新藤黄酸抑制人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的实验研究

目的 探讨新藤黄酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖抑制情况及其作用机制。方法 0.5～20μg／ml新藤黄酸处理MCF-7细胞72h,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测MCF 7细胞增殖抑制率;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位变化;Western blotting检测Fas、FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 0.5～20μg／ml新藤黄酸均能够抑制MCF-7细胞增殖,且增殖抑制作用呈浓度依赖,半数抑制浓度（IC₅₀）为1763 μg／ml。0.5～3.0μg／ml新藤黄酸即可诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡作用呈时间和浓度依赖。0.5μg／ml新藤黄酸处理MCF 7细胞48h后早期凋亡率为3.7％,总凋亡率为7.2％,72h早期凋亡率为6.7％,总凋亡率为13.7％;3μg／ml新藤黄酸48h后早期凋亡率为69.5％,总凋亡率为71.7％,72h早期凋亡率为76.9％,总凋亡率为81.5％。0.5、1.0、1.5 μg／ml新藤黄酸导致线粒体跨膜电位下降的细胞比例升高,促凋亡相关蛋白 FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平呈浓度依赖性上升,Fas和Bax蛋白表达水平变化不大,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平则呈浓度依赖性下降。结论 新藤黄酸通过诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡,抑制细胞增殖,其诱导凋亡的分子机制与死亡受体及线粒体凋亡途径密切相关。     

苦参碱诱导HL-60细胞株凋亡作用的实验研究

 目的　研究苦参碱（MAT）诱导HL-60细胞株凋亡的作用及其机制。方法　采用 CCK-8法检测不同浓度MAT对HL-60细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡以及线粒体跨膜电位的变化;分光光度法检测Caspase-9活性。结果　0.25～2.0 mg／ml MAT对HL-60细胞有生长抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（F＝67.83,P＜0.05）;MAT处理48 h后,细胞凋亡率明显增高,并呈剂量依赖性（t值分别为4.685、6.300、9.641、6.786,均P＜0.05）;1.0 mg／ml MAT处理后48 h内,细胞线粒体跨膜电位逐渐降低（F＝54.83,P＜0.05）,Caspase-9活性逐渐升高,呈时间依赖性（F＝72.31,P＜0.05）。结论　MAT可能通过降低细胞线粒体跨膜电位、激活Caspase-9而诱导HL-60细胞凋亡。     

三羟异黄酮诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用机制的研究

目的:探讨大豆异黄酮主要成分三羟异黄酮对体外培养人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:不同浓度三羟异黄酮处理MCF-7细胞后,采用流式细胞仪检测乳腺癌细胞凋亡、线粒体内膜损伤情况(线粒体跨膜电位的变化);其次,应用酶联免疫吸附方法检测了细胞凋亡中半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性变化,并采用蛋白印渍技术检测Bcl-2家族凋亡蛋白表达的变化.结果:三羟异黄酮处理乳腺癌MCF-7细胞后,细胞发生凋亡,并呈明显的剂量、时间效应关系,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.01);同时,细胞线粒体跨膜电位明显下降,Caspase-3酶活性增加.另外,Bcl-2家族凋亡蛋白中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL表达明显减少,而促凋亡蛋白Bax表达明显增加.结论:三羟异黄酮可诱导乳腺癌细胞凋亡,其机制可能为触发了线粒体途径凋亡,同时抑制了Bcl-2、Bcl-XL表达,增加了细胞中Bax蛋白的表达,从而达到诱导细胞凋亡的作用.     

槲皮素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的:观察槲皮素(quercetin)体外对肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,并探讨线粒体在诱导凋亡机制中的作用。方法:以10、30、60和100μmol/L槲皮素作用于体外培养的SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;Annexi-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;吖啶橙(acridine or-ange,AO)染色法观察细胞凋亡时形态变化;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)变化。结果:槲皮素体外能抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长(P<0.01),诱导细胞发生凋亡,并呈现量效和时效关系。10、30、60和100μmol/L槲皮素作用72h引起的细胞抑制率(F=343.71,P<0.01)和凋亡率(F=234.17,P<0.01)明显高于对照组。槲皮素作用48h后,AO染色图片可见细胞膜呈泡状膨出和凋亡小体等。凋亡过程中线粒体膜电位下降。结论:槲皮素体外能抑制肝癌SMMC-7721细胞生长,诱导细胞凋亡发生,线粒体膜电位下降在细胞凋亡过程中可能起到重要作用。     

过氧化物酶体增生物激活受体γ激动剂对Raji细胞的增生抑制作用及其机制

目的探讨过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPARγ）激动剂曲格列酮（TGZ）对白血病Raji细胞的增生抑制作用及其作用机制。方法以不同浓度的TGZ（0—60μmol／L）作用于体外培养的Raji细胞24、48、72h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡时的DNA梯状条带,并应用免疫印迹法（Western Blotting）检测凋亡调节蛋白Bax、bcl-2及Survivin的变化。结果20μmol／L以上的TGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量效与时效关系,药物作用72h后在琼脂糖凝胶电泳上可见明显的DNA梯状条带。Western Blotting检测结果表明,药物作用48h后凋亡抑制蛋白bcl-2及Survivin的表达水平明显降低,而促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升高。结论PPAR1激动剂TGZ能显著抑制Raji细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低bcl-2、Survivin及升高Bax的表达水平是TGZ诱导细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

松油烯-4-醇对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨松油烯-4-醇（T4O）对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。 方法 不同浓度（5~80 μmol/L）T4O体外作用于U266细胞。CCK-8法检测增殖抑制率;AO/EB染色,倒置显微镜观察细胞凋亡形态;比色法检测Caspase-3酶活性;流式细胞术检测细胞凋亡及周期;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位。结果 T4O对U266细胞有增殖抑制作用,呈时间-剂量依赖性（P<0.05）。T4O诱导U266细胞凋亡,呈剂量依赖性（P<0.05）,随药物浓度增加,Caspase-3酶活性逐渐增强（P<0.05）, 线粒体膜电位逐渐降低（P<0.05）,细胞周期被阻滞在G2期。结论 T4O对U266细胞有抑制增殖及促凋亡作用,其机制是激活细胞凋亡途径关键酶Caspase-3,使细胞线粒体膜电位降低,并且使细胞周期阻滞在G2期,进而抑制肿瘤细胞分化与增殖。     

BH3结构域拟似物BH3I-2′诱导人白血病细胞凋亡机理的探讨

目的:探讨BH3结构域拟似物BH3I-2′诱导白血病细胞发生凋亡的潜在机制,为其临床应用提供理论依据.方法:应用流式细胞仪、ELISA分析、Western Blotting印渍技术检测BH3I-2′作用后白血病细胞K562、CEM的凋亡情况、线粒体△ψm、ROS变化、NF-κB活性及凋亡相关蛋白表达.结果:BH3I-2′能显著诱导白血病细胞凋亡,引起细胞线粒体跨膜电位△ψm下降、ROS生成并同时激活核转录因子NF-κB及抗凋亡蛋白的上调.结论:BH3结构域拟似物BH3I-2′通过消耗线粒体跨膜电位,诱导细胞氧自由基ROS生成,进而造成线粒体内膜损伤,触发线粒体通路引起细胞凋亡;并且也同时诱导了NF-κB、抗凋亡蛋白激活表达,提示药物诱导肿瘤细胞凋亡的同时也启动了细胞自身的保护机制.     

BH3结构域拟似物BH3I-2''''诱导人白血病细胞凋亡机理的探讨

目的:探讨BH3结构域拟似物BH3I-2'诱导白血病细胞发生凋亡的潜在机制,为其临床应用提供理论依据。方法:应用流式细胞仪、ELISA分析、WesternBlotting印渍技术检测BH3I-2'作用后白血病细胞K562、CEM的凋亡情况、线粒体△Ψm、ROS变化、NF-κB活性及凋亡相关蛋白表达。结果:BH3I-2'能显著诱导白血病细胞凋亡,引起细胞线粒体跨膜电位△Ψm下降、ROS生成并同时激活核转录因子NF-κB及抗凋亡蛋白的上调。结论:BH3结构域拟似物BH3I-2'通过消耗线粒体跨膜电位,诱导细胞氧自由基ROS生成,进而造成线粒体内膜损伤,触发线粒体通路引起细胞凋亡;并且也同时诱导了NF-κB、抗凋亡蛋白激活表达,提示药物诱导肿瘤细胞凋亡的同时也启动了细胞自身的保护机制。     

青藤碱通过线粒体途径诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡的初步研究

目的:研究青藤碱(sinomenine,SIN)对人肺癌NCI-H460细胞株的生长抑制及诱导凋亡作用及其机制。方法:四甲基偶氮噻蓝（MTT）法检测细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡,TdT酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNNEL）方法观察细胞的凋亡,罗丹明123(Rhodamine123)染色流式细胞仪检测线粒体膜电位(ΔΨm)。结果:SIN对NCI-H460细胞株生长具有抑制作用并诱导凋亡。AnnexinV/PI双染检测细胞的凋亡可见随SIN浓度增加,细胞凋亡增加呈浓度依赖性。TUNNEL阳性的凋亡细胞呈棕黄色,细胞核片段化改变。罗丹明染色检测线粒体膜电位的结果提示在SIN作用于NCI-H460细胞48h后,线粒体膜电位下降,SIN浓度越高,膜电位下降越显著。结论:SIN具有明显的细胞毒作用,能诱导NCI-H460细胞凋亡,SIN通过线粒体途径诱导NCI-H460细胞凋亡。     

青蒿素诱导K562细胞凋亡研究

[目的]研究青蒿素对体外培养的K562细胞的凋亡诱导作用及机制。[方法]MTT法测定药物对K562细胞生长的抑制作用；透射电镜观察药物对K562细胞形态学的影响；流式细胞仪检测经药物作用后的细胞凋亡率；用Rhodamine(Rhl23)染色法检测细胞线粒体跨膜电位(Δψm)的变化。[结果]青蒿素对K562细胞生长有明显的抑制作用，细胞经药物作用48小时后的IC50为26．51μmol／L；电镜观察细胞有典型的凋亡形态特征；细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度正相关。给药后跨膜电位明显下降。[结论]青蒿素可抑制K562细胞的生长，诱导K562细胞跨膜电位下降而导致细胞凋亡。     

干扰素-α联合姜黄素对B-NHL淋巴瘤Raji细胞的增生抑制作用

Objective： To investigate the inhibitory effect of interferon-α （IFN-α） and curcumin on proliferation of Raji cells （B-NHL） and its mechanism. Methods： The morphological, changes of Raji cells were observed in culture medium with IFN-α （500, 1000, 2000, 3000 U/L） and various concentrations of curcumin （6.25, 12.5, 25 μmol/L） for different time in vitro. The inhibitory ratio was measured by MTT assay. Apoptosis was detected by flow cytometry （FCM）. The expression of caspase 6, caspase 8 and caspase 9 in Raji cells treated with IC5025 μmol/L curcumin with IFN-α was examined using Western blot. Results： IFN-α and curcumin could significantly inhibit the growth and induce apoptosis of RAji cells with synergistic effects. They could increase the expression of caspase 6, caspase 8 and caspase 9 in Raji cells in a dose- and time-dependent manner. Conclusion： The combined use of IFN-α and curcumin can inhibit the proliferation of B-NHL Raji cells apparently in vitro. Promotion of the expression of caspase 6, caspase 8, caspase 9 and induction of apoptosis might be one of the important mechanisms.     

格尔德霉素对人胃癌细胞株MGC-803增殖与凋亡的影响

目的探讨格尔德霉素(geldanamycin, GA)对人胃癌细胞株MGC-803增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测GA对MGC-803细胞的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化及细胞凋亡率;姬姆萨染色法观察细胞形态学改变;免疫细胞化学染色法及流式细胞术分析EphA2、survivin及Caspase-3蛋白的表达变化。结果GA可显著抑制MGC-803细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖关系;各浓度GA可阻滞细胞于S期,诱导细胞凋亡率的升高;姬姆萨染色可见用药组细胞出现凋亡形态学改变;各浓度GA可显著抑制EphA2、survivin蛋白的表达,同时上调Caspase-3蛋白的表达。结论GA可抑制MGC-803细胞增殖,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调EphA2、survivin的表达,进而促进Caspase-3的表达有关。     

紫花牡荆素诱导人肺癌Ａ５４９细胞凋亡及其机制的探讨

目的　探讨紫花牡荆素（ＣＡＳ）诱导人肺癌Ａ５４９细胞凋亡及其机制。方法　体外培养Ａ５４９细胞。ＭＴＴ法测定ＣＡＳ对Ａ５４９细胞的增殖抑制作用;ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ双染色分析细胞凋亡率;ＪＣ-１探针流式细胞术分析线粒体跨膜电位;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法分析线粒体细胞色素Ｃ的释放和Ｂａｘ蛋白的表达。结果　ＣＡＳ能抑制人肺癌Ａ５４９细胞增殖,呈浓度依赖性。ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法检测结果显示１０μｍｏｌ／ＬＣＡＳ作用Ａ５４９细胞１２、２４和４８ｈ后,凋亡率分别为２２.３９％、３８.６６％和６４.８２％。ＪＣ-１探针流式细胞术分析表明,ＣＡＳ能降低Ａ５４９细胞线粒体跨膜电位;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ显示ＣＡＳ能促进线粒体细胞色素Ｃ的释放和上调Ｂａｘ蛋白表达。结论　ＣＡＳ具有诱导Ａ５４９细胞凋亡的作用,其作用机制可能与降低细胞线粒体膜电位、增加细胞色素Ｃ释放和上调Ｂａｘ蛋白表达有关。     

赖氨酸去甲基化酶5C抑制剂CPI-455对ESCC细胞系 Eca-109增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的:本研究探讨赖氨酸去甲基化酶5C（lysine demethylase 5C,KDM5C）抑制剂CPI-455对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞系Eca-109增殖、凋亡的影响及其机制。方法:运用MTT法、平板克隆形成实验检测 CPI-455对Eca-109细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察CPI-455对Eca-109细胞线粒体内部超微结构的影响;流式细胞仪检测CPI-455诱导Eca-109细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;Western blot测定CPI-455对Eca-109细胞中p53、Bax、KDM5C、Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平的影响。结果:MTT法、平板克隆形成实验结果分析显示:CPI-455能够抑制Eca-109细胞的增殖,具有时间、浓度依赖性,差异有统计学意义（P均＜0.01）;电镜下观察Eca-109细胞内结构显示:CPI-455引起Eca-109细胞中的线粒体固缩,线粒体缩小,结构紧密;流式细胞术和Western blot显示:CPI-455可以上调Eca-109细胞中ROS含量、p53、Bax、Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3的蛋白表达,同时下调KDM5C蛋白表达（P＜0.05）。结论:CPI-455具有抑制Eca-109细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用,其作用机制可能与下调KDM5C蛋白的表达有关。     

XIAP反义寡核苷酸抑制胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的体外实验研究

目的观察X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系BT325的增殖及凋亡的影响。方法将XIAP全硫代反义寡核苷酸，通过脂质体途径转染BT325脑胶质瘤细胞。用CCK-8实验检测细胞杀伤率，RT-PCR和Western blot技术检测XIAP的mRNA和蛋白表达，JC—1检测细胞线粒体膜电位，流式细胞仪检测细胞凋亡率，比色法检测Caspase-3活性。结果XIAP反义寡核苷酸能够抑制BT325脑胶质瘤细胞的增殖；XIAP反义寡核苷酸使XIAP的mRNA和蛋白表达均明显下调，mRNA较对照组减少了67．8％，蛋白较对照组减少了63．3％；反义寡核苷酸使线粒体膜电位下降，诱导BT325细胞凋亡，反义寡核苷酸组的凋亡率为54．7％，错义链组为14．O％，两组比较，差异具有显著性（P〈0．05）；反义寡核苷酸使BT325细胞Caspase-3活性明显增高，与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论XIAP可能参与了脑胶质瘤细胞BT325的增殖和凋亡，下调XIAP可抑制BT325细胞增殖及促进其凋亡。     

E1A inhibits the proliferation of human cervical cancer cells (HeLa cells) by apoptosis induction through activation of HER-2/Neu/Caspase-3 pathway

OBJECTIVE: This study is to investigate the inhibitory effect of E1A gene on the cell proliferation of HeLa cells and its mechanism related to apoptosis. METHODS: MTT assay and soft agar colony formation assay were employed to justify the inhibition activity of E1A on the proliferation of HeLa cells transfected with E1A gene. Western Blot, RT-PCR and Real-time quantitative RT-PCR were used to detect the gene expression of E1A, HER-2/Neu and Caspase-3 in HeLa cells, respectively. The Caspase-3 activity was monitored by ApoAlert Caspase-3 Assay. The redistribution of cell cycles and apoptosis of HeLa cells regulated by E1A expression were evaluated by flow cytometry. RESULTS: E1A expression significantly inhibits the cell proliferation and anchorage-independent cell growth of HeLa, with the respective highest inhibition rate of 40.7% and 43.4% (P < 0.01). HER-2/Neu expression in HeLa was significantly down-regulated by E1A, while the protein expression and activity of Caspase-3 was up-regulated by E1A expression. Flow cytometry revealed that E1A transfection in HeLa increased the cell number at G1 stage and simultaneously decreased the cell number at S stage. E1A transfection induced 8.71% of HeLa cells at apoptosis status. CONCLUSIONS: E1A significantly inhibits the cell proliferation of HeLa by the apoptosis induction through HER-2/Neu/Caspase-3 pathway. These results encourage us to continue an in-vivo study and preclinical development of LPD-E1A as a novel gene therapeutic agent for human cervical cancer.     

雷帕霉素对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的 探讨不同浓度雷帕霉素作用不同时间对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞生物学行为的影响及其相关机制.方法采用0、10、50、100、250、500 nmol/L雷帕霉素分别作用Raji细胞24、48、72 h,采用CCK-8法测定Raji细胞增殖抑制率;采用流式细胞术测定Raji细胞凋亡及细胞周期;采用Caspase-3、Caspase-9活性检测试剂盒检测Raji细胞中Caspase-3、Caspase-9的酶活性;采用蛋白印迹法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Raji细胞中bcl-2、p53蛋白及其mRNA表达情况.结果作用24 h后,随着雷帕霉素浓度由0 nmol/L逐渐增加至500 nmol/L,Raji细胞增殖抑制率由(23.7±4.2)％升高至(51.7±3.7)％(P<0.01);细胞凋亡率由(4.9±1.9)％升高至(20.5±1.5)％(P<0.01);G0/G1期细胞比例由(40.8±1.4)％增加至(63.6±1.7)％(P<0.01);Caspase-3酶活性由0.16±0.05增加至1.08±0.04(P<0.01);Caspase-9酶活性由0.19±0.04增加至1.34±0.06(P<0.01);bcl-2 mRNA表达量由0.90±0.03减少至0.46±0.03,p53 mRNA表达量由2.51±0.41增加至5.85±0.21,并且bcl-2蛋白表达降低,p53蛋白表达增高.Raji细胞48 h和72 h实验结果与24 h实验结果趋势一致.结论雷帕霉素可能通过Caspase-3、Caspase-9、bcl-2、p53途径抑制Raji细胞增殖,并诱导Raji细胞凋亡.     

藤黄酸调节急性白血病细胞HL-60核孔蛋白Nup88的意义

目的 观察藤黄酸对白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响及其对核孔蛋白Nup88的调控作用,探讨二者间的相互关系.方法 采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性;Annexin-V FITC/PI双标法和Hoechst33258染色法分析细胞凋亡的改变;流式细胞术分析细胞周期和细胞内核孔蛋白Nup88的改变;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测藤黄酸对白血病细胞内Nup88基因表达的影响;共聚焦显微镜下观察Nup88蛋白的分布情况.结果 藤黄酸能明显抑制HL-60细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其12 h的IC50Molecule targetecl therapy; Response evaluation criteria为1.797 μmol/L.藤黄酸具有较强的诱导白血病细胞凋亡的效应,0.4 μmol/L藤黄酸即能诱导15.1%的HL-60细胞发生凋亡.当藤黄酸浓度达到1.6 μmol/L时,总凋亡率为79.0%,且该效应并不依赖于细胞周期阻滞作用.核孔蛋白Nup88弥漫分布于白血病细胞的核浆之间,以细胞浆和核膜为主,经藤黄酸干预后,Nup88蛋白和mRNA的表达水平明显下降,主要集中于核膜的胞浆面,偶见胞浆中表达.结论 藤黄酸能明显抑制HL-60白血病细胞的增殖,并诱导其凋亡;藤黄酸诱导的核孔蛋白Nup88的重新分布和表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.     

NF-κB抑制剂QNZ对人胶质瘤细胞生物学功能的影响

目的:探究NF-κB抑制剂QNZ对人胶质瘤细胞系U251生物学功能的影响。方法:胶质瘤U251细胞中加入QNZ处理,用CCK8法、Transwell实验、流式细胞术和Western blot检测细胞增殖、侵袭、凋亡以及Caspase-3的表达。结果:QNZ处理后绘制出生长曲线,发现胶质瘤细胞增殖受到抑制。QNZ降低U251细胞的侵袭性。不同浓度QNZ处理后,U251细胞凋亡增加,与QNZ浓度有相关性。QNZ处理后细胞周期被阻滞于G2期。结论:QNZ抑制胶质瘤细胞U251的增殖和细胞侵袭力,促进凋亡并阻滞细胞周期进展,为胶质瘤治疗提供新的思路。     

没食子酸诱导ROS积蓄介导黑色素瘤B16-F10细胞内源性凋亡及周期阻滞北大核心

目的:探究没食子酸诱导活性氧(reactive oxygen species,ROS)积蓄介导黑色素瘤B16-F10细胞凋亡及周期阻滞的作用机制。方法:以梯度浓度的没食子酸作用于黑色素瘤B16-F10细胞,采用MTT法检测没食子酸对细胞生长的影响,平板克隆技术检测细胞克隆形成率,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,ROS Assay Kit检测B16-F10细胞内ROS水平,线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞膜电位的变化,Hoechst 33258荧光染色法进行细胞形态学检测,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期阻滞水平,Western blot检测细胞内相关蛋白水平的变化。结果:结果显示,没食子酸明显抑制B16-F10细胞的生长,且具有浓度依赖性。没食子酸作用后,B16-F10细胞增殖、迁移及侵袭能力明显下降,细胞内ROS水平明显升高,线粒体膜电位明显下降;细胞数减少,细胞凋亡率增加,G_(0)/G_(1)期细胞数明显增多;细胞内凋亡相关蛋白Bax、Cytochrome C、Caspase-9以及Caspase-3表达量增加,而Bcl-2表达量减少;周期相关蛋白Chk2、p53、p21表达量明显增加,CyclinE1、CDK2表达量减少。结论:没食子酸作用于黑色素瘤B16-F10细胞后,通过诱导ROS积蓄,引起B16-F10细胞内源性凋亡及周期阻滞。