从果蝇染色体DNA制备RNA探针及其染色体原位杂交定位

在相差显微镜下显微切割野生型黑腹果蝇唾液腺X染色体的1区片段,抽提该片段的DNA并与PGEM3Z质粒重组,然后转化到JM103 E.colt中,共切割12个染色体,抽提到大约10pgDNA,经重组、转化获得9个重组子。提取其中5个重组质粒分析其重组片段,2个约为0.6kb,另3个约为3.0kb。2个约为0.6kb重组片断用依赖DNA模板的SP6RNA聚合酶体外合成~3H标记的RNA,以此作探针进行染色体原位杂交定位,被克隆片段定位在果蝇唾液腺X染色体1E,1F位点上。本文结果表明重组到PGEM3Z质粒中染色体DNA可直接作为合成RNA探针的模板。     

线粒体DNA与人细胞癌变的关系--癌细胞核基因组mtDNA探针FISH分析

目的：探讨ｍｔＤＮＡ与细胞癌变的关系。方法：采用ＰＣＲ方法制备地高辛标记的３条人ｍｔＤＮＡ探针,对６株人癌细胞系和１例原代培养人皮肤成纤维细胞的染色体或间期细胞核进行荧光原位杂交分析。结果：３条ｍｔＤＮＡ探针在６个癌细胞系的部分染色体或间期核中均存在阳性杂交信号,而在成纤维细胞核中未出现阳性杂交信号。结论：表明癌细胞核基因组中存在ｍｔＤＮＡ的同源序列,这些同源片段的出现可能与细胞癌变有关。     

小鼠次要卫星着丝粒DNA探针的制备与其在微核研究中的应用

小鼠次要卫星着丝粒ＤＮＡ探针的制备与其在微核研究中的应用胡斌，曹佳（重庆第三军医大学预防医学系分子毒理室６３００３８广州中山医科大学生化教研室５１００８９）近年的研究表明，非整倍体发生与肿瘤的形成有密切的联系。因此通过检测微核（ＭＮ）是无着丝粒断片还...     

生物素标记探针原位DNA分子杂交中的假阳性

以生物素标记的ＥＢ病毒ＢａｍＨＩ酶切Ｗ片段为探针，原位检测人鼻咽癌等石蜡切片中的ＥＢ的病毒ＤＮＡ，结果发现：在部分标本的癌细胞胞浆中和非癌的鼻咽增生上皮细胞中，鼻咽粘膜下小腺体及唾液腺细胞浆中，存在内源性的亲和素结合活性，因此产生假阳性信号。文章介绍了设立相邻切片的无探针对照来区分真伪的方法，并对生物标记探针原位杂技术的适用范围进行了讨论。     

卵巢粘液性肿瘤细胞DNA和RNA的流式细胞分析及其临床意义的探讨

本文以ＦＣＭ为手段，对４４例卵巢粘液性肿瘤细胞内ＤＮＡ和ＲＮＡ施定量检测，并结合肿瘤的组织学分级、临床分期和术后随访资料进行了综合分析。认为ＤＩ、倍体水平、ＰＩ和ＲＩ是判断肿瘤性质和预后的重要指标，它们从不同侧面反映肿瘤的本质。ＲＮＡ参数特别适用于ＤＮＡ检测结果较良，而临床经过较恶的肿瘤。ＤＮＡ和ＲＮＡ与癌的组织学分级有关，与临床分期无关。ＤＩ和ＲＩ对恶性肿瘤诊断的准确率高于良性肿瘤；ＤＮＡ和ＲＮＡ双参数诊断的准确率优于任一单参数。     

食管鳞癌DNA和RNA测定及其预后关系的研究

目的　探讨食管鳞癌ＤＮＡ异倍体和ＲＮＡ含量变化与预后的关系。方法　应用流式细胞技术对６２例随访患者的石蜡标本进行研究。结果　术后生存５年以上患者的ＤＮＡ异倍体７８．１％（２５／３２）,ＲＮＡ含量为２０．５３±４．２１。术后半年内死亡者ＤＮＡ为９３．３％ （２８／３０）,ＲＮＡ含量为２４．８４±６．３５,两者均有显著性差异。ＤＮＡ异倍体和ＲＮＡ含量与病期、恶性程度和淋巴结转移有关。结论　ＤＮＡ和ＲＮＡ测定是判断食管鳞癌病期、恶性程度、有无淋巴结转移和预后的重要指标。表２　食管癌不同病期与ＤＮＡ和ＲＮＡ含量的关系生存时间（年） 病期 例数 ＤＮＡ２Ｃ Ａｎ ％ＲＮＡ含量（ｘ±ｓ）＞ ５ Ⅰ ３ ２ １ ５０ １０．６１±０．２４Ⅱ １９ ４ １５ ７８．９ ２１．５６±３．４１Ⅲ ８ １ ７ ８７．５ ２３．９８±２．１１Ⅳ ２ ０ ２ １００ ２６．１２±１．５６＜ ０．５ Ⅰ ０ ０ ０Ⅱ １１ １ １０ ９０．９ ２３．４５±４．２７Ⅲ １３ １ １２ ９２．３ ２４．７６±２．８７Ⅳ ６ ０ ６ １００ ２７．３１±２．５６表３　食管鳞病分化程度与ＤＮＡ和ＲＮＡ含量的关系生存时间（年） 分化 例数 ＤＮＡ２Ｃ Ａｎ ％ＲＮＡ含量（ｘ±ｓ）＞ ５ Ⅰ ５ ３     

突变型p16基因exon2 DNA探针的制备及应用

在多种肿瘤细胞系中p16基因出现高频率的缺 失和突变。为了研究人肿瘤中P16基因的变化, 我们采用DNA重组技术,从一株人黑色素瘤细胞系 中获取了突变型p16基因第二外显子(exon 2)DNA 片段并制备成基因探针[5],应用该探针对40例卵巢 肿瘤的p16基因进行了核酸杂交检测。     

食管鳞癌DNA和RNA含量测定的临床意义

目的:为探讨食管鳞癌DNA异倍体和RNA含量的变化及临床意义。方法:应用流式细胞仪对140例食管鳞癌石蜡标本进行研究。结果:食管鳞癌DNA异倍体检出率为90％(126/140),RNA含量为21.85±6.90,DNA异倍体和RNA含量与病期、恶性程度和淋巴结转移有关。结论:提示DNA和RNA含量测定有助于判断食管鳞癌患者的病期、恶性程度和淋巴结转移情况,为术后有针对性的制定治疗方案提供依据。     

应用地高辛标记DNA探针检测胃癌细胞中MDR1基因的表达

应用地高辛标记ＤＮＡ探针检测胃癌细胞中ＭＤＲ１基因的表达洪敏，刘剑凯，杨成君，董丽雅白求恩医科大学基础生化科（长春１３００２１）化疗用于恶性肿瘤进行综合治疗具有一定的积极作用。胃癌与其他癌症一样存在对多种药物的耐受问题。多药耐受基因（ｍｕｌｔｉｄｒｕ...     

Expression Silence of DNA Repair Gene hMGMT Induced by RNA Interference

Objective： MGMT protein expression has been associated with tumor resistance to alkylating agents. The objective of this paper is to construct the RNA interference vector which can specifically induce the expression silence of human DNA repair gene hMGMT. Methods： The hMGMT specific siRNA expression cassette was made by two steps PCR, linked with pUCI 9 to get pU6-MGMTi, co-transfected with pEGFP-CI into 16HBE and screened by G418. The MGMT mRNA and protein levels were detected by RT-PCR and Western Blot respectively. Results： hMGMT specific RNA interfere vector pU6-MGMTi was constructed successfully. In transfected 16HBE cells MGMT mRNA level could hardly be detected and the protein level was only 10% of control. Conclusion： MGMT specific RNAi expression cassette can effectively inhibit MGMT expression. MGMT silence cell line was built by co-transfection technology, which offered condition for studying the gene function of MGMT.     

DNA甲基化及非编码RNA在多发性骨髓瘤中的研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是一种病因不明,目前仍无法治愈的血液系统恶性肿瘤。MM的发病机制、病情进展以及治疗都与DNA甲基化有密切关系。研究证实,在MM中一些DNA呈高甲基化,而一些基因反之呈现一种低甲基化的状态。此外,部分DNA的甲基化状态还与MM的病情进展及治疗有关。这些研究均为MM的病情诊断及预后提供了帮助。同样,研究证实,非编码RNA(nc RNA)在MM的发生、发展过程中起一定的作用。相关研究发现,MM国际分期标准与一些nc RNA的相对表达量呈正相关,这为MM的诊断分期提供了价值。本文将对基因甲基化及新型nc RNA在MM的发生、发展及治疗过程中的研究现状进行综述。     

微核实验中抗着丝粒抗体和DNA探针技术的应用及其意义

微核实验中抗着丝粒抗体和ＤＮＡ探针技术的应用及其意义曹佳综述蔡亚娜审校重庆第三军医大学预防医学系分子毒理室重庆６３００３８广州师范学院生物系广州５１０４００微核（Ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｉ，简称ＭＮ）主要由染色体受损后的染色体断片形成，这一基本概念已被遗...     

关于DNA、RNA和蛋白质印迹法分析

Southern印迹法（Southern blotting，DNA印迹法）：是一种把DNA的电泳分离区带转移到支持膜上的技术。因为这一技术是英国科学家E．M．Southern首先创建的，而且这一转移过程与墨迹被吸印到吸墨纸上的过程相似，所以用他的姓氏命名为Southern印迹法。     

ALK基因荧光原位杂交分离探针制备及临床检测分析

目的:建立ALK分离荧光原位杂交探针（FISH）检测ALK基因重排,并对临床样本进行检测。方法:制备ALK基因分离探针,使用TFG-ALK和EML4-ALK基因重排样本验证探针,同时检测临床非小细胞肺癌样本。结果:采用本研究制备的ALK分离探针能准确检测出经病理确诊的TFG-ALK和EML4-ALK基因重排。结论:ALK分离探针荧光信号清晰,背景干扰较少,能够准确的检测多种形式ALK基因重排。     

原位核酸杂交检测喉鳞状细胞癌人乳头状瘤病毒DNA

用生物素（Ｂｉｏｔｉｎ－１１－ｄｕｔｐ）经缺口翻译标记人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）６．１１．１６和３０亚型的ＤＮＡ探针，对４０例喉鳞状细胞癌石蜡切片进行原位核酸杂交。检出ＨＰＶＤＮＡ阳性结果为２３例（５７．５％），其中６例ＨＰＶ１１阳性（１５％），１４例ＨＰＶ１６阳性（３５％），３例ＨＰＶ３０阳性（７．５％），ＨＰＶ６全部阴性。对照实验组全部阴性。原位杂交阳性物质主要存在于癌细胞核内呈紫黑色阳性颗粒。实验结果表明，ＨＰＶ１１、１６、３０与喉鳞状细胞癌的发病有关，其中ＨＰＶ１６占优势。     

肿瘤发生中微小RNA与DNA甲基化和组蛋白乙酰化的关系

微小RNA（microRNA，miRNA）是非编码单链小RNA，它的发现给肿瘤研究带来了巨大的惊喜。近来的许多研究表明，miRNA表达异常是肿瘤的一个共同特征，认识其表达谱有助于肿瘤的诊断，也为肿瘤治疗提供了新的靶点。miRNA属于广义的表观遗传修饰范畴，一方面miRNA基因可以调节DNA甲基化等其他表观遗传学事件，另一方面某些miRNA与蛋白编码基因一样受其他表观遗传修饰调控，即miRNA基因本身的甲基化与肿瘤发生相关。     

卵巢上皮性肿瘤新鲜组织中DNA、RNA含量测定及临床意义

本文通过检测卵巢良性、交界性、恶性卵巢肿瘤细胞中的DNA含量(DI）、RNA含量(RI）、S期比率(SPF）、细胞增殖指数(PI）作为判定肿瘤性质、估计预后的辅助指标,以期指导临床治疗。1 材料与方法取我院1995～2000年之间手术切除的卵巢肿瘤新鲜标本计53例,于无坏死区取足够大一块瘤组织置于生理盐水中制备单细胞悬液,患者年龄在19～73岁,平均49．3岁。其中良性16例、交界性19例、恶性18例。细胞悬液制备采用周振英方法,以DNA染色用溴化乙啶染色,RNA染色用哌喏宁Y染色。流式细胞仪为美国产FACS Ca n 420型,用鸡红细胞调试CV…     

生物素标记的6种cDNA探针检测H22、EAC及其克隆细胞株mRNA的表达

 目的　检测H2 2、EAC瘤细胞及其克隆细胞株mRNA的表达。方法　用生物素标记的 6种cDNA探针 ,细胞玻片原位杂交的方法。结果　H2 2与生物素标记的 4种探针杂交阳性 ,其克隆细胞株H2D8、H2G4分别与 3及 1种探针杂交阳性 ;EAC细胞株与 4种探针杂交阳性 ,克隆细胞株E2G8与 2种探针杂交阳性 ,E2C6克隆细胞株与 6种探针杂交均阴性。结论　这些均有肿瘤特性的细胞株中mRNA的表达不同     

地球首个生命或由RNA和DNA混合而成

据英国《新科学家》杂志网站近日报道,英国研究人员一项最新研究发现,脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的关键组成部分可由相同原料制成。这表明,地球上出现的第一个生物或许并非由纯RNA或DNA组成,而由这两者混合而成。DNA和RNA对生命至关重要,它们是携带基因的分子,这些基因由父母遗传给后代。尽管某些病毒使用RNA,但多数生物的基因都由DNA构成。许多研究人员怀疑,RNA首先出现,随着生命体变得日益复杂,发展出制造DNA的能力,而DNA最终取代RNA,成为基因载体。