胆红素对肝星状细胞-T6增殖及细胞周期的影响

[目的]观察胆红素对肝星状细胞(HSC)-T6增殖及细胞周期影响.[方法]将培养细胞分成正常组和胆红素不同浓度(10 μmol/L、30 umol/L、50 /μmol/L、70 μmol/L、100 μmol/L)干预组,采用MTT法观察胆红素对HSC-T6增殖的影响,流式细胞仪观察各组细胞周期的变化.[结果]①不同浓度胆红素对HSC-T6均有促进增殖作用,且呈一定的量效关系,与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.05);②10 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L浓度胆红素作用HSC-T6后,G0/G1期减少,S期增加,G2/M期增加,与正常组比较均P＜0.05.[结论]胆红素对HSC-T6均有促进增殖作用.     

Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路参与氨致星形胶质细胞水肿

目的明确Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路在氨诱导星形胶质细胞水肿中的作用。方法①向体外培养星形胶质细胞中分别加入磷脂酶(PLC)抑制剂U73122(1μmol/L),Ca~(2+)螯合剂BAPTA(25μmol/L)或PKC抑制剂GF109203X(3μmol/L),再以氯化铵刺激细胞12 h,以Calcein作为荧光探针检测细胞水肿情况;②向细胞中分别加入PLC抑制剂U73122或表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478(1μmol/L),再加入氯化铵,以Fura-2作为荧光探针,检测细胞内Ca~(2+)瞬时变化;③氯化铵刺激细胞20 min,免疫共沉淀法检测PLC/EGFR相互结合情况;④向细胞中加入PKC抑制剂GF109203X,再以氯化铵刺激星形胶质细胞2 h检测ERK磷酸化情况。结果①U73122、BAPTA及GF109203X预处理均可显著抑制氨诱导的星形胶质细胞水肿(均P0.05);②U73122及AG1478显著抑制氨诱导的细胞内Ca~(2+)瞬时升高(均P0.05);③20 min氨刺激可增加PLC与EGFR间的相互结合(P0.05);④GF109203X显著抑制氨诱导的ERK磷酸化(P0.05)。结论 Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路介导了氨诱导星形胶质细胞水肿的过程。     

地喹氯铵对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的探讨地喹氯铵对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法用50、100、200μmol/L的地喹氯铵作用于脑胶质瘤细胞U251、U87、C6,作用时间分别为12、24、48、72、96 h,MTT检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测76μmol/L的地喹氯铵作用48 h后的脑胶质瘤细胞U251的细胞凋亡情况。Transwell小室检测地喹氯铵对脑胶质瘤细胞侵袭能力的影响。Western印迹检测细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达水平。结果 50、100、200μmol/L的地喹氯铵对U251、U87、C6脑胶质瘤细胞增殖均具有抑制作用。地喹氯铵对脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用随着作用时间的增加而增加,随着药物作用浓度的增加而增加。地喹氯铵作用胶质瘤U251、U87、C6细胞48 h的半数抑制浓度由大到小依次为:C6>U87>U251。76μmol/L的地喹氯铵作用后的脑胶质瘤细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。脑胶质瘤细胞经地喹氯铵作用后的侵袭细胞数明显低于对照组(P<0.01)。地喹氯铵作用后的脑胶质瘤细胞中PI3K、Akt的表达水平与对照组相比无明显差异,而p-PI3K、p-Akt的表达水平明显下降。结论地喹氯铵对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭能力具有抑制作用,对脑胶质瘤细胞凋亡具有促进作用,作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

黄连素抗胶质瘤的作用机制

目的探讨黄连素对大鼠恶性脑胶质瘤C6细胞生长的作用。方法培养恶性脑胶质瘤C6细胞,MTT法检测黄连素对C6细胞生长增殖的抑制作用,并且观察药物对细胞生长的影响。结果 12.5、25、50、100μmol/L黄连素均可以明显抑制C6细胞的生长,倒置显微镜下观察到药物作用后细胞密度明显降低。结论黄连素能明显抑制脑胶质瘤细胞的生长增殖。     

JAK-STAT信号通路阻断剂AG490对肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨酪氨酸激酶(JAK)-信号转导及转录激活因子(STAT)信号转导通路阻断剂α-氰基-(3,4-羟基)N-苄苯乙烯胺(AG490)对肺癌Lewis细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法不同浓度AG490(0、20、40、80、160μmol/L)作用于肺癌Lewis细胞24、48 h,噻唑蓝(MTT)实验观察各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测0、40、80μmol/L组细胞凋亡率,Western印迹检测0、80μmol/L组细胞STAT3、STAT5、Survivin蛋白表达。结果 AG490作用24和48 h,与0μmol/L组相比,20、40、80、160μmol/L组细胞的增殖抑制率显著升高(P<0.05);与20μmol/L组相比,40、80和160μmol/L组显著增高(P<0.05),40μmol/L组与80、160μmol/L组差异显著(P<0.05)。20、40μmol/L组在24 h时细胞增殖抑制率显著低于48 h(P<0.05),80和160μmol/L组在24 h时与48 h时无统计学差异(P>0.05)。作用24和48 h时,40、80μmol/L组细胞凋亡率显著高于0μmol/L组(P<0.05),80μmol/L组显著高于40μmol/L组;40、80μmol/L组作用24 h的细胞凋亡率显著低于48 h(P<0.05)。80μmol/L组细胞中STAT3、STAT5、Survivin的表达量均显著低于0μmol/L组(P<0.05)。结论一定浓度和时间范围内,AG490可显著抑制细胞的增殖,促进其凋亡,阻断JAK-STAT通路中STAT3、STAT5蛋白的表达水平,进而降低其下游凋亡抑制蛋白Survivin的表达可能是其作用机制之一。     

熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的 体外观察熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响,探讨熊果酸诱导肝星状细胞凋亡的可能作用机制. 方法 将不同浓度熊果酸作用于肝星状细胞HSC-T6及肝细胞L02,分别在药物作用24、48、72 h后用四甲基偶氮唑盐法检测熊果酸对HSC-T6及L02细胞增殖的影响;流式细胞仪检测熊果酸对HSC-T6凋亡的影响;光学显微镜观察熊果酸作用后细胞形态学变化情况;免疫细胞化学法检测HSC-T6中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况. 结果 各种浓度的熊果酸均可抑制HSC-T6细胞的增殖,且呈剂量-时间依赖性;当熊果酸浓度为25、50、75μmol/L时可促进L02细胞增殖,浓度＞75μmol/L则表现为抑制L02细胞增殖.在病理形态学方面,熊果酸作用HSC-T6细胞48 h后,光学显微镜下可见细胞缩小变圆、核浓缩等.25、50、75 μmol/L熊果酸作用HSC-T6细胞48 h后,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率分别为10.30%±3.85%、21.87%±4.46%、31.33%±6.18%,比对照组(2.93%±1.60%)明显升高(P＜0.01).免疫细胞化学显示Bax及Caspase-3蛋白表达较对照组升高(P＜0.05),且呈剂量依赖性,而Bcl-2蛋白表达水平与对照组无明显差异(P＞0.05).结论 在体外熊果酸可较明显地抑制HSC-T6细胞增殖,诱导其凋亡;对L02细胞的生长具有双向调节作用.熊果酸诱导HSC-T6细胞凋亡可能与降低Bcl-2/Bax比值、激活Caspase-3蛋白有关.     

转化生长因子α对小鼠气道平滑肌细胞的促增殖作用

目的 探讨转化生长因子α(transforming growth factog alphg,TGF-α)对小鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMC)促增殖作用及其机制.方法 用四唑盐(MTT)比色法和3H-TdR掺人法测定加入TGF-α后小鼠ASMC的增殖情况.本实验采用3H-TdR掺入法和MTT比色法观察选择性表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(AG1478)、EGFR中和抗体225(225mAb)、MEK抑制剂(U0126)、PI-3K抑制剂(Wonmannin)对加入TGF-α后促ASMC增殖的影响.通过Western Blot方法测定加入TGF-α及加用AG1478、225mAb后ASMC磷酸化EGFR蛋白表达.结果 用MTT比色法和3H-TdR掺入法测定ASMC培养液中加入TGF-α后ASMC增殖情况比对照组明显增加.加入AG1478、225mAb、U0126、Wortmannin可抑制TGF-α促ASMC增殖作用(P＜0.01).经Western Blot检测,TGF-α引起ASMC磷酸化EGFR蛋白表达增高.AG1478、225mAb抑制TGF-α所致ASMC磷酸化EGFR蛋白表达的增加(P＜0.01).结论 TGF-α激活EGFR为磷酸化EGFR,从而通过:①ras-raf-MEK-erk/MAPK途径;②PI3K-PKC-IKK途径;促进体外培养的小鼠ASMC的增殖.     

iNOS与COX-2对H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡的影响

目的 探讨iNOS与COX-2在H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡的作用.方法 在PC12细胞建立H2O2预处理对抗H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞仪(FCM)检测iNOS与COX-2蛋白表达水平.结果 用10 μmol/L H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制50 μmol/L H2O2作用24 h后引起的细胞凋亡,并可明显地促进PC12细胞iNOS与COX-2蛋白表达;选择性iNOS抑制剂AG和COX-2抑制剂NS-398分别阻断H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡作用.结论 iNOS和COX-2均介导了H2O2预处理诱导的抗凋亡作用.     

去甲斑蝥素聚乳酸—羟乙酸微球对胶质瘤C6 细胞生长的影响

[目的]观察去甲斑蝥素聚乳酸—羟乙酸(PLGA)微球对C6 细胞体外生长的影响.[方法]取对数生长期的胶质瘤C6 细胞,分别加入不同终浓度的去甲斑蝥素(A组)各10 μL和去甲斑蝥素PLGA微球(B组)各10μL.分别培养24、48、72 h.另设空白微球组(C组)和空白细胞对照组(对照组).采用MTT法测算各组各时点C6 细胞抑制率.[结果]去甲斑蝥素和去甲斑蝥素PLGA微球对C6 细胞生长均有抑制作用,并表现出明显的量效关系和时效关系(P均＜0.05);去甲斑蝥素对胶质瘤C6 细胞生长的抑制作用明显强于相同剂量的去甲斑蝥素PLGA微球,但随着去甲斑蝥素浓度的增高和作用时间的延长,二者差异呈减小趋势.高浓度(80 μg/mL)的去甲斑蝥素作用72 h,A、B组C6细胞生长抑制率相近(P＞0.05).[结论]去甲斑蝥素和去甲斑蝥素PLGA微球对C6 细胞的生长均有不同程度的抑制作用;去甲斑蝥素PLGA微球具有去甲斑蝥素缓释功能.     

联合抑制环氧合酶-2与5-脂氧合酶对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的:通过单独及联合应用选择性COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861处理胃癌细胞系AGS,比较各实验组的增殖凋亡率,探讨联合抑制COX-2和5-LOX两条通路对胃癌细胞系AGS增殖凋亡的影响.方法:AGS细胞在含100 mL/L小牛血清 100kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中培养,取对数生长期细胞做为实验组.以相差显微镜观察药物处理前后的细胞形态改变;设立AA861(25,50,100 μmol/L)组,尼美舒利(50,100,200 μmol/L)组,及AA861联合尼美舒利处理组(50 μmol/L AA861 100 μmol/L尼美舒利),用四氮唑蓝(MTT)法在24,48,72 h测量细胞吸光度,以此检测单用及联用AA861与尼美舒利对细胞生长增殖的影响;实验通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡率,以DNA-LADDER法观察凋亡.结果:相差显微镜观察,药物处理组细胞与对照组相比,形态发生明显改变.MTT显示,除尼美舒利200μmol/L的24,48 h处理组及AA861 25 μmol/L的24 h处理组外,尼美舒利和AA861基本呈时间、剂量依赖性抑制AGS细胞增殖.TUNEL染色法表明,尼美舒利或AA861处理组的细胞凋亡率随着剂量的增加而升高.药物处理48 h后,MTT法表明,细胞增殖在AA861组和尼美舒利组与两药联用组间相比差异显著(0.240±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.01;0.211±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.05);TUNEL染色法表明,单药组与两药联用组细胞凋亡率相比差异明显(AA861组:1 8.67%±0.03%,尼美舒利组:20.94%±0.48%vs两药联用组:23.76%±0.92%,P＜0.01);AO/EB染色法也同时表明,细胞凋亡单药组与两药联用组相比差异明显(AA861组:18.17%±0.28%、尼美舒利组:19.35%±0.74% vs两药联用组:23.78%±0.04%,P＜0.01).DNA琼脂糖凝胶电泳法显示,两药联合处理AGS细胞组与单药处理组比较,癌细胞增殖被抑制,凋亡明显增加.结论:COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861对胃癌AGS细胞的增殖抑制以及促凋亡作用基本呈时间浓度依赖性.联用尼美舒利和AA861抑制COX-2与5-LOX两条通路,与单独抑制其中一条通路比较,能更有效抑制胃癌细胞增殖,促进凋亡.     

Antitumor efficacy of cytotoxic drugs and the monoclonal antibody 806 is enhanced by the EGF receptor inhibitor AG1478

Blockade of epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling with specific inhibitors of the EGFR tyrosine kinase retards cellular proliferation and arrests the growth of tumor xenografts. AG1478, an inhibitor of the EGFR tyrosine kinase, is used in laboratory studies; however, its therapeutic potential has not been elucidated. Therefore, we evaluated an aqueous form of AG1478 for its antitumor activity in mice bearing human xenografts expressing the WT EGFR or a naturally occurring ligand-independent truncation of the EGFR [delta2-7 (de2-7) EGFR or EGFRvIII]. Parenteral administration of soluble AG1478 blocked phosphorylation of the EGFR at the tumor site and inhibited the growth of A431 xenografts that overexpress the WT EGFR and glioma xenografts expressing the de2-7 EGFR. Strikingly, even subtherapeutic doses of AG1478 significantly enhanced the efficacy of cytotoxic drugs, with the combination of AG1478 and temozolomide displaying synergistic antitumor activity against human glioma xenografts. AG1478 was also examined in combination with mAb 806, an anti-EGFR antibody that was raised against the de2-7 EGFR but unexpectedly also binds a subset of the EGFR expressed in cells exhibiting amplification of the EGFR gene. The combination of AG1478 and mAb 806 displayed additive, and in some cases synergistic, antitumor activity against tumor xenografts overexpressing the EGFR. Here, we demonstrate that different classes of inhibitors to the EGFR can have synergistic antitumor activity in vivo. These results establish the antitumor efficacy of the EGFR inhibitor AG1478 and provide a rationale for its clinical evaluation in combination with both chemotherapy and other EGFR therapeutics.     

表皮生长因子受体对支气管哮喘小鼠气道黏液分泌的影响及机制

目的 探讨支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道黏液分泌与表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子α(TGF-α)的关系以及表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(AG1478)的干预作用.方法 32只小鼠随机分为4组:正常对照组、哮喘模型组、AG1478组和地塞米松干预组.建立哮喘小鼠模型,对肺组织切片行过碘酸雪夫染色显示气道黏膜杯状细胞的增生情况.应用免疫组织化学方法检测TGF-α的蛋白及RT-PCR方法检测EGFR mRNA表达的变化.结果 哮喘组出现气道壁增厚、杯状细胞增多、黏液分泌增加,EGFR、TGF-α水平增高.地塞米松组和AG1478组较哮喘组均有所改善,EGFR、TGF-α表达降低(P<0.05).结论 EGFR、TGF-α参与哮喘小鼠气道黏液分泌过程,AG1478可抑制气道黏液分泌.AG1478可能通过下调EGFR、TGF-α的表达以及抑制依赖于EGFR下游的细胞信号转导级联反应来发挥其效应.     

表皮生长因子受体对支气管哮喘小鼠气道黏液分泌的影响及机制

目的探讨支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道黏液分泌与表皮生长因子受体（EGFR）、转化生长因子α（TGFα）的关系以及表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（AG1478）的干预作用。方法32只小鼠随机分为4组：正常对照组、哮喘模型组、AG1478组和地塞米松干预组。建立哮喘小鼠模型,对肺组织切片行过碘酸雪夫染色显示气道黏膜杯状细胞的增生情况。应用免疫组织化学方法检测TGF—α的蛋白及RTPCR方法检测EGFR mRNA表达的变化。结果哮喘组出现气道壁增厚、杯状细胞增多、黏液分泌增加,EGFR、TGF—α水平增高。地塞米松组和AG1478组较哮喘组均有所改善,EGFR、TGF—α表达降低（P〈0．05）。结论EGFR、TGF—α参与哮喘小鼠气道黏液分泌过程,AG1478可抑制气道黏液分泌。AG1478可能通过下调EGFR、TGF-α的表达以及抑制依赖于EGFR下游的细胞信号转导级联反应来发挥其效应。     

三氧化二砷对人脐静脉内皮细胞作用的研究

目的 通过观察不同浓度三氧化二砷(As2O3)对内皮细胞形态及增殖活力的影响，从内皮细胞角度评价As2O3防治经皮冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄的作用。方法 以不同浓度As2O3（0.01 μmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L和10 μmol/L）作用于传代培养的人静脉内皮细胞株（EVC-304），分别培养24 h、48 h和72 h观察细胞形态、绘制细胞生长曲线，并行MTT比色法观察As2O3对内皮细胞增殖活力〔吸光度(A)值〕的影响。结果 10 μmol/L的As2O3使细胞皱缩变圆，甚至浮起、碎裂。≤1 μmol/L的As2O3作用于内皮细胞后，细胞形态无明显变化。细胞计数显示，As2O3浓度高于1 μmol/L时，内皮细胞数明显降低。MTT比色法显示:As2O3浓度低于1 μmol/L，A值与对照组比较无差异，在1~10 μmol/L浓度范围内，A值明显降低（P<0.05），提示细胞增殖活力受到抑制。结论 高浓度As2O3对内皮细胞形态有破坏作用，并显著抑制内皮细胞增殖，且抑制作用具有时间及剂量依赖性。低浓度的As2O3则对内皮细胞形态及增殖活力无影响。     

埃罗替尼对胰腺癌细胞BxPC3生长的影响及其机制

目的 观察表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂埃罗替尼对体外培养的胰腺痛细胞BxPC3生长的影响,并探讨其作用机制.方法 应用MTT法检测埃罗替尼作用后BxPC3细胞的增殖情况;用流式细胞分析、透射电镜和原位末端标记(TUNEL)法观察细胞凋亡和细胞周期的变化;RT-PCR法检测细胞bcl-2、bax、bel-xl、bak mRNA表达.结果 埃罗替尼呈剂量和时间依赖性抑制BxPC3细胞生长.72h后,1、100μmol/L的埃罗替尼处理组细胞存活率分别为(90.25±2.62)%和(40.75±2.98)%,两者比较具有统计学意义(P<0.01).50 μmol,/L埃罗替尼处理BxPC3后24、96 h的细胞存活率分别为(74.0±4.08)%和(49.50 ±1.29)%,两者比较也具有统计学意义(P<0.01).50μmaol/L埃罗替尼处理组的细胞凋亡率为(11.0±1.1)%,显著高于对照组的(6.2±1.1)%(P<0.01);G_0/G_1细胞占(73.4 ±1.3)%,也显著高于对照组的(63.3 ±1.0)%;透射电镜可见细胞呈现明显凋亡形态,并见凋亡小体形成.埃罗替尼处理组细胞bcl-2、bcl-xl mRNA表达下调,bax mRNA表达轻微上调,bak mRNA的表达不受影响.结论 EGFR抑制剂埃罗替尼体外可抑制胰腺癌细胞系BxPC3的生长,其机制可能与阻滞细胞周期,上调促凋亡蛋白和下调凋亡抑制蛋白有关.     

茶黄素和表皮生长因子受体对气道黏液分泌的影响

目的 探讨茶黄素对炎症反应时气道上皮细胞黏液分泌的影响.方法 通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎症反应时气道黏液高分泌模型,以茶黄素和表皮生长因子受体(EGFR)阻断剂表皮生长因子受体阻断剂(AG1478)进行干预,观察黏蛋白5AC(MUCSAC)、EGFR、磷酸化EGFR(P-EGFR)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(P-ERK1/2)、兔抗磷酸化p38(P-p38)及磷酸化JNK丝裂原活化蛋白激酶(P-JNK)的表达.用四甲基偶氮唑盐法测定细胞活性,再将A549细胞分为对照组、HNE处理组、茶黄素组、AG1478组和茶黄素+AG1478组.用逆转录PCR方法检测各组MUC5AC mRNA、EGFR mRNA的变化;Western blot法检测EGFR、P-EGFR、P-ERK1/2、P-p38和P-JNK蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法观察MUCSAC蛋白表达的变化,并用细胞免疫激光共聚焦显微镜观察作用前后黏蛋白的分布.两样本均数间比较采用t检验,多样本均数间比较采用单因素方差分析.结果 HNE处理组MUC5AC的mRNA和蛋白的积分吸光度值分别为0.99±0.03和(169±6)μg/mg,EGFR mRNA和蛋白表达的积分吸光度值分别为0.98±0.02和(0.89±0.03)μg/mg,均较对照组[0.53±0.02、(105±4)μg/mg和0.61±0.11、0.21±0.05]明显升高;P-EGFR、P-ERK1/2的蛋白表达也较对照组显著增加,而P-p38的表达则有较低幅度的增强,P-JNK无明显变化.给予茶黄素及AG1478预处理后,与HNE刺激组相比,EGFR、P-EGFR、P-ERK1/2、P-p38均明显下调,P-JNK无相应改变;而茶黄素+AG1478组MUCSAC mRNA和MUC5AC的下调较单独用茶黄素或AG1478处理更为明显,其积分吸光度值分别为0.20±0.02和(125±3)μg/mg,差异均有统计学意义(t值分别为3.02和1405.94,均P<0.05).结论 茶黄素可通过下调EGFR水平、减少EGFR的活化、部分阻遏EGFR信号转导途径及细胞外信号调节激酶来实现对下游途径的影响,从而发挥茶黄素抑制炎性气道黏液高分泌形成的作用.     

埃罗替尼对胰腺癌细胞BxPC3生长的影响及其机制

目的观察表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂埃罗替尼对体外培养的胰腺癌细胞BxPC3生长的影响,并探讨其作用机制。方法应用MTT法检测埃罗替尼作用后BxPC3细胞的增殖情况;用流式细胞分析、透射电镜和原位末端标记（TUNEL）法观察细胞凋亡和细胞周期的变化;RT—PCR法检测细胞bcl-2、bax、bcl-xl、bak mRNA表达。结果埃罗替尼呈剂量和时间依赖性抑制BxPC3细胞生长。72h后,1、100μmol／L的埃罗替尼处理组细胞存活率分别为（90．25±2．62）％和（40．75±2．98）％。两者比较具有统计学意义（P〈0．01）。50μmol／L埃罗替尼处理BxPC3后24、96h的细胞存活率分别为（74．0±4．08）％和（49．50±1．29）％,两者比较也具有统计学意义（P〈0．01）。50μmol／L埃罗替尼处理组的细胞凋亡率为（11．0±1．1）％,显著高于对照组的（6．2±1．1）％（P〈0．01）;G0／G1细胞占（73．4±1．3）％,也显著高于对照组的（63．3±1．0）％;透射电镜可见细胞呈现明显凋亡形态,并见凋亡小体形成。埃罗替尼处理组细胞bcl-2、bcl—xl mRNA表达下调,bax mRNA表达轻微上调,bak mRNA的表达不受影响。结论EGFR抑制剂埃罗替尼体外可抑制胰腺癌细胞系BxPC3的生长,其机制可能与阻滞细胞周期,上调促凋亡蛋白和下调凋亡抑制蛋白有关.     

熊果酸诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的：观察熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制及诱导其凋亡作用。方法：MTT法检测5、10、20、30、40、50μmol/L UA对SMMC-7721细胞生长的抑制作用,吖啶橙（AO）荧光染色、电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：UA能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性。35.2μmol/L UA作用SMMC-7721细胞48小时后AO染色,荧光显微镜下可见细胞出现体积缩小,核碎裂,染色质凝集等凋亡形态改变;电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变,细胞核染色质出现边聚和中聚,细胞内部分线粒体肿胀;SMMC-7721细胞凋亡率为（67.91±5.24）%,与对照组（2.95±0.56）%比较差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：UA通过诱导SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长。     

Gefitinib prevents bleomycin-induced lung fibrosis in mice

RATIONALE: Transforming growth factor-alpha and epidermal growth factor (EGF), the ligands for EGF receptor (EGFR), stimulate fibroblast proliferation and play an important role in the pathogenesis of pulmonary fibrosis. Therefore, inhibition of the EGFR signal by an EGFR tyrosine kinase inhibitor (EGFR-TKI) may prevent pulmonary fibrosis. However, there is a possibility that blocking the EGFR signal may inhibit epithelial cell repair, thereby exaggerating lung fibrosis. OBJECTIVE: To investigate the effect of EGFR-TK inhibition on lung fibrosis. METHODS: We looked at the effects of the EGFR-TKIs gefitinib (20, 90, 200 mg/kg) and AG1478 (12 mg/kg) on a bleomycin-induced lung fibrosis model in mice. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: Gefitinib prevented lung fibrosis at all three doses. Furthermore, in those mice that did not receive bleomycin treatment, gefitinib at 200 mg/kg did not induce lung fibrosis. Immunohistochemistry revealed that phosphorylation of EGFR in lung mesenchymal cells induced by bleomycin was inhibited by gefitinib. AG1478 also attenuated the lung fibrosis. In vitro studies further demonstrated that the addition of gefitinib or AG1478 suppressed the EGFR ligand-induced proliferation of lung fibroblasts. CONCLUSIONS: These findings suggest that, in the preclinical setting, EGFR-TKIs may have a protective effect on lung fibrosis induced by bleomycin. Because these molecular targeted drugs may have differing effects depending on species and individuals, a cautious interpretation is warranted.     

抗脑抗体对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的观察抗脑抗体对脑胶质瘤细胞C6的增殖、凋亡和侵袭力的影响。方法将C6细胞分为实验组和对照组,实验组加入不同浓度的抗脑抗体,对照组不加抗脑抗体;分别采用MTT法、流式细胞术及Boyden小室测算C6增殖抑制率、细胞凋亡率及穿膜细胞数。结果实验组加抗脑抗体5、10、20、30、400μml处理后,C6增殖抑制率分别为16．3％±4．4％、18．7％±3．2％、22．6％±3．0％、27．7％±1．4％、39．9％±3．3％,对照组为0;实验组加抗脑抗体5、40μg/ml处理后,C6细胞凋亡率分别为17．257％±5．964％、28．677％±6．748％,对照组为6．043％±0．421％;实验组加抗脑抗体5、20、30μg/ml处理后,C6穿膜细胞数分别为（3266．67±251．66）、（7133．33±305．51）、（15000．00±2000．00）个,对照组为（1533．33±152．75）个。实验组各浓度间相比,P均〈0．05;与对照组相比,P均〈0．05。结论抗脑抗体可抑制脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭,并诱导其凋亡。