微量内毒素促平滑肌细胞增殖作用的实验观察

本文观察了微量内毒素对动脉壁平滑肌细胞的促增殖作用及硝苯吡啶对这一作用的影响。结果发明：在一定范围内，内毒具有浓度依赖性促平滑肌细胞增殖作用，且以培养液中浓度为１０＾－７ｇ／ｍｌ作用最强。硝苯吡啶可显著抑制内毒素的定作用。提示（１）内毒素通过促进平滑肌细胞的增殖而与动脉粥样硬化的形成密切相关；（２）内毒素的促平滑肌细胞增殖作用与细胞内外Ｃａ＾２＋的跨膜运转有关。     

辛伐他汀抗血脂代谢紊乱型大鼠血管平滑肌细胞增殖的实验观察

目的　观察辛伐他汀对血脂代谢紊乱型大鼠血脂水平的影响以及对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法　将 4 0只Wister大鼠分为空白对照组 ,模型组 ,辛伐他汀组 3组 ,喂饲高脂饲料造模 ,辛伐他汀组每天用西药辛伐他汀 (1.0ml 10 0g体重 ,1ml含药 0 .17mg) (浙江新昌京新制药有限公司 ,批号 :0 0 0 1175 )灌胃 ,以上各组共灌胃 10周 ,自由饮水 ,于实验第 77天全部处死取材。分别检测各组大鼠的总胆固醇 (TC) ,甘油三酯 (TG) ,低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C) ,高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)的含量 ,用PCNA标记法检测VSMC增殖率。结果　模型组的TC水平明显高于其他两组 (P <0 .0 1) ,LDL C的含量空白对照组和模型组差异有显著性。模型组的PC NA阳性细胞率明显高于其他两组 (P <0 .0 1)。经相关性分析显示 ,模型组VSMC增殖率与血清TG、TC含量呈正相关 ,其相关系数分别为r=0 .786 ,r=0 .6 96 ,经检验差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　西药辛伐他汀抑制内源性胆固醇的合成 ,为血脂调节剂 ,它通过降低血脂异常大鼠的TC含量 ,降低LDL C水平 ,还可能通过防止脂质的氧化 ,改善内皮功能 ,恢复内皮依赖性血管舒张反应 ,抑制VSMC的增生与迁移     

姜黄素抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖的作用

目的 研究姜黄素对气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖的作用.方法 体外培养大鼠原代ASMCs.CCK-8法检测血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)和PDGF加姜黄素处理的ASMCs A150的光密度值,以观察PDGF诱导的增殖和姜黄素的抗增殖作用.Western blotting 检测ERK1/2蛋白的表达水平.结果 与对照组(1.04±0.12)比较,CCK-8法检测给予PDGF 2 d后,10ng/mL PDGF组(1.16±0.14)和50 ng/mL PDGF组(1.30±0.15)的A150的光密度值均显著增加.P＜0.01.给予姜黄素处理12、24和36 h后,与对照组比较,11.25μmol/L组(21.57%、43.55%和65.99%)、16.88μmol/L组(39.64%、57.44%和77.80%)和25.3μmol/L组(44.50%、53.68%和92.68%)的细胞平均抑制率均增加显著,P＜0.05.姜黄素(25μmol/L)加PDGF(25 ng/mL)处理20、40和60 min后ERK1/2蛋白表达水平均显著降低.结论 姜黄素对增殖的ASMCs有抑制作用,可能与抑制了ERK1/2的信号通路活化有关.     

内皮素A受体在oxLDL促血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的：研究氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）对培养血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖中皮素受体Ａ亚型（ＥＴＲＡ）ｍＲＮＡ表达水平的影响。方法：Ｃｕ＾２＋氧化法制备ｏｘＬＤＬ,观察ｏｘＬＤＬ对大鼠主动脉ＶＳＭＣ增殖和ＥＴＲＡｍＲＮＡ表达的影响。将ＶＳＭＣ用非肽类ＥＴＲＡ拮抗剂ＢＭＳ－１８２８７４预处理生,加入１０μｇ／ｍｌ ｏｘＬＤＬ温育２４ｈ。采用非核素ＭＴＳ吸光度法测定细胞增殖,ＲＮＡ印迹法检测ＥＴＲｍ     

GSTp与GSTm抑制血管平滑肌细胞增殖作用的比较

目的:比较GSTp和GSTm对血管紧张素II诱导的血管平滑肌细胞过度增殖的抑制作用,以及对JAK/STAT3信号通路调控的影响,并探讨GSTp抑制作用的机制.方法:在VSMCs中过表达GSTp、GSTm及Y7F;MTT法检测细胞增殖,western blot检测STAT3磷酸化情况.结果:过表达GSTp和GSTm能够显著抑制血管平滑肌细胞的增殖及STAT3的磷酸化,GSTp的抑制效果较GSTm更佳,而Y7F抑制效果较差.结论:GSTp相比GSTm抑制血管平滑肌细胞增殖的效果更好,其作用机制可能是通过转移酶活性而下调ROS水平,从而抑制下游增殖相关信号通路.这证明GSTp在维持血管平滑肌细胞稳定性及动脉粥样硬化等心血管疾病中起重要的作用.     

雷公藤甲素抑制大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的作用及机制

目的 观察雷公藤甲素（T10）对小牛血清介导的平滑肌细胞（SMCs)增殖的抑制作用,及其对细胞DNA周期的影响。方法 体外主动脉SMCs培养、结晶紫染色法测定细胞数和流式细胞仪技术。结果 T10明显抑制指数增殖状态SMCs增殖（P＜0．01）,抑制作用呈剂量依赖方式,有部分可逆性。细胞DNA周期分析,T10作用后,指数增殖期SMCs G0/G1主G2／M期细胞比例均显下降（P＜0．05）,S期细胞比例却明显升高（P＜0．01）,细胞凋亡率升高非常显（P＜0．01）。T10作用后静止状态SMCs(0.5%小牛血清培养）无变化。结论 在实验采用的浓度范围内,T10对小牛血清刺激的SMCs指数增殖有明显抑制,其机制可能与T10促进G1期SMCs进入并阻滞于S期,发生凋亡有关。     

灯盏花素对平滑肌细胞增殖的抵制作用研究

目的：通过观察灯盏花素对体外培养的人胎儿脐动脉平滑肌细胞（Human umbilical artery smooth muscle cells）增殖的影响及球囊损伤动物模型血管内膜增殖的抵制作用，以探讨灯盏花素在再狭窄及埃及粥样硬化防治中的作用。方法：MTT法观察灯盏花素对人脐动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用；血清生化指标检测评估灯盏花素组对血脂、肝、肾功能及脂质氧化水平等的影响；组织形态学观察球囊损伤后血管增殖。结果：MTT结果显示灯盏花素组细胞活性比率显著降低（P〈0.05）；血清生化指标测定结果各组间无显著性差异；组织形态学结果显示低灯盏花素组和高灯盏花素组管腔面积均显著增加（P〈0.01）,内膜面积显著减少（P〈0.01）高、低剂量组之间无显著差异（P〉0.05）。结论：灯盏花素能抑制培养的人脐动脉平滑肌细胞的增殖；灯盏花素对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖有一定的抑制作用。     

普鲁托品对缺氧诱导的兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的作用

目的 观察缺氧对培养的兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响，以卡托普利为对照探讨普鲁托品平滑肌细胞增殖的作用。方法 采用析因实验设计，研究普鲁托品和卡托普利在常氧或缺氧条件下对培养兔平滑肌细胞数量、[^3H]-TDR、MTT的作用。结果 缺氧明显增加平滑肌细胞的数量，促进DNA的合成及细胞超微结构改变；1μmol／L、10μmol／L、10μmol／L普鲁托品均能逆转缺氧所致的细胞数量、MTT、[^3H]-TDR的变化，且随浓度的增加。此抑制作用愈显著。结论 缺氧本身可诱导平滑肌细胞增殖，普鲁托品抑制缺氧诱导的平滑肌细胞增殖，可望成为临床抗动脉粥样硬化或PTCA后再狭窄新的有效药物。     

姜黄素抑制气道重塑小鼠平滑肌细胞增殖的作用

目的探讨姜黄素对气道重塑小鼠气道平滑肌细胞增殖的作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、姜黄素小剂量组、姜黄素中剂量组和姜黄素高剂量组。以腹腔注射卵白蛋白致敏和雾化激发建立慢性哮喘小鼠气道重塑模型。姜黄素组在每次雾化前30 min给予姜黄素干预,其他组给予生理盐水。观察小鼠激发时的症状。检测气道反应性。计数支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞占白细胞总数的百分比。检测血清特异性IgE的含量。免疫组织化学鉴定气道平滑肌,图像分析软件IPP测支气管壁厚度、平滑肌层厚度、平滑肌细胞数以及胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ER K)在气道平滑肌细胞中的灰度值。结果与对照组相比,模型小鼠激发早期出现烦躁不安、呼吸急促和腹肌痉挛等阳性反应。姜黄素干预组症状不明显,出现症状较晚,且很快缓解。姜黄素干预组的气道反应性低于气道重塑模型组(P0.05)。姜黄素干预组的支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞占白细胞总数的百分比低于模型组(P0.05)。姜黄素干预组的血清特异性IgE低于模型组(P0.05)。姜黄素干预组的支气管壁厚度、支气管平滑肌层厚度及支气管平滑肌细胞数量均低于模型组(P0.05)。结论姜黄素可以抑制哮喘小鼠气道重塑模型中气道平滑肌的增殖,其机制与姜黄素抑制ER K信号通路和减少嗜酸性粒细胞在肺组织中的浸润相关。     

球囊导管损伤后早期动脉平滑肌细胞的增殖

目的：研究动脉硬化早期中膜与内膜平滑肌细胞的增殖。方法：球囊导管损伤大鼠的颈总动脉后在电镜和光镜下观察其形态和生化指标变化。结果：术后24h 5-溴脱氧尿嘧啶尿苷阳性平滑肌细胞出现,阳性细胞率分别于术后第2,5d出现高峰。术后第2,3d迁移细胞的出现率最高。术后第3d,88.8%迁移细胞增殖细胞核抗原阳性。透射电子显微镜下,术后第3d中膜平滑肌细胞特别是内层的为合成型,并且与细胞外基质连接稀疏,基底膜、胶原纤维和弹性纤维被消失。结论：动脉损伤后,中膜平滑肌细胞呈高增殖性,由收缩型转变为合成型,与细胞外基质的结合性降低,中膜弹性纤维、胶原纤维被消化,增生活跃的细胞向内膜的迁移性增高。迁移至内膜的平滑肌细胞呈高增殖性。     

溶血性磷脂酰胆碱对培养的小牛胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

为探讨溶血性磷脂酰胆碱（Lysophosphatidylcholine,LysoPC）对培养的小牛胸主动脉平滑肌细胞增殖的作用,采用原代培养的小牛胸主动脉平滑肌细胞,用细胞直接计数法、MTT比色法、流式细胞术,观察LysoPC对平滑肌细胞增殖的影响。结果:与对照组相比,LysoPC在浓度小于（或等于）50μmol/L时呈剂量依赖性刺激平滑肌细胞增殖。结论:LysoPC可显著地诱导小牛胸主动脉平滑肌细胞的增殖。提示LysoPC在动脉粥样硬化的发生中起重要作用。     

雷帕霉素对血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

 【目的】观察雷帕霉素（rapamycin）对体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（SMC）增殖的作用。【方法】组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞，取对数生长期细胞（第6-10代）用作实验，MTr法检测不同浓度雷帕霉素对平滑肌细胞增殖的效果，并用RT-PCR法检测其对平滑肌细胞增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）mRNA表达情况的影响。【结果】①MTT法检测显示雷帕霉素呈剂量依赖性抑制体外培养的大鼠平滑肌细胞增殖，各组吸光值似）分别为：对照组0．902±0．106；0．1ng／mL组0．873±0．079；1ng／mL组0．797±0．046；10ng／mL组0．692±0．061；100ng／mL组0．624±0．075。方差分析差异有显著性。F=28．85，P〈0．001；两两比较1ng／mL以上浓度组与对照组间差异均有显著性，不同浓度间差异显著。0．1ng/mL组与对照组相比差异无显著性。②RT-PCR显示雷帕霉素以浓度依赖模式抑制大鼠平滑肌细胞PCNA-mRNA合成。各组校正后光密度值分别为：对照组219．35±7．20；0．1ng／mL组212．39±6．56；1ng/mL组113．15±10．09；10ng／mL组97．17±12．25；100ng／mL组84．38±8．66。方差分析F=195．49，P〈0．001。两两比较与MTT检测相同。【结论】雷帕霉素呈剂量依赖性显著抑制大鼠平滑肌细胞的增殖，1ng／mL时即可明显起效。雷帕霉素有望成为治疗内支架术后再狭窄的理想药物之一。     

天麻注射液对主动脉平滑肌细胞增殖的影响

在家兔主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）离体培养基础上，应用细胞计数、３Ｈ－ＴｄＲ掺入及测定培养液中前列环素（ＰＧＩ２）产物含量的方法，探讨天麻注射液及其有效成分天麻素对ＶＳＭＣ增殖的影响及作用机理。结果表明：天麻注射液能明显抑制ＶＳＭＣ数目的增长和细胞对３Ｈ－ＴｄＲ的摄取，并可增加ＰＧＩ２水解产物６－Ｋ－ＰＧＦ１α的释放，但天麻素却未发现上述抑制ＶＳＭＣ增殖作用，提示天麻注射液的抗ＶＳＭＣ增殖作用与天麻素无关，而ＰＧＩ２产物含量增加可能是其机理之一。     

脱氢表雄酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨脱氢表雄酮对大鼠血管平滑肌细胞活性及细胞周期的影响。方法培养大鼠胸大动脉血管平滑肌细胞系,血小板源性生长因子(PDGF)刺激细胞增殖,采用CCK-8方法观察不同浓度脱氢表雄酮对血管平滑肌细胞活性的影响,用流式细胞分析法检测细胞周期分布。结果1.0、2.5、5.0μg/LPDGF增强大鼠血管平滑肌细胞活性,0.1、1.0、10、100nM脱氢表雄酮抑制细胞活性,两者的作用随浓度增加而增强;脱氢表雄酮可抑制PDGF的作用。脱氢表雄酮的作用增加G1期的细胞数量。结论脱氢表雄酮通过抑制细胞周期的进展,而减少血管平滑肌细胞的增殖。     

Dichloroacetate与肺动脉平滑肌细胞增殖及凋亡关系的研究

目的探讨Dichloroacetate（DCA）对低氧导致的肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖和凋亡的影响及其机制。方法原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞并传代纯化，实验用第3～8代细胞，实验共分3组：①对照组：不加特殊试剂，不作低氧处理；②低氧组：低氧处理24 h，不加特殊试剂；③低氧＋DCA组：低氧处理24 h，在进行低氧处理之前加入终浓度为0.1 mol/L的DCA。每组各6孔细胞。用免疫组化的方法检测并比较3组细胞的增殖和凋亡情况。结果低氧组增殖细胞核抗原（PCNA）的平均光度值是对照组的2.7倍，而低氧＋DCA组仅是对照组的1.7倍，Caspase-3在低氧组的表达最低，是对照组的1/4，低氧＋DCA组Caspase-3表达较对照组减低，但较低氧组明显增加，是低氧组的2倍。TUNEL法同样提示凋亡在低氧组最低，对照组最高，低氧＋DCA组居中。结论DCA可抑制PASMC增殖并促进其凋亡，可能对阻止肺动脉高压血管重构起一定作用。     

环孢霉素A对静态和刺激状态血管平滑肌细胞增殖和胶原Ⅰ的作用

目的建立人胎盘脐带血管内皮细胞(ECs)、平滑肌细胞(SMCs)模型,研究ECs调节的细胞培养液对SMCs增殖和胶原Ⅰ产物的影响、环孢霉素A(CyA)对未受刺激的SMCs增殖和胶原Ⅰ产物的作用、CyA对在ECs调节的细胞培养液刺激下SMCs增殖和胶原Ⅰ产物的作用。方法参照Valerie Marin等的方法,从人胎盘脐带静脉培养ECs;参照Nicole Endlich等的方法,从人脐带动脉培养SMCs;用无血浆DMEM细胞培养液制备含或不含CyA(0、50、100、300、5001、000 ng/ml)的ECs调节的细胞培养液;用细胞与3H-胸腺嘧啶结合闪烁记数法测定SM-Cs的增殖;用固相载体酶联免疫法测定SMCs释放到培养液中的可溶性胶原Ⅰ浓度。结果以对照组为基数比较,ECs调节的培养液(无CyA)使SMCs增殖增加到(170.6±13.7)%(P<0.01),胶原Ⅰ浓度增加到(128.0±7.7)%(P<0.01);CyA仅在5001、000 ng/ml时对非刺激下SMCs增殖有显著的抑制作用,而所有浓度的CyA都显著降低胶原I产物的含量,最多降低(24.7±7.6)%;无论是在ECs调节的培养液制备过程中加入CyA作用于ECs,还是在ECs调节的培养液制备后将CyA加入到细胞培养液,CyA都显著地抑制SMCs增殖及胶原I浓度。结论CyA在一定程度上能抑制人血管SMCs增殖,同时较好地抑制血管SMCs的胶原I产生。     

蛋白激酶C信号通道对牛肺动脉平滑肌细胞增生的调控作用

探讨蛋白激酶C（PKC）信号通道对体外培养的正常成年牛肺动脉平滑肌细胞（PA SMC）增生的调控作用。结果:PKC活化剂PMA（phorbol 12-myristate 13-acetate）可明显刺激PA SMC增生,PMA为10nmol/L时,3~H胸腺嘧啶掺入率由对照组的（44.9±10.6）min~（-1） /孔增加到（5904.7±607.6）min~（-1）/孔,p<0.01;预先应用PKC抑制剂可阻断PMA的刺激作用,3~H胸腺嘧啶掺入率由（5 117.1±756.2）min~(-1)/孔减少至（90.2±5.3）min~(-1)/孔;3种不同的PKC抑制方法均可部分阻断100ml/L小牛血清对PA SMC增生的刺激作用（均为 P<0.01）;在 PA SMC的全细胞溶解产物中可直接测到PKC酶活性,而经钝化处理后该酶活性消失（P<0.01 ）,与钝化处理可部分阻断血清的PA SMC增生刺激作用相吻合。提示PKC信号通道是PA SMC增生的调控机制之一。