藤梨根提取物抗人肺腺癌A549细胞生长的实验研究

采用MTT检测法、集落形成试验、流式细胞术检测细胞凋亡及建立裸鼠移植瘤模型进行体内实验,观察藤梨根提取物对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用。结果显示各浓度的藤梨根提取物对肺腺癌A549细胞均有较强的抑制效应,且呈现出明显的时相性和量-效依赖性;藤梨根提取物作用后G0～G1期细胞数增加,细胞出现凋亡,并随药物浓度增大作用增强;移植瘤体内试验显示藤梨根提取物高剂量组移植瘤生长缓慢,体积明显小于对照组及低剂量组。表明藤梨根提取物对人肺腺癌A549细胞在体内外均有生长抑制作用,并可诱导其细胞凋亡。     

亚硒酸钠及维甲酸对肺腺癌A549细胞分化和增殖的影响

用亚硒酸钠、反式维甲酸单独或联合作用于肺腺癌A549细胞株，了解其对肺癌细胞的分化及增殖的影响。     

反应停对肺腺癌细胞株诱导的血管内皮细胞增殖的影响

目的探讨反应停对肺腺癌细胞株诱导的血管内皮细胞增殖的影响。方法用噻唑兰法检测不同浓度反应停对血管内皮细胞株ECV304（ECV304细胞）、肺腺癌细胞株SPC—A1（SPC—A1细胞）及其诱导的血管内皮细胞ECV304增殖的影响。结果反应停浓度为8．0和80．0μg／ml时对ECV304细胞增殖有抑制作用（P〈0．05）;不同浓度反应停对SIC-A1细胞增殖无影响;经8．0和80．0μg／ml反应停作用后SIC-A1细胞条件培养液对ECV304细胞增殖有抑制作用（P均〈0．05）,其细胞生长抑制率分别为5．19％、12．49％。结论反应停对SPC-A1细胞诱导的ECV304细胞增殖有抑制作用。     

槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的实验研究

槐耳清膏是药用真菌槐耳菌质的热水提取物 ,临床上证实有一定的抗癌效果。为进一步探讨其抗癌机制 ,我们研究了槐耳清膏在体外诱导人肺腺癌细胞系Ａ5 49凋亡的作用。材料与方法　引进并培养人肺腺癌细胞系Ａ5 49细胞株。制备不同浓度的槐耳清膏ＰＲＭＩ 16 40含药培养液与接种成功、呈对数生长的Ａ5 49细胞共同培养 2 4ｈ后 ,每 6ｈ进行以下观察及测定 (设阳性对照组羟基喜树碱 10 0 μｇ/ｍｌ,共同孵育 10～ 12ｈ后进行测定 ) [1] 。 (1)荧光染色 :收集培养细胞 ,清洗并均匀涂片自然风干 2 4ｈ ,置于 0 0 5ｍｇ/Ｌ的Ｈｏｅｃｈｓｔ332 5 8…     

槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响

目的研究槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响。方法制备浓度为0、3、6、9 mg/ml的槐耳清膏与人肺腺癌A549细胞作用后,采用流式细胞检测观察细胞凋亡率,并分析药物干预36 h对细胞周期和细胞凋亡率的影响。结果流式细胞术检测结果显示,槐耳清膏各浓度组均可发生细胞凋亡,与对照组相比差异显著(P0.05)。各浓度组可使人肺腺癌A549细胞G0/G1、S期细胞比例减少,G2/M期细胞比例增多。结论槐耳清膏能诱导人肺腺癌A549细胞增殖,可能与细胞被阻滞于G2/M期有关。     

益肺解毒方联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的探讨益肺解毒方联合顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法 (1)应用血清药理学方法制备益肺解毒方药物血清。60只SD大鼠,分为低、中、高剂量组及空白血清组,每组15只。给予低、中、高剂量益肺解毒方煎剂及等体积生理盐水灌胃3 d,然后腹主动脉取血,制备益肺解毒方药物血清。(2)应用噻唑蓝(MTT)法检测益肺解毒方含药血清、顺铂及将两者协同后对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用。益肺解毒方药物血清组分为3个剂量组(低、中、高剂量组)、空白血清组、顺铂组;联合组(低、中、高剂量益肺解毒方与空白血清联合顺铂)。将顺铂设为5个浓度梯度(1、2、4、8、16 mg/L)。另设空白对照组、空白调零组。每组设6个复孔,实验重复3次。计算各组对人肺腺癌A549细胞增殖抑制率。结果低、中、高剂量益肺解毒方药物血清对人肺腺癌A549细胞增殖均具有抑制作用(P<0.05),且剂量与抑制率呈一定量效关系。顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖亦具有抑制作用,且随着浓度的增高,抑制率逐渐增高,作用呈现浓度依赖效应。中、高剂量益肺解毒方药物血清与顺铂协同,协同指数>1.15,数据结果提示益肺解毒方可以协同顺铂增加其疗效。而应用低剂量益肺解毒方则与顺铂协同效应为单纯相加。结论益肺解毒方联合顺铂对肺腺癌A549细胞具有协同增效作用。     

青蒿琥酯联合热疗对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

目的观察青蒿琥酯联合热疗对肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用。方法将A549分为四组:A组给予不同浓度的青蒿琥酯;B组给予热疗(43℃加热1 h);C组给予青蒿琥酯联合热疗;D组为正常培养A549(对照组)。分别在处理24、48 h时用MTT法检测四组A549的生长抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率。结果青蒿琥酯对A549生长抑制作用与剂量—效应—时间呈正相关系,在100～800μmol/L的范围内呈线性关系。青蒿琥酯及青蒿琥酯联合热疗作用24 h半数抑制浓度(IC_(50))分别为396μmol/L和172μmol/L。与D组相比,A、C组G_0/G_1期细胞数增多,S期和G_2/M期细胞数减少(P<0.01)。A、C组细胞凋亡率分别为16.77%和28.90%,均高于D组的2.08%(P<0.01)。结论青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗可抑制A549生长,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。     

弓形虫Ⅰ型和Ⅱ型ROP16蛋白对人肺腺癌A549细胞增殖、周期和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨弓形虫Ⅰ型和Ⅱ型ROP16蛋白对人肺腺癌A549细胞增殖、周期和凋亡的影响及分子机制。方法将构建好的Ⅰ型和Ⅱ型ROP16重组慢病毒表达载体(A549-RH ROP16、A549-Me49ROP16)感染A549细胞,经嘌呤筛选稳定后获得单克隆过表达细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot法鉴定过表达效果,免疫荧光法检测其定位。CCK-8法测定A549细胞的增殖活性。流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化水平。Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspases-3、Caspase9、p53和细胞周期相关蛋白p21、CDK6、CyclinD1的蛋白水平。结果Western blot和q-PCR检测结果显示,重组慢病毒表达载体转染A549细胞72h后其ROP16mRNA和蛋白都有明显表达(P<0.05)。cck8检测结果显示,Ⅰ型ROP16蛋白抑制A549细胞增殖(P<0.05)。流式细胞术检测显示,与对照组比较,Ⅰ型ROP16过表达组中细胞凋亡率下降20.69%,G1期细胞百分由原来的63.2%升高到83.2%。Western blot结果显示促细胞周期G1/S转化因子CDK6、CyclinD1蛋白表达明显降低,而细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21表达明显升高(P<0.05);促凋亡因子Bax、Cleaved Caspases-3、Caspase9、p53蛋白的表达明显升高,抗凋亡因子Bcl-2表达受到抑制(P<0.05)。而Ⅱ型ROP16过表达组与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论Ⅰ型ROP16蛋白过表达可诱导人肺腺癌A549细胞周期停滞和细胞凋亡。     

RAd-ODC/Ex3as对肺癌A-549细胞抑制作用的研究

目的探讨重组腺病毒rAd-ODC／Ex3as对肺癌A-549细胞的体外抑制作用。方法利用基因GFP测定病毒感染效率，采用MTT法观察rAd—ODC／Ex3as对肺癌细胞A-549生长增殖的影响，用Western Blot检测rAd—ODC／Ex3as对鸟氨酸脱羧酶（ODC）基因表达的影响。结果当MOI为50时，腺病毒感染A-549细胞的效率约为75％；Western Blot证实rAd—ODC／Ex3as可抑制ODC基因的表达；rAd—ODC／Ex3as以20MOI感染肺癌A-549细胞可明显抑制其生长增殖。结论rAd—ODC／Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达，并可抑制肺癌A-54．9细胞的生长和增殖，有单成为治疗肺癌的基因药物。     

厄洛替尼联合RNAi对人肺腺癌A549细胞凋亡及survivin表达的影响

目的探讨厄洛替尼联合survivin siRNA转染对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及对survivin基因的抑制作用。方法选用survivin siRNA转染和厄洛替尼二者单独或联合作用于人肺腺癌A549细胞,作用48 h后采用流式细胞技术检测其对各组细胞凋亡的影响,Western blot法检测其对survivin蛋白表达的影响。结果 survivinsiRNA转染和厄洛替尼二者单独或联合作用于人肺腺癌A549细胞48 h后细胞凋亡均明显增加（P〈0.05）,并且均能明显降低细胞内survivin蛋白的表达水平,联合应用较单独应用促进细胞凋亡作用更显著（P〈0.05）,对sur-vivin蛋白表达的抑制作用更强（P〈0.05）。结论应用siRNA沉默survivin表达可以提高肺腺癌细胞对厄洛替尼的敏感性。     

槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖抑制及诱导凋亡的影响。方法制备不同浓度的槐耳清膏(0、3、6、9 mg/ml)和羟基喜树碱100μg/ml作用于A549细胞,分别于24、36和48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果槐耳清膏与羟基喜树碱均可诱导A549细胞凋亡,槐耳清膏各浓度组与阴性对照组相比差异显著(P<0.05),且这种抑制存在浓度和时间依赖性,槐耳清膏浓度在3.0 mg/ml 36 h后抑制作用最强,羟基喜树碱组与之比较无显著差异(P>0.05),各浓度槐耳清膏组在与A549细胞作用36 h后达到抑制高峰。结论槐耳清膏在体外能抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡作用。     

诺帝对人肺腺癌细胞A549及其耐药株A549DDP体外生长的影响及机制

目的探讨诺帝对肺腺癌细胞系A549及耐顺铂株A549DDP的作用及机制,为诺帝的临床应用提供理论依据。方法 MTT法检测诺帝对A549及A549DDP细胞增殖的抑制作用,流式细胞术（FCM）分析细胞周期,免疫细胞化学SP法及原位杂交法分别检测细胞质内P糖蛋白及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达。结果诺帝干预后A549及A549DDP细胞增殖明显受抑,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞减少;A549及A549DDP细胞质内P糖蛋白及VEGF mRNA表达均明显降低。结论诺帝对A549及A549DDP细胞生长均有抑制作用,其机制可能是抑制肿瘤血管生成及降低P糖蛋白表达。     

廿烷五烯酸协同顺铂对肺腺癌细胞株的影响

目的观察廿烷五烯酸（EPA）联合顺铂对肺腺癌细胞株A-549的抗增殖和诱导凋亡作用。方法A-549进行体外培养后分为A组和B组。B组分别加EPA15（B1组）、30（B2组）、60（B3组）μg/ml及顺铂30μg/ml（B4组）、顺铂30μg/ml＋EPA15μg/ml（B5组）、顺铂30μg/ml＋EPA 30μg/ml（B6组）、顺铂30μg/ml＋EPA60μg/m（B7组）,分别培养24、48、72、96 h。A组加培养液50μl。实验步骤两组相同。MTT法测A-549的生长抑制率,倒置显微镜、光学显微镜观察细胞形态,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果①B1～B7（EPA在15～60μg/ml范围内）组,A-549均呈抑制生长,EPA与顺铂具有协同抗癌作用,并表现出浓度、时间依赖性关系。②光镜下B组A-549体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,部分细胞核脱落,细胞膜起泡形成凋亡小体;A组细胞生长旺盛,呈不规则形,核分裂象多见,细胞核规整,染成均一蓝色。倒置显微镜下,B组A-549体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱;A组细胞贴壁生长良好,充分生长,透亮度好。③B1～B3组细胞凋亡指数（AI）依次升高,分别为5．57％±0．82％、11．68％±1．26％、24．53％±1．68％（P〈0．01）。结论体外实验中,EPA对A-549生长有抑制作用,呈明显的量效和时效关系;EPA与顺铂有协同作用。     

厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法选用Survivin siRNA转染和厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,作用48 h后,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用,免疫组化法观察Survivin蛋白表达的变化。结果 Survivin siRNA转染和厄洛替尼两者单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549作用48 h后,两种因素单独或联合应用都对细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制率分别为（47.68±4.09）%、（60.28±3.23）%、（78.14±4.34）%,较对照组差别有统计学意义（P〈0.01）,并能明显降低细胞内Survivin蛋白的表达水平,联合应用较两者单独应用对细胞增殖的抑制作用更显著（P〈0.01）,对Survivin蛋白表达的抑制作用更强。结论应用siRNA沉默Survivin表达可以提高肺腺癌细胞对厄洛替尼的敏感性。     

维甲酸对肺腺癌细胞凋亡的影响

维甲酸对肺腺癌细胞凋亡的影响司斌张世明柳河刘志遐王雄彪细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种生理性的、高度程序化的、自动的细胞死亡过程，在维持机体组织细胞的数目平衡上起重要作用。已经证明，生物体中细胞死亡通路的紊乱与肿瘤的形成密切相关，促进肿瘤细胞凋亡...     

RNAi技术对人肺腺癌细胞A549内源Survivin基因表达的影响

目的 为Survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法的临床应用提供依据.方法 应用RNA干扰技术(RNAi)将靶向Survivin的基因片段插入载体后构建重组质粒,将其导入A549细胞,MIT法检测转染前后A549细胞增殖情况, RT-PCR及Western blot法分析转染前后Survivin mRNA和蛋白表达情况.结果 成功构建重组质粒pGenesil1.1-Survivin.转染重组质粒后Survivin mRNA和蛋白的表达明显降低,抑制率分别为65%和71%,细胞增殖受抑.结论 RNAi技术构建的重组质粒可明显抑制A549细胞内源Survivin的表达和mRNA转录,其在肿瘤基因沉寂疗法中可能起重要作用.     

人肺腺癌A549细胞系培美曲塞耐药细胞株模型的建立

目的建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。方法以人肺腺癌A549细胞为亲本株,应用高浓度反复间歇法模拟临床给药模式建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株。MTT法绘制生长曲线、计算倍增时间,同时检测耐药株细胞对顺铂、依托泊苷、紫杉醇、长春新碱的药物敏感性。结果亲本株IC_50为(181.75±12.56)ng/ml,耐药株IC_50为(4930.40±129.71)ng/ml,最终获得耐药指数为27.18±1.16的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株,命名为A549/PEM。A549和A549/PEM增殖速度接近,倍增时间分别为(62.78±1.06)h和(62.35±0.89)h(P=0.773)。A549/PEM同时对顺铂、依托泊苷耐药,耐药指数分别为(1.93±0.02)、(8.26±1.55);对紫杉醇、长春新碱敏感,耐药指数分别为(0.89±0.10)、(0.95±0.11)。结论本研究成功建立的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。     

STAT3在人肺腺癌细胞A549中的表达及意义

目的 探讨信号转导和转录激活因子3( STAT3)的临床应用价值.方法 利用电化学发光免疫法检测人肺腺癌细胞A549和人胚胎成纤维细胞MRC-5培养3d的培养液中癌胚抗原(CEA)的表达水平.采用荧光定量PCR法检测人肺腺癌细胞A549和人胚胎成纤维细胞MRC-5中STAT3mRNA、CEA mRNA的表达.结果 ...     

ZD1839对免疫效应细胞裂解人肺腺癌A549细胞作用的影响

ZD1839(Iressa^TM)是选择性表皮生长因子(EGF)受体酪氨酸激酶抑制剂，能阻断参与细胞增殖的信号转导通路，是目前实体瘤靶向治疗的重要药物。试验证明，ZD1839可以抑制肺腺癌的增殖。2003年ZD1839被美国FDA批准为铂类和紫杉类药物化疗失败，局部进展或者转移的非小细胞肺癌(NSCLC)的单方治疗药物。ZD1839抑制肺腺癌增殖的效果较好，其机制可能与上述各环节有关；但是，它能否通过影响机体免疫系统，尤其免疫效应细胞发挥抗癌作用尚不清楚。     

E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨E1A基因对人肺腺癌细胞增殖的抑制作用与细胞周期的关系及作用机制。方法 利用细胞增殖曲线和裸小鼠体内致瘤性实验研究E1A基因对人肺腺癌细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析人肺腺癌细胞周期,以蛋白印迹方法分析P16、P21、P53和cyclin B1水平变化。结果 转染E1A基因后,人肺腺癌细胞（Anip973-E1A）生长缓慢,体内致瘤性降低。Anip973-E1A细胞周期出现明显的S期抑制和G2/M阻滞,周期调控蛋白P16、P21、P53水平无明显变化,但cyclin B1表达明显下降。结论 E1A基因能显著抑制人肺腺癌细胞的体内外增殖,降低周期蛋白cyclin B1的表达,使细胞周期阻滞于G2/M,这可能与A1A基因抑制作用有关。