源性细胞簇,分泌软骨基质;DNA和糖胺多糖(GAG)在培养第24天时达到高峰,分别为(5.18±0.19)、(214.3±2.8)μg/块;对异体关节软骨损伤的移植修复结果良好,在12周时,移植物与周边正常组织结合紧密、齐高,移植的软骨细胞趋于柱状排列,为透明软骨组织。结论用胶原蛋白和人血纤维蛋白为载体支架体外培养软骨细胞,可构建较大的组织工程软骨,能较好地修复同种异体关节软骨缺损。     

组织工程软骨修复全层大面积关节软骨损伤的实验研究

目的观察由软骨细胞体外培养的人工软骨组织对家兔膝关节软骨全层缺损修复的可行性.方法分离收集兔软骨细胞(4周龄),用培养液悬浮,经离心管体外培养成组织工程软骨,然后植入兔膝关节股骨负重面的缺损(5 mm×4 mm)部位,观察2,4,8,12周软骨缺损的修复情况,并进行大体和组织学观察.结果移植后第8周,移植部位填充物与宿主已完全整合,缺损处表面光滑;组织学显示,缺损部位新生软骨与所移植软骨有较好的连续性,并且缺损底部有软骨下骨及海绵状骨生成;对照组(未移植组),从组织学观察到缺损部位呈纤维样修复,未见有由新生软骨细胞形成软骨组织.结论用体外培养的组织工程软骨做移植物修复家兔关节软骨组织深层缺损具有较好的疗效.     

生长因子与软骨细胞-胶原海绵复合体联合应用修复软骨缺损的研究

目的研究在体条件下碱性成纤维生长因子（bFGF）与软骨细胞-胶原海绵复合体联合应用修复软骨缺损的疗效. 方法取3日龄异体幼兔膝关节软骨细胞,体外培养后接种在胶原海绵支架上,再做移植.同一大白兔双侧膝关节内外髁分为4组：空白对照组、软骨细胞-胶原海绵复合体移植组（复合体移植组）、bFGF应用组和软骨细胞-胶原海绵复合体与bFGF联合应用组.移植术后不同时间分批处死,进行大体、光镜和电镜观察. 结果移植术后12周联合应用组软骨缺损修复以完全修复为主,而复合体移植组以不完全修复为主,差异有统计学意义;20周时2组均得到修复,差异无统计学意义,组织学分析均为软骨组织;在不同时间点空白对照组和单纯bFGF应用组软骨缺损修复差异无统计学意义,但组织学上修复的组织,前者为纤维组织,而后者同时有软骨组织存在. 结论 bFGF在软骨组织工程中有促进软骨缺损早期修复的作用.     

转化生长因子-β1基因修饰骨髓间充质干细胞复合壳聚糖修复兔关节软骨缺损

目的利用壳聚糖负载转化生长凶子-β1(TGF—β1)基因修饰后骨髓间充质干细胞(MSCs)构建新型组织工程软骨培养体系，观察该培养体系对体内软骨缺损修复能力。方法将12只新西兰大白兔随机分为A、B、C三组，分别用壳聚糖、末转染MSCs 壳聚糖和TGF—β1基因修饰MSCs 壳聚糖修复全层关节软骨缺损，于术后6、12周用甲苯胺蓝染色、免疫组织化学法观察缺损区软骨基质和TGF—β1表达情况。结果TGF—β1基因修饰MSCs组缺损修复时间明显缩短，并且新生的透明软骨组织均匀一致，与正常软骨结合良好，效果明显优于其他两组。结论TGF-β1基因修饰MSCs复合壳聚糖是优秀的组织工程软骨培养体系，可用于全层关节软骨缺损的修复治疗。     

骨关节炎软骨移植的研究进展

骨关节炎是一种常见的关节病 ,以关节软骨的进行性变性和破坏为特征 ,可能与关节软骨生物力学及生物化学尤其是细胞外基质的代谢异常有关。在骨关节炎早期 ,软骨细胞增生及细胞外基质合成增多 ,关节软骨可进行自身修复 ,随着慢性损伤的持续加重 ,蛋白溶解酶合成明显增加而导致关节软骨修复失败。至今改善骨关节炎病情进展的有效方法还十分缺乏 ,而骨软骨和软骨细胞移植则可能是目前较有前途的治疗方法之一。1　软骨的免疫原性一直认为关节软骨为免疫“特惠”组织 ,然而软骨尤其是软骨细胞亦具有抗原性。研究发现兔膝关节对软骨细胞移植物发…     

应用转染BMP7基因组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损观察

目的 构建转染骨形态发生蛋白-7(BMP7)基因组织工程软骨,观察对家兔膝关节软骨缺损的修复作用.方法 将转染BMP7基因的软骨细胞(5×109个/L)接种于胶原-纤维蛋白凝胶的支架中,培养14 d后移植于家兔膝关节软骨表面,直径为5.0 mm,深达软骨下骨板的全层软骨缺损部位.移植后4、8、12周处死家兔,通过创面形态观察、组织形态的光镜观察、BMP7基因在移植部位的表达,评价转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损的修复作用.结果 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨培养物的体积分别为9 mm × 9 mm×2 mm和8 mm×8 mm×2 mm.转染BMP7基因组移植于家兔膝关节软骨后4、8、12周,均有软骨缺损修复作用,且移植部位有红褐色BMP7 mRNA和棕红色BMP7蛋白表达.移植后12周修复效果佳.优于未转染BMP7基因组.结论 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损均有修复作用,但转染BMP7基因组织工程软骨修复作用更强.     

BMSCs-PLGA复合物修复软骨缺损的实验研究

目的 观察软骨源性形态发生蛋白1(CDMP1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)体外联合诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞表型分化的作用及体内修复软骨组织缺损的能力.方法 在体外高密度细胞悬液与聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)构筑的三维立体培养体系下,用CDMP1联合TGF-β1诱导BMSCs向软骨细胞分化,观察诱导后细胞表型的表达;将培养体系移植入动物体内,从大体、组织学及力学方面观察其对软骨缺损的修复效果.结果 诱导后的培养体系可表达特异性软骨基质Ⅱ型胶原和糖氨聚糖;将培养体系移植动物体内,可有效修复软骨缺损.结论 CDMP1和TGF-β1联合诱导BMSCs所得组织工程化软骨可以有效修复软骨缺损.     

骨性关节炎的实验研究进展

骨性关节炎,又名老年性关节炎,是一种常见的病因未明的慢性骨关节病,严重危害老年人的身体健康。其最初病理变化是由于软骨细胞功能不全引起的软骨纤维显现及关节表面粗糙。随着关节病变的进行性恶化,骨髓腔开放。继后,新生结缔组织替代关节面,使骨与软骨缺损得到修复。炎性介质从炎性滑膜释放入关节腔是本病由关节结构损害到出现临床表现的决定性转折点。一旦发炎的关节出现疼痛,本病的临床进程即告开始。由上可知,软骨细胞功能不全是     

骨筋膜再生软骨的形态学观察

以犬为对象,复制骨关节软骨受损动物模型.在术后8、16、24周分别观察了骨筋膜组织电镜结构特点,了解骨筋膜是否有再生软骨功能,以便能为受损关节软骨的修复提供一种新方法.     

β-TCP—HA—AC—BMSCs复合体修复兔膝关节骨、软骨缺损的实验研究

目的观察磷酸三钙人工骨（β-TCP）－透明质酸（HA）－脱细胞耳软骨（AC）-骨髓间充质干细胞（BM-SCs）复合体修复兔膝关节骨、软骨缺损的效果。方法获取新西兰大白兔BMSCs,体外诱导成软骨细胞并培养,取异体兔耳软骨并进行脱细胞处理,并与β-TCP—AC结合形成复合物接种软骨细胞。取6月龄新西兰大白兔12只,手术制备膝关节缺损模型,并随机分为A、B两组。A组（8只）缺损区植入β-TCP—AC—BMSCs,并于关节腔内注入HA;B组（4只）缺损空置作为空白对照。结果BMSCs在体外生长稳定,增殖能力强,可被诱导为软骨细胞。第16周,A组缺损区内充填白色半透明新生软骨组织,色泽与正常软骨相似,质韧,表面平整,与正常软骨界限消失,表面细胞平行于关节面,深层细胞排列紊乱,细胞呈团状,基质异染广泛,与周围正常软骨连接良好。B组缺损区未修复,底部为白色纤维组织。结论 β-TCP—HA-AC—BMSCs复合体修复兔膝关节骨、软骨缺损效果良好。     

膝骨关节炎软骨损伤及组织工程学修复

正膝关节软骨作为胫骨与股骨连结组成部分能减轻关节摩擦和提供缓冲以保证肢体正常活动和稳定负重。膝骨性关节炎中关节软骨退变、软骨下骨赘增生及滑膜炎症等会破坏软骨组织~([1]),导致关节疼痛、关节交锁征、关节畸形等异常表现,膝关节软骨长期不可逆损伤会使患者丧失关节功能,严重影响患者生活质量。目前针对膝关节软骨早期损害的手术治疗方法包括软骨膜移植及自体骨软骨镶嵌移植成形术等,终期     

踝关节镜下关节清理术治疗大骨节病性踝关节炎

大骨节病是一种以软骨坏死为主要病理改变的累积全身骨关节的地方性疾病,在我国的东北、西北等高寒地区多见。由于病变同时侵及关节软骨和骺软骨,重症病例可出现侏儒体型和摇摆步态,轻症病例则以剥脱性骨软骨炎为主要改变,膝关节、踝关节受累最多,关节软骨剥脱后形成大量的关节游离体,导致关节疼痛、绞锁,甚至丧失劳动能力。     

应用自体软骨细胞移植物修复关节软骨缺损

目的 通过体外扩增关节软骨细胞，构建软骨组织工程移植物，观察移植物对自体关节软骨损伤的修复作用。方法 由8周龄成年兔髌骨外侧缘获取关节软骨，分离软骨细胞，体外扩增后，与牛Ⅰ型胶原、人血冻干纤维蛋白原、凝血酶按一定比例混合，制成软骨培养物，体外培养4d。用于对成兔自体关节软骨损伤的移植修复。结果 成年家兔关节软骨细胞体外单层培养至第2代时开始出现去分化现象，可利用生长因子抑制去分化；该移植物的移植修复效果良好，修复后12周移植物与周边正常组织结合紧密、齐高，细胞趋于柱状排列，已形成透明软骨组织。结论 利用体外扩增的方法能获得足够量表型良好的关节软骨细胞，当应用胶原-纤维蛋白为载体制备出软骨组织工程培养物后，能较好地修复自体关节软骨损伤。     

低硒与大骨节病患者软骨胶原研究

大骨节病是一种主要侵犯生长发育期儿童成骨性透明软骨(骺、骺板及关节软骨)的地方病,患者短指和四肢关节增粗,严重者身材矮小畸形,丧失劳动能力.以住研究表明大骨节病患者除软骨细胞萎缩、变性和坏死外,还发现其软骨胶原代谢障碍,尿中排出的胶原特有氨基酸-羟脯氨酸量低[1],胶原纤维超微结构异常,关节和骺软骨基质中胶原纤维直径变小、横纹模糊或消失[2],至今软骨胶原这种生化和病理改变的原因不清.1972年莫东旭首次观察到大骨节病区水、粮硒含量低以来,现已证实我国大骨节病区基本分布于低硒地带.大骨节病的X线患病率与发硒、尿硒含量之间显著负相关,存在剂量反应关系[3],补硒可以纠正大骨节病患者低硒营养状态,促进干骺端病变修复和防止其恶化,减少该病新发[3,4],低硒与大骨节病的发生或发展有关联.硒是人体必需的微量元素,胶原是软骨主要成分之一,占软骨基质干重的46.1%～63.7%,维持着软骨组织的结构和功能.深入研究低硒与大骨节病患者软骨胶原关系有助了解低硒在大骨节病中的作用,本文介绍了近年低硒与大骨节病患者软骨胶原方面的人体研究和基础实验结果,供参考.