大黄素对脂多糖诱导后巨噬细胞释放炎症因子的影响

目的:研究大黄素对脂多糖(Lipopolysacchride,LPS)诱导后巨噬细胞RAW264.7释放炎症因子的影响及其分子机制。方法:将细胞分为6组,空白组,LPS组和不同浓度(1μM,5μM,10μM,25μM)大黄素+LPS组,不同浓度的大黄素预处理细胞2 h后,再加入1μg/m L LPS刺激细胞,用ELISA法检测细胞上清液中的TNF-α,IL-1β,IL-6蛋白水平,用RT-PCR法检测炎症因子mRNA表达,用Western-Blot检测核转录因子(NF-κB p65)的磷酸化。结果:LPS刺激后RAW264.7巨噬细胞炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的表达和分泌明显高于空白组,而给予大黄素的LPS组表达和分泌上述细胞因子明显降低,且呈剂量依赖性。LPS刺激后的细胞NF-κB p65磷酸化明显增强,而大黄素则能抑制NF-κB p65的磷酸化,且呈剂量依赖性。结论:大黄素能明显抑制巨噬细胞释放炎症因子,降低mRNA的表达,其作用机制主要通过抑制NF-κB p65磷酸化的信号通路。     

人参多糖对LPS诱导小鼠巨噬细胞炎症因子生成的抑制作用及其机制

目的:研究人参多糖对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用及机制。方法:细胞以2×104个/m L的密度接种于6孔培养板,将细胞分为空白组,LPS组,LPS+地塞米松组,LPS加人参多糖组(质量浓度分别为31.25,62.6,125,250,500 mg·L-1)。用LPS(1 mg·L-1)刺激生长良好的RAW264.7细胞24 h建立体外细胞炎症模型,Griess试剂法检测一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测一氧化氮(NO),TNF-α和IL-6 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞K基因结合核因子抗体核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达。结果:与空白组比较,LPS模型组细胞因子NO,TNF-α,IL-6表达量显著升高(P0.01),炎症模型建立成功。给予人参多糖干预后,与LPS组比较,31.25~500 mg·L-1的人参多糖可以明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞释放炎症因子NO,TNF-α和IL-6水平(P0.05,P0.01),抑制i NOS,TNF-α和IL-6 mRNA的转录(P0.05,P0.01),与LPS组比较,125~500μmol·L-1可以显著抑制细胞核内NF-κB p65的表达(P0.05,P0.01)。结论:人参多糖能明显抑制巨噬细胞炎症因子NO,TNF-α和IL-6过度表达,从而抑制炎症反应,其机制可能与抑制相关炎症因子和mRNA的表达和抑制NF-κB信号通路相关。     

茄根酸性组分对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞核因子kB表达的影响

目的：探讨茄根酸性组分的抗炎机理。方法：以淀粉诱导小鼠腹腔巨噬细胞，用LPS为刺激剂。诱导NF-kB的表达，再用NF-kB P65的抗体与其结合，用流式细胞术测定巨噬细胞表面NF-kB P65亚单位表达的荧光强度，反映NF-kB活化程度。结果：LPS刺激12h后，NF-kB P65的表达明显增加，茄根酸性组分能显著抑制NF-kB的表达（P〈0．01）。结论：抑制NF-kB的活化，可能是茄根酸性组分发挥抗炎作用的主要机理之一。     

不同组方加味藿香正气软胶囊对脂多糖诱导小鼠原代骨髓巨噬细胞炎症相关因子表达的影响

本研究考察不同组方加味藿香正气软胶囊对脂多糖诱导小鼠原代骨髓巨噬细胞炎症相关因子表达的影响。采用原代小鼠骨髓单核细胞用M-CSF诱导成骨髓巨噬细胞,经鉴定后,用脂多糖（LPS）诱导其产生各种炎症因子（TNF-a、IL-6、IL-12p40,NO）,加入不同组方的加味藿香正气软胶囊,收集上清检测各种炎症因子含量。结果显示,原代小鼠骨髓细胞单核细胞经诱导成成熟巨噬细胞,LPS（1μg?mL^-1）能刺激其产生炎症因子,不同组方加味藿香正气软胶囊均能一定程度降低LPS诱导的炎症因子的释放,尤其是苍术代替白术后效果更明显。不同组方藿香正气软胶囊均可降低LPS刺激的炎症因子的产生,减轻其炎症反应,可能是加味藿香正气软胶囊治疗肠道炎症的重要机制之一。     

基于NF-κB通路探讨六神胶囊对脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响

目的探讨六神胶囊的抗炎作用及机制。方法 RAW264.7细胞分为六神胶囊组和地塞米松组,六神胶囊按9.76、4.88、2.44、1.22、0.61、0.31、0.15μg/ml梯度稀释;地塞米松按250、125、62.5、31.25、15.63、7.81、3.91μg/ml梯度稀释,选择细胞存活率大于90%的最大3个六神胶囊浓度和最大无毒剂量的地塞米松进行后续实验。RAW264.7细胞分为空白组,地塞米松组,模型组及六神胶囊高、中、低剂量组。除空白组外,其余各组采用脂多糖诱导建立炎症模型。造模后六神胶囊高、中、低剂量组分别加入筛选浓度的高、中、低浓度六神胶囊溶液各1 ml;地塞米松组加入筛选浓度的地塞米松溶液1 ml;模型组和空白组加入1 ml培养液。24 h后收集细胞上清液检测一氧化氮(NO)的浓度,ELISA法检测细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的含量,实时荧光定量PCR法检测细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达,蛋白印迹实验检测核因子κB p65 (NF-κB p65)、磷酸...     

刺槐素通过核因子κB信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞损伤

目的：探讨刺槐素（Acacetin）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠骨髓巨噬细胞（BMDMs）的抗炎作用机制。方法：CCK-8法检测各浓度刺槐素（5 μmol/L,10 μmol/L,20 μmol/L,40 μmol/L）对小鼠骨髓巨噬细胞增殖的影响,筛选最佳剂量;分离培养小鼠骨髓巨噬细胞,LPS（50 ng/mL）预处理BMDMs（0 min,10 min,30 min,60 min）,加入刺槐素（10 μmol/L）孵育0.5 h。蛋白质印迹法检测p65、磷酸化p65（p-p65）、核因子κB抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化IκBα（p-IκBα）的表达,激光共聚焦观察核因子κB核转位情况。结果：CCK-8结果显示,5~40 μmol/L的刺槐素对小鼠骨髓巨噬细胞增殖无明显影响,结合课题组前期研究结果,选择10 μmol/L刺槐素作为后续研究剂量;与空白对照组比较,LPS不同时间刺激组p-p65、p-IκBα的表达水平均显著增加,给予刺槐素治疗后,能显著降低p-核因子κB p65和p-IκBα的表达;刺槐素能抑制LPS介导的核因子κB p65核转位。结论：刺槐素的抗炎作用与抑制核因子κB信号通路有关,刺槐素可作为一种有潜力的候选抗炎药物。     

重楼总皂苷对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α及IL-1β的影响

目的:探讨重楼总皂苷对细菌内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)分泌TNF-α、IL-1β的影响.方法:分离并纯化大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ),与重楼总皂苷共同孵育,2小时后予LPS(100ng/ml)诱导PMΦ释放TNF-α、IL-1β,以ELISA酶联免疫吸附测定法检测上清液中TNF-α、IL-1β浓度.结果:重楼总皂苷对LPS诱导PMΦ释放TNF-α、IL-1β具有显著的抑制作用(P＜0.01).结论:重楼总皂苷可以抑制腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β的活性.     

脂多糖体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4m RNA表达的影响

目的 探讨时间和剂量对脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4mRNA表达的影响.方法 常规提取和培养小鼠腹腔巨噬细胞.时效实验,加入终浓度为1 μg/ml LPS,分别刺激1,3,6,12 h后取材;量效实验,分别加入终浓度为0.00,0.01,0.1,1,10 μg/ml LPS, 3 h后取材.小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4 mRNA的表达采用RT-PCR进行.结果 ①在LPS 1μg/ml 剂量下6 h内,随着时间的延长,TLR2/4mRNA的表达量逐渐上升,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01);但刺激时间达12 h时,细胞开始脱壁、死亡.②在LPS 0.01~1 μg/ml 剂量范围内,随着LPS浓度的增加,TLR2/4mRNA的表达量逐渐上升,呈一定剂量依赖关系,与空白对照组相比有显著性差异,(P<0.05或P<0.01);但当LPS浓度达10 μg/ml,TLR2/4 mRNA的表达量反而下降.结论 用LPS体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞,在0.01~1 μg/ml浓度范围内,在1~6 h时间内,其TLR2/4 mRNA的表达呈现出一定的时效与量效关系,该研究可为今后的研究者提供有益的时间和剂量参考.     

三七总皂苷对小鼠巨噬细胞炎性反应的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对小鼠巨噬细胞炎性反应的治疗作用,同时探讨其可能机制。方法:通过蛋白质免疫印迹实验、实时PCR法、酶联免疫吸附试验,对照研究PNS对小鼠巨噬细胞系RAW 246.7细胞中炎性反应调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)以及其下游调控的炎性反应递质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)和重组人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF),白细胞介素6(IL-6),炎性反应相关氧化因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶-2(COX-2)表达的影响。结果:小鼠巨噬细胞炎性反应模型制备后TNF-α、CRP、M-CSF、IL-6、iNOS及COX-2水平明显上调,三七总皂苷给药后,细胞炎性反应递质与造模组比较有显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:三七总皂苷可明显抑制小鼠巨噬细胞炎性反应效应,其作用机制可能通过激活调控因子PPAR-α实现。     

茄根酸性组分对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞核因子κB表达的影响

目的:探讨茄根酸性组分的抗炎机理。方法:以淀粉诱导小鼠腹腔巨噬细胞,用LPS为刺激剂,诱导NF-κB的表达,再用NF-κB P65的抗体与其结合,用流式细胞术测定巨噬细胞表面NF-κB P65亚单位表达的荧光强度,反映NF-κB活化程度。结果:LPS刺激12 h后,NF-κB P65的表达明显增加,茄根酸性组分能显著抑制NF-κB的表达(P<0.01)。结论:抑制NF-κB的活化,可能是茄根酸性组分发挥抗炎作用的主要机理之一。     

灵芝多糖对小鼠巨噬细胞cAMP含量的影响

目的：研究灵芝多糖（ＧＬＢ_７） 对小鼠巨噬细胞（ＭФ） 内ｃＡＭＰ含量的影响,为其免疫增强作用机制提供依据。方法：采用细胞培养和竞争性蛋白结合分析法测定小鼠腹腔ＭФ中ｃＡＭＰ含量。结果：ＧＬＢ_７ 能剂量依赖性引起小鼠腹腔ＭФ中ｃＡＭＰ浓度快速升高,５ ｍｉｎ 达峰值,之后缓慢下降,至３０ ｍｉｎ 时基本恢复原来水平。结论：ＧＬＢ_７ 引起小鼠ＭФｃＡＭＰ浓度快速升高,可能与其增强小鼠免疫功能有关。     

The Effects of Propolis and its Isolated Compounds on Cytokine Production by Murine Macrophages

Since propolis and phenolic compounds, such as cinnamic and coumaric acids, have several biological properties, their immunomodulatory effect on cytokine production (IL‐1β, IL‐6 and IL‐10) was investigated. Peritoneal macrophages from BALB/c mice were incubated with propolis, coumaric and cinnamic acids in different concentrations and the concentrations that inhibited cytokine production were tested before or after macrophage challenge with LPS, to evaluate a possible immunomodulatory action. Propolis and the acids stimulated IL‐1β production, while IL‐6 production was significantly inhibited after incubation with propolis (5, 50 and 100 µg/well), coumaric and cinnamic acids (50 and 100 µg/well). In LPS‐challenge protocols, inhibitory concentrations of cinnamic and coumaric acids after LPS incubation prevented efficiently its effects on IL‐6 production, whereas propolis inhibited LPS effects both before and after its addition. Propolis, coumaric and cinnamic acids (50 and 100 µg/well) inhibited IL‐10 production as well. Both acids showed a similar inhibitory activity on IL‐10 production when added after LPS challenge, while propolis counteracted LPS action when added before and after LPS incubation. Propolis modulated the immune/inflammatory response, depending on the concentration. Its efficiency may occur due to the synergistic effect of its compounds, and cinnamic and coumaric acids may be involved in the action of propolis on cytokine production. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

金振口服液对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的实验研究

目的：探讨金振口服液（JZKFY）对脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）大鼠的影响。方法：实验动物随机分为正常组、模型组、阳性对照组、JZKFY 高、中、低3 个剂量（4.4、2.2、1.1 g·kg-1）,各给药组连续灌胃给药7 天;末次给药后1 h,除正常组外,每鼠气管内滴注LPS（6 mg·kg-1）复制LPS 致ALI 大鼠模型,正常对照组给予等体积生理盐水,注射LPS 16 h 后麻醉大鼠,取肺,进行组织学观察,并检测肺通透性、肺组织MPO、MDA、SOD 活性、血清TNF-ɑ、IL-6、IL-1β的含量。结果：JZKFY 高、中、低剂量组均能降低肺通透指数;JZKFY 高、中剂量组能调节肺组织MPO、MDA、SOD 活性;JZKFY 高、中剂量组明显降低血清TNF-ɑ、IL-6、IL-1β的含量;JZKFY 高、中剂量组明显改善ALI 的肺组织病变。结论：JZKFY 对LPS 诱导的急性肺损伤具一定的改善作用,其机制可能与改善肺血管通透性,减轻肺内中性粒细胞聚集,提高抗氧化应激能力及下调炎症反应有关。     

醒脑静对内毒素致大鼠全身炎症反应综合征的影响

 目的观察醒脑静对内毒素所致大鼠全身炎症反应综合征(SIRS)中的作用。方法静脉注射脂多糖(LPS)建立大鼠SIRS模型。雄性Wistar大鼠85只,随机分为假手术对照组(C组)、LPS模型组(LPS组)和醒脑静治疗组(XNJ组);XNJ组依据给药剂量不同(5,10,15 mL·kg^-1)又分为XNJ-5,XNJ-10,XNJ-15共3个亚组。LPS组和XMJ组按观察时间分为1,2,4,6 h 4个亚组。运用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测单个核细胞中NF-κB活性、血清中TNF-α及IL-6水平,并观察肺脏和肝脏的病理学变化。结果LPS组单个核细胞中NF-κB活性及TNF-α浓度明显升高,2 h最明显,显著高于对照组;血清IL-6浓度随着时间的推移不断升高,显著高于对照组,病理结果显示,LPS组肺泡出血、水肿、大量炎症细胞浸润,肝脏毛细血管扩张、充血、水肿和炎症细胞浸润。XNJ组与LPS组比较,NF-κB活性、TNF-α及IL-6水平显著降低,肺脏和肝脏的病理损伤减轻。结论醒脑静可通过抑制NF-кB活性、TNF-α及IL-6水平,改善内毒素所致大鼠全身炎症反应综合征。     

当归、丹参和川芎嗪注射液对腹膜透析腹腔巨噬细胞功能的干预作用

目的：研究当归、丹参和川芎嗪注射液（简称中药）对腹膜透析（PD）腹腔巨噬细胞（MC）功能的影响。方法：（1）将MC置于含当归、丹参和川芎嗪的腹膜透析液（CDS）的培养液中培养24h，测定3个中药组、CDS组和对照组MC的一氧化氮（NO）含量和对四甲基偶氮唑盐（MTT）还原能力。（2）MC分别置于含2、10、100μg/ml的3个中药的CDS中培养24h，观察不同浓度中药对MC吞噬能力、NO含量和MTT还原能力的影响，对照组为等量培养液代替CDS。结果：CDS组MC的NO含量和MTT还原能力均明显低于对照组（P＜0．01）；与CDS组比较，川芎嗪组的MC NO含量和3个中药组MC MTT还原能力均有明显提高（P＜0．01），并随着培养液中的中药浓度的提高，3个中药组MC吞噬能力和NO含量均有显著增加。结论：在CDS中加中药能改善腹膜腔MC的防御功能，降低腹膜炎的发生率，对提高PD疗效有重要意义。     

芳香新塔花总黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响及机制

目的观察芳香新塔花总黄酮(ZCF)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264. 7细胞炎症模型中炎症因子的影响及机制。方法采用LPS刺激RAW264. 7细胞,建立细胞炎症模型。以MTT法检测不同浓度芳香新塔花总黄酮对RAW264. 7细胞的毒性作用。芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙(阳性药物)预处理,观察各组细胞的形态,以Griess法检测NO的含量,以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定TLR4和NF-κB p65 mRNA的表达。结果1μg/m L LPS刺激RAW264. 7细胞24 h,可成功构建炎症细胞模型。芳香新塔花总黄酮在1~100μg/m L浓度范围内对RAW264. 7细胞无显著的细胞毒性。LPS刺激RAW264. 7细胞后,细胞体积明显增大,形态不规则,伸出大量的伪足,而阿托伐他汀钙和芳香新塔花总黄酮干预后,RAW264. 7细胞变小,触角减少,形态较规则。脂多糖可明显诱导RAW264. 7细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β和IL-6(P <0. 01),TLR4和NF-κB p65 mRNA表达增高,而芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙可使NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的释放受到抑制(P <0. 05,P <0. 01)。芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙预处理可使TLR4和NF-κB p65 mRNA的表达降低(P <0. 05,P <0. 01)。结论芳香新塔花总黄酮可抑制LPS诱导的RAW264. 7细胞炎症反应,下调NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,其机制可能与其抑制TLR4/NF-κB信号转导通路的激活有关。