酸中毒时心脏克隆钾离子通道Kv1.4的动力学特性

目的:探讨心脏克隆钾离子通道Kv1.4的C型失活(Kv1.4△N)在非洲蟾蜍卵母细胞上表达后的动力学特性以及酸中毒时的改变. 方法:将Kv1.4△NcRNA(最大体积为50 nl)注入非洲爪蟾的卵母细胞内,于18℃孵育16 h以上.电极采用两步法拉制,微电极由1.5 mm口径的电极拉制.电极内充3M KCl,电阻0.5～1.0MΩ.采用双微电极电压钳制法(two electrode voltage clamp,TEV)在室温下(20～24℃)记录电流. 结果:与正常pH时相比,酸性环境下,Kv1.4△N的峰电流减小,在pH 7.4时通道在去极化至-40mv激活,而pH 6.8时为-30 mv激活;通道在pH 7.4时最大失活为0.384±0.072,而在pH 6.8时为0.197±0.013;在pH 6.8时通道复活减慢(P＜0.05). 结论:酸中毒导致通道电流减小,并且使通道失活加快和恢复减慢.     

姜黄素对Kvl．4钾通道C型失活的影响

目的 研究姜黄素对去N端Kv1.4(Kv1.4△N)通道C型失活特性的影响.方法 将Kv1.4△N的mR-NA注射入非洲爪蟾卵母细胞并于18～20℃下孵育,成功表达后使用双微电极钳制法记录电流,观察姜黄素对Kv1.4△N电流失活、复活的影响.结果 ①姜黄素对Kv1.4△N峰电流的抑制作用呈电压依赖性.②姜黄素对Kv1.4△N通道失活速度无明显影响.姜黄素灌流前后失活时间常数变化不大(2 765±118 ms vs 2 513±193 ms,n=5,P＞0.05).③通道失活后的恢复时间延长.结论 姜黄素抑制钾电流并延长其恢复时间,但对稳态失活并无明显影响.其机制可能与它对通道的开放状态比失活态有更高的亲和力有关.     

地尔硫卓对Kvl．4钾通道动力学的影响

目的：研究地尔硫卓对异源表达在卯母细胞上的克隆fKvl．4钾通道电流的激活及失活动力学影响。方法：在非洲爪蟾卵母细胞上异源表达雪貂心脏来源的去N端Kvl．4（fKvl．4△N）通道基因,采用双电极电压钳制技术记录电流、记录药物对fKvl．4AN通道电流的影响。结果：地尔硫卓以频率依赖性、电压依赖性及浓度依赖性的方式抑制fKvl．4△N通道电流,其半抑制浓度（IC50）为（241．04±23．06）μmo]／L（＋50mV）。对照条件下,fKvl．4△N通道电流失活的表现为单指数方程拟合,在应用地尔硫卓后,fKvl．4△N通道电流失活变为双指数方程拟合,即药物诱导的快速失活成分及较慢的C型失活成分。地尔硫卓可加快C型失活,但其不影响fKvl．4△N通道电流的激活过程。结论：地尔硫卓为fKvl．4△N通道的开放状态阻滞剂,可加快Kvl．4△N通道的失活过程。     

姜黄素对Kv1.4钾通道C型失活的影响

目的研究姜黄素对去N端Kv1.4(Kv1.4ΔN)通道C型失活特性的影响。方法将Kv1.4ΔN的mR-NA注射入非洲爪蟾卵母细胞并于18～20℃下孵育,成功表达后使用双微电极钳制法记录电流,观察姜黄素对Kv1.4ΔN电流失活、复活的影响。结果①姜黄素对Kv1.4ΔN峰电流的抑制作用呈电压依赖性。②姜黄素对Kv1.4ΔN通道失活速度无明显影响。姜黄素灌流前后失活时间常数变化不大(2765±118msvs2513±193ms,n=5,P>0.05)。③通道失活后的恢复时间延长。结论姜黄素抑制钾电流并延长其恢复时间,但对稳态失活并无明显影响。其机制可能与它对通道的开放状态比失活态有更高的亲和力有关。     

参松养心胶囊对Kv1.4钾电流特性的影响

目的: 探讨中药复方制剂参松养心胶囊对KV1.4钾通道C型(KV1.4△N)失活的影响。方法: 将Kv1.4ΔN mRNA注射入非洲爪蟾卵母细胞中,使用双电极钳制法（Two electrodes voltage clamp TEV）观察参松养心胶囊对KV1.4ΔN电生理特性的影响 。结果: 参松养心胶囊对Kv1.4ΔN通道的峰电流有抑制作用,这种阻滞作用具有电压依赖性,随电位的升高而作用加强,符合单指数和线性关系。参松养心胶囊可加速KV1.4ΔN钾通道电流的失活过程,同时可使KV1.4ΔN通道失活后的恢复减慢 。结论: 参松养心胶囊能显著抑制KV1.4钾通道电流,这可能是其抗心律失常作用的机制之一。     

普罗帕酮对Kv1.4ΔN钾通道的作用及细胞外钾离子和pH浓度变化时的影响

目的:探讨抗心律失常药物普罗帕酮对Kv1.4△N钾通道的作用,以及细胞外钾离子和pH浓度变化时对该作用的影响,并探讨该作用可能的机制.方法:将Kv1.4ΔN的mRNA注射入非洲爪蟾卵母细胞并使用双电极钳制法观察普罗帕酮对Kv1.4ΔN电生理特性的影响,以及细胞外钾离子和pH变化时的电生理特性改变.结果:pH7 4状态下,普罗帕酮对Kv1.4ΔN通道的峰电流有抑制作用,这种阻滞作用具有电压依赖性、浓度依赖性以及频率依赖性,并且随电位的升高而作用加强,符合单指数和线性关系.普罗帕酮加速电流的失活过程.在不同的钾离子浓度下,这种阻滞作用具有pH依赖性,细胞外高钾pH7 4时,不同浓度普罗帕酮灌流显示IC50为121 μmol/L;细胞外酸性环境下(pH6 0)IC50提高到463 μmol/L,碱性化的环境(pH8 0)降至58 μmol/L.结论:普罗帕酮是Kv1.4ΔN的阻滞剂,可能与作用于细胞内的某些位点有关.     

地尔硫卓对Kv1.4钾通道动力学的影响

目的:研究地尔硫卓对异源表达在卵母细胞上的克隆fKv1.4钾通道电流的激活及失活动力学影响。方法: 在非洲爪蟾卵母细胞上异源表达雪貂心脏来源的去N端Kv1.4（fKv1.4ΔN）通道基因,采用双电极电压钳制技术记录电流、记录药物对fKv1.4ΔN通道电流的影响。结果: 地尔硫卓以频率依赖性、电压依赖性及浓度依赖性的方式抑制fKv1.4ΔN通道电流,其半抑制浓度（IC50）为(241.04±23.06) μmol/L(+50 mV)。对照条件下,fKv1.4ΔN通道电流失活的表现为单指数方程拟合,在应用地尔硫卓后,fKv1.4ΔN通道电流失活变为双指数方程拟合,即药物诱导的快速失活成分及较慢的C型失活成分。地尔硫卓可加快C型失活,但其不影响fKv1.4ΔN通道电流的激活过程。结论: 地尔硫卓为fKv1.4ΔN通道的开放状态阻滞剂,可加快Kv1.4ΔN通道的失活过程。     

替米沙坦对表达在卵母细胞上Kv1.5通道的抑制效应

目的:研究替米沙坦对表达在卵母细胞上的克隆人类Kv1.5通道的作用,探讨其在心脏复极中的潜在效应。方法:在非洲爪蟾卵母细胞上异源表达克隆人类Kv1.5通道基因,使用双电极电压钳技术记录全细胞电流,检测药物对Ikur电流的影响。结果:替米沙坦以电压依赖性和浓度依赖性方式抑制Kv1.5通道电流,且对峰电流及1.5s末端电流的抑制效应不同,在1μmol/L浓度下,抑制效应分别达到(7.75±2.39)和(52.64±3.77),其半抑制浓度(IC50)分别为(2.25±0.97)μmol/L和(0.82±0.39)μmol/L。替米沙坦对通道的稳态失活没有显著改变,在对照条件下,V1/2的值为(14.47±3.71)mV,斜坡因子k为(23.24±3.86)mV;在1μmol/L替米沙坦作用下,V1/2和k的值分别为(14.38±4.62)mV和(26.26±5.04)mV(n=6,P>0.05)。同时,替米沙坦显著加速了Kv1.5通道的失活。在对照条件下,Kv1.5通道的失活慢时间常数是(693.74±23.16)ms,在应用1μmol/L替米沙坦后,其失活的慢时间常数下降为(523.85±10.28)ms(n=5,P<0.05)。结论:替米沙坦在临床有效浓度范围内能显著抑制表达在卵母细胞上的Ikur电流,提示它兼有选择性阻滞Kv1.5通道的作用。     

普罗帕酮对Kv1.4通道内口突变前后的影响

目的探讨普罗帕酮对编码瞬时外向钾电流(Ito)慢通道Kv1.4通道(fKv1.4ΔN)内口突变(fKv1.4[V561A]ΔN)前后的影响。方法将fKv1.4ΔN和fKv1.4[V561A]ΔN的cRNA注射到非洲爪蟾卵母细胞,孵育24～72 h后使用不同刺激程序用双微电极法记录通道电流的表达。用Clampfit 9.0对数据进行分析。部分电流用相应的方程拟合。结果普罗帕酮对fKv1.4ΔN和fKv1.4[V561A]ΔN的阻滞效应都呈电压和频率依赖性。通道内口的V561A突变使fKv1.4ΔN通道与普罗帕酮的结合能力减小,50%抑制浓度(IC50)在突变前后分别为100μmol/L和380μmol/L(P<0.01)。普罗帕酮能改变fKv1.4ΔN和fKv1.4[V561A]ΔN的失活特性。尽管普罗帕酮对fKv1.4ΔN的失活后恢复没有影响,但是它能延长fKv1.4[V561A]ΔN的50%失活后恢复时间。结论普罗帕酮是fKv1.4ΔN通道的开放通道阻滞剂,fKv1.4ΔN通道内口突变(V561A)能改变普罗帕酮与通道之间的结合能力,从而影响通道的失活和失活后恢复。     

酮色林对表达在卵母细胞上的Kv1.3通道的抑制作用

目的:研究酮色林(KT)对表达在卵母细胞上的Kv1.3通道的作用,探讨其作为心血管药物的潜在免疫效应。方法:在非洲爪蟾卵母细胞表达Kv1.3cRNA通道基因,使用双电极电压钳技术记录通道电流,并用药物干预。结果:KT对Kv1.3通道产生浓度依赖性和可逆性抑制效应,其抑制钾通道50%时的浓度(IC50)为(14.3±1.4)μmol/L。在10μmol/L浓度下,KT降低Kv1.3电流幅值达(43.1±3.2)%;在20μmol/L时降低达(54.1±3.2)%。KT的主要效应是降低电流幅度,对激活曲线和失活曲线无显著影响。对稳态激活曲线,在对照条件下,50%最大激活时的膜电位(V1/2)和曲线斜率(k)分别是(-23.8±0.4)mV和(7.2±0.3);应用10μmol/LKT后,V1/2和k分别是(-22.6±0.5)mV和(8.0±0.4);应用20μmol/LKT后,V1/2和k分别是(-22.3±0.5)mV和(8.1±0.5)。对失活曲线,在对照条件下,V1/2和k分别是(-46.7±0.7)mV和(9.0±0.6);应用10μmol/LKT后,V1/2和k分别是(-48.4±0.7)mV和(8.9±0.7);应用20μmol/LKT后,V1/2和k分别是(-49.2±0.6)mV和(8.8±0.5)。结论:KT在临床相关浓度内,对表达在卵母细胞上的Kv1.3通道有显著的抑制作用。其可能通过抑制淋巴细胞Kv1.3通道,从而抑制淋巴细胞的激活,而在心血管疾病的治疗中有潜在的免疫调节作用。     

FELLOW CLINICAL GERONTOLOGISTS . . . .

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S.H.A.R.E.

This paper presents a Canadian community hospital program for reducing health care costs and improving patient care associated with substance abuse. A case study is presented that illustrates the workings of the S.H.A.R.E. program, including medical staff education, patient identification and assessment, and referral to community treatment services.     

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