缺血预处理对大鼠心肌Na^＋,K^＋—ATP酶和Ca^2＋,Mg^2＋—ATP酶活…

离体大鼠心脏经１０ｍｉｎ左冠状动脉缺血加３０ｍｉｎ再灌注后，心肌中Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶的活力显著降低，Ｃａ＾２＋，Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶的活力稍上升。离体心脏经３次３ｍｉｎ全心缺血加５ｍｉｎ再灌注的缺血预处理后，显著减轻随后缺血－再灌注引起的Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活力降低，并有进一步增高Ｃａ＾２＋，Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活力的趋势。缺血预处理也显著减轻缺血－再灌注时的心肌收缩力下降和心律失常     

大鼠心肌缺血再灌线粒体跨膜电位及ATPase合成活性的变化

用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ无做功非循环式离体心脏灌注模型琥珀酸为呼吸链底物，分别以Ｒｈ１２３荧光染料流动透析法和荧光素－荧光素酶 光法来检测缺血／再灌注对心肌线粒体和内膜体跨膜电位及ＡＴＰａｓｅ合成活力的影响，并观察了丹参素的保护作用。     

心肌肌细胞膜及线粒体膜ATP敏感钾通道与心肌缺血预处理

The potential cardioprotection can be involved during ischemic preconditioning in heart which mechanisms remain unknown yet. It is reported that sarcolemmal and mitochondrial KA‘rp channels mediate cardioprotection, and they play distinct myoprotective roles during ischemic preconditioning. This paper reviews the present progress in myocardial sarcolemmal and mitochondrial KATP channels in ischemic preconditioning.     

维生素C对缺氧大鼠心肌线粒体呼吸功能及ATP含量的影响

维生素Ｃ对缺氧大鼠心肌线粒体呼吸功能及ＡＴＰ含量的影响第三军医大学病理生理教研室第三军医大学高原医学研究室（重庆６３００３８）罗刚谢增柱刘福玉张国斌为探讨Ｖｉｔ．Ｃ对缺氧过程中心肌线粒体能量代谢的影响，５０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠（２１０～３００ｇ，雌雄各...     

磁场对AMI大鼠血SOD活性及心肌ATP含量变化的影响

本实验将大鼠随机分为五组：空白对照组、磁作用对照组、ＡＭＩ组、ＡＭＩ药物（心得安）治疗组、ＡＭＩ磁场治疗组。分别采用四氮唑蓝法和生物发光法测定各组大鼠血红细胞ＳＯＤ活性及心肌ＡＴＰ含量。结果表明：ＡＭＩ磁场治疗组血红细胞ＳＯＤ活性及心肌ＡＴＰ含量均明显高于ＡＭＩ组（Ｐ＜０．０１），磁作用对照组高于空白对照组（Ｐ＜０．０５）。初步证实，磁场对ＡＭＩ大鼠和健康大鼠心肌具有一定的保护作用，此种作用对ＡＭＩ大鼠更为明显。     

缺血预处理对大鼠心肌Na~ ,K~ -ATP酶和Ca~(2 ),Mg~(2 )-ATP酶活性的影响

离体大鼠心脏经１０ｍｉｎ左冠状动脉缺血加３０ｍｉｎ再灌注后，心肌中Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶的活力显著降低，Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的活力稍上升。离体心脏经３次３ｍｉｎ全心缺血加５ｍｉｎ再灌注的缺血预处理后，显著减轻随后缺血－再灌注引起的Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力降低，并有进一步增高Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活力的趋势。缺血预处理也显著减轻缺血－再灌注时的心肌收缩力下降和心律失常的发生。在体大鼠心脏缺血预处理对这些酶活力的影响与离体缺血预处理的结果相似，表明缺血预处理对这些酶活力的影响是作用于心脏本身所致。     

氟烷和七氟醚对缺血心肌功能和代谢及Ca2+-ATP酶活性的影响

目的: 研究氟烷、七氟醚(1.5MAC)对缺血心肌的影响。方法: 应用离体大鼠心脏Langendorff逆行灌注模型研究氟烷、七氟醚对心肌缺血前心率(HR)、左室舒张末期压力(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室压力升高速率(+dp/dt)、左室压力下降速率(-dp/dt)和冠脉流量(CF)的影响,测定缺血前、缺血10min、缺血25min3个不同时间的心肌ATP含量、Ca²⁺-ATP酶活性,同时记录缺血间期左室内压的变化情况。结果: 七氟醚显著增加正常离体心脏的CF,氟烷、七氟醚均不同程度地抑制心肌收缩功能和Ca²⁺-ATP酶活性,能够增加正常心肌的能量贮备。缺血10min时,二药能够减缓心肌ATP含量及Ca²⁺-ATP酶活性的下降,氟烷的作用比较明显。缺血间期,氟烷明显推迟缺血性挛缩的起始时间,降低挛缩幅度。结论: 氟烷的抗缺血损伤作用优于七氟醚,延缓缺血期心肌ATP含量及Ca²⁺-ATP酶活性的下降可能是氟烷抗缺血损伤作用的重要机制之一。     

睾酮对心肌梗塞大鼠肥大心肌肌球蛋白ATP酶活性及其同工酶分布的影响

本文观察了肌注睾酮对心肌梗塞(MI)雄鼠左室非梗塞区心肌肥大以及肥大心肌肌球蛋白ATP酶活性和同工酶分布的影响。术后第21日,经睾酮处理的MI组不仅心肌细胞直径明显大于对照MI组,且肌球蛋白ATP酶活性也比对照MI组明显提高(P<0.05)。电泳分析进一步表明,这种提高与同工酶V_1的含量增加有关(80% vs 74%,P<0.05)。提示MI后肌注睾酮在促进非梗塞心肌肥大的同时还能提高心肌的收缩性能,从而有助于左室功能的改善。     

大鼠心肌缺氧预处理中COX-2、iNOS、P38MAPK和线粒体K+ATP通道间信号转导关系的研究

目的：探讨大鼠心肌细胞缺氧预处理(IPC)时线粒体K+ATP通道的作用及其与P38MAPK、iNOS和COX-2的关系。 方法： 实验分为8组（对照组、缺氧预处理组、IPC+HDpr组、IPC+HDpo组、DZX+SB组、DZX+SMT组、DZX+NS组和DZX+HD组），用Western blotting 法测定心肌细胞的COX-2、iNOS表达量和Phosph-P38MAPK量，以LDH释放和台盼蓝排斥试验判断心肌细胞损伤程度。 结果： IPC前加入5-HD能抑制P38MAPK、iNOS和COX-2表达，并能取消IPC的心肌保护作用；IPC及二氮嗪预处理后加入5-HD不抑制P38MAPK、iNOS和COX-2表达，但也取消IPC的心肌保护作用。二氮嗪预处理后加入SB203580能抑制iNOS和COX-2表达；加入SMT能抑制COX-2表达但不抑制iNOS表达;加入NS398不抑制P38MAPK和iNOS表达。 结论： IPC晚期保护作用中，线粒体K+ATP通道发挥了双重作用，既是P38MAPK、iNOS和COX-2上游触发子，又是IPC后期的效应子。     

缺血预适应对青年与老年大鼠缺血/再灌注心肌氧化应激及线粒体功能的影响

目的:探讨缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC)对青年与老年大鼠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,IR)心肌损伤的影响。方法:雄性3月龄(青年)与20月龄(老年)Wistar大鼠,应用离体心脏灌流方法复制心肌IR与IPC模型。实验分为青年缺血/再灌注(YIR)组、青年缺血预适应(YPC)组、老年缺血再灌注(OIR)组与老年缺血预适应(OPC)组。透射电镜观察心肌及心肌线粒体超微结构变化;TTC染色测定心肌梗死面积;比色法测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附法测定心肌组织硝基化与羰基化蛋白质含量,TUNEL方法检测心肌细胞凋亡;氧电极法测定线粒体呼吸功能及钙诱导的线粒体渗透性转运孔开放情况。结果:与YIR组比较,YPC组心肌梗死面积明显减少,冠脉流出液中LDH活性降低,心肌组织的SOD活性增加,MDA含量降低,心肌硝基化与羰基化蛋白含量降低。电镜下可见YPC组心肌及分离的心肌线粒体膜结构完整、基质致密。YIR组心肌线粒体呼吸控制率与Ⅲ态耗氧量及P/O比值均明显增加,质子漏出减少,钙诱导的线粒体肿胀明显减轻,心肌细胞凋亡率下降。而与OIR组比较,OPC组上述指标均无显著统计学差异。与YPC组比较,OPC组心肌超微结构损伤明显增加,心肌氧化应激水平增加,线粒体呼吸功能下降,心肌细胞凋亡与坏死增多。结论:缺血预适应能够保护青年大鼠心肌缺血/再灌注损伤;而老年大鼠心脏对预适应刺激减敏,导致缺血预适应心肌保护作用钝化,这可能与老龄IPC心脏氧化应激水平增加导致线粒体损伤、细胞凋亡有关。     

急性重复低氧对小鼠脑组织血氧饱和度、线粒体功能以及ATP水平的影响

目的： 探讨急性重复低氧对脑组织血氧饱和度与线粒体功能的影响。方法: 将BALB/c小鼠置于低氧密闭罐中，通过小鼠呼吸消耗罐内氧造成罐内低氧，以小鼠出现喘呼吸为低氧耐受极限，然后将小鼠转到另一低氧密闭罐中，依此类推，连续进行5次低氧。记录小鼠每次的缺氧耐受时间、局部脑组织血氧饱和度，测定每次低氧暴露结束时的脑组织的线粒体复合体I活性和ATP含量。结果: 小鼠的缺氧耐受时间随缺氧暴露次数增加而显著延长。脑组织血氧饱和度在第1、2次缺氧暴露时急剧下降，但在第3、4、5低氧暴露时先小幅度下降再逐渐恢复至正常水平，然后再缓慢降低。脑组织线粒体复合体I的活性随着缺氧次数的增加逐渐被抑制，ATP含量在第1次低氧暴露结束时低于正常水平，在第3、5次低氧暴露结束时高于正常水平。结论: 急性重复低氧导致脑组织血氧饱和度降低的速度减慢、线粒体功能抑制以及脑组织ATP水平增高，后者很可能是动物脑组织耐缺氧能力增强的重要机制。     

二氮嗪预处理对大鼠心肌线粒体呼吸功能与呼吸酶活性的影响

目的： 探讨特异性线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂二氮嗪预处理对离体大鼠缺血再灌注心肌线粒体呼吸功能和酶活性的影响。方法: 采用Langendorff装置建立大鼠离体心肌缺血再灌注模型，将72只SD大鼠随机分为正常组（NOR）、缺血再灌注组（IR）、二氮嗪预处理组（DIA）、5－羟葵酸拮抗二氮嗪组（5HD-DIA）。NOR组在平衡灌注20 min后续灌100 min，IR组在平衡20 min后续灌30 min，继后全心缺血40 min，复灌30 min。DIA组在缺血前给予含二氮嗪50 μmol/L的K-H液10 min后，全心缺血40 min，复灌30 min。5HD-DIA组在二氮嗪预处理之前先给予含5－羟葵酸100 μmol/L K-H液10 min，其余同二氮嗪预处理组。分别于平衡末、缺血前及再灌注末取心肌并分离、制备线粒体，测定各组线粒体的呼吸功能、呼吸酶活性。结果: 再灌注末DIA组的线粒体呼吸功能（呼吸控制率、磷氧比、3态呼吸速率）和呼吸酶活性（NADH氧化酶、琥珀酸氧化酶、细胞色素C 氧化酶）明显优于IR组和5HD-DIA组（P<0.05）但次于NOR组（P<0.01）；而IR组和5HD-DIA组比较无显著差异(P>0.05)。结论: 线粒体钾通道开放剂二氮嗪预处理能够保护缺血/再灌注损伤心肌的线粒体，其机制与保护线粒体的呼吸功能及呼吸链的酶活性有关。     

Urocortin-I预处理对离体大鼠心肌线粒体呼吸功能及呼吸酶活性的影响

目的:探讨urocortin-I预处理对离体大鼠缺血再灌注心肌线粒体呼吸功能及酶活性的影响,观察心肌细胞ATP含量的变化。方法:(1)健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常组(Nor组)、缺血再灌注组(IR组)、urocortin-I预处理组(Ucn I组)、5-羟葵酸(5-HD)拮抗urocortin-I组(5-HD+Ucn I组)。采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型。分别于平衡末(T_1)、缺血前(T_2)及再灌注末(T_3)分离、提取心肌线粒体,测定各组线粒体呼吸功能及呼吸酶活性。(2)利用MPA离体心脏灌注装置分离成年大鼠心肌细胞,将分离培养24 h后同批次的心肌细胞随机分为正常组(Nor组)、缺氧复氧组(I/R组)、urocortin-I预处理组(Ucn I组)、5-HD拮抗urocortin-I组(5-HD+Ucn I组)。建立缺氧复氧模型,于复氧末用高效液相色谱法检测各组心肌细胞ATP含量。结果:T_3时点除Nor组外,其余各组与T_1、T_2时点相比呼吸功能(3态呼吸速率、呼吸控制率)及琥珀酸氧化酶、NADH氧化酶、细胞色素C氧化酶活性均明显下降(P0.05);T_3时Ucn I组心肌线粒体的呼吸功能及呼吸酶活性明显优于5-HD+Ucn I组及IR组(P0.05),但次于Nor组(P0.05);T_3时5-HD+Ucn I组心肌线粒体的呼吸功能及呼吸酶活性(琥珀酸氧化酶、NADH氧化酶)较IR组好(P0.05),但2组间细胞色素C氧化酶活性差异无统计学显著性;T_1、T_2时点各组组内及组间呼吸功能及3种呼吸酶活性的差异无统计学显著性。心肌细胞实验结果显示,复氧末Nor组ATP含量较其余各组均高(P0.01);I/R组和5-HD+Ucn I组心肌细胞的ATP含量较Ucn I组低(P0.05);此外,5-HD+Ucn I组心肌细胞的ATP含量较I/R组高(P0.05)。结论:Ucn I预处理可减轻缺血再灌注对心肌线粒体呼吸功能及呼吸酶活性的干预,保证了缺氧/复氧后心肌ATP的含量。     

慢性低氧大鼠骨骼肌线粒体的蛋白质组学研究

目的： 采用蛋白质组学方法研究慢性低氧大鼠线粒体蛋白表达变化并讨论其病理生理学意义。方法： Wistar大鼠随机分为2组：慢性低氧组和对照组。动物麻醉后取双侧腓肠肌标本，分离纯化线粒体蛋白进行二维电泳和ImageMaster分析，对差异蛋白质用MALDI-TOF-MS质谱仪进行肽指纹图谱测定。结果： 建立了大鼠腓肠肌线粒体蛋白质二维凝胶图像；与对照组相比，慢性低氧组大鼠线粒体350-450个蛋白点中共有35个蛋白表达显著改变，其中27个表达下调，8个表达上调；并对低氧相关的线粒体蛋白进行了鉴定。结论： 慢性低氧可诱导低氧相关线粒体蛋白表达改变，其作用可能与线粒体氧化磷酸化、物质转运和脂代谢有关。     

Anoxia-recovery cycle in ventricular muscle: Action potential duration,contractility and ATP content

Summary The action potential duration, tension, time to peak tension, mean rate of tension development, and ATP content of guinea pig ventricular muscle declined during 60 min of anoxic incubation. The decline in tension was closecorrelated with the decline in mean rate of tension development, whereas time to peak tension decreased in an S-shaped relationship with action potential duration decrease. When muscles were incubated under anoxic conditions for 5, 30, or 60 min then under control conditions for 30 min, the action potential duration and time to peak tension returned to control level; tension, mean rate of development, and ATP content did not recover to control level when the period of anoxia exceeded 5 min. During the first 10 min of re-oxygenation a transient overshoot of control value was noted in action potential duration and time to peak tension. The transient increase in time to peak tension was accompanied by a transient increase in tension. It was not dependent on the occurrence, or degree, of overshoot in action potential duration. Transient changes did not occur in mean rate of tension development.It has been concluded that the anoxia-induced decrease in tension is due to a decrease in the rate of tension development as a result of a decreased ATP suppl. Time to peak tension seems related to action potential duration and both are independent oftotal muscle ATP content.Supported by grants from the Canadian and Nova Scotia Heart Foundations and the Medical Research Council of Canada.     

急、慢性低氧对大鼠脑线粒体蛋白翻译合成的影响

目的:探讨模拟高原低氧对大鼠脑线粒体蛋白合成功能的影响。方法:雄性wistar大鼠随机分为急性低氧组、慢性低氧组和平原对照组。急、慢性低氧组动物分别连续暴露于模拟4000m高原3d和40d, 分离脑线粒体, 用[³H]-亮氨酸掺入法测定线粒体体外翻译活性, [³⁵S]-蛋氨酸掺入并对翻译后产物经SDS-PAGE和放射自显影进行分子量鉴定。结果:急性低氧脑线粒体蛋白翻译活性明显低于对照组60%(P<0.01), 慢性低氧时线粒体翻译活性与对照组无显著差异(P>0.05), 但显著高于急性低氧组(P<0.05).急性与慢性低氧暴露均未发现线粒体蛋白体外翻译产物与平原对照组有质的差异。结论:低氧可影响线粒体DNA编码蛋白合成, 并且与低氧暴露时间有关。     

毛冬青甲素对大鼠急性缺氧性肺血管收缩反应的影响及其机制

急性缺氧性肺血管收缩反应(HPV)具有重要的生理意义,前列腺素(PGs)和白三烯(LTs)参与了HPV的发生。本实验研究了中药成分毛冬青甲素对HPV的影响及其作用与PGs和LTs的关系。结果表明毛冬青甲素可增加基础肺血管阻力,减少心输出量,其作用一部分是通过增加LTs生成所致,而与PGs无明显关系。毛冬青甲素可增强HPV,其作用一方面是通过抑制Wistar大鼠缺氧时以舒血管性PGs(尤其是PGI_2)为主的PGs的产生,另一方面是通过增加LTs生成所致,也可能有其它机制参与。     

离体大鼠肝细胞与三磷酸腺苷(ATP)的结合及脂质体的影响

离体大鼠肝细胞与10~(-3)或10~(-4)mol/L的~3H-ATP共同孵化20分钟,细胞结合ATP量分别为0.53±0.06和0.21±0.03n mol/mg·Pr。应用脂质体作为药物载体包裹ATP(10~(-4)mol/L),使肝细胞结合ATP增加102.4％(P<0.01)。缺氧并不使细胞结合ATP增加。高浓度ATP(10~(-3)mol/L)降低正常或缺氧细胞存活率和增加细胞内蛋白漏出。10~(-4)mol/L的ATP对细胞存活率和蛋白漏出无明显影响,脂质体包裹的ATP抑制缺氧肝细胞的蛋白漏出。     

线粒体KATP通道开放剂与缺氧预适应对乳鼠窦房结细胞起搏离子流作用的比较

目的： 通过比较线粒体K_ATP通道开放剂及缺氧预适应（HP）对缺氧/复氧（H/R）乳鼠窦房结细胞起搏离子流（I_f）的作用，探讨HP对H/R时窦房结细胞电生理活动的保护机制。 方法： 取培养 2 d 的乳鼠窦房结细胞，随机分为①对照组；②H/R组；③HP组；④ diazoxide（线粒体KATP通道开放剂）+H/R组；⑤5-HD（线粒体K_ATP通道阻断剂）+HP组。以全细胞膜片钳技术检测I_f。 结果： ①H/R组各指令电压下的If密度显著高于对照组，激活曲线右移，半数最大激活电压由(-98.9±2.4)mV变为(-85.1±2.5)mV(P＜0.01)；②HP及diazoxide预处理能显著抑制I/R后升高的I_f密度，使激活曲线左移，半数最大激活电压分别为(-90.7±5.0)mV(P＜0.01)及(-92.2±1.9)mV(P＜0.01)；③5-HD预处理阻断HP效应，使I_f密度增加并使激活曲线右移，半数最大激活电压为(-86.3±2.7)mV(P＜0.01)。 结论： 线粒体K_ATP通道开放剂预处理能模拟HP效应，对抗H/R对乳鼠窦房结细胞I_f 的影响，有助于维护H/R时窦房结细胞电生理活动的相对稳定性。     

雾化吸入硝酸甘油治疗新生猪急性低氧性肺动脉高压和心肌损害的研究

目的： 探讨雾化吸入硝酸甘油（NTG）对新生猪急性低氧性肺动脉高压和心肌损害的疗效和安全性。方法: 24头上海种新生白猪建立急性低氧性肺动脉高压和心肌损害的模型。将动物随机分成4组：sham组（假手术组）；model组（模型组）；N1组（缺氧结束后雾化吸入NTG 0.5 h）和N2组（缺氧状态 0.5 h 后即雾化吸入NTG 0.5 h）。实验过程中连续监测平均动脉压（MAP）和平均肺动脉压(MPAP)，间断监测血清肌酸激酶心肌同功酶（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTnI）浓度，TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化染色检测心肌组织肌红蛋白(Mb)及心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43的含量。结果: 缺氧 1 h 后，N2组的MPAP显著低于model组（P<0.01）；缺氧结束后 0.5 h，N1组的MPAP显著低于model组（P<0.05）。4组新生猪在相同时点的MAP差异无统计学意义（P>0.05）。缺氧结束后 5 h，N1和N2组的CK-MB与model组差异无统计学意义（P>0.05）；N1和N2组的cTnI的含量均显著低于model组（P<0.01）。N1和N2组的心肌细胞凋亡指数显著少于model组（P<0.05）；心肌Mb在N1和N2组的表达显著强于model组（P<0.01）；心肌Cx43在N1和N2组的表达也显著强于model组（P<0.05）。结论: 缺氧同时或缺氧后雾化吸入NTG均能选择性地降低急性低氧引起的肺动脉高压，对心肌也有一定的保护作用。