基因重组丝虫融合蛋白抗原抗丝虫的保护性免疫及用于丝虫病血清学诊断、监测的研究

目的:测定基因重组丝虫壳质酶融合蛋白抗原对动物感染丝虫的保护性免疫作用和用于丝虫病血清学诊断和监测的评价。方法:用基因重组壳质酶抗原免疫沙鼠,ELISA方法检测动物及人血清中的抗体水平,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹试验测定特异的蛋白质分子。结果:壳质酶抗原可诱导动物体内产生特异的抗丝虫抗体,在用丝虫感染期幼虫攻击感染后,这种特异的抗体可使沙鼠血循环中微丝蚴(Mf)出现的时期明显推迟,MI数显著减少,成虫数也减少。壳质酶抗原与微丝蚴可溶性抗原(Mf-xt)检测Mf阳性沙鼠、正常沙鼠、Mf血症患者、流行区非Mf血症者和非流行区正常人的血清抗体水平中壳质酶检测的结果分别为100％,0,100％,5％和O,则Mf-xt为80％,0,80％,20％和5％。证明壳质酶抗原较Mf-xt敏感性高,特异性强。结论:壳质酶融合蛋白抗原免疫沙鼠具部分的抗丝虫感染的保护性免疫作用。壳质酶抗原同样可用于丝虫病的血清学诊断和监测。     

胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的建立一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法(GICA)用于检测血清中乙型肝炎病表面抗原(HBsAg)。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒、标记乙型肝炎病毒表面抗体(抗HBs),制成免疫层析测试条。血清中HBsAg与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动。与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果GICA试条只与HBsAg有特异性反应,与乙型肝炎病毒核心抗原、e抗原等无交叉反应,检测中国药品生物制品检定所HBsAg标准品,灵敏度可达1ng/ml。用GICA与酶免疫法比较检测了395份不同血清标本中HBsAg,两法符合率为99%,结论GICA检测血清中的HBsAg特异性强、灵敏度高、简便快速、无需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

糖尿病患者血清HCMV pp65特异性IgM表达水平

目的建立检测人HCMV pp65特异性IgM的酶联捕获技术,来分析糖尿病患者HCMV感染状态。方法利用抗人IgM(μ链特异性)抗体包被固相载体,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记HCMV pp65单克隆抗体或HCMV pp65抗原,建立抗体捕获HCMV pp65特异性IgM酶联免疫技术。用该法检测727例糖尿病患者及230例健康献血员血清样本,并与HCMV-pp65抗原表达水平进行了比较。结果糖尿病患者血清HCMV pp65-IgM阳性分别为81例(11.14%,酶标抗体法)和78例(10.73%,酶标抗原法),与健康组(0.87%)相比存在统计学差异(P<0.05)。酶标抗体法与酶标抗原法在抗体捕获HCMV pp65特异性IgM检测时不存在显著性差异(P>0.05),且不受RF因子的影响。HCMV pp65-IgM与HCMV pp65蛋白表达呈现良好的相关性。结论酶联捕获HCMV pp65特异性IgM法具有简便、快速、特异和敏感等特点,可诊断HCMV活动性感染。     

胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原395例临床体会

目的:建立一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法(GICA)用于检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒、标记乙型肝炎病毒表面抗体(抗—HBs),制成免疫层析检测试条。血清中HBsAg与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果:GICA试条只与HBsAg有特异性反应,与乙型肝炎病毒核心抗原、e抗原等无交叉反应。检测中国药品生物制品检定所HBsAg标准品,灵敏度可达1ng/ml。用GICA与酶免疫法比较检测了395份不同血清标本中HBsAg,两法符合率为99.0％。结论:GICA检测血清中的HBsAg特异性强,灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

酶联免疫吸附试验检测甲型肝炎抗原

自从应用免疫电镜法(IEM)检测甲型肝炎抗原以来,其他灵敏检测技术如免疫粘附血凝试验(IAHA)、固相放射免疫试验(SPRIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等也相继建立,其中以 ELISA 检测甲型和乙型肝炎抗原和抗体较为简便、特异、灵敏。本文介绍ELISA 检测甲型肝炎抗原,并与 IEM 和 SPRIA 进行比较。     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体458例

目的为探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热(HFRS)抗体的检测方法。方法 458例HFRS病人血清同时采用免疫滴金法(CGIDA)与酶联免疫吸附法(ELLISA)对比检测特异性免疫球蛋M抗体(抗HV-IgM)、免疫荧光法(IFAT)对比检测特异性免疫球蛋G抗体(抗HV-IgG)并以20例发热待查、48例病毒性肝炎血清作对照。结果 458例HFRS病人血清,以CGIDA法检测抗HV-IgM,阳性358例,与ELLISA法作结果评价时,CGIDA灵敏度80％,特异度100％;以CGIDA法检测抗HV-IgG,阳性386例,与IFAT法作结果评价时,CGIDA灵敏度91％,特异度100％。结论 CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELLISA法及IFAT法对照,均有简便、快速、特异、灵敏之优点,检测抗HV-IgM,CGIDA法敏感性差于ELLISA法,但是无假阳性;检测抗HV-IgM,CGIDA法的灵敏度高于IFAT法。     

恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白,测定重组蛋白的免疫活性。方法采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫(海南株)GDH基因,双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清,并用琼脂双向扩散法检测效价,ELISA、Western blotting检测重组抗原的免疫活性。结果获到了重组表达的抗原蛋白,表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1∶16。结论恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。     

用酶结合免疫吸附测定法检测麻疹特异性SIgA

在麻疹流行病学研究和临床诊断中,红细胞凝集抑制抗体法(HIA)和酶结合免疫吸附测定法(ELISA)是检测血清特异抗体水平的常用方法。本文用ELISA间接法对麻疹患者血和唾液中的IgA抗体进行了试测,旨在建立麻疹IgA检测方法,以便进一步研究麻疹SIgA在流行病学和临床诊断中的意义。材料和方法一、试剂麻疹病毒抗原、正常细胞对照抗原、冻干羊抗人I只A酶结合物、马抗人IgG晦结合物,均购自中国预防医学科学院病毒所。,冻     

血吸虫病快速免疫诊断——胶体染料免疫渗滤法的初步研究

目前,血吸虫病的免疫诊断是以抗体检测为主,常用的方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、环卵沉淀试验(COPT)和间接血凝试验(IHA)。这些方法,操作较烦琐,对大规模的现场查病来说仍不十分理想。本研究根据双抗原夹心ELISA、斑点渗滤法和胶体染料标记抗原、抗体技术开发研制出一种快速、敏感、适于血吸虫病现场筛查的新方法——胶体染料免疫渗滤法(Colloidal Dye Immunofiltration Assay,以下简称CDIFA),检测患者血清中特异性抗体,用于血吸虫病现场快速筛检。     

结核抗体检测对肺结核病诊断价值的探讨

自1976年Nassau等用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结核菌抗体以来，国内外均有不少报道，以适用BCG，PPD抗原诊断为多。我院自1993年应用郑州博赛研制的结核杆菌胞膜蛋白抗原诊断试剂盒，采用ELISA法检测了肺结核病人，肺部其他疾病、肿瘤病人，健康输血员的血清抗体，现将结果报告如下：     

不同免疫检测法在乙型肝炎抗体的检测中的应用价值分析

目的探讨不同免疫检测法在乙型肝炎抗体的检测中的应用价值。方法选择2017年1月至2019年2月就诊于我院疑似乙型肝炎患者88例,均行酶联免疫法、电化学发光免疫分析法、免疫胶体金法检测乙型肝炎抗体,以病理诊断为金标准,分析3种检查方式诊断乙型肝炎抗体的敏感度、特异度与准确度。结果 88例患者经病理诊断确诊乙型肝炎患者44例(50%);电化学发光免疫分析法检测乙型肝炎抗体的敏感度、特异度与准确度均为95%,高于酶联免疫法、免疫胶体金法,差异有统计学意义(P<0.05);酶联免疫法检测乙型肝炎抗体的敏感度、特异度与准确度与免疫胶体金法相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论酶联免疫法、电化学发光免疫分析法、免疫胶体金法均可有效检测乙型肝炎抗体,但电化学发光免疫分析法检测的敏感度、特异度与准确度较高,可将其作为筛查乙型肝炎患者的常用检测方式。     

血清-酶联葡萄球菌A蛋白免疫组化法检测抗肿瘤相关抗原抗体

据文献报道证实,肿瘤病人血清中有抗肿瘤相关抗原抗体(Antibodies to Tumorrelated Antigens,简称AbT-Ag)存在。根据这一机理,在抗肿瘤人单克隆抗体的研究中,有应用细胞微点PAP法和微孔酶联免疫筛选法检测血清抗体作病例筛选及克隆株筛选,以增加获得特异性抗肿瘤人单抗机率的报道。 我们以人血清为第一抗体,恶性上皮性癌瘤的组织切片作为肿瘤抗原,用酶联葡萄球菌     

介绍一种提高IgA/EA敏感性的免疫酶标法

采用免疫酶标法检测血清中抗EB病毒壳抗原的免疫球蛋白A抗体(IgA/VCA),有助于鼻咽癌的早期发现和早期诊断,业已获得广泛的应用。虽然,抗EB病毒早期抗原的免疫球蛋白A抗体(IgA/EA)对鼻咽癌的诊断更为     

抗人AFP单克隆抗体酶联免疫检测法的建立及其应用

报道用抗人甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(McAb)标记辣根过氧化物酶(HRP),以纯化之免抗人AFP多克隆抗体包被徽孔条板,建立用于检测血清中AFP的酶联免疫法。结果表明:该方法具有特异、敏感(10ng/ml)、重复性好(变异系数<10％)和简便等优点。在204例临床血清标本的检测中,本方法与放射免疫法(RIA)的结果相符合。     

免疫酶染色法检测传染性单核细胞增多症血清 EB 病毒特异性 IgM 抗体

本文用免疫酶染色法检测217例,疑似传染性单核细胞增多症(IM)患儿血清EB 病毒特异性VCA—IgM 抗体。126例阳性、阳性率58.1%。并与正常儿血清作了比较,检测39例,2例阳性,阳性率±5.12%。提示在诊断IM 时,免疫酶染色法测定体血清EB 病毒特异性VCA—IgM 抗体、方法敏感、特异。     

HRP-SPA免疫组织细胞化学法检测抗核抗体

用辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)标记葡萄球菌A蛋白(SPA),在酶标记免疫组织细胞化学法中,代替酶标记第二抗体(马抗人IgG)。以鼠肝印片作为抗原基质,检测32例病人血清中的抗核抗体,并与免疫荧光间接法、酶标记抗体(HRP—IgG)免疫组织细胞化学法,检测抗核抗体比较,三者在敏感性和特异性方面基本相符。HRP—SPA免疫组织细胞化学法,HRP—IgG免疫组织细胞化学法,都可在光学显微镜下观察,标本可长期保存。但是HRP—SPA试剂较HRP—lgG试剂稳定,为检测抗核抗体提供了更便于推广的一种新方法。     

重症肌无力合并胸腺瘤的血清学诊断：蛋白印迹法与酶联免疫法的比较

目的：探讨Wasternblot法对重症肌无力合并胸腺瘤(MGT)患者的血清学诊断价值。方法：分别用蛋白印迹法和酶联免疫法检测33例重症肌无力患者（有瘤16例,无瘤17例）、正常人10例、其他疾病对照18例血清中的人骨骼肌柠檬酸提取物抗体（CAE-Ab）。结果：CAE抗原中3.4万,5.0万,6.0万组分与MGT患者血清结合显色率分别为93.7％（15/16例）,75.0％（12/16例）,75.0％（12/16例）,而其他组无1例结合显色。蛋白印迹法、酶联免疫法对MGT患者检出阳性率分别为16/16,12/16,假阳性率分别为0/17,1/17。结论：蛋白印迹法检测血清中CAE-Ab比酶联免疫法更敏感,特异性高。但蛋白印迹法比酶联免疫法操作复杂,费用较高。     

临床关于HSV-Ⅱ四种实验室检测方法的比较

目的评价四种实验室检测Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)感染方法的灵敏度和特异度,寻找一种实验室检测HSV-Ⅱ快而准的方法.方法采用直接免疫荧光法(DIFA)检测生殖器疱疹(GH)患者患处分泌物中的HSV-Ⅱ抗原,用酶免疫法(EIA)检测GH患者患处分泌物中的HSV-Ⅱ抗原和血清中的HSV-Ⅱ IgM抗体,并将以上检验结果与细胞培养法比较.结果 DIFA法、EIA法检测HSV-Ⅱ抗原,EIA法测HSV-Ⅱ IgM抗体,细胞培养法分离HSV-Ⅱ,4种检测方法的灵敏度分别为75.8%,83.9%,17.7%和71.8%;特异度分别为95%,97%,85%和100%.与细胞培养法相比较,DIFA法灵敏度、特异度均无显著性差异(均P＞0.05);EIA法检测HSV-Ⅱ抗原灵敏度高于细胞培养法(P＜0.05),而特异度相比较,无显著性差异(P＞0.05);EIA法检测HSV-Ⅱ IgM抗体灵敏度和特异度均显著低于细胞培养法(P＜0.01,P＜0.05).结论EIA法检测HSV-Ⅱ抗原灵敏度和特异度均较高,是目前临床实验室检测HSV-Ⅱ感染较为理想的方法.     

性病患者血清HCMV pp65特异性IgM表达水平

目的建立检测人HCMV pp65特异性lgM的酶联捕获技术,并分析性病患者HCMV感染状态。方法利用抗人IgM（μ链特异性）抗体包被固相载体,采用辣根过氧化物酶（HRP）标记HCMV pp65单克隆抗体或HCMV pp65抗原,建立抗体捕获HCMV pp65特异性IgM酶联免疫技术。用该法检测688例性病患者及450名健康献血员血清样本,并与HCMV-pp65抗原表达水平进行比较。结果性病患者血清HCMV pp65-IgM阳性分别为274例（39.8%,酶标抗体法）和262例（38.1%,酶标抗原法）,与正常对照组（0.89%）存在显著性差异（P〈0.05）。酶标抗体法与酶抗原法在抗体捕获HCMV pp65特异性IgM检测时无显著性差异（P〉0.05）,阳性符合率95.6%,且不受类风湿因子（RF）的影响。结论酶联捕获HCMVpp65特异性lgM法具有简便、快速、特异和敏感等特点,可诊断HCMV活动性感染。     

SP-B中间产物特异性抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定表面活性物质蛋白B(surfactant protein B,SP-B)加工处理过程中部分中间产物的特异性抗体。方法利用Lasergene 7.0和Macvector 11.0.4软件进行抗原表位分析,确定作为抗原的3条多肽序列,将人工合成的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,免疫兔制备抗血清,间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫前血清背景和免疫后血清效价,抗原亲和纯化抗血清,超滤浓缩抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度,间接ELISA法检测抗体效价,蛋白质印迹(Western blot)鉴定抗体特异性。结果免疫前兔血清背景均低,免疫后抗血清效价均达到要求,抗原亲和纯化后所得抗体纯度及效价高,特异性好。结论成功制备了3种SP-B中间产物特异性多克隆抗体,为深入研究SP-B的加工处理奠定了基础。