Avidin—HRP制备及其实验因素的控制

本文报导将过碘酸法连接亲和素和辣根过氧化物酶用于ELISA技术,以增加标准ELISA的敏感性用于检测人IgG。亲和素与活化辣根过氧化物酶克分子比例与敏感性相关,1:1.5比例最为敏感。比较了化学修饰亲和素—辣根酶酸和亲和素—辣根酶两种连接物。前者用于BA—ELISA,敏感性限度高于标准ELISA 4倍,并且实验结果相当稳定;亲和素—辣根酶用于BA—ELISA,比普通ELISA敏感4—16倍,但是,由于存在强非特异性吸附和高变异系数,对于大多数用途的检测是不能接受的。其它可能改善BA—ELISA的实验因素作了讨论。     

抗土霉素单克隆抗体的制备及其特性分析

目的:制备抗土霉素(OTC)的单克隆抗体(mAb),对其特异性和竞争ELISA的实用性进行分析。方法:通过碳二亚胺法和羰基二咪唑法分别将OTC与载体蛋白(BSA、OVA)偶联制备免疫原和检测抗原,用杂交瘤技术制备mAb,鉴定mAb的特异性并用于竞争ELISA效果分析。结果:获得1株能稳定分泌抗OTC的mAb杂交瘤细胞株,mAb腹水的ELISA效价为3×104,土霉素竞争ELISA检测下限为1mg/L。结论:抗OTC的mAb具有抗原结合特异性,可用于OTC竞争ELISA免疫学检测。     

抗人μ链单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株。mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Westernblot法鉴定。以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5。mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgG1(κ),相对亲和力为1×10-5。Westernblot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000。以辛酸硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好。结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。     

用酶标Ig交叉反应性单抗作间接ELISA检测肾综合征出血热(HFRS)病毒抗体

<正> 自Tkachenko等和Gavrilovskaya等应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了HFRS病毒抗体以来,ELISA在HFRS的诊断与血清流行病学调查上的应用得到不断的发展。1986年,柴瑞珍等建立了ELISA抗IgM固相法检测人血清中的IgM抗体,但若用于不同种属血清的检测则需选用不同的固相包被抗体。本文在制备了Ig交叉反应性单抗(McAb)的基础上,制备了可用于人、猪、兔血清IgG检测的酶标McAb,建立了检测人、猪、兔血清中HFRS病毒抗体的ELISA间接法。     

活菌ELISA夹心法的建立

<正> ELISA以其敏感和特异性而已被广泛应用于各种诊断,但用于细菌菌体抗原的检测报道不多,同时不能获得活菌作进一步的确诊。本文研究的目的是把ELISA的敏感性和细菌培养的高度特异性结合起来,试图建立一种既能用ELISA快速检测预报,又能在ELISA检测后原位培养获得活菌的方法,称谓活菌ELISA夹心法。实验研究结果证明,本法不单具有一般ELISA夹心法的敏感和特异性,检测结果报告后,还可以从中分离培养出活菌确诊。     

ELISA测定中影响因素简析

ELISA方法被广泛用于各种抗原和抗体测定.但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在临床检验中如果处理不当,会出现一些错误结果(即假阳性或假阴性结果).引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②操作因素;③试剂因素.本文主要就标本因素和操作因素对ELISA测定的影响做如下讨论.     

斑点ELISA测定麻疹IgG抗体

<正> 血凝抑制试验(HIT)是检测麻疹抗体水平的常规方法,但因猴血球来源困难,基层无法开展。1986年郭可謇等用ELISA测定麻疹IgG抗体获得成功。该法特异、稳定、操作简便,其灵敏度比HI法约高150倍。但因成本高,使其广泛应用受到限制。斑点ELISA法(Dot ELISA)是近年在ELISA法基础上发展起来的一种检测技术,特异、敏感、简便快速,国内外已用于病毒和寄生虫等的抗原抗体检测。我们试用该法测定血清中麻疹IgG抗体水平,并与ELISA进行比较,获得了满意的结果。     

检测HIV-1逆转录酶活性的ELISA方法的建立

目的　建立检测HIV 1逆转录酶活性的ELISA方法。方法　应用包被的模板和逆转录酶将生物素标记的dUTP掺入 ,用辣根过氧化物酶反应系统检测酶活性。结果　建立了检测HIV 1逆转录酶活性的ELISA方法 ,并与同位素掺入检测法进行了比较 ,用ELISA法检测了PFA等药物对HIV 1逆转录酶活性的抑制作用 ,对ELISA法的重复性、稳定性及用于抑制剂研究的特异性和敏感性进行了评价。结论　HIV 1RT活性的ELISA检测法具有简便、快速、重复性好、特异性强的特点 ,适用于抗HIV 1逆转录酶药物的大样品量筛选工作 ,并可发展成为高通量技术     

ELISA方法在基础医学研究中的应用及注意事项

1971年瑞典斯德哥尔摩大学的Engvall和Perlmann首次建立了酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA）方法,用于定量检测家兔血液中的IgG。     

C反应蛋白单克隆抗体的制备及夹心ELISA的建立和应用

目的制备和鉴定抗C反应蛋白(CRP)的单克隆抗体(m Ab)并建立双抗体夹心ELISA。方法应用CRP作为免疫原刺激小鼠,获得抗CRP m Ab后,分组进行交叉配对,建立ELISA,并对肾综合征出血热(HFRS)患者血浆CRP含量进行检测。结果获得12株高亲和力抗CRP特异性m Ab(FMMU-CRP1~FMMU-CRP12)。其中FMMU-CRP7和FMMU-CRP1分别作为包被抗体和检测抗体建立双抗体夹心ELISA,其敏感性达1 ng/m L。ELISA检测发现HFRS患者血浆中CRP含量较正常人明显升高。结论成功制备出抗CRP m Ab,并建立高敏感性ELISA用于CRP检测。     

改良凝集试验(MAT)与间接血凝试验(IHAT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测弓形虫抗体的比较分析

为了评价用于检测弓形虫抗体的改良凝集试验 (MAT)、用MAT、间接血凝试验 (IHAT)、酶联免疫吸附试验 (ELISA)对动物和人的血清进行检测 ,比较阳性检出率与符合率 ,并对检测的结果进行统计分析。结果显示 :MAT和IHAT、MAT与ELISA检测动物和人血清的阳性检出率都无显著差异 (P >0 0 5 )。MAT与IHAT检测动物血清的总符合率为 78 7% (5 9 75 ) ,检测人血清的总符合率为 81 6 % (71 87) ;MAT与ELISA检测动物血清的总符合率为 74 0 % (5 4 73) ,检测人血清的总符合率为 79 3 % (6 9 87)。应用配对资料卡方检验分析显示 :MAT与IHAT、MAT与ELISA检测的结果一致。因此 ,检测弓形虫抗体的MAT与IHAT和ELISA具有良好的符合性 ,这 3种方法都能用于弓形虫抗体的常规普筛和血清流行病学研究。     

改良凝集试验（MAT）与间接血凝试验（IHAT）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测弓形虫抗体的比较分析

为了评价用于检测弓形虫抗体的改良凝集试验(MAT)、用MAT、间接血凝试验(IHAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)对动物和人的血清进行检测,比较阳性检出率与符合率,并对检测的结果进行统计分析.结果显示MAT和IHAT、MAT与ELISA检测动物和人血清的阳性检出率都无显著差异(P>0.05).MAT与IHAT检测动物血清的总符合率为78.7%(59/75),检测人血清的总符合率为81.6%(71/87);MAT与ELISA检测动物血清的总符合率为74.0%(54/73),检测人血清的总符合率为79.3%(69/87).应用配对资料卡方检验分析显示MAT与IHAT、MAT与ELISA检测的结果一致.因此,检测弓形虫抗体的MAT与IHAT和ELISA具有良好的符合性,这3种方法都能用于弓形虫抗体的常规普筛和血清流行病学研究.     

用于检测可溶性人IL-2R的一种竞争性的ELISA

一种用于可溶性人IL-2R的定量检测的固相竞争性ELISA已建立。从固相开始,试剂的连接顺序为(1)源于重组DNA的纯化IL-2R,(2)含有可溶性IL-2R的样品以及与异硫氰酸连接的抗IL-2R的抗体7G7/B6,(3)碱性磷酸酶连接的兔抗FIFC,(4)底物。将此法与检测可溶性IL-2R的夹心ELISA相比,竞争性ELISA没有夹心法     

筛选抗间日疟原虫单克隆抗体的免疫酶斑点法的建立

免疫酶斑点法(Dot--ELISA)是近年在ELISA基础上建立起来的微量蛋白检测技术,它除具有ELISA的简便、敏感、特异等特点外,尚有样品用量极少,节约抗原的特点。我们将此法用于筛选抗间日疟原虫(P.v.)单抗,克服了抗原来源限制给检测带来的困难,使检测效率大大提高。     

逆转录-聚合酶链反应对肾综合征出血热早期的诊断

为了选择更为敏感,特异,快速的肾综合征出血热（HFRS）的诊断方法。我们建立了碘化钠—异流氰酸胍—氯仿法提取汉坦病毒（HV）核酸（RNA）用于逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同病型HFRS患者一周内血清中HV－RNA且与酶联免疫吸附法（ELISA）检测HFRS-IgM进行比较。45例HFRS患者血清中HV－RNA阳性率为82．2％,其中轻、中、重型阳性中分别为75％,78.5％,86.9％。HFRS-IgM阳性率55．5％,其中轻、中、重型阳性率分别为37.5％,50.0％,65/2％。RI-PCR法检出率高于ELISA法,差别有显著性。RT-PCR法和ELISA法均可以用于HFRS的早明诊断。但前者更为敏感。     

分支肽在血清学诊断中检测HIV-特异抗体及使用甘氨酸隔离物增强敏感性的优越性

合成肽可被抗蛋白质整个分子的抗体所识别,肽易合成且价廉.肽-基ELISA试剂盒已用于检测HIV特异抗体,既敏感又特异.近年来,又用分支肽检测抗体,发现分支肽比单体肽更为优越.该文用ELISA试验比较了分支肽和单体肽的反应性.用单克     

用于定量ELISA方法的抗人β2微球蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗人β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)特异性单克隆抗体并建立其双抗体夹心定量ELISA免疫检测方法。方法以高纯度的人β2-MG作为免疫原,采用常规免疫和脾内免疫相结合的方法免疫纯系Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人β2-MG单克隆抗体并鉴定,以此为基础建立双抗体夹心ELISA检测方法。结果制备出5株稳定分泌抗人β2-MG的单克隆抗体,经鉴定5株单抗皆为IgG1类,均为β2-MG抗原特异性抗体。经抗体配对试验筛选出1对可用于ELISA检测的配对抗体,建立了定量ELISA检测方法。结论制备出抗人β2-MG单克隆抗体并建立了双抗体夹心定量ELISA免疫检测方法,与国外试剂盒检测结果相关性良好。     

德国小蠊变应原皮内试验与血清sIgE检测的相关性

目的探讨德国小蠊变应原皮内试验与血清sIgE检测的相关性。方法通过对德国小蠊变应原天然粗浸液进行酶联免疫吸附实验（ELISA）测定蟑螂过敏病人血清sIgE水平,与皮试结果进行相关性比较。结果当皮试阳性反应程度≥“＋”时,sIgE阳性率为41.7%,皮试与ELISA的符合率为65.6%;当皮试阳性反应程度≥“＋＋”时,sIgE阳性率为60%,皮试与ELISA的符合率为87.5%,皮试程度与血清sIgE抗体检测结果显著相关;当皮试阳性反应程度≥“＋＋＋”时,皮试与ELISA完全相符。结论强阳性皮试反应程度与ELISA检测血清sIgE水平呈一致关系,两种方法可相结合用于分析诊断德国小蠊变应原。     

夹心ELISA检测N端利用物因子A(NusA)标签融合蛋白

目的创建基于夹心ELISA原理的定性和定量检测N端利用物因子A(NusA)标签融合蛋白的方法,为NusA标签融合蛋白的鉴定提供新的手段。方法以NusA标签蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别NusA标签蛋白的单克隆抗体(mAb),常规标记辣根过氧化物酶,方阵法筛选夹心ELISA的配对抗体。结果获得14株NusA标签蛋白特异性mAb并最终确定一对可用于夹心ELISA检测的NusA特异性mAb。以NusA No.1作为捕获抗体, NusA No.10为检测抗体。结论成功建立双抗体夹心ELISA检测NusA标签融合蛋白的方法,检测敏感度可达1.5 ng/mL。     

抗Ig融合蛋白Fc段单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究

目的：制备并鉴定抗Ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体(mAb)，建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法。方法：以hBCMA—Ig融合蛋白为抗原免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合制备抗Fc段mAb，用ELISA等方法鉴定mAb的Ig亚类、表位以及种属特异性，建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法;Western blot检测mAb对变性Ig融合蛋白的反应性。将mAb与Sepharose4B交联，制备亲和层析柱，对LAIR1-Ig融合蛋白进行纯化。结果：获得7株稳定分泌抗Fc段mAb的杂交瘤(FMUFcl-FMUFc7)。利用FMUFc4作为包被mAb，FMUFc5作为酶标记mAb，成功地建立了检测Ig融合蛋白的ELISA法，敏感度达到2μg／L；在7株mAb中，FMUFc6可用于Ig融合蛋白的western blot检测。用FMUFc 6mAb制备的亲和层析柱，可有效地纯化LAIRl—Ig融合蛋白。结论：成功地制备了抗Ig融合蛋白Fc段的mAb，建立了可用于Ig融合蛋白检测和纯化的方法，为Ig融合蛋白的应用提供了有力手段。