基于海马CA1区微量注射AMPA对肝郁脾虚证模型大鼠杏仁核BLA区阳性细胞的影响探讨逍遥散的调节机制

目的运用免疫组化方法,对比海马CA1区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)对肝郁脾虚证模型大鼠杏仁核BLA区AMPA受体亚基阳性细胞的影响,探讨逍遥散调节肝郁脾虚证的机制。方法 25只SD雄性大鼠随机等分为5组,正常组、模型组、假手术组、AMPA组和逍遥散组。以21 d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型,于模型大鼠双侧海马CA1区,埋管微量注射AMPA受体的激动剂AMPA,逍遥散组造模方法和AMPA组尽可能相似,突出逍遥散和AMPA干预的可比性。运用免疫组化方法检测杏仁核基底外侧区(BLA区)AMPA受体的2个重要亚基谷氨酸受体1(GluR1)和谷氨酸受体2(GluR2)的阳性细胞数变化情况,比较逍遥散组和AMPA组上述指标的变化趋势是否一致。结果造模21 d后,在杏仁核BLA区,与正常组比较,AMPA组和逍遥散组GluR1和GluR2阳性细胞数表达差异均无统计学意义(均P>0.05);与模型组比较,AMPA组和逍遥散组GluR1和GluR2阳性细胞数表达差异均有统计学意义(均P<0.01),且2组GluR1阳性细胞数表达均较模型组增高,GluR2阳性细胞数表达均较模型组降低,2组阳性细胞数表达升降趋势一致。各组阳性细胞积分光密度结果与阳性细胞数结果一致。结论结合前期实验,从免疫组化角度进一步推断逍遥散通过纠正杏仁核和海马AMPA受体的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,从而治疗肝郁脾虚证。     

肝郁脾虚证大鼠双侧海马CA1区注射AMPA后行为的变化及逍遥散的调节作用

目的从行为学角度进一步探讨逍遥散治疗肝郁脾虚证的调节机制。方法 75只SD雄性大鼠随机分为5组,正常组、模型组、假手术组、α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)组和逍遥散组。以21 d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型,于模型大鼠双侧海马CA1区,埋管微量注射AMPA受体的激动剂AMPA,逍遥散组造模方法和AMPA组尽可能相似,突出逍遥散和AMPA 2种干预的可比性。于第1、7、14、21 d分别比较AMPA组和逍遥散组行为变化各项指标趋势是否一致。结果模型组大鼠逐步呈现肝郁脾虚证表现,AMPA组、逍遥散组大鼠焦躁状态逐步得到抑制。造模第21天,与正常组比较,AMPA组和逍遥散组大鼠穿格次数、站立次数、修饰次数等指标均无统计学意义(P>0.05)。结论从宏观行为学角度,初步推断逍遥散可能通过纠正杏仁核和海马的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,来治疗肝郁脾虚证。     

逍遥散与肝郁脾虚证方证相关研究

逍遥散多应用于临床各科肝郁脾虚证的治疗,疗效确切,近几年运用现代研究手段对逍遥散与肝郁脾虚证的方证相关方面进行了较为深入的研究,但对逍遥散方证的研究仍然有限。     

逍遥散对肝郁脾虚证模型大鼠中枢GluR1、GluR2表达的影响

目的 观察慢性束缚应激大鼠海马及杏仁核谷氨酸受体1(GluR1)、谷氨酸受体2(GluR2)表达的变化及逍遥散对其的影响.方法 雄性SD大鼠30只,按体重随机分为3组,每组10只:A组,正常对照组;B组,模型组;C组,逍遥散组.B、C组以慢性束缚方法制作应激模型,A组散养于各自饲养箱.自造模第1天开始,C组每日在束缚前1 h灌服逍遥散有效组分悬液;A、B组灌服等量蒸馏水.造模21 d结束后,各组大鼠麻醉后灌注取脑,冰冻切片后行GluR1、GluR2免疫组织化学染色.结果 模型组的GluR1在海马CA1和DG区表达增多;GluR2在CA1、CA3和DG区表达下降;GluR1和GluR2在基底外侧杏仁核(BLA)区均无明显变化.逍遥散可下调GluR1阳性细胞及免疫阳性物表达,上调GluR2阳性细胞数及免疫阳性物表达.结论 肝郁脾虚证模型大鼠α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基GluR1和GluR2在海马的表达趋势不同;海马CA1区可能是肝郁脾虚证模型大鼠突触可塑性的最敏感部位;逍遥散对GluR1和GluR2表达的调节呈现出区域选择性、时相性和双向调节作用.     

大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型的研究

大鼠每天经一定时间限制活动和束绑后肢３周后,用５％醋酸灌注大鼠结肠造成溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型。大鼠分别在３、６、１２ｄ后处死检测实验指标。结果表明：模型组大鼠体重下降、粪便溏泄、肾上腺重量增加、胸腺重量下降;结肠粘膜在光镜下可见到大量炎细胞浸润、出血、水肿、粘膜溃疡等;大鼠脾Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖反应能力明显下降;全血粘度在４５、１８、１１２５ｓ－１切变率时比明显升高;造模１２ｄ后,模型组大鼠下丘脑单胺类激素如去甲肾上腺素、多巴胺、５－羟色胺显著升高;以上各项均比单纯醋酸诱导组改变明显。用疏肝健脾方药治疗后上述指标改善明显     

肝郁脾虚证患者口服加味逍遥散后阿魏酸的血药浓度HPLC测定法

目的　建立加味逍遥散汤剂中阿魏酸 (FA)在肝郁脾虚证患者体内血药浓度测定的HPLC法。方法　应用乙腈提取法预处理血样 ,RP -HPLC法测定 10例肝郁脾虚证患者在口服加味逍遥散汤剂后 8个时间点血清样本中的FA浓度。色谱条件 :KromasilC18柱 ( 2 5 0mm× 4.6mm ,5 μm)为固定相 ;甲醇 -水 -冰醋酸 ( 40∶5 9.6∶0 .4,V/V)为流动相 ,流速 :1.0mL/min ;检测波长λ :32 2nm。FA用内标 (对 -羟基苯甲醛 )鉴定。结果　FA的最低检测限为 0 .46 2ng(S/N =3) ,血清最低检测限浓度 4.6 92ng/mL ;线性范围为 7.82～ 195 .5ng/mL(r =0 .9971)。结论　本法简便、快速、灵敏、准确而专一 ,适用于肝郁脾虚证患者口服加味逍遥散汤剂后血清FA的测定。     

肝郁脾虚证大鼠模型的建立与评价

目的 通过动物行为学、宏观表征、尿D-木糖排泄率确证慢性束缚应激方法 造成大鼠肝郁脾虚证模型.方法 60只大鼠随机等分为3组,对照组、模型组和逍遥散组.通过以下三方面对此模型评价:①对大鼠宏观表征、食量、体重、粪便变化及反映小肠吸收功能的尿D-木糖排泄率检测;②利用Noldus公司的行为学设备(The Observer 5.0分析软件),对大鼠旷场实验进行分析,了解大鼠的焦虑、抑郁程度,验证模型是否成功;③以方测证:逍遥散的调节作用.结果 模型组大鼠由初次束缚时反抗不安,逐步转变为神态倦怠、烦躁、毛发枯黄散乱无光泽、大便稀溏等;模型组大鼠体重增长缓慢;尿D-木糖排泄率逐渐降低;第7天开始穿格数、站立次数、修饰次数均有下降趋势,第21天达到最低点.而逍遥散有显著的治疗调节作用.结论 本实验利用慢性束缚方法 造成大鼠肝郁脾虚证模型,模拟郁怒日久、木郁乘土、肝郁脾虚的病理演变过程,成功复制出大鼠肝郁脾虚证模型.     

肝郁脾虚证患者口服加味逍遥散后血清阿魏酸药动学研究

目的观察加味逍遥散汤剂中当归来源的阿魏酸在肝郁脾虚证患者体内的药代动力学特征。方法选取肝郁脾虚证患者10例,测定患者在口服加味逍遥散汤剂5、10、15、30、60、90、120 m in的血清样本中阿魏酸的浓度。结果肝郁脾虚证患者阿魏酸的血药浓度-时间曲线符合二室开放模型,其吸收半衰期为(15.61±9.77)m in,分布半衰期为(41.54±23.95)m in,消除半衰期为(91.01±64.14)m in。结论明确阿魏酸在肝郁脾虚证患者体内的药代动力学特征,为临床用药提供一定的参考作用。     

益肝逍遥散联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎肝郁脾虚证临床观察

目的:观察益肝逍遥散联合拉米夫定(LAM)治疗中度慢性乙型肝炎(CHB)肝郁脾虚证的疗效性和安全性。方法:106例中度慢性乙型肝炎肝郁脾虚证患者随机分为两组,治疗组给予乙肝逍遥散联合LAM治疗,对照组给复方益肝灵、黄芪精口服液及LAM治疗,每组连用3个月。分别检测两组患者治疗前后肝功能、血脂、肝纤维化指标(HA、LN、PCⅢ、IV-C)、HBV标志物(HBsAg、HBeAg、抗-HBc、HBV-DNA)、细胞因子(cytokines)IL-2、IL-4和肝脏B型超声直方图灰阶值(B-ultrasonic histogram gray scale of live),同时观察治疗前后中医证候积分的变化,并用统计学方法,分析比较两组患者治疗前后各项指标的差异。结果:经3个月治疗后,临床数据统计处理发现,慢性乙型肝炎患者的中医证候积分、肝功能、血脂、肝纤维化指标、乙肝病毒复制指标、IL-2、IL-4和肝脏B型超声直方图灰阶值,两组均得到不同程度的改善,治疗组好于对照组(P0.01或P0.05),差异均有统计学意义。治疗组的显效率和总有效率分别为60.37%和81.13%,显著高于对照组的24.52%和54.72%(P0.01或P0.05)。结论:益肝逍遥散联合LAM治疗慢性中度乙型肝炎肝郁脾虚证疗效显著,副作用少,安全度高且复发率低(3.8%)。     

肝郁、脾虚和肝郁脾虚证模型大鼠行为学变化及柴疏四君子汤对其作用的比较

目的比较肝郁证、脾虚证和肝郁脾虚证模型大鼠的行为学变化及柴疏四君子汤对其作用的异同。方法大鼠随机分为正常组、肝郁组、脾虚组、肝郁脾虚组、肝郁干预组、脾虚干预组、肝郁脾虚干预组共7组,每组13只。3个证候模型组及各干预组大鼠分别采用慢性束缚、过度疲劳+饮食失节、慢性束缚+过度疲劳+饮食失节法造模,正常组不予处理;于造模第2周末,3个证候干预组大鼠按2.86 g/kg分别给予柴疏四君子汤灌胃,连续2周;各模型组和正常组给予等量蒸馏水。实验第14天和第28天,旷场实验法观察各组大鼠的行为特征,记录爬格数、直立次数、中央格停留时间、修饰时间及测算活动里程数。结果实验2周末时,与正常组相比,肝郁组和脾虚组大鼠爬格数、直立次数和里程数均显著升高(P0.05),肝郁脾虚组则均显著降低(P0.05);肝郁组和肝郁脾虚组中央格停留时间显著升高、修饰时间降低(P0.05),脾虚组变化与之相反(P0.05)。实验4周末时,与正常组相比,3个证候模型组大鼠爬格数和里程数均显著降低(P0.05),其中肝郁组和肝郁脾虚组还见直立次数和修饰时间显著降低(P0.05),中央格停留时间显著升高(P0.05),脾虚组的相关指标变化相反。中药干预2周后的变化:与相应模型组相比,肝郁干预组大鼠爬格数、里程数显著升高(P0.05),中央格停留时间显著降低(P0.05);脾虚干预组还见修饰时间显著升高(P0.05),而直立次数显著降低(P0.05);肝郁脾虚干预组各参数均显著升高(P0.05)。结论 3个证候模型大鼠在自主活动方面均存在不同程度的异常,其中肝郁证大鼠中枢的兴奋性由强转弱,脾虚证大鼠呈中枢神经系统反应失调,肝郁脾虚证大鼠呈现抑制渐进加重的趋势。柴疏四君子汤对3个证候模型的行为学指标均有一定的改善作用,但以对肝郁脾虚证的综合干预效应最优。     

肝郁脾虚型肠易激综合征便秘大鼠模型的建立和评价

目的：筛选便秘型肠易激综合征动物模型的最佳建立方法,并探讨所建立模型的中医证候属性。方法：分别采用母婴分离法、冰水灌胃法、限水法、母婴分离结合冰水灌胃法、母婴分离结合限水法制作便秘大鼠模型,观察大鼠一般行为学变化、体重和24h进食量,测定4h内排便颗粒数,并对大鼠粪便进行Bristol分型积分和含水量测定,采用直肠扩张实验评价内脏敏感性,观察各组大鼠肠组织形学变化,筛选出符合IBS-C临床特征的动物模型建立方法。并采用复方中药逍遥散进行反证,判定模型的中医证候范畴。结果：采用母婴分离结合冰水灌胃法建立的模型具有排便颗粒数减少,粪便含水量降低, Bristol分型积分显示为便秘型的特征,且其肠道敏感性显著升高,结肠组织无形态学改变,符合IBS-C的临床特征。经逍遥散验证,该IBS-C模型属于中医“肝郁脾虚证”范畴。结论：母婴分离结合冰水灌胃法能够建立中医肝郁脾虚证IBS-C大鼠模型,能高度拟合IBS-C的临床特征,造模成功率高。     

肠乐胶囊对肝郁脾虚型肠易激综合征模型大鼠的影响

目的探讨肠乐胶囊对肝郁脾虚型肠易激综合征(IBS)模型大鼠的治疗作用及其作用机制。方法以番泻叶水煎剂加四肢束缚应激刺激的方法建立肝郁脾虚型IBS大鼠模型,观察肠乐胶囊对模型大鼠体质量、粪便含水量、稀便级数、小肠炭末推进百分率、血清中5-羟色胺(5-HT)含量及大鼠结肠黏膜组织形态学的影响。结果肠乐胶囊可有效减缓肝郁脾虚型IBS模型大鼠体质量的下降;明显降低肝郁脾虚型IBS模型大鼠的粪便含水量、稀便级数、小肠炭末推进百分率、血清中5-HT的含量;各给药组结肠黏膜结构基本完好,未见明显充血水肿及炎性细胞浸润。结论肠乐胶囊对肝郁脾虚型IBS模型大鼠有较好的治疗作用,其可能的作用机制是通过降低模型大鼠血清中5-HT含量,改善失调的胃肠运动功能。     

脾虚大鼠模型脑内精氨酸加压素水平和基因表达变化及归脾汤的影响

目的观察脾虚模型脑内对学习记忆有促进作用的精氨酸加压素(AVP)水平和基因表达变化及归脾汤的影响作用。方法采用苦降泻下、饮食失节和劳倦过度法建立脾虚大鼠模型,以免疫组化和原位杂交法检测下丘脑腹侧核、海马CA1区、前额叶皮层AVP水平和基因表达变化。结果模型组上述脑区AVP免疫阳性反应物水平明显降低,治疗组明显升高;模型组海马CA1区、前额叶皮层AVPmRNA表达显著下降;治疗组表达明显升高。结论脾虚模型脑内对学习记忆有促进作用的AVP水平和基因表达有变化,归脾汤可能通过调节AVP水平和基因表达而影响其学习记忆。     

王克穷教授运用逍遥散治疗放疗后乳腺癌经验探析

乳腺癌位居女性恶性肿瘤首位,严重危害女性健康.王克穷教授谙熟经典,擅用经方,认为乳腺癌临证以脾虚肝郁居多,选方遣药时应明辨主证在先,次证居后,法当培补中土为主,佐以疏肝.遵循逍遥散守正创新,在方药组成不变的基础上,通过改变药物剂量,重用方中补脾药物茯苓65～250 g,白术45 g,衍生逍遥散2号治疗脾虚肝郁证之乳腺癌...     

脾虚模型脑内神经肽Y水平和基因表达变化及归脾汤的影响

目的研究脾虚模型脑内神经肽Y基因表达变化及归脾汤的影响作用。方法采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度法建立脾虚大鼠模型,检测下丘脑腹侧核、海马CA1区、前额叶皮层神经肽Y水平和基因表达变化。结果模型组NPY免疫阳性反应物在下丘脑腹侧核、海马CA1区、前额叶皮层明显降低;给予归脾汤的治疗组上述脑区的NPY免疫阳性反应物明显增加。模型组NPYmRNA表达在下丘脑腹侧核、前额叶皮层明显降低;治疗组上述脑区的NPY mRNA表达明显增加。结论脾虚模型学习记忆下降与脑内学习记忆有促进影响作用的神经肽Y水平和基因表达有变化,归脾汤对其有调节作用。     

中医肝郁脾虚证症状分布和特征专家问卷调查研究

目的研究中医肝郁脾虚证的症状分布和特征。方法应用临床流行病学(DME)方法,在全国15家中医三甲医院同步专家问卷调查。结果中医肝郁脾虚证最常见的5个症状依次是脉弦、胸胁胀闷、纳呆食少、舌苔白和神疲乏力。结论肝郁脾虚证问卷调查结果符合中医基本理论,为进一步的患者调查奠定了基础。     

束缚应激大鼠AMPA受体和相关蛋白变化及逍遥散对其影响

目的观察慢性束缚应激状态下海马及杏仁体AMPA受体和相关蛋白的变化及逍遥散的作用。方法使用捆绑的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21d后检测模型大鼠海马CA1区、基底外侧杏仁核(BLA)谷氨酸受体2/3(GluR2/3)、N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)的积分吸光度(IOD)和阳性神经元数。结果7 d模型组大鼠海马CA1区和BLAGluR2/3 IOD较7 d正常组显著增高(P<0.01,P<0.05);7 d模型组海马CA1区GluR2/3阳性神经元数及PICK1 IOD较7 d正常组增高(P<0.05,P<0.01),7 d治疗组(逍遥散)上述指标与7 d模型组相比有显著差异(P<0.01,P<0.05),与7 d正常组比较无差异;21 d模型组与21 d正常组比较,海马CA1区GluR2/3 IOD显著降低(P<0.05)、NSF IOD升高(P=0.06),BLA GluR2/3阳性神经元数增多(P=0.090)、PICK1阳性神经元数减少(P=0.075),21 d治疗组上述指标与正常组比较无显著性差异。结论7 d和21 d束缚应激对AMPA受体影响的变化趋势不同,海马CA1区与BLA的变化趋势也不一致,逍遥散对21 d束缚应激状态下AMPA受体的变化调节较强。     

Effects of ketamine-midazolam anesthesia on the expression of NMDA and AMPA receptor subunit in the peri-infarction of rat brain

BACKGROUND: Activation of N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors and alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid (AMPA) receptors play an important role in the neurons death induced by ischemia. The mitigating effect of intravenous anesthetics on ischemic neuron injury is related to their influence on NMDA receptors. This study was performed to investigate the effect of ketamine-midazolam anesthesia on the NMDA and AMPA receptor subunits expression in the peri-infarction of ischemic rat brain and explore its potential mechanism of neuroprotection. METHODS: Thirty Sprague Dawley (SD) rats were subjected to permanent middle cerebral artery occlusion under ketamine/atropine (100/0.05 mg/kg) or ketamine-midazolam/atropine (60/50/0.05 mg/kg) intraperitoneal anesthesia (n=15 each). Twenty-four hours after ischemia, five rats in each group were killed by injecting the above dosage of ketamine or ketamine-midazolam intraperitoneally and infarct size was measured. Twenty-four and 72 hours after ischemia, four rats in each group were killed by injecting the above dosage of ketamine or ketamine-midazolam intraperitoneally. After staining the brain tissue slices with toluidine blue, the survived neurons in the peri-infarction were observed. Also, the expression level of NMDA receptors 1 (NR1), NMDA receptors 2A (NR2A), NMDA receptors 2B (NR2B) and AMPA (GluR1 subunit) were determined by grayscale analysis in immunohistochemical stained slices. RESULTS: Compared with ketamine anesthesia, ketamine-midazolam anesthesia produced not only smaller infarct size [(24.1+/-4.6)% vs (38.4+/-4.2)%, P<0.05], but also higher neuron density (24 hours: 846+/-16 vs 756+/-24, P<0.05; 72 hours: 882+/-22 vs 785+/-18, P<0.05) and lower NR2A (24 hours: 123.0+/-4.9 vs 95.0+/-2.5, P<0.05; 72 hours: 77.8+/-4.1 vs 54.2+/-3.9, P<0.05) and NR2B (24 hours: 98.5+/-2.7 vs 76.3+/-2.4, P<0.05; 72 hours: 67.2 +/-7.5 vs 22.2+/-2.6, P<0.05) expression level in the peri-infarction following ischemia. CONCLUSION: The protective effects of ketamine-midazolam anesthesia on ischemic brain injury may related to decreasing NR2A and NR2B expression.