灰树花多糖对宫颈癌细胞增殖和转移的影响及机制

目的探讨灰树花多糖对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B)信号通路的影响。方法 50、100、200μg/mL灰树花多糖处理Caski细胞48 h,通过MTT比色法、Transwell小室及Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞增殖、侵袭迁移及凋亡率,Western blot检测AKT、p-AKT、PCNA(增殖细胞核抗原)、Cleaved caspase-3(裂解的半胱天冬酶3)和E-cadherin蛋白(上皮钙黏蛋白)表达。使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(10μmol/L)单独或联合灰树花多糖(10μmol/L LY294002和200μg/mL灰树花多糖)处理Caski细胞48 h,检测各组细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及AKT、p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白表达。结果随着灰树花多糖质量浓度增加细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT和PCNA表达降低,Cleaved caspase-3和E-cadherin表达升高(P0.05)。LY294002可增强灰树花多糖对Caski细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin表达的影响。结论灰树花多糖可通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

基于PI3K/AKT通路探讨电针预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制

目的:基于PI3K/AKT通路探讨电针预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针预处理组和LY294002组,采用线栓法建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察脑缺血再灌注后大鼠神经功能缺损情况及TTC染色观察脑梗死体积,应用western blot法检测缺血脑组织中p-Akt、HIF-1α和Caspase-3蛋白表达水平。结果:电针预处理对脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损具有明显的改善作用,能够明显降低脑梗死范围。western blot结果发现:模型组中p-Akt和HIF-1α的表达明显高于假手术组;与模型组比较,电针预处理组中p-Akt和HIF-1α的表达明显增加,LY294002组中p-Akt的表达明显低于模型组;模型组中Caspase-3的表达明显增加;与模型组比较,电针预处理组中Caspase-3的表达明显减少,LY294002组脑组织中Caspase-3的表达明显增加。结论:电针预处理对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其可能机制与激活PI3K/Akt信号通路、上调p-Akt和HIF-1α蛋白表达、降低Caspase-3表达有关。     

胰岛素样生长因子-1保护人终板软骨细胞的作用机制

目的:明确胰岛素样生长因子-1(IGF-1)保护人终板软骨细胞的作用机制。方法:从腰椎爆裂性骨折患者的终板分离原代终板软骨细胞,用IGF-1刺激原代终板软骨细胞,检测COL2A1,SOX9和MMP13的mRNA水平和蛋白表达水平;用IGF-1刺激原代终板软骨细胞,检测PI3K活性、AKT和p-AKT蛋白表达,以及ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达;IGF-1联合PI3K抑制剂LY 294002或ERK1/2抑制剂AG-126处理原代终板软骨细胞,再次检测COL2A1,SOX9和MMP13的蛋白表达,明确其上下游关系。结果:IGF-1可以诱导COL2A1和SOX9上调表达,并抑制MMP13;此外,IGF-1增高PI3K活性,并上调p-AKT和p-ERK1/2;IGF-1上调COL2A1的作用依赖于PI3K-AKT信号通路的激活,而IGF-1诱导SOX9上调和MMP13下调依赖于ERK1/2的活化。结论:IGF-1激活PI3K-AKT信号通路和ERK1/2通路,调节终板软骨细胞功能性蛋白的表达,为椎间盘退变的治疗提供理论依据。     

补肾活血方含药血清通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞增殖分化研究

目的：观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞增殖分化以及PI3K/Akt信号通路的影响,探讨补肾活血方防治骨质疏松症的作用机制。方法：通过新西兰大白兔制备补肾活血方含药血清,将人成骨细胞株分为空白组（Control组）、补肾活血方组（Z组）、补肾活血方含药血清＋10%μmol/L的抑制剂LY294002组（Z＋LY组）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测各组成骨细胞的增殖情况,生化方法检测成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性,Western blot法检测AKT的活化情况。结果：补肾活血方含药血清能促进成骨细胞的增殖,并使之分化增强,且较Control组差异有统计学意义（P〈0.01）;阻断PI3K/AKT信号通路后,Z＋LY组对成骨细胞增殖分化的抑制较Z组差异有统计学意义（P〈0.05）,且对成骨细胞的分化功能有显著抑制作用（P〈0.01）;Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能促进磷酸化AKT（p-AKT）的表达,用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,p-AKT表达含量明显减少（P〈0.01）。结论：补肾活血方可能通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞的增殖,并促进成骨细胞分化功能,这可能是补肾活血方防治骨质疏松症的机制之一。     

葛根素对PI3K/AKT通路介导PASMCS凋亡的影响

探讨葛根素(puerarin,Pue)对缺氧抑制的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡的影响,并研究细胞外信号PI3K/AKT通路是否参与了Pue诱导PASMCs凋亡的过程。以血清饥饿组(SD组)为对照组,通过噻唑蓝比色法(MTT)、Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒和蛋白免疫印迹法检测Pue对大鼠PASMCs凋亡情况的影响。采用蛋白免疫印记法检测PI3K/AKT通路是否参与了Pue诱导缺氧抑制的PASMCs凋亡的进程中。结果显示,①常氧条件下Pue对PASMCs细胞凋亡无影响,缺氧可抑制PASMCs凋亡,常氧及缺氧条件下Pue对TNF-α表达无影响。Pue可以逆转缺氧诱导的Bcl-2(P<0.01)表达上调以及Bax(P<0.01)表达下调。②常氧情况下Pue对P-AKT的表达没有影响,LY294002与Pue均可抑制缺氧诱导的Bcl-2,P-AKT表达上调以及Bax表达下调,与缺氧单独加Pue或缺氧单独加入LY294002对比,缺氧+Pue+LY294002组Bcl-2,Bax,P-AKT表达变化更显著。结果表明,Pue可诱导缺氧抑制的PASMCs凋亡,并且可能是通过PI3K/AKT通路调控的。     

PI3K/AKT 信号通路抑制剂对食管癌细胞 TE1 的侵袭及迁移影响的机制研究

〔摘 要〕 目的：探讨 PI3K/AKT 信号通路抑制剂对食管癌细胞 TE1 迁移及侵袭能力的影响,并分析其可能机制。方法： 培养食管癌 TE1 细胞株,用 30 μmol·L-1 的 LY294002 处理 TE1 细胞 1 h,24 h 后采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞 增殖抑制率,采用细胞划痕实验、细胞侵袭实验观察细胞迁移及侵袭情况,采用Western blot实验检测PY14 Cav–1的表达水平。 结果：LY294002 能明显抑制食管癌细胞株 TE1 的增殖,并抑制其迁移及侵袭能力,与对照组比较,差异具有统计学意义 （P ＜ 0.05）。同时 LY294002 能够使 PY14Cav–1 表达水平下调。结论：PI3K/AKT 信号通路正向调节食管癌细胞的增殖,并参 与细胞的侵袭及迁移,LY294002能够抑制食管癌细胞的生长、迁移及侵袭,其可能机制与通过下调PY14 Cav–1表达水平有关。     

基于PTEN/PI3K/AKT信号通路花蕊石抗肝癌细胞增殖作用机制研究

目的探讨花蕊石对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及其初步作用机制。方法采用CCK-8法检测花蕊石含药血清对肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting法检测PTEN/PI3K/AKT信号通路中第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸蛋白激酶B(p-Akt)相关蛋白的表达水平;RT-PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)及核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)相关基因mRNA的表达水平。结果花蕊石具有明显的抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。花蕊石含药血清可明显上调PTEN/PI3K/AKT信号通路中PTEN蛋白的表达水平,降低PI3K及p-Akt蛋白的表达,同时下调NF-κB mRNA的表达。结论花蕊石能够抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,并促进肝癌细胞凋亡,其作用机制可能与激活PTEN表达水平从而抑制PI3K/AKT信号通路及其下游基因NF-κB的异常活化有关。     

葛根素调控PI3K/AKT信号对甲状腺癌细胞凋亡及机制研究

目的:探讨葛根素抑制PI3K/AKT信号对甲状腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:12.5、25、50、100、200μmol/L的葛根素处理人甲状腺癌K1、FTC-133、8505C细胞48 h及200μmol/L葛根素处理细胞24、48、72 h,CCK8检测细胞活力。后续研究分为对照组、葛根素组、PI3K/AKT信号抑制剂LY294002组和葛根素+LY294002组,CCK8检测各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率及ROS含量;Western blotting检测p-AKT、PCNA、survivin的蛋白表达。结果:葛根素可时间及浓度依赖性抑制人甲状腺癌K1、FTC-133、8505C细胞活力;葛根素和LY294002均可抑制K1细胞活力,诱导细胞凋亡,诱导ROS产生,下调p-AKT、PCNA、survivin蛋白表达,与对照组比较差异均具有统计学意义(P0.05),两者联合对细胞活力抑制、诱导凋亡和ROS产生及p-AKT、PCNA、survivin表达下调作用更显著,且与葛根素组和LY294002组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:葛根素可抑制甲状腺癌细胞活力和诱导凋亡,机制可能与诱导ROS产生及抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

鹿角方阻断PI3K/AKT信号通路对AngⅡ诱导心肌细胞肥大的保护作用

目的:研究鹿角方对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的保护作用,并从PI3K/AKT信号通路的角度探讨其可能机制。方法:培养原代乳鼠心肌细胞,将其随机分为正常对照组、AngⅡ模型组、鹿角方+AngⅡ组、LY294002(PI3K通路阻断剂)+AngⅡ组、鹿角方+LY294002+AngⅡ组。通过图像分析系统测量心肌细胞表面积;RT-PCR检测ANP、BNP mRNA表达;Wertern Blot检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT(Ser473)和GSK3β蛋白表达。结果:与正常对照组比较,AngⅡ模型组心肌细胞表面积、ANP和BNP mRNA表达以及p-PI3K和p-AKT(Ser473)蛋白表达显著增加(P<0.01);而鹿角方可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,使模型细胞表面积显著减小(P<0.01),ANP、BNP mRNA表达以及p-PI3K和p-AKT(Ser473)蛋白表达显著降低(P<0.01),且抑制效果与LY294002相当,而鹿角方对GSK3β蛋白表达无显著影响。结论:鹿角方可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其机制与阻断PI3K/AKT信号通路有关。     

山核桃叶总黄酮对H9c2细胞氧化损伤的保护作用

目的研究山核桃叶(Carya cathayensis)总黄酮对H2O2诱导的H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其与PI3K/Akt(磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶B)信号通路的关系。方法使用MTS(溴化噻唑蓝四氮唑)检测H2O2诱导氧化应激损伤的H9c2细胞存活率,Hoechst 33342染色观察其凋亡,Western blot技术检测p-AKT和AKT表达量,并用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002进行验证。结果山核桃叶总黄酮可显著的提高氧化应激损伤细胞的存活率,减少细胞凋亡,增加细胞中p-AKT的表达,但其作用可被PI3Ks抑制剂LY294002抵消。结论山核桃叶总黄酮激活PI3K/Akt信号通路来有效抑制H9c2细胞的氧化损伤。     

基于PI3K/Akt信号转导通路的通脉醒脑滴丸治疗脑缺血的机制研究

目的 探讨以活血化淤为主要功效的中药创新复方制剂通脉醒脑滴丸防治脑缺血卒中的作用机理.方法 选用线栓阻断大鼠大脑中动脉法复制脑缺血再灌注模型,采用荧光定量PCR方法测定脑组织PI3K、Akt和PTEN的表达,免疫组化方法测定脑组织HIF-1α和VEGF的表达,考察通脉醒脑滴丸对PI3K/Akt信号通路的作用.结果 通脉醒脑滴丸能上调脑组织PI3K、Akt、HIF-1α以及VEGF的表达,下调PTEN的表达.结论 研究初步证实通脉醒脑滴丸对脑缺血损伤的保护作用机制可能与活血化淤的中药方剂激活PI3K/Akt信号通路有关.     

基于VEGF相关信号通路研究益气除痰方对缺氧血管新生的影响

目的:研究益气除痰方(YQCTF)对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管新生的影响及机制探讨。方法:设立HUVEC常氧(Norm)组、缺氧造模(Hyp)组、缺氧+YQCTF低浓度(L)组、缺氧+YQCTF中浓度(M)组、缺氧+YQCTF高浓度(H)组,采用CCK8法和流式细胞术(Annexin V/PI染色)检测细胞增殖和凋亡;管腔形成实验和transwell小室测定细胞血管生成和细胞迁移能力;Western blot检测HIF-1α、VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果:与常氧组比较,缺氧造模组HUVEC无明显增殖抑制和凋亡,但迁移和管腔形成能力增强,且HIF-1α、VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT、P-AKT蛋白表达上调;与缺氧造模组比较,YQCTF可明显抑制缺氧下HUVEC增殖,促进凋亡,降低迁移及管腔形成能力,呈现剂量依赖性,并可下调HIF-1α、VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结论:益气除痰方可抑制缺氧诱导的血管新生,可能与其调控VEGF相关信号通路有关。     

大蒜素诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用机制研究

目的：探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用机制。方法：分别以二甲基亚砜（空白对照组）、大蒜素（12.5、25、50 μg/mL）和LY294002 5 μg/mL干预对数生长期Ishikawa细胞。48 h后,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡状况,Western Blotting法检测p-PI3K、p-AKT、Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与空白对照组比较,经大蒜素12.5、25、50 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够提高Ishikawa细胞增殖抑制率和凋亡率;经大蒜素25、50 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够下调p-PI3K、p-AKT、Bcl-2表达并上调Cleaved Caspase-3、Bax表达,提高Bax/Bcl-2比值,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与LY294002组比较,经大蒜素50 μg/mL干预能够提高Ishikawa细胞增殖抑制率和凋亡率,下调p-PI3K、p-AKT表达并上调Cleaved Caspase-3、Bax表达,提高Bax/Bcl-2比值,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：大蒜素能够诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,可能与抑制PI3K/AKT信号通路活化而使其下游促凋亡蛋白表达上调有关。     

二仙汤对过氧化氢诱导的成骨细胞蛋白组学及PI3K信号通路的影响

采用过氧化氢(H_2O_2)复制细胞氧化应激模型,探讨二仙汤对过氧化氢(H_2O_2)刺激的成骨细胞蛋白组学的影响及其保护机制。取新出生(24 h以内)乳鼠的头盖骨培养原代成骨细胞,实验分为正常组、模型组、福善美组、二仙汤组4组,空白组和模型组加入空白血清,福善美组和二仙汤组则分别加入福善美含药血清和二仙汤含药血清干预45 h后,除正常组外,各组均加入H_2O_2刺激3 h后,提取细胞蛋白,采用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测,Protein Discovery软件进行蛋白鉴定,SIEVE软件进行相对定量定性分析;另外用LY294002(10μmol·L~(-1))阻断PI3K信号通路,实验分为空白对照组、模型组、LY294002组、二仙汤组、二仙汤+LY294002组,观察LY294002干预下二仙汤含药血清对H_2O_2刺激成骨细胞后细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及BMP-2、OPG、p-Akt、p-FoxO1蛋白表达的影响。结果显示,二仙汤组与模型组比较共发现78个差异蛋白,这些蛋白参与PI3K/Akt、胰高血糖素、雌激素、胰岛素等信号通路的调节;使用LY294002后,二仙汤对成骨细胞增殖的促进作用被削弱,OPG、p-FoxO1表达显著下调,BMP-2、p-Akt表达有下调趋势但无显著性,然而LY294002和二仙汤均提高了成骨细胞ALP活力,这可能与细胞状态、细胞分化进程有关。以上结果表明,二仙汤含药血清对H_2O_2刺激的成骨细胞有保护作用,PI3K/Akt信号通路是内在机制之一。     

五龙消癥丸抑制人胃癌BGC-823细胞侵袭与迁移作用及机制研究

目的探究五龙消癥丸对胃癌BGC-823细胞侵袭与迁移能力的影响及其作用机制。方法分别用五龙消癥丸、PI3K激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)及PI3K特异性抑制剂LY294002作用于BGC-823细胞,采用MTT法检测不同质量浓度五龙消癥丸对BGC-823细胞增殖的影响;Transwell小室模型研究五龙消癥丸对BGC-823细胞垂直侵袭和迁移能力的影响;采用ELISA法检测五龙消癥丸对血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9表达的影响;采用Western blotting及RT-PCR法检测脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中相关蛋白及m RNA的表达。结果五龙消癥丸可显著抑制BGC-823细胞的增殖、黏附、侵袭和迁移能力,显著抑制BGC-823细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白的表达,显著抑制p-PI3K、p-Akt、磷酸化Ik B激酶-α(p-IKK-α)、p-NF-κB p65Ser 276蛋白及PI3K、Akt、IKKα、NF-κB m RNA的表达,并且呈现一定的时效和量效关系。结论五龙消癥丸通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白及m RNA表达,从而达到抑制BGC-823细胞的增殖、迁移、侵袭作用。     

二仙汤对顺铂所致大鼠卵巢早衰模型中卵巢颗粒细胞增殖及周期的影响

目的观察二仙汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。方法以不同剂量的二仙汤药理血清作用于体外培养的顺铂损伤卵巢颗粒细胞,并以正常药理血清为空白对照,戊酸雌二醇药理血清为阳性对照,同时对比加入PI3K/AKT通路的抑制剂LY294002后各组的变化。MTT法检测各组药理血清作用于卵巢颗粒细胞24小时、48小时和72小时的增殖情况。流式细胞术检测各组中细胞周期各时相的变化。结果 (1)二仙汤对顺铂损伤后的卵巢颗粒细胞具有增殖促进作用(P0.05);且对于顺铂损伤后并给予LY294002抑制剂的颗粒细胞也具有增殖改善作用(P0.05)。(2)二仙汤各剂量组及戊酸雌二醇组均能使处于S期的顺铂损伤颗粒细胞比例显著增多,G_0/G_1期细胞相对比例减少(P0.01),且增殖指数升高(P0.01)。结论二仙汤对卵巢颗粒细胞增殖有显著促进作用,其作用机制可能是激活或增强AKT信号通路,抑制细胞凋亡,从而促进细胞增殖;另一方面,也可能是通过促进颗粒细胞从G_0期向S期转化,增加S期细胞比率来实现的。     

阳和化岩汤对HER-2高表达型乳腺癌细胞PI3K/Akt通路HER-2,PI3K,p-Akt表达的机制

目的:观察阳和化岩汤与磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)抑制剂LY294002对乳腺癌细胞株SK-BR-3[人表皮生长因子受体-2(HER-2)高表达型]PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路中HER-2,PI3K,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达的影响,研究阳和化岩汤的干预机制。方法:制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3分为空白组,阳和化岩汤组,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组,阳和化岩汤(125 g·L-1),LY294002 (0. 05 g·L-1),阳和化岩汤+LY294002 (阳和化岩汤125 g·L-1,LY294002 0. 05 g·L-1),用药干预24 h后通过免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HER-2,PI3K,p-Akt蛋白表达,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HER-2,PI3K,p-Akt mRNA表达。结果:与空白组比较,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组均能抑制乳腺癌细胞株HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05);阳和化岩汤组能抑制乳腺癌细胞株HER-2,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05),但对PI3K的抑制作用不明显;联用LY294002较单用LY294002具有进一步抑制PI3K表达的作用(P 0. 05)。与阳和化岩汤组,LY294002组比较,LY294002+阳和化岩汤组能够明显抑制HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05)。结论:阳和化岩汤能够抑制乳腺癌脉管生成和侵袭,主要作用机制为通过干预PI3K/Akt通路,降低通路中HER-2,PI3K,p-Akt表达。     

黄癸素对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的作用机制分析

目的:探讨黄癸素对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的作用机制。方法:采用Western blot法检测黄癸素对MCF-7细胞信号通路分子STAT3及AKT表达的影响,采用细胞划痕实验检测黄癸素对MCF-7细胞迁移能力的影响以及采用TranswellTM细胞侵袭实验检测黄癸素对MCF-7细胞侵袭能力的影响。结果:黄癸素可明显上调STAT3及AKT的表达;黄癸素组、黄癸素联合DMSO组、黄癸素联合JAK/STAT3组、黄癸素联合PI3K/AKT组平均划痕率与对照组比较差异有统计学意义;黄癸素可促进MCF-7细胞的迁移力,JAK/STAT3信号通路抑制剂AG490及PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002可抑制黄癸素对MCF-7细胞的促迁移作用。黄癸素组、黄癸素联合DMSO组、黄癸素联合JAK/STAT3组、黄癸素联合PI3K/AKT组穿膜细胞数与对照组比较,差异有统计学意义,黄癸素能够促进MCF-7细胞的促侵袭作用。结论:黄癸素对MCF-7细胞的促迁移作用与PI3K/AKT及JAK/STAT3信号通路有关,黄癸素促进MCF-7细胞的侵袭特性与JAK/STAT3信号通路有关。     

虾青素对缺氧复氧心肌细胞的保护作用及机制研究

目的探讨虾青素(Astaxanthin,AST)对缺氧复氧(H/R)心肌细胞保护作用及对PI3K/AKT/HMGB1通路影响。方法原代心肌细胞随机分为3组:对照组、H/R组与H/R+AST处理组;机制探讨中给予PI3K/AKT抑制剂(LY294002)干预。4 h缺氧联合6 h复氧构建H/R损伤,按分组情况给予AST处理。检测心肌细胞存活率、心肌损伤酶与促炎症介质含量;SOD/MDA联合DHE探针观察氧化应激;流式细胞术检测凋亡;Western blotting检测蛋白表达。结果 AST改善H/R诱导的心肌细胞损伤,表现为细胞活性上调、LDH/CK-MB酶含量降低。此外,AST可减轻心肌细胞凋亡、抑制IL-6/TNF-α释放、降低ROS产生、增加SOD活性并下调MDA含量。在机制研究中,AST激活PI3K/AKT并抑制HMGB1表达,而阻断PI3K/AKT后AST心肌保护功能被逆转。结论 AST通过PI3K/AKT/HMGB1依赖性途径在H/R心肌细胞中发挥保护功能。     

PI3K/Akt通路在芍药苷抗Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的:研究PI3K/Akt通路在芍药苷对PC12细胞神经保护中的作用。方法:芍药苷组(5,10,20μmol·L-1)预处理30 min,然后加入Aβ25-35(20μmol·L-1)共同作用24 h;抑制剂LY294002(10μmol·L-1)于芍药苷(10μmol·L-1)作用前预处理30 min。用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染检测细胞凋亡率,以及Western blot法检测p-Akt,Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3蛋白表达。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,其保护作用可能是通过上调Akt磷酸化水平,增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制caspase-3等的激活而实现的;抑制剂LY294002可减弱上述芍药苷的保护作用。结论:芍药苷可通过激活PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。