荧光定量逆转录聚合酶链反应检测婴幼儿粪便A组轮状病毒

目的建立一种快速、准确、定量检测A组轮状病毒方法。方法选择轮状病毒内壳蛋白基因作为A组轮状病毒的靶序列,设计合成引物和探针;与世界卫生组织(WHO)推荐的轮状病毒胶体金法平行检测,评价荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)的敏感性与重复性。收集腹泻患儿粪便样本246份,并对其进行检测分析。结果采用荧光定量逆转录PCR检测A组轮状病毒的敏感性为1.0×101拷贝/μL;246份粪便样本中检出A组轮状病毒68例(27.64%);胶体金法检出A组轮状病毒抗原阳性48例(19.51%)。结论应用荧光定量逆转录PCR能够快速、准确检测A组轮状病毒,适合于大样本检测。     

荧光定量分型PCR法在HBV-DNA检测中的应用

目的：探讨荧光定量分型PCR法在乙型肝炎病毒（HBV）-DNA检测中的作用,为HBV基因的分型提供参考。方法对120份 HBV-DNA阳性样本分别采用荧光定量分型PCR法和直接测序法检测,比较两种方法的检测效果。结果120份样本均被荧光定量分型PCR 法和直接测序法成功分型,荧光定量分型PCR 检出29（24．17％）例混合感染样本,直接测序法检出7（5．83％）例,前者检出率高于后者（χ^2＝15．817,P＝0．000）;两种方法的一致性较好（Kappa 值为81．67％）;检测结果不一致的样本经TA 克隆后,证实与荧光定量分型PCR 法的检测结果一致。结论荧光定量分型PCR 法是一种简便、快速高效的HBV 基因分型法,对基因型混合感染样本的检出率高于直接测序法,且正确率高。     

一起诺如病毒Ⅰ、Ⅱ型混合感染引起的感染性腹泻疫情调查

目的应用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测技术,对疑似诺如病毒感染引起的腹泻疫情标本进行核酸检测,为疫情控制提供准确可靠的技术支持。方法从18例粪便标本中提取RNA,进行诺如病毒核酸荧光定量RT-PCR检测。结果18份标本中有13份诺如病毒核酸RT-PCR检测阳性,阳性率为72.2%。其中6份标本中检出诺如病毒Ⅰ型;6份标本中检出诺如病毒Ⅱ型;有1份标本同时检出诺如病毒Ⅰ型、Ⅱ型。结论应用荧光定量RT-PCR技术,对诺如病毒进行核酸检测结果准确可靠。     

婴幼儿腹泻患者A群轮状病毒快速检测分析及临床意义

目的 了解内江地区婴幼儿腹泻患者粪便中A群轮状病毒检测情况,探讨A群轮状病毒快速检测在临床辅助诊断和治疗中的意义.方法 对内江市第一人民医院2007～2010年3 738份婴幼儿腹泻粪便标本采用胶体金法快速检测A群轮状病毒.结果 3 738份腹泻婴幼儿粪便标本中1 052份A群轮状病毒阳性,阳性率为28.14%.年龄段以0～1岁的婴幼儿感染率最高,达到34.21%;与4～5岁、6～7岁和8～9岁组比较差异有统计学意义(P<0.01).从发病月份上看,每年10～12月的阳性率明显高于其他月份,与4～6月和7～9月比较差异有统计学意义(P<0.01).不同性别患儿间阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 胶体金法检测具有操作简便、快速、准确、特异性强、阳性率高等特点,为临床诊断和治疗轮状病毒致腹泻、胃肠炎的婴幼儿提供了及时、准确的客观依据.     

三种婴幼儿A组轮状病毒检测方法的方法学评价

目的比较婴幼儿A组轮状病毒三种不同检测方法的优劣性。方法选择318例婴幼儿粪便或肛拭子标本分别行酶联免疫吸附(ELISA)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、胶体金法(GICA)、荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测A组轮状病毒,并以荧光定量RT-PCR为标准,对ELISA、PAGE、GICA进行方法学评价。结果四种检测方法阳性率:ELISA 55.0%、PAGE 43.1%,GICA 53.2%,RT-PCR 58.5%;以RT-PCR为对照,灵敏度(91.4%)、约登指数(0.876)、符合率(93.4%)、阴性预测值(95.5%)以ELISA最高,特异度(99.2%)、阳性预测值(99.3%)以PAGE最高。结论 ELISA、GICA检测A组轮状病毒操作简单,方法学评价指标良好,适合在基层医院推广应用。     

实时荧光定量PCR方法检测青藏高原喜马拉雅旱獭血样中布鲁氏菌DNA

  目的   应用实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法检测青藏高原喜马拉雅旱獭血样中布鲁氏菌DNA。  方法   2019—2020年收集青海省青藏高原喜马拉雅旱獭全血,进行布鲁氏菌病血清学试验,包括虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）微量法、胶体金免疫试验（GICA）,阳性标本进行real-time PCR检测。 分析real-time PCR方法的灵敏度、特异度等指标,评价其结果的准确性。  结果   共收集全血1 466份,RBT检出阳性64 份,GICA检出阳性28份,SAT检出阳性18份。64 份RBT阳性标本进行real-time PCR检测,其中56份标本及阳性对照菌株有特异的荧光扩增曲线,8份标本及阴性对照无特异的扩增曲线。 real-time PCR与SAT、GICA比较灵敏度为100%,与RBT比较特异度为99.93%,Kappa值为0.81,高度一致。  结论   与传统方法相比,real-time PCR方法具有快速、特异等优点,可以用于青藏高原喜马拉雅旱獭样本检测。     

实时荧光定量PCR快速检测脑膜炎奈瑟菌的临床价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)快速检测流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)病原菌脑膜炎奈瑟菌(Nm)的临床价值。方法收集70例疑似流脑病例的双份脑脊液标本,1份采用细菌培养法进行检测,另1份采用实时荧光定量PCR进行检测,比较2种方法的检出阳性率以及敏感性和特异性。结果采用细菌培养法检出Nm阳性49例,阳性率为70.00%;实时荧光定量PCR检出Nm阳性67例,阳性率为95.71%,二者阳性率比较差异有统计学意义(P0.05)。实时荧光定量PCR检测结果与细菌培养法阳性符合率为70.00%,其中有18例细菌培养法为阴性而实时荧光定量PCR为阳性。实时荧光定量PCR检测Nm的特异性为100%,无假阴性结果,阳性预测值为73.13%,阴性预测值为0.00%,检测下限为103拷贝/m L,线性范围为2×103~2×107拷贝/m L。结论实时荧光定量PCR检测Nm敏感性高、特异性强,且快速简便,为流脑流行病学调查提供了一种快速、简便的病原学诊断手段。     

G1型轮状病毒分子生物学检测及临床应用价值

目的探讨G1型轮状病毒（rotavirus,RV）的分子生物学检测及其在RV感染性腹泻诊治中的应用价值。方法收集90例腹泻患儿第1、3天大便标本各90份,根据RV基因序列,结合文献设计针对RV G1型引物和探针,采用PCR法检测第1天标本中RV核酸,以免疫胶体金法检测第1、3天标本中RV抗体,比较2种方法检测阳性率。将PCR检测阳性病例随机分为2组,观察组立即行抗病毒及对症治疗,对照组在免疫胶体金法RV抗体阳性时再行上述治疗,比较2组住院时间。结果 PCR法共检出RV核酸51例,检测阳性率（56.7%）与第1天免疫胶体金法检测阳性率（6.7%）比较差异有统计学意义（P〈0.01）,与第3天阳性率（48.9%,）比较差异无统计学意义（P〉0.05）;观察组住院时间（（8.0±2.5）d）低于对照组（（15.0±1.5）d）（P〈0.05）。结论 PCR技术对RV G1型检测具有较高特异性和敏感性,有助于疾病的早期诊断与治疗。     

新生儿轮状病毒无症状感染的聚合酶链反应研究

选用与 A 组人类轮状病毒(Human Romvirus,HRV)编码 VP7蛋白的第9基因(或8)两个保守序列互补的引物,建立检测 A 组 HRV dsRNA 的聚合酶链反应技术,扩增产物片段约342bp。经逆转录—聚合酶链反应(RT—PCT)检测18例无腹泻症状新生儿89份粪便标本,并与聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法进行比较,结果前者检出 HRV 核酸54份(60.7%),而后者则检出35份(39.3%),PCR 结果可能比较接近新生儿排泌轮状病毒的实际情况。     

实时荧光定量PCR检测人粪便中空肠弯曲杆菌方法的建立与评价

目的：建立一种快速检测人粪便样本中空肠弯曲杆菌的实时荧光定量 PCR方法。方法根据空肠弯曲杆菌保守序列设计特异引物,建立空肠弯曲杆菌的实时荧光定量 PCR检测法。对该方法的线性范围、抗干扰能力进行考察。同时采用培养法和实时荧光定量 PCR法对150例粪便样本进行检测,以培养法检测结果作为参照标准,对实时荧光定量 PCR方法的灵敏度、特异度、准确度和重复性进行考察。采用 Kappa检验对两种检测方法的结果进行统计学分析。结果建立的实时荧光定量PCR方法标准曲线线性关系良好Y＝-3.51 Log（X）＋37.09,相关系数为0.996,理论检测下限为102 CFU/ml。抗干扰能力强,仅空肠弯曲杆菌出现特异性扩增曲线。与培养法相比,其灵敏度、特异度、准确度分别为92.4％,95.8％和94％;检测结果重复性良好（CV％＜5％）。统计学分析显示两种方法检测结果具有一致性,且一致性强度为极强（Kappa＝0.88,P＜0.05）。结论实时荧光定量PCR法能准确快速检测粪便样品中的空肠弯曲杆菌。     

623份婴幼儿腹泻标本A群轮状病毒检测分析

目的探讨婴幼儿腹泻患者粪便中A群轮状病毒检测对临床辅助诊断的价值。方法采集腹泻患儿的粪便,用免疫层析双抗体夹心法原理即胶体金法定性检测A群轮状病毒。结果623份腹泻婴幼儿粪便标本中189份A群轮状病毒阳性,阳性率为30.34%。年龄段以1岁以下的婴幼儿感染率最高,达到36.59%;其次为1～2岁婴幼儿感染率为30.14%;随着年龄增大,轮状病毒感染率随之降低。从发病季节上看,每年第四季度腹泻患儿轮状病毒的阳性率明显高于前3个季度,以第二季度和第三季度较低。结论A群轮状病毒胶体金法定性检测为儿科感染性与病毒性腹泻病因早期快速鉴别诊断提供了可靠依据。     

GeneXpert实时荧光定量PCR快速检测艰难梭菌的临床评估

目的对GeneXpert实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测临床粪便标本中艰难梭菌的应用进行评估。方法采用双拭子蘸取临床未成形粪便标本,一支拭子用于GeneXpert实时荧光定量PCR检测艰难梭菌毒素基因tcdB,另一支用于常规厌氧菌培养检测;对GeneXpert实时荧光定量PCR检测结果与常规厌氧菌培养结果的一致性进行统计学分析,并计算GeneXpert实时荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值等参数。结果临床收集到141例未成形粪便标本,GeneXpert实时荧光定量PCR检出艰难梭菌毒素基因tcdB阳性42例,其中常规厌氧菌培养阳性34例,两者一致性较好(Kappa=0.775 0,P0.01),GeneXpert实时荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为87.2%、92.2%、81.0%和94.9%。结论 GeneXpert实时荧光定量PCR直接检测粪便标本中的艰难梭菌具有检测快速、操作简便等优点,有重要的临床应用价值。     

天津地区急性腹泻患儿肠道病毒感染临床特征和流行病学分析

目的 了解天津地区可引起儿童腹泻的常见肠道病毒的临床和流行病学特征,为指导儿童病毒性腹泻的防治提供参考。方法 收集2019年8月—2020年7月天津市儿童医院1 102例急性腹泻住院患儿临床资料和粪便样本,患儿男680例、女422例,年龄1～148个月。采用胶体金免疫层析技术检测轮状病毒和肠道腺病毒,采用逆转录聚合酶链反应（PCR）检测诺如病毒。分析病毒检测结果和临床资料信息。结果 1 102例粪便样本中,有421例（38.2%）检出病毒阳性,诺如病毒、轮状病毒、腺病毒的检出率分别为24.9%、11.0%、2.4%。诺如病毒和轮状病毒冬、春季检出率较高,腺病毒夏、秋季检出率较高。不同年龄患儿3种肠道病毒检出率差异有统计学意义（P<0.05）,不同性别患儿诺如病毒和腺病毒检出率差异有统计学意义（P<0.05）。不同肠道病毒引起的发热、咳嗽、呕吐、腹痛等急性腹泻伴随症状发生率不同（P<0.05）;腺病毒感染患儿水、电解质和酸碱平衡紊乱的发生率更高（P<0.05）;轮状病毒感染患儿粪便常规脂肪滴检出率和外周血白细胞下降发生率更高（P<0.05）。结论 诺如病毒和...     

免疫胶体金法与聚丙烯酰胺凝胶电泳检测儿童腹泻A组轮状病毒

目的及早发现腹泻患儿中轮状病毒感染状况，为合理选用轮状病毒检测方法及其预防控制提供参考依据。方法采用胶体金法对武汉市儿童医院部分腹泻患儿进行轮状病毒检测，与聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）进行比较研究。结果对280份儿童腹泻患儿愉测，胶体金法和PAGE法阳性检出率各为79．64％和48．93％，两者比较差异有显著性（P〈0．05）；以聚合酶链反应（PCR）为检测最终标准，胶体金法敏感性和PAGE特异性分别达95．2％和95．8％。结论胶体金法检测儿童腹泻轮状病毒敏感性高，在临床中可作为简便快速的重要筛检手段，PAGE能明显提高其鉴别诊断能力。     

西安地区学龄前腹泻患儿轮状病毒快速检测分析

目的 调查西安地区儿童轮状病毒腹泻的流行状况及其影响因素。方法 采集西安市儿童医院急性腹泻儿童粪便样本,采用胶体金免疫层析法对腹泻婴幼儿进行轮状病毒抗体检测。结果 2 739例腹泻儿童粪便样本中,547例检测结果为阳性,阳性率为19.97%。轮状病毒检出高峰在12月到次年2月份。结论 西安市儿童医院收治的腹泻患儿轮状病毒检出率较高,2岁以内儿童寒冷季节仍为高发感染对象。     

实时荧光定量PCR法用于人类SLC01B1和ApoE基因多态性检测的方法学评价

目的：探讨在ISO15189实验室认可体系下,实时荧光定量 PCR法检测人类SLC01B1和ApoE基因多态性的方法学评价。方法本文收集经Sanger测序确定基因型的20份DNA样本。采用实时荧光定量PCR法对其中2份样本的SLCO1B1*1b、SLCO1B1*5、ApoE2和ApoE4共4个多态性位点分别批内重复扩增检测10次,以评价方法的精密度;再使用该方法扩增所有样本的4个多态性位点,每个位点检测一次,并与Sanger测序法结果比对,以评价方法的准确性;使用实时荧光定量PCR法对其中1份经梯度稀释的DNA样本进行扩增,以评价方法的最低检测限。结果2份DNA样本扩增所得Ct值变异系数均小于2．5％（≤1％）;与Sanger测序法结果对比,实时荧光定PCR法结果准确性达100％（20／20）;DNA浓度在0．964 ng／μl时,该方法仍可正确检出其基因型。结论借助经典实时荧光定量PCR法,我们能准确、快速地检测临床样本SLC01B1和ApoE基因多态性,用于指导正确合理使用他汀类药物。     

免疫胶体金法与聚丙烯酰胺凝胶电泳检测儿童腹泻A组轮状病毒

目的及早发现腹泻患儿中轮状病毒感染状况,为合理选用轮状病毒检测方法及其预防控制提供参考依据。方法采用胶体金法对武汉市儿童医院部分腹泻患儿进行轮状病毒检测,与聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)进行比较研究。结果对280份儿童腹泻患儿检测,胶体金法和PAGE法阳性检出率各为79.64%和48.93%,两者比较差异有显著性(P<0.05);以聚合酶链反应(PCR)为检测最终标准,胶体金法敏感性和PAGE特异性分别达95.2%和95.8%。结论胶体金法检测儿童腹泻轮状病毒敏感性高,在临床中可作为简便快速的重要筛检手段,PAGE能明显提高其鉴别诊断能力。     

HCV胶体金试剂在急诊患者手术输血前的快速检测

目的应用HCV胶体金试剂对急诊手术患者输血前进行检测,并与抗-HCV ELISA法进行比较。方法对本医院2008年1～10月的3216例急诊手术患者,先应用HCV胶体金试剂检测抗体,再分别用试剂①、②两种抗-HCV试剂进行ELISA法检测。对HCV胶体金试剂、试剂①、②检测为阳性的标本,再进行HCV RNA RT—PCR荧光定量检测。结果3216份标本中HCV胶体金试剂检测阳性25份,抗-HCV试剂①ELISA法检测阳性33份,试剂②检测阳性34份（两种试剂均阳性26份,仅试剂①、②阳性的分别为7和8份）。HCV RNA RT—PCR荧光定量检测阳性28份。结论HCV胶体金法与抗-HCV ELISA法结果符合率为92．59％,与HCV RNA RT—PCR荧光定量法结果符合率89．29％,HCV胶体金试纸法假阳性率低,操作简便、快速,适合急诊患者手术前输血的筛选。     

粪便轮状病毒的检测及临床意义

目的了解婴幼儿腹泻粪便轮状病毒检出状况。方法胶体金法轮状病毒抗原检测,对不同年龄组检出结果进行分析。结果在3 894例婴幼儿腹泻粪便中,其中检出轮状病毒1 569例,阳性率为40.8%。结论轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原体。检测轮状病毒对临床诊断提供重要依据和对婴幼儿进行对症治疗。     

流感病毒快速检测方法特异性和敏感性研究

目的比较多重逆转录聚合酶链反应(mRT-PCR)和胶体金法检测流感病毒的敏感性和特异性。方法采用mRT-PCR和胶体金法检测经细胞培养和红细胞凝集抑制试验(HI)鉴定为A/H1、A/H3、B型流感病毒的鼻咽拭标本78份,阴性鼻咽拭标本40份,并对已稀释成101~105病毒半数感染量(TCID50)/0.1 mL的3株H1、H3、B型流感病毒进行敏感性试验。结果mRT-PCR对A型流感病毒的检测敏感性为44.8%,特异性为97.5%;对B型流感病毒检测敏感性为20.0%,特异性为100.0%。胶体金法对A型流感病毒检测敏感性为44.8%,特异性为100.0%;对B型流感病毒检测敏感性为5.0%,特异性为97.5%。对经20代内狗肾细胞(MDCK)分离培养阳性的4份A/H1、4份A/H3和3份B型流感培养液,mRT-PCR和胶体金法检测的阳性符合率与型别符合率均为100.0%。mRT-PCR检测流感病毒敏感性为103TCID50/0.1 mL;胶体金法检测的敏感性为103TCID50/0.1 mL。结论mRT-PCR和胶体金法的敏感性与特异性无差异;mRT-PCR和胶体金法均可用于人群流感鼻咽拭标本流感病毒快速检...