虎杖甙对白细胞-内皮细胞粘附作用的影响

目的探讨虎杖甙改善微循环的作用机理。方法在细胞液流室中,观察虎杖甙（ＰＤ）对血液中性粒细胞与培养的血管内皮细胞粘附性的影响。结果在正常情况下,随着切应力增大,白细胞与内皮细胞粘附率逐渐下降,但ＩＬ－８处理组和失血性休克组的白细胞,其与内皮的粘附率都明显高于对照组。而这两组的白细胞如果事先与ＰＤ温育３０ｍｉｎ后,再与内皮细胞作用,则白细胞与内皮的粘附率明显下降到接近正常对照水平。如果中性粒细胞与内皮细胞先粘附并以一定切应力灌流后再加入ＰＤ溶液孵育,也发现ＰＤ能显著降低白细胞与内皮的粘附率。结论ＰＤ能通过直接降低白细胞对血管内皮的粘附性而改善微循环。     

虎杖甙对脂多糖诱导血管内皮细胞I CA M-1表达的抑制作用

目的和方法:用细胞免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜扫描技术,研究脂多糖(LPS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的诱导作用,以及虎杖甙对ICAM-1表达的抑制作用。结果:内皮细胞未受LPS剌激时,细胞表面ICAM-1表达很弱;LPS剌激后,细胞表面ICAM-1分子在第8-36h显著增加,并与ICAM-1的表达呈剂量反应关系。虎杖甙单独处理内皮细胞时,对ICAM-1表达无明显影响;但虎杖甙预处理内皮细胞后,可显著抑制LPS对ICAM-1表达的诱导作用。结论:LPS可促进内皮细胞ICAM-1的表达,并可被虎杖甙所抑制。     

缺氧对大鼠中性粒细胞趋化能力的影响

目的：研究急、慢性缺氧对大鼠中性粒细胞（PMNs）趋化能力的影响。方法:应用细胞微管吸吮实验技术，从单细胞角度研究在血清趋化作用下不同缺氧状态PMNs伪足生长的变化。结果:自身血清作趋化剂，急性、慢性缺氧组PMNs伪足长度分别为(1.200±0.178)μm和(1.094±0.164)μm，显著大于常氧对照组(0.914±0.156)μm（P＜0.05）；常氧、急性缺氧和慢性缺氧血清作用于常氧PMNs时，急、慢性缺氧血清作用下PMNs伪足长度分别为(1.059±0.179)μm和(1.041±0.175)μm，显著大于常氧血清作用（P＜0.05）；常氧血清作用于常氧、急性和慢性缺氧PMNs时，急性、慢性缺氧PMNs伪足长度分别为(1.058±0.163)μm和(1.118±0.126)μm，显著大于常氧对照组（P＜0.05）。结论:急、慢性缺氧促进了大鼠PMNs趋化能力，缺氧后血液微环境的变化和PMNs响应能力的变化是其重要原因。     

α-MSH对脂多糖部分生物学活性的影响

目的:探讨α-黑色素细胞刺激素对LPS部分生物学活性的影响。方法:本文应用比色法、倒置生物显微镜及流式细胞仪观察小鼠腹腔巨噬细胞释放H₂O₂、中性粒细胞凋亡及FITC-LPS与单核细胞的结合情况。结果:LPS可刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放H2O2,而α-MSH与LPS共同培养,则能明显抑制巨噬细胞释放H₂O₂(P<0.01);α-MSH及LPS本身均不影响中性粒细胞凋亡(P>0.05),但在LPS作用下,α-MSH可显著促进中性粒细胞凋亡(P<0.01);并且,α-MSH可降低FITC-LPS与单核细胞的结合率及单核细胞表面的平均荧光强度(P<0.05,P<0.01)。结论:α-MSH不仅能有效抑制LPS刺激巨噬细胞释放H₂O₂、促进LPS作用下的中性粒细胞发生凋亡;而且可干扰LPS与单核细胞的结合,发挥其有效的免疫调控作用。     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导小鼠分泌IL-12的影响及其机制研究

目的：观察八肽胆囊收缩素（CCK-8）对脂多糖诱导小鼠分泌IL-12的影响，探讨核因子-κB（NF-κB）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）的信号转导作用。方法：雌性BALB/c小鼠经LPS诱导后分别给予CCK及CCK-A、B受体拮抗剂。ELISA法检测小鼠血清及肺、脾组织中IL-12p40、p70的表达；Western blotting法检测肺脏、脾脏IκB、p38 MAPK的表达；EMSA法检测肺、脾组织中NF-κB/DNA的结合活性。结果：CCK-8进一步提高了LPS诱导的小鼠血清及肺、脾组织中IL-12p40、p70的表达；抑制IκB磷酸化和NF-κB/DNA结合活性；促进p38 MAPK磷酸化。而CCK-A受体拮抗剂（CR-1409）及CCK-B受体拮抗剂（CR-2945）部分逆转了CCK-8的效应。结论：CCK-8可促进LPS诱导小鼠分泌IL-12，p38 MAPK可能参与了其信号转导机制，而NF-κB途径可能并未参与CCK-8促IL-12分泌这一过程。     

幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白的研究进展

幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白是150000u蛋白质,具有多种生物学功能①作为抗原能激发宿主产生特异性免疫反应;②对白细胞具有趋化、激活作用;③介导免疫粘附及介导幽门螺杆菌粘附、定植胃粘膜;④激活人白细胞NADPH氧化酶,产生活性氧中间产物.结论幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白是参与幽门螺杆菌致病机制的重要因子;可作为幽门螺杆菌疫苗的重要候选者.     

白细胞介素-18在内毒素诱导的老年大鼠记忆障碍中的作用

目的:探讨白细胞介素-18(IL-18)在内毒素(LPS)诱导的老年大鼠记忆障碍中的作用。方法:16只老年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为内毒素组和生理盐水对照组,在被动回避训练结束后,立即经腹腔注射LPS250μg/kg或等体积的生理盐水,24h后记录大鼠从明室进入暗室的潜伏期作为记忆成绩。记忆功能测试结束后立即取海马组织,分别用逆转录-多聚酶链式反应和酶联免疫吸附实验测定IL-18mRNA和IL-18蛋白的表达,并检测其中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的活性。另分批实验,将16只老年SD大鼠随机分为IL-18组和生理盐水对照组,同样在训练后经脑室注射IL-18(100ng)或等体积的生理盐水,24h后记录大鼠进入暗室的潜伏期。结果:LPS组大鼠进入暗室的潜伏期较对照组明显缩短,差异显著(P0.01);并且LPS组海马组织IL-18mRNA和IL-18蛋白表达水平和caspase-1酶活性均明显高于对照组,差异显著(P0.01);IL-18组大鼠进入暗室的潜伏期明显短于对照组,差异显著(P0.05)。结论:IL-18可能参与了LPS诱导的老年大鼠记忆障碍。     

辣椒素对脂多糖诱导血管内皮细胞活化的影响及机制

 目的:探讨辣椒素对脂多糖（LPS）刺激后小鼠主动脉内皮细胞活化的影响,并探讨其可能机制。方法:（1）体外分离培养小鼠主动脉内皮细胞,免疫荧光鉴定内皮细胞特异性标志。（2）以100 μg/L LPS作用于血管内皮细胞后,以不同浓度的辣椒素（50 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L）进行干预,分别于12、24和48 h收集主动脉血管内皮细胞及细胞上清液。采用ELISA法检测各组细胞上清液中的可溶性细胞间黏附分子 1（sICAM-1）、可溶性血管细胞黏附分子 1（sVCAM-1）和可溶性P-选择素(sP-selectin)水平,Western blotting法检测各组主动脉血管内皮细胞核内NF-κB p65水平和胞浆p-IκBα、IκBα水平。结果:与对照组相比,LPS组细胞上清液中sP-selectin、sICAM-1和sVCAM-1含量显著升高（P<0.05）, LPS能够时间依赖性上调sICAM-1和sVCAM-1的含量。与同时点的LPS组相比,辣椒素能够剂量依赖性下调sP-selectin、sICAM-1和sVCAM-1水平。与对照组相比,LPS作用24 h后, 细胞核内NF-κB p65和胞浆p-IκBα蛋白水平显著升高（P<0.05）,胞浆IκBα蛋白水平显著降低（P<0.05）。与同时点LPS组相比,辣椒素能够剂量依赖性下调细胞核内NF-κB p65和胞浆p-IκBα蛋白的水平（P<0.05）,剂量依赖性上调胞浆IκBα蛋白水平（P<0.05）。结论: 辣椒素能够显著抑制LPS作用后血管内皮细胞活化水平,该效应可能是通过下调IκBα降解和NF-κB p65胞核内转位而实现的。     

脂多糖诱导山羊肝脏TNF-α分泌特点的研究

目的:为了研究肝脏在实验性内毒素血症中的免疫调节作用。方法:采用17只雄性去势山羊,外科手术方法装置颈静脉插管、肝静脉插管和门静脉插管。手术4 d后,分3个组进行实验:组①经门静脉灌注20 EU/kg体重的LPS;组②经颈静脉灌注20 EU/kg体重的LPS;组③经颈静脉灌注1 500 EU/kg体重的LPS。灌注前和灌注8 h内定时采集颈静脉、肝静脉和门静脉血样,采用放射免疫测定法测定血样中TNF-α的含量变化。结果:在组①肝静脉和门静脉血TNF-α水平于5 h上升到峰值,颈静脉动血则基本无变化。在组②颈静脉、肝静脉血于1 h和3 h上升达到峰值,而门静脉血TNF-α水平则在0-8 h期间持续上升。在组③肝静脉、门静脉和颈静脉血中TNF-α在1h同步迅速达到峰值。结论:肝脏在内毒素血症时TNF-α的分泌依脂多糖进入的途径和剂量而有不同的分泌特点。     

Galectin-3 inhibits the chemotaxis of human polymorphonuclear neutrophils in vitro

In the recent years, the participation of the animal lectin galectin (gal)-3 in inflammation and in host defence mechanisms was extensively studied. In vivo studies implied - among others - a role of gal-3 in the recruitment of polymorphonuclear neutrophils (PMN) to sites of bacterial infection. In that context, we asked the question whether gal-3 was chemotactic for PMN. Functional assays revealed that gal-3 was not chemotactic for PMN, but that it inhibited the spontaneous migration and the chemotaxis of PMN towards complement C5a, interleukin (IL)-8, or ATP. Moreover, gal-3 inhibited the shape change and the actin polymerisation of PMN that occurs in response to C5a or IL-8. By use of FITC-labelled gal-3, we found that it attached rapidly to the PMN membrane in a lactose-sensitive manner. In response to gal-3 the MAP kinase p38 was phosphorylated. This kinase is crucial for the migration of PMN towards end-target chemokines, such as C5a, and is activated in response to C5a or IL-8. When PMN were preincubated with gal-3, the C5a-induced p38 phosphorylation was transiently enhanced, but eventually down-modulated. We conclude that by interfering with the chemokine-induced p38 phosphorylation gal-3 inhibits chemotaxis of PMN.     

Human polymorphonuclear neutrophils express RANK and are activated by its ligand, RANKL

The receptor activator of NF-κB (RANK) is especially well studied in the context of bone remodeling, and RANK and its ligand, RANKL, are key molecules in the induction of bone resorbing osteoclasts. We now report that polymorphonuclear neutrophils (PMNs) contain preformed RANK, stored in secretory vesicles and in specific granules. Upon stimulation of PMNs in vitro, RANK was translocated to the cell membrane. In patients with persistent bacterial infections, RANK surface expression was enhanced compared with that of healthy individuals. The functional activity of RANK was assessed by determining migration of PMNs toward RANKL. A time- and dose-dependent migration was seen, leading to the conclusion that RANK on PMNs is functional. We presume that regulated RANK expression contributes to the fine tuning of PMN migration, for example, on and through inflamed endothelium that is known to express RANKL.     

虎杖苷抗肺缺血再灌注损伤作用及对磷酸化蛋白激酶Cα调节的实验研究

目的：探讨虎杖苷（PD）抗肺缺血再灌注损伤作用及对磷酸化蛋白激酶Cα（PKCα）活性调节。方法:采用在体单肺原位缺血再灌注损伤模型。健康日本大耳白兔40只随机均分成假手术对照组（sham组）、肺缺血再灌注组(I/R组)、肺缺血再灌注+虎杖苷组（PD组）、肺缺血再灌注+PD+多粘菌素B组（PMB组）。各组在不同时点抽血检测丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性。实验末，测湿干重比（W/D），计算肺泡损伤率(IAR)，电镜观察细胞超微结构改变，免疫组化分析磷酸化PKCα表达情况。结果:①I/R组和PMB组血清SOD活性降低无明显差异，PD组显著高于I/R组（P<0.01）；而MDA的上升PD组显著慢于I/R组、PMB组（P<0.05或P<0.01）。② PD组的W/D与IAR均显著低于IR组和PMB组（均P<0.01）。 ③ 电镜提示PD组损伤程度明显轻于IR组及PMB组。④除I/R组外，免疫组化显示磷酸化PKCα皆阴性表达。结论:PD对LIRI具有防治作用，其机制除抗氧化损伤外可能还与抑制PKCα活化有关。     

Human mitochondria-derived N-formylated peptides are novel agonists equally active on FPR and FPRL1, while Listeria monocytogenes-derived peptides preferentially activate FPR

N-formyl peptides are cleavage products of bacterial and mitochondrial proteins, and can attract leukocytes to sites of infection or tissue damage. In this study, HL-60 cell lines expressing the human N-formyl peptide receptor FPR or its two homologues (FPRL1, FPRL2) were used to determine the receptor selectivity of N-formylated peptides derived from Listeria monocytogenes or from human mitochondrial proteins. Bacterial peptides were 100-fold more potent on FPR than on FPRL1, whereas none of them could trigger intracellular signaling through FPRL2. In contrast, N-formylated hexapeptides corresponding to the N terminus of mitochondrial NADH dehydrogenase subunits 4 (fMLKLIV) and 6 (fMMYALF), and cytochrome c oxidase subunit I (fMFADRW) were equally potent on FPR and FPRL1. They triggered cellular responses with the following order of potency: fMMYALF > fMLKLIV > fMFADRW, with an EC50, in a Fura-2 calcium mobilization assay, of 10 nM, 44 nM, and 160 nM on FPR-expressing cells, and 15 nM, 55 nM and 120 nM on FPRL1-expressing cells. fMMYALF was also a low-affinity agonist of FPRL2 (EC50 of 1 microM) and was chemotactic for both FPRL1- and FPRL2-expressing cells. We identified novel mitochondrial host-derived agonists for human N-formyl-peptide receptors that might play a role in inflammatory or degenerative processes linked to their stimulation.     

中性粒细胞抑制人单个核细胞释放TNF-α及其机理的研究

目的:探讨人中性粒细胞(PMNs)对人外周血单个核细胞(PBMCs)释放TNF-α的影响及其作用机理。方法:采集健康供血者的新鲜外周静脉血,以葡聚糖沉淀和密度梯度离心法分离其PMNs和PBMCs,将PMNs细胞与PBMCs细胞按2:1的数量比与脂多糖共同培育后,分别采用酶联免疫吸附法测定培养上清的TNF-α浓度,并用流式细胞术测定结合荧光标记脂多糖的单核细胞的百分率及单核细胞表面平均荧光强度。结果:PMNs在细菌脂多糖刺激下不释放TNF-α,PMNs可以抑制PBMCs释放TNF-α,其抑制作用具有细胞特异性;经多聚甲醛固定的PMNs仍具有上述的抑制作用。流式细胞术结果显示PMNs并不影响单核细胞与脂多糖结合。结论:PMNs可抑制人PBMCs释放TNF-α,其机理可能是PMNs干扰脂多糖激活PBMCs的信号转导过程,抑制细菌脂多糖对其的活化,从而下调TNF-α的释放。     

Morphological and biochemical responses of leukocytes in chemokinesis and chemotaxis

Morphological changes associated with leukocyte chemokinesis and chemotaxis are briefly described. Leukocyte stimulation by chemokinetic and chemotactic factors (cytotaxins) elicits various biochemical responses including ligand-receptor interactions, ion fluxes, alterations in phospholipid and arachidonic acid metabolism, cyclic nucleotides, protein phosphorylation and reorganization of the cytoskeleton. These biochemical processes may be related to signal transduction, the effector mechanisms of directional locomotion or possibly other leukocyte responses which occur in parallel.     

脂多糖诱导多形核白细胞和肺泡巨噬细胞凋亡异常在急性肺损伤发病中的意义

目的：探讨ＰＭＮ 和ＡＭ 凋亡异常的机制和意义;为适度调控炎性细胞凋亡防治ＡＬＩ 提供理论依据。方法：通过建立大鼠外周血多形核白细胞（ＰＭＮ） 和肺泡巨噬细胞（ＡＭ） 体外培养,采用流式细胞技术观察ＬＰＳ 对上述细胞凋亡的影响。结果：ＬＰＳ 加入体外培养大鼠外周血ＰＭＮ 中,培养２４ ｈ ,ＰＭＮ 的凋亡率明显降低,ＬＰＳ 可明显促进体外培养的大鼠ＡＭ 凋亡,并呈剂量、时间依赖关系。结论：ＬＰＳ 诱导ＰＭＮ 和ＡＭ 细胞凋亡异常可能是失控性全身炎症反应持续发展和加重的重要机制之一。     

重组病毒趋化因子vMIP对脂多糖刺激的细胞免疫功能的影响

了解重组病毒趋化因子vMIP作用前后及内毒素刺激后细胞内细胞因子IL-4和IFN-γ水平的变化,探讨vMIP对免疫功能的影响。方法:通过放射性配体－受体结合实验、ELISA法及流式CD4⁺T细胞的细胞内染色法检测外周血单个核细胞的培养上清IL-12水平及细胞内细胞因子IFN-γ及IL-4分泌水平的变化。结果:通过竞争结合细胞膜表面趋化因子受体,vMIP-II可减缓高浓度LPS引起的爆发式细胞因子IL-12、IFN-γ产生;vMIP可促进IL-12、IFN-γ和IL-4分泌。结论:病毒趋化因子vMIP-II可调节CD4⁺T细胞分泌IFN-γ和IL-4,从而下调过激的炎症反应,并对感染性休克可能有拮抗作用。