用PCR-SSCP及DNA测序法研究胃癌p53基因突变

目的 探讨p53基因突变与人类胃癌发生的关系。方法 运用PCR、PCR－SSCP结合银染法对25例胃癌组织p53基因第4、第5－6和第7外显子进行突变检测;运用双脱氧链终止法对第7外显子阳性突变标本进行DNA测序。结果 在25例胃癌组织中检出突变5例,突变率为20％;在第7外显子阳性突变标本中发现了18bp的大片段缺失。结论 p53基因突变与人类胃癌的发生具有明显相关性,并且这种突变可能不仅仅局限于点突变,大片段缺失也是p53基因突变方式之一。     

胃癌及癌前病变p53基因改变的免疫组化和原位杂交研究

目的 研究胃癌及癌前病变p53基因改变情况，探讨p53基因突变与胃癌的相关性。方法 在本院近10年库存石蜡标本中选取74例胃癌、20例胃癌前病变和10例浅表性胃炎标本，用免疫组化和原位杂交的方法同时检测胃粘膜p53蛋白和p53mRNA表达。结果 浅表性胃炎未发现p53基因异常；胃癌和癌前病变p53基因突变率用免疫组化方法分别为41．9％和40．0％，用原位杂交方法分别为51．4％和40．O％，免疫组化和原位杂交结果显示良好的一致性，胃癌p53基因突变率和癌前病变无显著差异，突变与胃癌分型及部位相关，而与分期关系不密切。结论 p53基因突变可能和肠型胃癌和非贲门部胃癌的早期发生有关。     

p53基因测序在恶性肿瘤诊断中的应用价值观察

目的研究p53基因测序在临床肿瘤诊断中的应用价值。方法采用聚合酶链反应一直接测序方法对肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、乳腺癌、鼻咽癌、甲状腺癌、宫颈癌及支气管和胃粘膜非典型增生的活检标本,急、慢性白血病的外周血标本,肺癌胸水、肝癌腹水标本等临床肿瘤样本进行p53基因外显子5、6、7、8序列分析。结果正常对照组未发现突变,所测的几种常见肿瘤样本的活检标本的错义突变率一般为30％—50％,胸、腹水标本突变率与相应肿瘤的活检标本相近,突变大多位于外显子7、8。存在突变的病例2年病死率明显升高。结论p53基因测序在常见恶性肿瘤诊断和判断预后等方面有一定的参考价值。     

胃癌及其癌前病变中ras, c-erbB-2, p53癌基因产物的表达

目的 探讨胃癌及其癌前病变中ras,c-erbB-2,p53癌基因蛋白产物的表达分布特点及其在胃癌发生发展中的作用。方法 应用免疫组化ABC方法,对58例胃癌、31例胃粘膜上皮异型增生和11例正常胃粘膜组织中,鼠抗人mAb ras基因p21蛋白、兔抗人c-erbB-2原癌基因产物多克隆抗体p185,鼠抗人mAb p53蛋白进行了检测。结果p21在正常胃粘膜和轻、中、重度异型增生和胃癌中的表达率分别为27．3％,30．0％,46．2％,75．0％和72．4％;其表达率在重度异型增生和胃癌中显著高于正常胃粘膜和轻、中度异型增生（P＜0．05）;p185在正常胃粘膜和轻、中度异型增生中无表达,在重度异型增生和癌中的阳性表达率分别为25．0％,18．9％,各组间无显著性差异（P＞0．05）;p53仅在癌中有表达,表达率29．3％,明显高于非癌组织（P＜0．05）。胃癌中两种以上癌基因蛋白同时表达率明显高于非癌组织（P＜0．05）。结论 ras基因可能作用于胃癌发生的早期阶段,c-erbB-2,p53基因可能作用于胃癌发生的较晚期。并认为胃癌发生需要多基因协同作用。     

53例胃癌前病变粘膜组织K—ras基因突变情况分析

目的：探讨胃癌前病变组织K－ras基因突变情况,揭示K－ras基因突变与胃癌发生的关系。方法：应用聚合酶链反应（PCR）与单链构多态性分析（SSCP）对53例经病理切片诊断为胃癌前病变粘膜组织和10例正常胃粘膜组织进行K－ras基因突变分析。结果：53例胃癌前病变粘膜组织中,K－ras基因发生突变40例,占75．5％;男女间突变率比较差异无显著性（P＞0．05）;而10例正常胃粘膜组织无K－ras基因突变发生。结论：K－ras基因突变是胃癌前病变中常见的分子事件,用PCR－SSCP法检测胃粘膜组织K－ras基因的突变情况将有助于了解胃癌发生的生物学行为,对早期诊断有一定的帮助。     

P~(53)基因突变与胃癌发生关系的研究

目的：探讨Ｐ５３基因突变在胃癌发生中的地位和Ｐ５３基因突变的好发位点，并探索用活检胃粘膜组织进行Ｐ５３基因突变检测的临床价值。方法：采用ＰＣＲ结合酶解分析技术研究活检胃粘膜组织中Ｐ５３基因的１７５、２４５、２４８和２４９等４个位点的突变。共检查３９例胃癌，１４例不典型增生和１２例肠化生。结果：胃癌的Ｐ５３基因点突变率为３０．８％，重度不典型增生的Ｐ５３基因点突变率为２５％，突变位点多见于１７５和２４８密码子。结论：Ｐ５３基因突变在部分胃癌的发生中起着较重要的作用；对胃活检组织Ｐ５３基因突变的检测有助于诊断早期胃癌和筛选高危患者     

P53基因测序在恶性肿瘤诊断中的应用价值研究

①目的研究P53基因测序在临床肿瘤诊断中的应用价值。②方法采用聚合酶链式反应一直接测序方法对肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、乳腺癌、鼻咽癌、甲状腺癌、宫颈癌及支气管和胃粘膜非典型增生的活检标本,急、慢性白血病的外周血标本,肺癌胸水、肝癌腹水标本等临床肿瘤样本进行P53基因外显子5、6、7、8序列分析。⑧结果正常对照组未发现突变、所测的几种常见肿瘤样本的活检标本的突变率一般为30％～50％,胸、腹水标本突变率与相应肿瘤的活检标本相近,突变大多位于外显子7、8。存在突变的病例2年病死率明显升高。④结论P53基因测序在常见恶性肿瘤诊断和判断预后等有一定的参考价值。     

结肠癌K-ras和P~(53)基因序列改变

采用PCR和DNA双链四色荧光单道测序方法对 31例结肠癌组织、13例大肠息肉伴不典型增生、11例结肠癌术后并发腹水标本进行K ras基因外显子 1、2和P53基因外显子 5、6、7、8测序分析。结果显示 :31例癌组织中发现K ras突变 7例 ,P53突变 12例 ,阳性率分别为 2 2 .58%和 38.71% ;13例息肉伴不典型增生组织中发现P53突变 2例 ;11例术后腹水标本中发现K -ras突变 1例 ,P53突变 2例 ,且突变与患者包埋组织结果一致。表明结肠组织癌变与这两个基因突变密切相关 ,癌基因突变是结肠癌较早期的细胞损害 ;DNA测序方法是研究癌基因突变的最精确可靠的方法。     

胃癌患者静脉血及肿瘤组织p53基因突变检测的临床意义

目的探讨胃癌患者外周血、门静脉血及癌组织标本p53基因突变或异常表达的临床意义。方法应用PCR-SSCP法检测73例手术治疗的胃癌患者外周血和门静脉血中p53基因的突变,并用免疫组织化学法检测胃癌组织中p53蛋白的异常表达。结果73例胃癌患者中有7例检测到外周静脉血p53基因突变,有29例检测到门静脉血p53基因突变,有51例检测到胃癌组织中p53蛋白的异常表达;胃癌组织中的p53蛋白阳性表达率（69.86%）和门静脉血中p53基因突变检出率（39.73%）均显著高于外周血的检出率（9.59%）。经中位24个月随访,其中有16例出现术后异时性肝转移,这些患者外周静脉血、门静脉血以及胃癌组织中的p53基因突变检出率或p53蛋白阳性表达率均显著高于无肝转移者,而且7例外周静脉血、门静脉血及胃癌组织中同时检测出p53基因突变或p53蛋白阳性表达的患者均发生肝转移。结论胃癌患者外周血中p53基因突变者术后发生异时性肝转移的可能性显著增加,外周静脉血联合门静脉血以及胃癌组织中p53基因突变检测有助于判定胃癌患者的预后。     

联合检测胃粘膜组织P53、P16、K—ras对胃癌的诊断价值

目的 :探讨胃癌组织P53、P1 6 、K ras基因的协同突变情况 ,揭示P53、P1 6 、K ras基因突变与胃癌发生的关系。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)与单链构象多态性分析法 (SSCP)对 6 0例经病理切片诊断为胃癌组织和 2 0例正常胃粘膜组织进行P53、P1 6 、K ras基因突变分析。结果 :6 0例胃癌粘膜组织中 ,P53基因发生突变 5 3例 ,占 88 3% ;P1 6 基因发生突变 49例 ,占 81 7% ;K ras基因发生突变 5 6例 ,占 93 3% ;男女间突变率比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;而 2 0例正常胃粘膜组织无P53、P1 6 、K ras基因突变发生。结论 :P53、P1 6 、K ras基因突变是胃癌中常见的分子事件 ,用PCR—SSCP法联合检测胃粘膜组织P53、P1 6 、K ras基因的突变情况将有助于诊断胃癌 ,为临床提供更为可靠的检验资料     

胃癌患者血浆中p53基因突变的检测

目的:检测并比较胃癌患者外周血浆、肿瘤组织以及癌旁正常黏膜中p53基因突变状况.方法: 从96名胃癌患者的术前血浆、肿瘤组织及癌旁正常黏膜提取DNA,采用PCR、变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)及测序技术,检测p53基因5～8外显子的突变,选择20例健康人的血浆作为正常对照.结果: 96例胃癌患者肿瘤组织中,p53基因杂合性突变的检出率为19.8%(19/96),在其相应的外周血浆中,p53基因杂合性突变的检出率为5.2%(5/96),在p53基因突变阳性的外周血浆中,其对应的肿瘤组织均发现有同样的p53基因突变,在对应癌旁正常黏膜组织及20例健康人对照血浆中均未检出p53基因突变.肿瘤组织和外周血浆中p53基因突变与胃癌患者的临床病理特征无相关性.结论:胃癌患者血浆中可检测出p53基因突变,胃癌患者血浆中p53基因突变的分析有可能作为临床辅助诊断、疾病监测的指标之一.     

抑癌基因P53突变与宫颈不典型增生的相关性研究

目的：探讨抑癌基因Ｐ５３突变在宫颈不典型增生形成中的作用和意义。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）,单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析法检测了５０例宫颈不典型增生,２６例宫颈息肉,２５例慢性宫颈炎症组织中Ｐ５３外显子７－８的变异。结果：宫颈不典型增生,息肉,炎症组织中均未见Ｐ５３外显子７－８缺失;宫颈不典型增生,息肉组织中ＰＴ５３外显子７－８突变阳性率分别为１６％,３．８５％,二者差异显著;     

ING1基因蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨p33ING1基因蛋白与胃癌发生及病理生物学关系及临床意义.方法对71例胃癌、12例胃粘膜不典型增生、18例对照组,应用Envision免疫组化法,检测p33ING1.结果粘膜不典型增生组及对照组中p33ING1均阳性表达,而胃癌中表达62.0%(44/71)有明显下降,与前两组之间有显著差异(P＜0.01);胃癌中p33ING1表达与肿瘤的浸润、淋巴结的转移及分化有关(P＜0.01).结论p33ING1是抑癌基因,在胃癌中表达下降,对胃癌发生、发展可能起重要作用,p33ING1与p53野生型基因互相协同、依赖,抑制细胞生长、促进凋亡.p33ING1的水平,对p53介导的基因治疗尤为重要,应予检测.     

P53在胃粘膜上皮非典型增生和胃癌中的表达及意义

目的　研究P5 3在胃粘膜上皮非典型增生和胃癌中的表达及其与临床病理和预后的关系。方法　应用免疫组化S -P法对 2 0例正常胃粘膜组织 ,2 4例非典型增生和 3 5例胃癌进行P5 3检测。结果　P5 3在胃癌中的阳性表达率(5 1.43 % )明显高于正常胃粘膜 (0 % )和异型增生 (16.67% ) ,P均 <0 .0 1;P5 3阳性表达率与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移有直接关系 ,P 均 <0 .0 5。结论　P5 3基因的阳性表达有助于判断非典型增生的发展趋势 ,评估胃癌的发生发展及判断和监测胃癌的预后。     

p16,p53和Mad2在胃癌中的表达及临床病理学意义

目的：研究p16,p53和Mad2基因在胃癌中的表达及其临床病理学意义.方法：应用免疫组化SP法检测胃癌组和对照组（正常胃粘膜、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、增生性息肉、不典型增生）中p16,p53和Mad2蛋白的表达.结果：对照组中p16,p53和Mad2的阳性率分别为74.6%,32.8%和59.7%,而胃癌中p16,p53和Mad2的阳性率分别为46.3%,58.7%和79.1%,各指标在两组间的表达均有显著性差异（P〈0.05）;p16在累及浆膜组的表达与未累及浆膜组间有显著性差异（P〈0.05）;p16,p53和Mad2在有淋巴结转移组与无淋巴结转移组间均存在显著性差异（P〈0.05）.结论：p16,p53和Mad2基因表达的异常在胃癌的发生、发展和预后中起着重要的作用.     

胃癌组织中p33~(ING1)、p53基因蛋白的表达及其临床意义

目的　探讨 p33ING1基因蛋白在胃癌中表达的临床意义及其相互关系。方法　应用Envision免疫组化法检测71例胃癌、12例胃粘膜不典型增生患者p33ING1、p5 3基因蛋白的表达 ,并与正常胃粘膜及慢性胃炎粘膜 18例对照。结果　粘膜不典型增生组及对照组中 p33ING1均阳性表达 (10 0 % ) ,而胃癌中表达 6 2 .0 % (4 4/ 71) ,明显下降 ,与前两组之间差异显著 (P <0 .0 1) ;胃癌中 p33ING1表达与肿瘤的浸润、淋巴结的转移及分化有关 (P <0 .0 1) ;p5 3表达与肿瘤大小、浸润、淋巴结转移有关 (P <0 .0 1)。结论　p33ING1是抑癌基因 ,在胃癌中表达下降 ,对胃癌发生、发展可能起重要作用 ,p33ING1和 p5 3在胃癌中表达有相关性 (P <0 .0 5 )。p33ING1与 p5 3野生型基因互相协同、依赖 ,抑制细胞生长 ,促进凋亡。检测胃癌患者p33ING1的水平 ,对p5 3介导的基因治疗有重要意义。     

胃癌及癌前病变中P21与P53蛋白表达、幽门弯曲杆菌感染的相关性研究

目的:利用胃癌及癌前病变生物学恶性信息,检测胃粘膜活检组织中幽门弯曲杆菌感染与P21、P53表达的关系。方法：收集胃粘膜活检标本,应用免疫组化技术,常规石蜡切片、HE、Giemsa染色观察。结果：幽门弯曲杆菌（HP）感染率：慢性浅表性胃炎（CSG）30．8％（8／26）,慢性萎缩性胃炎67.9％19／28）,肠上皮化生63．6％（21／23）,不典型增生（AH）73％（22／30）,胃癌（GC）64．1％（25／39）。HP感染与各型病变中P21表达阳性率（％）关系：HP阳性者为36.8～64．0,其中GC为最高,AH为次;HP阴性者为22．2～57．1,与P53表达阳性率（％）关系：HP阳性者为31.6～60．0,其中GC为最高,AH为次;HP阴性者为11．1～50．0。结论：对胃癌及癌前病变进行HP及两种蛋白检测,有助于认识HP感染是胃癌发生的高危因素及胃粘膜萎缩→肠化生→异型增生→癌变的P21、P53表达阳性率呈递增的规律。     

应用PCR-SSCP方法检测胸水细胞中p53基因突变鉴别良恶性胸水

目的 探讨胸水细胞中ｐ５３基因突变的检测对鉴别良恶性胸水的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对３４例肺癌患和１６例良性肺部疾病患的胸水细胞中的ｐ５３基因突变情况进行了检测,同时进行了胸水的瘤细胞学检查和部分肺癌组织的ｐ５３基因突变检测,并将结果进行了比较。结果 在４７．０％９１６／３４）的肺癌患的胸水细胞中检测到ｐ５３基因的突变,在３７．５％（６／１６０的瘤细胞学检查阴性的肺癌患的胸水细