支气管灌洗液Survivin基因检测在肺癌诊断中的价值

目的 探讨支气管灌洗液(BLF)标本Survivin m RNA检测在肺癌尤其是周围型肺癌诊断中的可行性及应用价值.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,分别检测124例肺癌、103例支气管肺部良性疾病患者BLF标本Survivin mRNA表达情况,并与BLF标本细胞病理学等结果相比较.结果 BLF标本Survivin mRNA表达阳性率肺癌患者45.2％(56/124),显著高于支气管肺部良性疾病患者18.4％(19/103),差异有统计学意义(x2=18.150,P=0.000).BLF标本Survivin mRNA相对表达量与肺癌病理类型、分化程度均相关(均P ＜0.05);而与肺癌患者的性别、年龄、抽烟史、肿瘤的部位、大小、淋巴结转移、远处转移、临床分期及中心型肺癌患者BLF方式之间均无明显相关(均P＞0.05).BLF标本检测Survivin mRNA诊断肺癌的敏感性、特异性分别为45.2％(56/124)和81.6％(84/103),诊断周围型肺癌的敏感性、特异性分别为35.9％(14/39)和85.4％(88/103).BLF标本检测Survivin mRNA表达联合细胞病理学检查阳性率为57.5％(65/113),显著高于单独检测Survivin mRNA阳性率43.4％(49/113)或细胞病理学阳性率23.9％(27/113),差异均有统计学意义(x2=4.531,26.472,P=0.033,0.000).结论 BLF标本Survivin mRNA可能成为肺癌诊断有价值的肿瘤标志物之一,为肺癌尤其是周围型肺癌早期诊断提供帮助,BLF标本获取方式不影响Survivin mRNA表达检测结果.     

HRM方法检测非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞基因突变的临床意义

[目的]探讨应用HRM方法检测非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞EGFR、KRAS基因突变用于指导EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂治疗的可行性.[方法]收集36例非小细胞肺癌患者胸水标本,常规提取DNA,HRM方法检测KRAS基因第2外显子、EGFR基因第19和21外显子突变.统计分析胸水标本与前期检测过的非小细胞肺癌组织KRAS、EGFR突变率差异.[结果]胸水标本36例中,2例(5.6％)KRAS突变,10例(27.8％) EGFR突变(其中EGFR第19和21外显子突变各5例).前期检测过的非小细胞肺癌组织KRAS和EGFR突变率分别为5.8％和36.3％.KRAS和EGFR突变率在胸水标本与前期非小细胞肺癌组织中差异均无显著性意义(P＞0.05).[结论]对难以获得肺癌组织标本的非小细胞肺癌患者可应用HRM方法检测胸水标本筛查KRAS、EGFR基因突变,指导EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂应用.     

连环素α、β在非小细胞肺癌中表达及与病理生物学行为的关系

目的 :探讨连环素α、β在非小细胞肺癌中表达及其临床意义。方法 :用SABC免疫组化技术检测αβ -catenin在 5 8例非小细胞肺癌手术标本中的表达变化 ,并探讨αβ-catenin表达与病理组织学分级和淋巴结转移之间的关系。结果 :NSCLC病理组织中存在不同程度的αβ -catenin表达降低 ,5 8例肺癌组织标本有 38例(6 5 .5 2 % )α -catenin表达降低、35例 (6 0 .34% ) β -catenin ;表达降低 ;低分化肺癌标本与高中分化肺癌标本αβ-catenin比较差异有显著性 (P值均 <0 .0 5 ) ;伴有淋巴结转移的肺癌标本与没有淋巴结区域转移肺癌标本比较差异有显著性 (P均 <0 .0 5 )。结论 :αβ -catenin异常表达与非小细胞肺癌的分化程度和淋巴结转移密切相关。     

抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1水平的一致性比较

目的：比较抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本程序性死亡分子1配体（PD-L1）水平的一致性。方法：选取2020年1月至2021年8月该院病理科检测的40例肺非小细胞肺癌标本进行前瞻性研究,均进行免疫组织化学检测,比较抗体22C3与SP263检测（不同病理分型、不同T分期）非小细胞肺癌标本PD-L1水平的结果判定难度等级、阳性检出率,采用Kappa检验分析抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1水平的一致性。结果：抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1水平的结果判定难度等级比较,差异无统计学意义（P>0.05）;抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1阳性检出率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;抗体22C3与SP263检测不同病理分型非小细胞肺癌标本PD-L1阳性检出率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;抗体22C3与SP263检测不同T分期非小细胞肺癌标本PD-L1阳性检出率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;Kappa检验结果显示,抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1水平的一...     

Aurora-A激酶在肺癌中的表达

[目的]探讨Aurora-A基因在不同组织类型肺癌中的表达及其与临床的相关性.[方法]采用RT-PCR、Western-blot与免疫组化方法检测肺癌组织标本行Aurora-A的mRNA与蛋白表达.[结果]肺癌30例标本中RT-PCR检测Aurora-A mRNA的表达,19例(63%)肺癌表达水平高于相应癌旁组织,其中Western blot方法检测20例中,13例(65%)蛋白表达水平高于相应癌旁组织.免疫组化检测48例肺癌中32例高表达(66.67%).肺癌Aurora-A mRNA的表达水平与肺癌患者的性别,吸烟史以及病理特征无明显相关性.肺鳞癌的Aurora-A的蛋白水平高表达程度与肿瘤转移有相关性.[结论]肺癌组织Aurora-A表达明显高于其癌旁组织,提示Aurora-A基因的过表达与肺癌的发生有相关性.     

肺癌患者纤维支气管镜活检标本K-ras基因突变的检测及其临床意义

目的: 探讨检测纤维支气管镜活检标本K-ras基因突变对肺癌诊断的临床意义。方法： 采用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-single strand conformational polymorphism, PCR-SSCP） 银染技术,检测52例肺癌患者和9例肺良性疾病患者的纤支镜活检标本中K-ras基因第12,13和61位密码子的突变率,并对K-ras基因突变与临床病理参数进行相关分析。结果： 52例肺癌患者活检标本中,12例检测出K-ras基因点突变,突变率为23.1%,9例肺良性疾病患者活检标本中未检测出K-ras基因点突变。K-ras基因突变与肺癌病理组织类型相关,在腺癌中达43.8%,但与患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤细胞分化程度及临床分期无关。 结论：检测纤支镜活检标本K ras基因突变有可能作为肺癌早期诊断的一个参考指标。肺癌; 纤维支气管镜; K-ras基因; 突变     

肺癌患者血浆游离DNA微卫星检测的意义

目的 研究肺癌患者血浆游离性肿瘤DNA微卫星不稳定(Microsatellite instability，MSl)和杂合性缺失(Loss of beteroxygosity，LOH)在肺癌基因检测中的价值。方法 通过PCR—银染法检测肺癌病人的37例新鲜手术标本、94例全血标本DNA3p部位三个微卫星位点的LOH、MSI.结果 大多数肺癌患者的血浆游离DNA的浓度在微克水平以上。联合三个位点进行LOH、MSI检测时，组织和血浆的阳性率均在70％以上。不同分期、不同病理类型之间差异不显著；有无淋巴结转移之间差异有显著性意义。结论 血浆游离DNA水平检测肺癌可以作为肺癌基因检测的新途径。     

肺癌患者痰、BALF及肺癌组织中检测K-ras和p53基因突变的诊断价值

目的 探讨K-ras和p53基因突变在肺癌患者的痰、支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺癌组织等3种标本中的检出和临床应用价值.方法 以组织病理学证据作为肺癌诊断的标准,将207名患者分为肺癌组(101例)和良性肺病组(106例).采用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)和聚合酶链反应结合单链构象多态性分析法(PCR-SSCP)分别检测痰、BALF及肺癌组织等3种标本中K-ras和p53基因突变情况,同时检测痰、BALF中的脱落细胞进行比较.结果 3种标本中K-ras和p53基因突变率在肺癌组明显高于良性肺疾病组(P＜0.05);基因突变率高于细胞学阳性率;基因突变率在肺癌组织中最高,在痰中最低,但差异不具显著性.2种基因突变均与吸烟指数的关系最密切;K-ras基因突变率在腺癌中最高,p53基因突变率在鳞癌中最高,但在不同分期的肺癌中分布无差异.结论 K-ras基因激活和p53基因失活在肺癌的发生中是常见事件,将它们作为肿瘤标志物并联合细胞学进行检测,可明显提高肺癌的诊断率.     

血清survivin检测在肺癌诊断中的应用价值

目的:探讨血清survivin基因表达及抗体在肺癌诊断的应用价值.方法:收集47例患有不同类型的肺癌患者的外周血标本及作为对照组的30例健康体检者的外周血标本,分别采用ELISA检测血清中的survivin基因抗体水平和逆转录PCR检测肺癌患者血清中的survivin mRNA表达水平.通过各组数据统计分析三种指标的相关性及其诊断价值.结果:肺癌患者血清survivin抗体表达与血清survivin-mRNA的表达均高于正常对照组(P＜0.05),二者呈正相关(P＜0.01,Pearson's R=0.367)；肿瘤组织survivin蛋白表达与肺癌患者血清survivin抗体表达、血清survivin-mRNA的表达均无明显相关(P＞0.05).结论:血清survivin基因表达及抗体检测是临床肺癌诊疗中价值较大的临床指标.     

肺癌组织中经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化的检测

目的 检测肺癌组织中经典wnt信号途径相关基因(WIF-1、sFRP-1、DKK-3)启动子的甲基化状态及其与患者临床病理特征问的关系,探讨其在肺癌发生中的作用.方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测30例纤维支气管镜活检肺癌组织、11例石蜡包埋肺癌组织和10例肺良性疾病患者的纤支镜活检标本以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化.结果 肺良性疾病患者活检标本未检测到所选基因的甲基化,肺癌患者活检标本WIF-1、sFRP-1、DKX-3基因启动子甲基化的发生率分别为:46.3%、29.3%和36.6%;重度吸烟患者肺癌组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0.05).肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态.结论 经典wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌袁观遗传干预治疗的新靶点.     

不同分析技术对不同类型标本的EGFR基因突变检测分析比较

目的:比较DHPLC法和ARMS技术检测非小细胞肺癌患者3种不同类型标本的EGFR基因突变情况。方法:收集50例非小细胞肺癌患者的新鲜肺癌组织标本、石蜡切片和血液标本。分别用DHPLC法和ARMS技术同时检测其3种不同类型标本的EGFR基因的突变情况。再用直接测序法来检验以上3种类型标本的EGFR基因突变情况。结果:DHPLC法与直接测序法结果大致相同,ARMS技术检出率明显高于DHPLC法,两组新鲜肺癌组织标本的检出率差异具有统计学意义(P<0.05),石蜡切片标本和血液标本的检出率差异不具有统计学意义(P<0.05),(P<0.05)。ARMS技术中3种类型标本的检出率相比,差异不具有统计学意义(P<0.05)。结论:ARMS技术检测新鲜肺癌组织EGFR基因突变的检出率明显高于DHPLC法和直接测序法,全血标本的DHPLC法可作为EGFR基因的初筛检测,ARMS技术可用于无法确认的EGFR突变基因检测。     

p16基因甲基化检测指导非小细胞肺癌放疗靶区设计的初步探讨

目的探讨利用肺癌组织、癌旁组织p16基因甲基化的差异来指导精确放疗的临床价值。方法选取33例肺部疾病住院病人手术切除的肺组织标本,其中29例为肺癌,4例为良性肺部疾病。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSPCR)法检测其p16基因甲基化状态。结果29例肺癌组织标本中12例(41.4%)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化,近癌旁组织、远癌旁组织标本中均未检测出甲基化存在。4例良性肺部疾病中肺脓肿1例,肺炎性假瘤3例,手术切除标本中均未检测出甲基化存在。结论MSPCR技术对肺癌病人标本中的异常甲基化检测具有特异性,可进一步应用于肺癌生物靶区设计的探讨。     

寡核苷酸芯片检测肺癌患者痰标本中p53点突变

目的：用寡核苷酸基因芯片方法检测肺癌患者痰标本中p53基因的热点突变,为肺癌的诊断探索快速、准确的基因检测途径。方法：收集肺癌患者痰标本并提取基因组DNA,用荧光标记的引物对DNA进行p53基因Exon5、Exon7PCR扩增,然后用PCR扩增产物与基因芯片进行杂交,通过对杂交信号的检测,判断是否发生点突变,并用测序方法对部分阳性结果进行验证。结果：在27例肺癌患者痰标本中,p53基因突变的检出率为25．92％,其中小细胞肺癌的突变率为40％（2／5）、肺鳞癌的突变率为26．6％（4／15）、肺腺癌的突变率为14．28％（1／7）,检测到的突变位点有175（2）、248（1）、249（2）,对2例阳性标本的测序证实了基因芯片的结果。结论：寡核苷酸基因芯片法可以快速、准确检测出肺癌患者痰标本中p53基因的点突变,今后可用该法对肺癌患者和高危人群的痰标本进行大规模筛选,提高肺癌的早期诊断率。     

非小细胞肺癌组织中CD68与c-Jun蛋白的表达

目的:探讨非小细胞肺癌( NSCLC)组织中CD68和c-Jun蛋白的表达与肺癌发生发展的关系及其意义.方法:采用免疫组化SP法检测67例人NSCLC标本(每个标本取癌、癌旁和正常组织)中CD68和c-Jun蛋白的表达,应用Spearman秩相关检验CD68阳性细胞数与c-Jun蛋白表达的相关性.结果:肺癌、癌旁及正常...     

肺癌病人痰细胞中p16基因高甲基化分析

目的　分析肺癌病人痰标本中p16基因启动子区域异常高甲基化的改变情况 ,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标记物的价值。方法　运用半巢式甲基化特异性PCR技术 ,检测 94例原发性肺癌病人痰标本和部分对应肿瘤组织 ,以及 10例慢性炎病例痰标本中p16基因启动子区域的甲基化改变。结果　 74%的肺癌病人痰标本中检测到了p16基因异常高甲基化 ,与传统细胞学相比 ( 4 6.8%) ,痰标本中p16基因异常高甲基化对肿瘤的检出率灵敏度更高 (P <0 .0 1) ;痰细胞中p16甲基化检测和细胞学相结合 ,对肿瘤的检出率可达 86.17%( 81 94)。如果痰标本中p16基因启动子区域发生高甲基化 ,其对应的肿瘤组织中p16基因亦为高甲基化。 10例慢性炎病人痰标本中仅 3例检测出p16基因甲基化。结论　痰标本中p16基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效分子生物标记物之一。     

液基细胞学检测技术和传统细胞学涂片对肺癌的诊断价值比较

目的 比较液基细胞学检测(liquid-based cytology test,LCT)技术和传统细胞学涂片(coventional smear,CS)检测不同标本对肺癌的诊断价值.方法 研究标本包括痰液、胸腔积液、支气管黏膜刷检物、肺泡灌洗液和肺细针吸活检标本.对比上述两种方法诊断肺癌的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值;并分析两种方法的涂片质量和检出的癌细胞的形态结构.结果 LCT法检测痰液、胸腔积液、支气管黏膜刷检物、支气管肺泡灌洗液、细针吸活检标本对诊断肺癌的敏感度分别为28.6%、37.5%、37.5%、30.0%、87.5%;准确度分别为65.2%、75.0%、62.1%、57.6%、91.5%;阴性预测值分别为59.6%、70.6%、51.0%、48.1%、78.9%;CS法检测痰液、胸腔积液、支气管黏膜刷检物、支气管肺泡灌洗液、细针吸活检标本诊断肺癌的敏感度分别为14.3%、12.5%、22.5%、15.0%、75.0%;准确度分别为58.3%、65.0%、53.0%、48.5%、83.0%;阴性预测值分别为55.1%、63.2%、45.6%、43.3%、65.2%.LCT法在涂片质量、癌细胞形态学判断方面较CS法好.结论 LCT法检测痰液、胸腔积液、支气管黏膜刷检物、支气管肺泡灌洗液及肺细针吸活检物诊断肺癌的敏感度、准确度、阴性预测值均较CS法高,故LCT法对肺癌的诊断价值高于CS法,涂片质量也明显优于CS法.     

肺癌K-ras基因突变的二步PCR检测及其临床应用

目的　探讨高敏感性Kras基因点突变检测方法在肺癌临床的应用价值。方法　应用二步(巢式)聚合酶链反应结合限制性片断多态性分析方法(PCRRFLP)检测临床肺癌标本Kras基因第12密码子点突变。结果　二步PCRRFLP法检测Kras点突变的敏感性较一步法提高约64倍。55例肺癌石蜡包埋标本中,Kras点突变检出率为47.3%;对另67例纤支镜标本进行基因检测,以Kras突变进行基因诊断的敏感性为70.9%,特异性为91.7%。结论　二步PCRRFLP法对临床肺癌标本Kras点突变检出率较高,对肺癌有一定的辅助诊断价值     

Neuritin基因在肺癌及正常肺组织中表达的检测

目的:了解neuritin基因在肺癌组织中的表达情况,探讨neuritin基因表达与肺癌发生发展的相关性.方法:收集肺癌、正常肺石蜡及新鲜组织标本,利用免疫组化检测组织中neuritin的表达情况.利用RT-PCR方法检测新鲜肺癌及正常肺组织中neuritin mRNA表达.结果:肺癌组织中neuritin的表达高于正常肺组织,差异有统计学意义(p＜0.05).结论:neuritin在肺癌组织和正常肺组织表达存在显著差异,提示neuritin表达可能与该肿瘤的发生发展相关.     

外周血血浆中p16基因异常甲基化对非小细胞肺癌患者的检测意义

目的 了解非小细胞肺癌患者外周血血浆中p16基因异常甲基化发生情况及其在非小细胞肺癌临床辅助诊断中的应用价值.方法 选取72例肺部手术患者的血浆和组织标本,其中49例为非小细胞肺癌,23例为良性肺部疾病,采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSPCR）方法 检测了p16基因启动子的异常甲基化情况.结果 在非小细胞肺癌患者的血浆和肿瘤组织中,p16基因甲基化检出率分别为55.1%和63.3%;非小细胞肺癌患者血清、肿瘤组织中p16基因的甲基化异常事件与肿瘤分期、分型无明显相关性.在23例良性肺部疾病,其血浆和手术切除标本均未检测出p16基因启动子的异常甲基化存在.结论 检测非小细胞肺癌患者血浆中p16基因异常甲基化情况有可能成为有价值的非小细胞肺癌临床辅助诊断手段.     

检测癌胚抗原信使核糖核酸诊断肺癌及癌细胞微转移的研究

目的：评估检测组织标本癌胚抗原信使核糖核酸（CEA－mRNA)指标在诊断肺癌细胞微转移方面的应用价值。方法：以肺癌组织及其切缘组织为研究标本、非癌性疾病的肺病变组织及其切缘组织为对照标本,应用反转录套式聚合酶链反应（RT－NP－PCR）技术,检测组织标本CEA－mRNA指标。结果：31份肺癌组织及其切缘组织CEA－mRNA阳性率分别为83．9％（26／31）和38．7％（12／31）,11份对照组织均无阳性发现。对于肺癌,CEA－mRNA指标的特异性为100％、敏感性为84．8％。结论：检测肺癌组织及其切缘组织CEA－mRNA指标,诊断肺癌与肺癌转移具有较高的应用价值。