脱矿牙本质对修复性牙本质形成的诱导作用

自从 1 96 5年 Urist等建立了骨诱导理论以来 ,人们对与骨有相似化学组成的牙本质是否具有诱导能力产生了浓厚的兴趣 [1] 。大量研究表明 ,脱矿牙本质 (demineralized dentin)不仅具有骨诱导作用 ,而且还具有诱导修复性牙本质形成的作用 [2、3、4 ] 。因此 ,对脱矿牙本质诱导修复性牙本质形成的研究 ,既具有临床应用价值 ,又将对细胞分化理论的认识产生深远的影响。1　脱矿牙本质的种类和制备1 .1　同种脱矿牙本质基质 (allogeneicdemineralized dentin matrix,DDM.)取年龄 3 5岁以下供体的无龋坏、无牙周病的阻生牙、多生牙、埋伏牙或因…     

ACVR1对成牙本质细胞极性及牙本质形成的作用

目的 研究Ⅰ型骨形态发生蛋白(BMP)受体活化素A受体1(ACVR1)调节小鼠成牙本质细胞极性及促进牙本质形成的作用机制.方法 通过Cre-loxP系统,以Osterix为启动子激活Cre重组酶,敲除小鼠牙源性间充质细胞的Acvr1基因.于小鼠出生后21 d收集标本,观察成牙本质细胞形态、排列及牙本质的形态;免疫荧光染...     

体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究

目的通过构建体外组织培养模式，观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1（TGF-β1）的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织，剪碎后与牙本质陶瓷粉（CDP）及2μg／mL TGF-β1混合，将混合物以骨基质明胶（BMG）为载体构建牙髓组织培养模型，在培养3、7、14和21d后，通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成，免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白（DSP）的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化，甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积，免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型，该模型能维持牙髓细胞的生长和存活，可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察；该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。     

体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究

目的通过构建体外组织培养模式,观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1(TGF-β1)的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织,剪碎后与牙本质陶瓷粉(CDP)及2μg/mL TGF-β1混合,将混合物以骨基质明胶(BMG)为载体构建牙髓组织培养模型,在培养3、7、14和21 d后,通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成,免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白(DSP)的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化,甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积,免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型,该模型能维持牙髓细胞的生长和存活,可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察;该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。     

双黄补缓释药条直接盖髓的动物实验研究

目的 探讨双黄补缓释药条作为盖髓剂用于牙髓修复的影响.方法 将4只Beagle狗的64颗恒牙人工穿髓,分为实验组(双黄补缓释药盖髓)、阳性对照组(氢氧化钙盖髓)、阴性对照组(氧化锌丁香油粘固粉盖髓),分别于盖髓后第14 d和第28 d处死动物取出牙齿,观察修复性牙本质形成及牙髓组织学变化,免疫组织化学检测骨形成蛋白2( bone morphogenetic protein,BMP2)表达情况.结果 实验组14 d后牙髓组织产生基质样牙本质,28 d后产生牙本质桥,BMP2蛋白呈阳性表达.结论 双黄补缓释药条可早期诱导牙髓产生修复性牙本质,促进牙髓创伤修复.     

重组人骨形成蛋白用于狗直接盖髓的实验研究

目的：观察重组人骨形成蛋白-2（recombinant human bone morphogenetic protein-2，rhBMP-2）对修复性牙本质形成的诱导作用。方法：用rhBMP-2与痉基磷灰石（HA）复合，用于狗恒牙人为穿髓后直接盖髓，并与氢氧化钙直接盖髓对照，通过组织病理观察修复性牙本质的形成。结果：rhBMP-2-HA盖髓术后3周，穿髓孔下方可见形成的修复性牙本质团块，团块周围有类造牙本质细胞；术后6周，穿髓孔下方可见完整的修复性牙本质桥；术后12周，修复性牙本质桥增厚而且致密，牙本质桥近髓可见排列规则的成牙本质细胞。氢氧化钙盖髓对照组，术后3周，穿髓孔下方可见钙质团块形成，有炎症细胞浸润；术后6周，可见有修复性牙本质形成，但不连续；术后12周，修复性牙本质形成但较rhBMP-2-HA盖髓后形成的修复性牙本质桥薄而且疏松。结论：rhBMP-2-HA可以直接诱导牙髓细胞分化为成牙本质细胞，形成修复性牙本质。     

牙本质基质作为骨代用材料的研究进展

牙本质基质来源于天然牙齿,由于具有良好的生物相容性和骨诱导能力,且富含可诱导新生骨形成的生长因子,而成为一种理想的骨替代材料。本文就牙本质基质的制备方法、实验研究和临床应用研究进展作一综述,以供临床应用参考。     

成牙本质细胞的分化指标

成牙本质细胞源于神经嵴 ,牙乳头细胞在来自上皮源性的生物分子作用下 ,依照特定的时空式于钟状期晚期开始分化 ,其主要功能是合成和分泌牙本质细胞外基质 ,并促进矿化[1] 。成牙本质细胞在成熟过程中表现出特定的形态 ,与其发挥的分泌功能相适应。细胞形态学特征和成牙本质细胞分泌的特异性基质蛋白是成牙本质细胞最为重要的表型[2 ] 。但是两者均有一定的复杂性 ,首先 ,成牙本质细胞形态经过一系列变化过程 ,最终才极化为成熟细胞。而随着分子生物学技术的进展 ,人们对牙本质特异蛋白的认识不断深入 ,业已进入分子水平 ,但仍有许多问题尚…     

牙本质粘结界面混合层形成的影响因素

目前研究认为,影响牙本质粘结的因素有很多,其中影响混合层形成因素均会影响到牙本质粘结强度及微渗漏的形成,而混合层的形成又与树脂突的质量密切相关.在各种不同影响因素下形成的树脂突的数量、长度及混合层的厚度是不同的,且它们与所形成的混合层质量的关系不是绝对的.本文对牙本质粘结界面混合层的研究现状作一综述.     

重组人骨形成蛋白-2复合材料间接盖髓的组织学研究

目的通过动物实验观察重组人骨形成蛋白-2复合材料的盖髓效果。方法用重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)氧化锌复合材料(A组)、rhBMP-2(B组)、氢氧化钙(C组),将其分别衬洞于已备V类洞底的狗牙上,在规定的时间内给狗口服四环素,四环素的沉积物作为新形成修复性牙本质的标记物。在第95天拔除实验牙,制作横切磨片,在荧光显微镜下观察修复性牙本质形成情况。冠髓制作成常规切片,在光学显微镜下观察。结果三组材料盖髓后形成修复性牙本质的量A组明显高于B组和C组(P<0.05);在实验第60天时,形成修复性牙本质的总量A组为0.668mm,B组为0.487mm,C组为0.224mm。在第90天时,A组为0.834mm,B组为0.609mm,C组为0.255mm。结论rhBMP-2复合材料具有良好的可操作性,能有效地诱导修复性牙本质的形成,且对牙髓的刺激性小。     

1-α羟化酶基因敲除导致小鼠牙本质形成和前期牙本质矿化障碍

目的:探讨1,25二羟维生索D在小鼠牙本质形成和前期牙本质矿化的作用.方法:利用组织学.免疫组织化学和RT-PCR比较分析了6周龄野生型和1-α羟化酶基因敲除小鼠牙本质形成和矿化的差异.结果:与野生型小鼠相比.1-α羟化酶基因敲除小鼠的牙量、I型胶原和骨钙素在牙本质的沉积和骨钙素在成牙本质细胞表达均明显降低.而前期牙本质则明显增加.结论:1,25二羟维生素D在小鼠牙本质形成和前期牙本质的矿化过程中起重要作用.     

颅神经嵴干细胞成牙本质样细胞分化诱导的体内实验研究

目的观察诱导颅神经嵴干细胞（cranial neural crest stem cell，CNCSC）后的裸鼠体内成牙本质样细胞表型分化，探讨CNCSC用于牙再生研究的可行性。方法颅神经管组织块无血清条件培养法获取CNCSC，体外经成纤维生长因子8（FGF8）、骨形态发生蛋白2（BMP2）、转化生长因子β1（TGFβ1）、牙本质基质非胶原蛋白等因子诱导后，与胶原-壳聚糖三维凝胶支架复合植入裸鼠背部皮下，免疫组织化学方法检测Ⅰ型胶原表达、牙本质涎磷蛋白（DSPP）表达，鉴定其成牙本质样细胞表型分化特征。结果诱导后CNCSC植入体内后1月表现为Ⅰ型胶原及DSPP阳性表达，2月后DSPP表达增强，局部区域可见极性栅栏状排列的细胞分布，并可见明显的细胞外基质形成。结论CNCSC在体内可向成牙本质样细胞表型分化，为进一步开展牙再生研究奠定了基础。     

颅神经嵴干细胞成牙本质样细胞分化诱导的体内实验研究

目的观察诱导颅神经嵴干细胞(cranial neural crest stem cell,CNCSC)后的裸鼠体内成牙本质样细胞表型分化,探讨CNCSC用于牙再生研究的可行性。方法颅神经管组织块无血清条件培养法获取CNCSC,体外经成纤维生长因子8(FGF8)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质基质非胶原蛋白等因子诱导后,与胶原-壳聚糖三维凝胶支架复合植入裸鼠背部皮下,免疫组织化学方法检测型胶原表达、牙本质涎磷蛋白(DSPP)表达,鉴定其成牙本质样细胞表型分化特征。结果诱导后CNCSC植入体内后1月表现为型胶原及DSPP阳性表达,2月后DSPP表达增强,局部区域可见极性栅栏状排列的细胞分布,并可见明显的细胞外基质形成。结论CNCSC在体内可向成牙本质样细胞表型分化,为进一步开展牙再生研究奠定了基础。     

纤维粘连蛋白及骨形成蛋白-2、4在牙胚发育中的表达研究

目的 观察纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和骨形成蛋白-2、4(BMP-2、4)在大鼠牙胚发育中的表达,探讨其在成牙本质细胞分化及成熟过程的时空表达关系,为明确牙齿发育的分子调控网络提供理论和实验基础.方法 获取SD大鼠蕾状期和钟状期第一磨牙牙胚,通过免疫组化LsAB法观察FN和BMP-2、4的表达差异及相互关系.结果 FN在蕾状期和钟状期都有表达,蕾状期主要分布在牙上皮、牙间质,周围非牙间质细胞为阴性,钟状期主要分布在成牙本质细胞分化活跃的区域和分化中的内釉上皮细胞.钟状期BMP-2、4的表达较强,主要分布在成牙本质细胞分化活跃的区域. 结论 BMP-2、4和FN在牙齿发育的蕾状期和钟状期均有表达,但表达的阳性分布区不同.     

GM-6001及丹宁酸对树脂牙本质粘结界面的影响

本文采用0．04％GM-6001（galardin）基质金属蛋白酶抑制剂和浓度1％的丹宁酸蛋白交联剂处理牙本质全酸蚀粘结界面,通过薄片推出粘结强度测试及电镜观察探讨两者对牙本质胶原纤维生物降解的抑制作用,同时比较了这两种试剂对纤维桩的粘结力的影响,综合临床及加工等多方面因素,为提高纤维桩的使用年限方法提供理论依据。     

大鼠第一腮弓细胞构建组织工程牙本质-牙髓复合体样结构

目的 观察胚胎12.5 d(E12.5 d)大鼠第一腮弓上皮及外胚间充质细胞离散后肾被膜下移植的成牙能力.方法 切取E12.5 d大鼠第一腮弓(下颌突),酶消化离心后与明胶海绵支架复合植入大鼠肾被膜下,4周后收获移植物,对移植物进行组织学观察和免疫组化抗牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)检测.结果 种植4周,植入细胞在肾被膜下形成牙本质-牙髓复合体样结构.DSP在新生的牙本质组织中呈阳性表达.Masson三色法显示绿色矿化基质形成.结论 E12.5 d大鼠第一腮弓细胞部分保留了牙齿自然发育的遗传信号,在肾被膜下可以构建形成牙本质-牙髓复合体样结构.     

成纤维细胞在牙本质桥形成中的作用

对７５例牙本质桥进行了透射式电子显微镜观察研究。发现成纤维细胞是“桥”形成的重要细胞来源，牙髓穿孔盖髓后，在骨形成因子的诱导刺激下，可分化为造牙本质细胞，故提供骨形成蛋白因子及Ｖｉｔ．Ｃ，促进ＤＢ的形成，有重要的意义。     

牙髓-牙本质复合体中第三期牙本质的生物学研究

牙本质是构成牙齿主体的硬组织，而牙髓是组成牙齿的唯一的软组织，但是由于其胚胎发生和功能上的关系密切，因此将他们合称为牙髓一牙本质复合体。牙髓可以终生不断地形成牙本质，此活动受到牙髓一牙本质复合体中一些生长因子的调节。牙本质可分为三期：第一期牙本质(原发性牙本质)，是牙齿发育过程中所形成的牙本质，     

乳牙牙本质小管管壁纤维与管内膜样结构的电镜观察

目的观察乳牙牙本质小管内膜样结构,探讨其结构形态与周围组织的关系及相应功能.方法运用扫描及透射电镜对16颗乳牙牙本质小管及其管壁纤维进行观察.结果乳牙牙本质小管壁基质纤维的排列既与小管平行又相互交织成网.牙本质经过酸处理后,发现在小管管壁与成牙本质细胞突起之间,有一层呈管状膜样结构存在.此结构可能由未被钙化的或钙化不全的管壁基质纤维和成牙本质细胞突起的分枝组成.结论管状膜样结构可能参与调节牙本质小管管壁的矿化,继而阻止牙本质小管因过度钙化而引起的闭锁.     

牙髓牙本质复合体的nNOS阳性神经纤维

目的:研究神经型一氧化氮合酶（nNOS）在牙髓牙本质复合体中的表达,探讨其分布与功能的关系。方法:收集新鲜健康人前磨牙60颗,经固定、脱钙、石蜡包埋、切片,nNOS免疫组织化学染色。结果:在根髓nNOS阳性神经纤维呈粗大束状,向颈部逐渐变细,分支少;在颈部,束状纤维呈放射状至冠髓;在冠髓束状纤维大量分支呈网状,部分围绕于血管,部分止于牙髓基质,部分经成牙本质细胞层进入前期牙本质和成熟牙本质近髓1/3牙本质小管。结论:nNOS阳性神经纤维存在于人牙髓牙本质复合体中,部分围绕于血管周围,可能与血管功能调节有关,部分止于牙髓基质、前期本质和牙本质小管内,可能与牙内因素和牙外因素引起的感觉有关。