口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白谱差异

目的 探讨人口腔鳞癌体外培养亲本细胞株KB与耐药细胞株KBV200的蛋白质表达差异.方法 在体外培养KB及KBV200细胞株,采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI)及蛋白质芯片技术检测KB及KBV200蛋白质谱.结果 体外培养的口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株的蛋白质存在差异表达,CM-10芯片共捕获102个蛋白,发现差异峰19个,其中15个差异蛋白在KBV200细胞中高表达,4个差异蛋白在KBV200细胞中低表达.结论 SELDI蛋白芯片技术检测口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白质的差异表达方法 简便、敏感、重复性好.     

飞行时间质谱技术筛查卵巢癌患者血清特异性蛋白的研究

目的:应用飞行时间质谱技术筛选卵巢癌患者与正常人血清中差异性蛋白,为卵巢癌的早期诊断提供理论依据。方法:应用弱阳离子芯片(WCX2)及表面增强激光解析电离飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测30例正常人(对照组)和30例卵巢癌患者(实验组)血清中蛋白质的含量,并作比较。结果:对照组与实验组在2 000～30 000 Da间质荷比为3 812.556 Da与7 237.904 Da的2个蛋白峰差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SELDI-TOF-MS技术对卵巢癌早期诊断和特异性肿瘤标记物的筛选等方面具有一定价值。     

铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药相关差异蛋白质组学研究

目的筛选铜绿假单胞菌野生型菌株PAO1对左氧氟沙星耐药前后的差异蛋白质,探讨这些蛋白质与铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药的关系。方法采用亚抑菌浓度梯度递增法体外诱导PAO1对左氧氟沙星耐药,并设置同步对照组,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI)技术和CM10蛋白质芯片检测PAO1对左氧氟沙星耐药株和同步对照菌株的菌体蛋白,采用Biomarker Wizard软件进行分析。结果左氧氟沙星耐药株与同步对照菌株间有8个差异蛋白(P<0.05),5个差异蛋白高表达,分子量分别为1 004、1 007、1 918、5 175Da和5 454Da;有3个蛋白质低表达,分子量分别为1 012、1 629、2 004Da。结论用蛋白质芯片和SELDI技术对PAO1的左氧氟沙星耐药菌株与同步对照菌株进行蛋白质组学研究,可以筛选出与PAO1对左氧氟沙星耐药可能相关的差异蛋白质。     

EGCG对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响及可能的分子机制。方法不同浓度EGCG对HepG2细胞进行干预后,CCK-8法检测EGCG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;荧光显微镜及流式细胞术(FCM)Annexin V-FITC/PI双染法检测EGCG对HepG2细胞的凋亡诱导作用;Transwell侵袭实验检测EGCG对HepG2细胞侵袭的影响;ELISA法检测HepG2细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平。结果EGCG各浓度组干预HepG2细胞24、48h后,细胞的生长增殖均明显受到抑制,其24h IC25值和IC50值分别为58.19和133.90mg/L。以60、135mg/L EGCG干预肝癌HepG2细胞24h后,FCM结果显示药物组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05),荧光显微镜观察显示随着药物浓度的增加,细胞凋亡程度加重。Transwell侵袭实验显示,60、135mg/L EGCG对HepG2细胞侵袭力抑制率分别为69.47%和100%(P<0.05)。ELISA检测结果显示,EGCG干预后HepG2细胞上清液中MMP-2和VEGF表达水平下降(P<0.05)。结论 EGCG对人肝癌HepG2细胞具有抑制增殖和侵袭作用,其机制可能与EGCG诱导HepG2细胞凋亡和抑制肿瘤细胞中MMP-2及VEGF表达水平有关。     

激动线粒体乙醛脱氢酶2可降低高糖诱导的A549细胞炎性小体生成

目的探讨激动线粒体乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)对高糖诱导的A549细胞炎性小体生成的影响。方法 25 mmol/L高糖完全培养基体外培养肺泡上皮A549细胞,实验分为4组:对照组,ALDH2激动剂20μmol/L Alda-1组,ALDH2阻断剂60μmol/L Daidzin组,20μmol/L Alda-1+60μmol/L Daidzin组。干预处理24 h后,四甲基噻唑盐(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法检测细胞增殖活力,二氢乙锭(dihydroethidium,DHE)荧光染色检测细胞活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平,细胞划痕实验观察细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测ALDH2及炎性小体主要成员核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific protease-1,caspase-1)蛋白的表达。结果与对照组相比,Alda-1特异性激动ALDH2后,细胞增殖活力无明显变化,细胞ROS水平和细胞迁移率均明显降低(P<0.05),ALDH2蛋白表达增加(P<0.05),炎性小体主要成员NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05);Daidzin特异性阻断ALDH2后,细胞增殖活力、细胞ROS水平、细胞迁移率、ALDH2蛋白和ASC蛋白表达无明显变化,NLRP3蛋白表达明显升高(P<0.05),caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与Alda-1组相比,Alda-1+Daidzin组细胞增殖活力及ROS水平无明显变化,细胞迁移率明显增高(P<0.05),ALDH2蛋白表达降低(P<0.05),NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达明显增高(P<0.05)。结论提高ALDH2在肺泡上皮A549细胞中的表达可减轻高糖诱导的细胞炎症反应,可能是通过降低细胞ROS水平、降低炎性小体的表达来实现。     

人参皂苷Rg3对人肺腺癌细胞株A549/DDP抑制转移及逆转耐药作用的研究

目的:探讨人参皂苷Rg3抑制人肺腺癌细胞株A549/DDP的浸润及转移和逆转其耐药作用及机制。方法:应用MTT法检测Rg3对A549/DDP细胞逆转耐药的作用;用细胞膜流动性实验检测Rg3对A549/DDP细胞膜流动性的改变用穿膜实验检测Rg3对A549/DDP细胞侵袭和转移的影响;用Western blotting实验检测Rg3对转移和耐药相关蛋白表达的影响。结果:Rg3作用后,A549/DDP细胞对顺铂的耐药性下降I,C50明显降低(P<0.05),细胞膜的流动性明显降低(P<0.05),细胞的穿膜能力明显降低(P<0.05),Rg3作用后,nm23及caspase-3的表达明显上调,LRP的表达无明显改变。结论:Rg3可通过上调nm23的表达抑制A549/DDP细胞的侵袭和转移能力,还可通过上调caspas-3的表达,降低细胞膜的流动性达到逆转耐药的作用。     

铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药相关差异蛋白质组学研究北大核心CSCD

目的筛选铜绿假单胞菌野生型菌株PAO1对左氧氟沙星耐药前后的差异蛋白质,探讨这些蛋白质与铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药的关系。方法采用亚抑菌浓度梯度递增法体外诱导PAO1对左氧氟沙星耐药,并设置同步对照组,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI)技术和CM10蛋白质芯片检测PAO1对左氧氟沙星耐药株和同步对照菌株的菌体蛋白,采用Biomarker Wizard软件进行分析。结果左氧氟沙星耐药株与同步对照菌株间有8个差异蛋白(P<0.05),5个差异蛋白高表达,分子量分别为1 004、1 007、1 918、5 175Da和5 454Da;有3个蛋白质低表达,分子量分别为1 012、1 629、2 004Da。结论用蛋白质芯片和SELDI技术对PAO1的左氧氟沙星耐药菌株与同步对照菌株进行蛋白质组学研究,可以筛选出与PAO1对左氧氟沙星耐药可能相关的差异蛋白质。     

应用Clinprot系统研究21-三体综合征胎儿羊水蛋白质谱

目的:建立21-三体综合征的蛋白质组指纹诊断模型,为21-三体综合征的产前快速诊断提供理论依据。方法:收集2009年1月~2011年12月间在该院做产前诊断的孕妇,采用液体蛋白芯片飞行时间质谱技术对18例21-三体综合征胎儿(21-三体组)及18例正常胎儿(对照组)的羊水进行蛋白质组学对比研究。结果:21-三体组和对照组中共有44种蛋白质峰强度差异有统计学意义(P<0.05),选取其中质荷比(m/z)分别为3 762.68 Da、7 988.8 Da、3 911.26 Da、3 709.99Da和1 450.5 Da的5种蛋白质峰建立分类预测模型,该模型对21-三体组和正常对照组的识别率和预测率均为100%,其中3762.68 Da和861.8 Da的分布能力较好,3 762.68 Da在21-三体组中高表达,861.8 Da在21-三体组中低表达。结论:利用Clinprot系统筛选出来的44种差异表达蛋白有可能成为用于21-三体综合征产前快速诊断的一组生物学指标,3 762.68 Da可能为21-三体综合征胎儿的羊水蛋白标志物。     

SELDI技术检测反义寡核苷酸作用前后肝癌细胞培养液的差异蛋白

目的利用针对人端粒酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸(ASODN)和正义寡核苷酸(NODN)作用于人肝癌细胞SMMC-7721,比较ASODN和NODN作用后细胞培养液蛋白的变化。方法利用SELDI技术检测差异蛋白的表达变化。对照组为未加任何处理因素的SMMC-7721细胞。结果SELDI技术检测发现,ASODN作用组有40个差异蛋白分子低表达,3个差异蛋白分子高表达。NODN作用组有37个差异蛋白分子低表达,6个差异蛋白分子高表达。所有差异蛋白分子量均小于10 000 Da。ASODN作用组中有3个低表达蛋白在NODN作用组高表达,分子量分别为3 011.99 Da、3 048.28 Da和3 248.75 Da。结论ASODN和NODN作用SMMC-7721细胞后细胞培养液中所表达的差异蛋白十分相似。     

矽尘接触人群血清蛋白质指纹与接尘量的相关性分析

目的 筛选矽尘接触人群血清蛋白质指纹并分析其与接尘量的相关性.方法 应用液体芯片飞行时间质谱技术检测Ⅰ期矽肺组(25例)、正常对照组(30例)、矽尘接触组(30例)及可疑矽肺组(30例)血清蛋白质指纹并筛选出差异显著的蛋白,对每个样品差异蛋白的峰强度与其对应的接尘量进行相关性分析.结果 4组间共筛选出5个差异显著蛋白,其中5081 Da、5066 Da为表达上调蛋白,3954 Da、2021 Da、1777 Da为表达下调蛋白,将这些蛋白峰强度分别与其相应的接尘量进行相关分析,未发现蛋白峰程度与接尘量有相关关系(r1=0.039,r2=0.104,r3=-0.047,r4=-0.028,r5=-0.016,P＞0.05).结论 本次研究中矽尘接触人群血清蛋白质指纹与接尘量不存在相关关系.     

5种抗菌中药体外抗衣原体活性研究

采用McCoy细胞培养衣原体的方法筛选有抗衣原体活性的中药。结果表明穿心莲、车前子、栀子、地肤子和牡丹皮浓度为50～200mg/ml时能显著减少包涵体数目(P<0.01)。其最大抑制率分别为93％,87％,85％,80％和70％。说明这5种抗菌中药具有体外抗生殖道衣原体作用。     

Antiproliferative Effect of Vine Stem Extract from Spatholobus Suberectus Dunn on Rat C6 Glioma Cells Through Regulation of ROS,Mitochondrial Depolarization,and P21 Protein Expression

The vine stem of Spatholobus suberectus Dunn (SS) is used as a traditional herbal medicine in China. Chinese herbal medicines are well known as natural bioactive compounds that can be used as new medicines, and their antioxidant and anticancer effects have also been reported. This study aimed to examine the anticancer effect of a high-pressure hot-water SS extract on rat C6 glioma cells. The SS extract effectively suppressed the viability and proliferation of C6 glioma cells through an antioxidant effect. Reactive oxygen species (ROS) levels in cancer cells are higher than that in normal cells. If the ROS level falls below that required for the growth of cancer cells, their rapid proliferation and growth can be suppressed. We also measured the induction of mitochondrial membrane depolarization and cell cycle arrest effect caused by the SS extract in C6 glioma cells through a FACS analysis. In addition, we observed an increase in STAT3, p53, E2F1, and p21 mRNA expression and a decrease in Bcl-2 mRNA expression by quantitative PCR. An increase in p21 protein expression of over 83% was observed through western blot analysis. All these data support the fact that the high-pressure hot-water SS extract has the potential to be used for glioma treatment.     

某省级结核病专科医院中成药用药分析

目的了解本院药剂科中成药的应用情况,为临床合理用药提供参考。方法利用医院信息系统数据库检索本院2010年1-10月中成药的使用数据,对用药金额、用药频度、日均费用进行统计分析。结果本院药剂科2010年1-10月份使用的中成药品种有46个,剂型涉及胶囊剂、片剂、颗粒剂、溶液剂,其中胶囊剂391.03万元,占总销售金额的66.7%;销售金额排序前十位的中成药护肝药8种,抗结核药及辅助药各1种;用药频度（DDDs）排序前三位的中成药是益肝灵软胶囊、结核灵片和肝苏胶囊;亮菌口服液、熊胆舒肝利胆囊DDDc值居前两位。结论本院药剂科2010年1-10月份中成药应用情况基本符合结核病专科医院的用药特点,中成药的使用以护肝药、抗结核药及辅助治疗药物为主,未见明显不合理用药。     

4种抑菌中药疗程内重金属积累的定量分析

选取目前普遍认为有抑菌作用的4种中药(黄连、白附子、复方黄连素、双黄连粉针剂),对其浸出液常规浓缩后采用MIC法,分别测定对金黄色葡萄球菌与大肠杆菌的体外最小抑菌浓度。采用同样的检测方法,分别检测3种常用抗生素(青霉素、诺佛沙星、阿莫西林)的最小抑菌浓度。通过原子吸收光谱法检测出单位浓度下上述中药的重金属含量。结合通过对比常用抗生素MIC值,得出的单个疗程中中药所需的最小药量,计算出单个疗程内服用中药摄入的重金属总量。分析结果表明在确定疗效下,疗程内所需摄入中药的重金属总量普遍超标。     

50种常见食用植物药材及中草药植物中甾醇的含量研究

目的对中国常见的50种药食两用植物和中草药中的植物甾醇的量和分布进行分析。方法选择了目前保健食品原料中常用的药食两用植物18种和中草药32种,用气相色谱法分析了β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、谷甾烷醇的含量,并计算各成分占总量的百分比。结果18种药食两用植物中,植物甾醇的总含量从14.8mg/100g(生姜)到208.3mg/100g(火麻仁),而测定的32种中草药中,植物甾醇总含量则从9.4mg/100g(川贝母)到280.3mg/100g(柏子仁),在各种"仁"、"子"的样品中植物甾醇的含量较高。大部分样品中含量最多的是β-谷甾醇;传统用来降血脂、利尿、抗炎的中草药中含有较高的植物甾醇。结论50种保健食品常用原料中均含有一定量的植物甾醇。     

红花等三种中药中砷、汞、铅含量的分析研究

目的:了解红花等三种中药中砷、汞、铅的含量。方法:采用微波消解法消解中药材样品后,用原子荧光法测定其中的砷、汞、铅含量,并对测定方法进行了方法学考察。结果:对于所测元素,砷、汞、铅标准曲线的相关系数分别为0.99833、0.99987、0.99987;方法的线性范围为0.1μg/L～200μg/L。方法的RSD为2.6%～6.9%。加标回收率为88.0%～115.0%。利用该方法检测实验所用红花、甘草、贝母中砷、汞、铅含量均未超标。结论:该方法快速、简便、准确且灵敏度高,为中药材中重金属含量测定提供了较好的方法。     

现代医学和中医学慢性病防控策略分析

对比分析现代医学和中医学慢病预防控制的理论与方法,探讨现代医学与中医学合作与交流的可行性与必要性,提出具有中医特色的慢病防控策略建议。收集现代医学和中医学在慢病预防控制领域中的理论与方法,以综述的方法对比分析其主要思想,探讨具有中国特色的慢病防控策略。现代医学和中医学的慢病预防控制理论方法具有一致性,现代医学的慢病预防控制对中医药的需求较大。携中医药之手,走中国特色的慢病防控之路。     

氢化物发生—原子荧光光谱法测定中药中不同形态的砷

建立了一种氢化物发生—原子荧光光谱法测定中药中As(Ⅲ)、As(V)的方法。研究了仪器的工作条件、试剂浓度对砷原子荧光强度的影响以及五价砷的还原条件,探讨了共存离子对砷测定的干扰和消除方法。在最佳工作条件下,砷的检出限为0.0903μg/L,相对标准偏差为2.01%。将该法成功应用于3种中药样品中砷的形态分析,As(Ⅲ)和As(V)的回收率分别为90.8%～98.2%和89.2%～102.0%。建立的方法简便可行,可用于多种样品中砷的形态分析。     

西部农村基层医疗机构门诊处方中成药使用现状

目的:通过分析西部农村基层医疗机构门诊处方数据,揭示中成药在农村地区使用中呈现的规律和问题。方法:选取2011年西部七个省(自治区)农村地区132家医疗机构的14 336张中成药处方数据,描述中成药使用的整体情况,比较不同级别和不同地域医疗机构对中成药使用的差异。结果:中成药处方占农村基层医疗机构处方总数的62.47%,县、乡、村级医疗机构这一比例分别为49.76%、56.96%和71.51%。县、乡、村级医疗机构单张处方使用中成药的品种数分别为1.38、1.91和2.54种,处方平均药费金额分别为52.20元、21.89元和19.37元,中成药基药使用率分别为37.25%、32.14%和25.79%。所有中成药处方中,86.84%由西医师开具,仅13.16%出自中医师,且中医师处方诊断存在西医化现象。结论:我国西部农村各级医疗机构中成药使用情况存在差异,随着医疗机构级别降低,使用中成药的品种数逐渐增多;县级医疗机构平均每张处方药费金额高于乡、村两级医疗机构。基层医疗机构中成药基药使用率低。中成药处方存在西医化现象。相关部门应根据农村各级医疗机构的具体需求和特点,完善中成药处方管理和质量控制。     

抗缺氧类药物中微量元素的因子分析

对6种抗缺氧类药物,用原子吸收分光光度法测定4种微量元素(Cu,Fe,Mn,Zn)的含量,并进行因子分析,建立因子对变量的回归方程,选取主因子F1、F2的得分值作图,中成药间药效有明显不同。并对数据进行聚类分析,分析结果与因子分析结果一致。