雷公藤多甙对哮喘大鼠肺组织基质金属蛋白酶9及其抑制剂1表达的影响

目的:探讨雷公藤多甙对哮喘大鼠肺组织中细胞外基质相关因子基质金属蛋白酶9及金属蛋白酶组织抑制因子1的表达的影响。方法:①实验于2004-01/09在南京医科大学实验动物中心、南京医科大学生化教研室实验室和病理教研室实验室完成。选用健康雄性Wis-tar大鼠18只。按随机数字表将大鼠分为3组:对照组、哮喘组、药物组,每组6只。②哮喘组和药物组于第1,8天每只腹腔内注射抗原混悬液1mL致敏;第15天开始雾化吸入10g/L鸡卵清蛋白激发哮喘,1次/d,20min/次,连续4周制作哮喘模型。每天激发前30min,药物组预先灌胃雷公藤多甙悬浮液(1.5mL)50mg/(kg·d)。对照组以等量生理盐水行致敏和激发,1次/d,20min/次,连续吸入4周。③采用免疫组化法观察大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1的蛋白表达,采用反转录聚合酶联反应技术测定3组大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA的表达。④多组间均数的比较采用方差分析,组间两两比较采用q检验。结果:大鼠18只均进入结果分析。①大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9和组织金属蛋白酶抑制剂1蛋白含量:哮喘组明显高于对照组(q=9.75,7.87,P<0.01);经药物干预后,明显低于哮喘组(q=5.99,3.27,P<0.05),但仍明显高于对照组(q=3.76,4.59,P<0.05)。②大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1比值:哮喘组>1,明显高于对照组(q=3.87,P<0.05);经药物干预后<1,明显低于对照组(q=3.47,P<0.05),更低于哮喘组(q=7.34,P<0.01)。③大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达水平:哮喘组明显高于对照组(q=16.71,15.37,P<0.01);经药物干预后显著下降,明显低于哮喘组(q=11.14,7.21,P<0.01),但未完全降至正常,仍明显高于对照组(q=5.57,8.17,P<0.01)。④大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA比值:哮喘组>1,明显高于对照组(q=3.45,P<0.05);经药物干预后<1,明显低于对照组(q=3.45,P<.05),更低于哮喘组(q=6.89,P<0.01)。结论:雷公藤多甙可能下调基质金属蛋白酶9的表达,调节基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1比值的平衡,干预细胞外基质重塑。     

促肝细胞生长素对肺纤维化大鼠的干预作用及其途径

目的：观察早期和晚期给予促肝细胞生长素对大鼠肺纤维化模型的干预作用，并分析其可能作用途径。 方法：实验于2005—05／09在哈尔滨医科大学附属第二医学院实验中心完成。选择雄性Wistar大鼠85只，按随机数字表法分为5组，正常对照组、博来霉素模型组、地塞米松治疗组及促肝细胞生长素早期治疗组每组各20只，促肝细胞生长素晚期治疗组5只。除正常对照组外，其他大鼠均经气管内灌注博来霉素A5（5mg／kg）生理盐水溶液0.2-0．3mL，诱导肺纤维化。地塞米松治疗组和促肝细胞生长素早期治疗组于造模后第2天开始腹腔注射地塞米松3mg／kg和促肝细胞生长素lmg／kg，1次／d。正常对照组和博来霉素模型组注射等体积生理盐水。各组分别于气管内灌注后的第3，7，14，28天经麻醉腹主动脉放血法处死5只大鼠。促肝细胞生长素晚期治疗组于造模后第14天开始腹腔注射促肝细胞生长素1mg／kg，1次／d，于造模后第28天经麻醉腹主动脉放血法处死5只大鼠。分离肺组织，用免疫组化方法检测转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶抑制剂1蛋白在大鼠肺组织的表达水平。通过苏木精-伊红染色、Masson胶原染色及测定肺组织羟脯氨酸浓度来评价治疗效果，肺泡炎及肺纤维化程度分为4级（1分：无肺泡炎或无纤维化；4分：重度肺泡炎或纤维化，受累面积〉50％）。 结果：85只大鼠全部进入结果分析，无脱失。①促肝细胞生长素早期治疗组造模后第7，28天肺组织羟脯氨酸含量均显著低于博来霉素模型组（P〈0．05～0．01）。②促肝细胞生长素早期治疗组造模后第28天肺纤维化评分显著低于博来霉素模型组（P〈0.05）。③促肝细胞生长素早期治疗组造模后第7，28天肺组织转化生长因子β1蛋白表达水平显著低于博来霉素模型组（P〈0．05）。④促肝细胞生长素早期治疗组造模后第3，7，14天基质金属蛋白酶抑制剂1蛋白表达水平均显著低于博来霉素模型组（P〈0．05）；造模后第14，28天基质金属蛋白酶9蛋白表达水平均显著高于博来霉素模型组（P〈0．05）。⑤促肝细胞生长素早期治疗组和晚期治疗组各项指标比较差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：早期和晚期应用促肝细胞生长素能减轻博来霉素诱导的大鼠肺纤维化，这种作用可能通过抑制转化生长因子β1和调节基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶抑制剂l蛋白的表达而实现。     

雷公藤对哮喘大鼠气道炎症及重塑影响的研究

目的：探讨雷公藤对哮喘大鼠气道炎症及重塑的影响。方法：40只大鼠被随机均分为阴性对照组、阳性对照组、雷公藤常规剂量组（雷Ⅰ组）和雷公藤小剂量组（雷Ⅱ组）4组。采用卵白蛋白致敏方法制备哮喘模型，采用瑞氏染色，进行支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞分类及计数，免疫组化方法检测肺组织中核转录因子-κB（NF-κB）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达。结果：与阴性对照组相比，阳性对照组BALF中的淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及嗜酸粒细胞数均明显升高；肺组织中NF-κB、MMP-9和TIMP-1的阳性细胞百分数亦明显升高，差异均有显著性（P均〈0．01）。与阳性对照组比较，两个雷公藤治疗组BALF中淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及嗜酸粒细胞数均明显降低（P均〈0．01）；且肺组织中NF-κB、MMP-9和TIMP-1的阳性细胞百分数亦明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。雷Ⅰ组与雷Ⅱ组各指标比较，差异均无显著性。结论：雷公藤能够抑制哮喘大鼠的气道炎症和纤维化，且小剂量雷公藤亦能产生上述效果。     

已酮可可碱对血管损伤后血管重构的影响

目的：观察已酮可可碱对球囊成形术后兔血管重塑和基质金属蛋白酶1及其抑制剂表达的影响。方法：①实验于2004-03／09在汕头大学第一附属医院动物实验中心和汕头大学医学院第二附属医院病理科完成。选用新西兰大白兔36只。随机将动物分为2组，对照组（n=18）造成血管球囊损伤模型，不给予其他干预措施；用药组（n=18）行造模并于术前3d开始腹腔注射已酮可可碱[42mg／（kg&;#183;d）]，持续至处死。分别于术后2，4，12周各处死6只。②随机选取对照组6只白兔另一侧未行球囊损伤侧的髂总动脉做为正常组。采用病理图像分析系统H-100进行图像分析，计算血管腔面积和外弹力膜围绕面积（平均动脉面积）。计算高倍镜视野下基质金属蛋白酶1和组织型基质金属蛋白酶1抑制剂的阳性细胞率。③计量资料差异比较采用t检验。结果：大白兔36只均进入结果分析。①球囊成形术后4和12周对照组兔髂动脉的管腔面积和外弹力膜围绕面积均明显小于正常组（P〈0．01）；而用药组兔髂动脉的管腔面积和外弹力膜围绕面积均明显大于对照组（P〈0．05）。②球囊成形术后2和4及12周用药组基质金属蛋白酶1表达与对照组相近（P〉0．05）。组织型基质金属蛋白酶1抑制剂表达明显少于对照组（P〈0．01）。结论：已酮可可碱可抑制血管损伤后血管负性重构，减轻血管的狭窄，对冠状动脉球囊损伤术后的后期管腔丧失和病理性血管重塑方面有一定作用，可能与抑制组织型基质金属蛋白酶1抑制剂表达，恢复基质金属蛋白酶1与组织型基质金属蛋白酶-1抑制剂的平衡有关。     

洛沙坦对大鼠心肌梗死后心肌间质基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2表达的干预作用

目的：观察大鼠心肌梗死后心肌间质基质金属蛋白酶2及金属蛋白酶组织抑制因子2的表达和心室重塑、心功能变化的关系及洛沙坦干预的影响。 方法：实验于2004-09／2005-08在华中科技大学协和医院心血管研究所实验室进行。①取180只SD大鼠，随机取8只为假手术组（不结扎冠状动脉），其余172只大鼠结扎冠状动脉前降支复制急性心肌梗死模型。②将造模成功的67只大鼠随机分成洛沙坦组[灌胃洛沙坦30mg／（kg&;#183;d），1次／d]和模型组（灌胃等量生理盐水），两组分为术后1，7，14，28d4个亚组。③应用反转录-聚合酶链反应法及免疫组化方法检测基质金属蛋白酶2，金属蛋白酶组织抑制因子2及Ⅰ/Ⅲ胶原的表达，超声心动图评价大鼠心功能变化和心室重塑的过程。 结果：75只大鼠进入结果分析。①基质金属蛋白酶2及金属蛋白酶组织抑制因子2蛋白表达：模型组除术后1d基质金属蛋白酶2表达与假手术组无差异外，其他各时间点表达均高于假手术组（P〈0．05）；洛沙坦组术后7，14，28d金属蛋白酶2表达均低于模型组（P〈0．05）。②基质金属蛋白酶2及金属蛋白酶组织抑制因子2mRNA表达：模型组各时间点均高于假手术组（P〈0.05），洛沙坦组术后1，14，28d基质金属蛋白酶2mRNA表达均低于模型组（P〈0．05）。③心肌Ⅰ/Ⅲ胶原比例：术后14，28d，模型组显著高于假手术组（P〈0．05），洛沙坦组低于模型组（P〈0．05）。④超声心动图显示模型组大鼠在术后7，14，28d时心功能明显低于假手术组（P〈0．01），洛沙坦组14，28d时心功能指标均较模型组明显改善（P〈0．05）。 结论：大鼠心肌梗死后心肌间质金属蛋白酶2、金属蛋白酶组织抑制因子2表达增高，非梗死区Ⅰ／Ⅲ胶原比例升高可能是心室重塑和心力衰竭发生发展的原因之一。洛沙坦可通过抑制金属蛋白酶2表达，逆转Ⅰ／Ⅲ胶原比例改善心肌梗死后心室重塑及心力衰竭。     

高氧致新生大鼠肺损伤中氧化应激与基质金属蛋白酶的关系

目的探讨氧化应激和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）／基质金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）在高氧肺损伤新生大鼠的肺组织中动态变化以及两者的相互关系。方法将足月新生大鼠在出生后,分别持续吸人90％～95％高氧或空气,于1、3、7、14、21d取肺组织进行HE染色,应用分光光度计比色法检测肺组织丙二醛（MDA）含量、免疫组化技术检测MMP-9和TIMP-1动态表达。结果病理观察高氧3d时出现炎症反应,7d时出现肺泡发育阻滞,最终纤维化;高氧3、7、14d后MDA含量高于空气组（P〈0．05,P〈0．01,P〈0．05）;MMP-9表达主要在上皮细胞胞浆,高氧3d时较空气组增强（P〈0．05）;TIMP-1表达主要在上皮细胞、内皮细胞和肺泡巨噬细胞胞浆,3d后各时间点的表达均高于空气组（P〈0．05,P〈0．05,P〈0．01,P〈0．01）;MDA含量与MMP-9、TIMP-1蛋白表达呈正相关（P〈0．05,P〈0．01）。结论高氧暴露后可能通过氧化应激上调MMP-9和TIMP-1表达引起基膜的破坏,从而导致毛细血管通透性的增加和以后呼吸道重塑的发生。     

虫草制剂对肾小球硬化大鼠细胞外基质的影响

目的：观察虫草制剂对进行性肾小球硬化大鼠细胞外基质的影响，并探讨其作用机制。 方法：实验于2002-11／2003-11在青岛大学医学院中心实验室完成。将36只健康级Wistar大鼠随机数字法分为正常对照组、模型组和冬虫夏草组，每组12只。模型组和冬虫夏草组分别行5／6肾切除，制备进行性肾小球硬化模型。正常对照组行两次手术，但不切除肾脏。冬虫夏草组在术后3 d给予四川产天然冬虫夏草制剂百令胶囊4 g／（kg&;#183;d）水提取液灌胃进行干预治疗。末次术后4，9周分别测定大鼠血生化；观察肾脏病理变化，用免疫组织化学方法检测肾组织胶原Ⅳ及纤维连接蛋白。 结果：36只大鼠纳入结果分析。①虫草制剂组能够减少尿蛋白排泄（25．03&;#177;3．36）g／L，降低血胆固醇（1．38&;#177;0．21）mmol／L和低密度脂蛋白（0．86&;#177;0．11）mmol/L,与模型组相比差异显著（P〈0．01）。②虫草制剂组术后9周时肾小球硬化指数为30．33&;#177;7．74，与模型组44．67&;#177;9．87相比下降明显，胶原Ⅳ和纤维连接蛋白表达也减少（P〈0．05-0．01）。③虫草制剂组在术后4周基质金属蛋白酶组织抑制因子-2mRNA表达减少为（1．668&;#177;0．355）A；术后9周基质金属蛋白酶-2mRNA表达增加为（0．643&;#177;0．136）A，而基质金属蛋白酶组织抑制因子-2mRNA表达减少为（1．563&;#177;0．307）A（P〈0．05-0．01）。 结论：虫草制剂能够减少5／6肾切除大鼠尿蛋白排泄量；纠正脂质代谢紊乱；调节基质金属蛋白酶／基质金属蛋白酶组织抑制因子系统之间的平衡；减轻肾小球硬化细胞外基质的积聚，延缓肾功能减退。     

慢性阻塞性肺疾病患者肺组织基质金属蛋白酶2与细胞黏附因子的表达

目的：研究慢性阻塞性肺疾病患者肺组织基质金属蛋白酶2，细胞黏附因子蛋白及mRNA在肺内的分布和表达、相互作用及与气流阻塞的关系。 方法：收集2005-03／09哈尔滨医科大学附属第一医院和附属第三医院胸外科手术肺肿瘤患者边缘肺组织（距肿瘤组织〉5cm）标本28份。根据吸烟史．有无慢性阻塞性肺疾患病史、胸部X射线片、肺功能将标本来源患者分为两组，对照组9例，无吸烟史也无慢性阻塞性肺疾病；慢性阻塞性肺疾患组19例，吸烟伴有慢性阻塞性肺疾病：通过肺功能检测两组患者第一秒用力呼气容积百分比、用力肺活量百分比、第一秒用力呼气容积／用力肺活量百分比肺功能变化指标。采用免疫组织化学方法和反转录一聚合酶链反应法检测人肺组织基质金属蛋白酶2、细胞黏附因子蛋白和mRNA的表达，并进行相关性分析。 结果：纳入患者28例，均进入结果分析。①肺功能变化指标：两组比较第一秒用力呼气容积百分比、用力肺活量百分比、FEV1／FVC／％差异显著（P〈0．01）。②免疫组织化学染色结果：基质金属蛋白酶2高表达于慢性阻塞性肺疾患组肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、血管平滑肌细胞、肺泡巨噬细胞、间质细胞（积分值为2．47&;#177;0．70）。对照组表达非常弱（积分值为1．22&;#177;0．44），两组比较差异显著（P〈0．01）；细胞黏附因子高表达于慢性阻塞性肺疾患组肺泡上皮细胞（积分值2．58&;#177;0．51），对照组表达非常弱（积分值0．67&;#177;0．87），两组比较差异显著（P〈0．01）。③反转录-聚合酶链反应结果：基质金属蛋白酶2平均吸光度值（A）半定量分析，慢性阻塞性肺疾患组高于对照组，差异显著（0．54&;#177;0．14，0．19&;#177;0．08，P〈0．01）。细胞黏附因子平均吸光度值（A）半定量分析，慢性阻塞性肺疾患组高于对照组，差异显著（0．62&;#177;0．15，0．37&;#177;0．1l，P〈0．01）。④相关分析：基质金属蛋白酶2mRNA表达及免疫组织化学表达与第一秒用力呼气容积百分比．第一秒用力呼气容积／用力肺活量百分比呈直线负相关（r=-0．577，-0．768，-0．531，-0．591，P〈0．05）；肺组织细胞黏附因子mRNA及免疫组织化学与第一秒用力呼气容积百分比、FEVl／FVC／％呈直线负相关（r=-0．584，-0．529，-0．580，-0．721，P〈0．01）。慢性阻塞性肺疾患患者肺组织基质金属蛋白酶2、细胞黏附因子mRNA呈直线正相关（r=0.535，P〈0．01），慢性阻塞性肺疾患患者肺组织基质金属蛋白酶2、细胞黏附因子免疫组织化学分析呈直线正相关（r=0．664，P〈0．01）。 结论：慢性阻塞性肺疾患患者肺组织基质金属蛋白酶2增多使气道结构细胞失去正常的支持作用，通过细胞黏附因子促进炎症细胞的趋化、移行，聚集于血管壁，释放炎性因子，迁移进入细胞外基底膜及气道上皮细胞，参与气道壁的炎症反应，引起肺组织的重构，引起及加重慢性阻塞性肺疾患患者的气流阻塞。     

温心胶囊对心力衰竭大鼠心肌基质金属蛋白酶组织抑制物1mRNA表达的干预效应

目的：观察温心胶囊对异丙肾上腺素诱导的充血性心力衰竭大鼠心肌基质金属蛋白酶组织抑制物1mRNA表达的影响，探讨基质金属蛋白酶组织抑制物1在心力衰竭发病中的作用及温心胶囊防治心力衰竭心肌重塑的作用机制。 方法：①实验分别于黑龙江中医药大学中医基础理论实验室和哈尔滨医科大学遗传教研室分子生物学实验室完成。②选用健康Wistar雄性大鼠60只。大鼠被随机分为5组，空白对照组，模型组，西药对照组，温心胶囊低、高剂量组，每组12只。③温心胶囊（由桂枝、黄芪、赤芍、茯苓等组成）悬液：每毫升悬液含生药量2g。④除空白对照组外，其余各组皮下多点注射异丙肾上腺素，以每天20，10和5mg／kg的递减剂量连续注射3d，再以每天3mg／kg剂量维持9d。于造模前1天起开始灌胃给药各组连续给药6周。⑤治疗结束后，连接MP100A—CE多导生理记录仪记录左室收缩压、左室舒张末压、室内压最大上升速率、室内压最大下降速率。计算心脏质量指数（心脏湿重／体质量）。进行苦味酸天狼猩红特殊胶原染色法检测，运用彩色病理图像系统分析。计算胶原面积与统计场总面积比值（反映Ⅰ型胶原含量）。应用反转录多聚酶链反应法检测心肌基质金属蛋白酶组织抑制物1mRNA表达。⑥数据间差异性比较采用单因素方差分析。 结果：实验过程中模型组，药物对照组，温心胶囊高、低剂量组分别死亡1，2，1，3只，相应组进入心脏质量指数比较的只数分别为11，10，11．9只。①室内压最大上升速率、室内压最大下降速率、左室收缩压：西药对照组和温心胶囊高剂量组明显高于模型组（P〈0．05-0．01）。②左室舒张末压：西药对照组和温心胶囊高剂量组明显低于模型组（P〈0．05-0．01）。③心脏质量指数：西药对照组和温心胶囊高剂量组明显低于模型组（P〈0．05-0．01）。④大鼠心肌Ⅰ型胶原含量：西药对照组，温心胶囊低、高剂量组明显低于模型组（P〈0．05-0．01），以温心胶囊高剂量组差异最明显。⑤心肌细胞基质金属蛋白酶组织抑制物1mRNA表达：模型组明显低于空白对照组（P〈0．01），仅温心胶囊高剂量上调效果最显著（P〈0．05）。 结论：温心胶囊能抑制细胞外基质重塑和心肌肥厚，明显改善心力衰竭大鼠心肌收缩和舒张功能，可能与其上调基质金属蛋白酶组织抑制物1mRNA表达有关。     

肺纤维化大鼠肺泡灌洗液中基质金属蛋白酶表达与地塞米松的干预效应

目的：探讨炎症细胞与地塞米松对基质金属蛋白酶活性的影响及基质金属蛋白酶在肺纤维化中的作用。方法：①实验于2004-04／07在解放军兰州军区总医院动物实验中心和呼吸内科实验室、血液科实验室完成。选用32只普通Wistar大鼠。随机将动物分为3组：对照组（n=8），肺纤维化组（n=12），治疗组（n=12）。②肺纤维化组和治疗组按5mg／kg经气管内灌注博莱霉素溶液0．3mL制备大鼠肺纤维化模型，对照组则给予0．3mL生理盐水，治疗组每日腹腔注射地塞米松0．4mL（5mg／kg），对照组及肺纤维化组则每日腹腔注射0.4mL生理盐水。（3）在实验第3，7，14、27天分别处死后，收集肺泡灌洗液，行细胞计数和分类；聚丙烯酰胺明胶酶谱法鉴定肺泡灌洗液中基质金属蛋白的活性变化；羟脯氨酸法测定肺组织胶原含量的变化。结果：大鼠32只均进入结果分析。①病理组织切片示肺纤维化组肺损伤明显，出现典型肺纤维化改变；治疗组肺损伤和纤维化程度明显减轻。②治疗组肺泡灌洗液粒细胞学分类在第7，14天分别比肺纤维化组降低了51．6％和62．4％（P〈0．05）；第14天治疗组肺胶原总量比肺纤维化组降低了17．8％（P〈0．05）。（3）聚丙烯酰胺明胶酶谱示基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9在两组中活性带均增强，但治疗组活性带的强度比肺纤维化组明显减弱。结论：炎症细胞能增强基质金属蛋白酶的活性，基质金属蛋白酶活性增强进一步促进了纤维化的发展，而地塞米松则抑制了基质金属蛋白酶活性增强，减轻了肺纤维化程度。     

慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶9及组织金属蛋白酶抑制剂1与固本颗粒胶囊半

背景：中医药防治慢性阻塞性肺疾痫（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）的有效性和安全性已初步得到临床认证。目的：观察COPD模型大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9及其特异性抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1表达与吲本颗粒胶囊干预的影响。方法：将50只Wistar大鼠随机等分为5组,除正常组外,其余大鼠均以烟熏及气管内滴注脂多糖的方式建立COPD模型。造模29d,泼尼松组、固本颗粒胶囊低、高剂量组分别灌谢给予醋酸泼尼松1.04mg／（kg°d）,固本颗粒胶囊O.47,0.94g／（kg°d）,1次／d,观察记录大鼠的一般状况。免疫组织化学方法检测大鼠肺组织中基质金腻蛋白酶9及组织金属蛋白酶抑制剂1的表达。结果与结论：COPD大鼠肺组织中基质金属蚩白酶9及组织金属蛋白酶抑制剂1的表达显著增强（P〈0.05）。药物干预后,COPD大鼠的一般状况明显改善,肺组织中基质金属蛋白酶9及组织金属蛋白酶抑制剂1的表达有所降低;其中,醋酸泼尼松的作用最为显著,固本颗粒高剂晕次之,低剂量最弱。说明固体颗粒胶囊能以剂量依赖的方式缓解COPD大鼠的l临床表现,改善气道重塑,纠正COPD大鼠体内蛋白酶和抗蛋白酶失衡。     

基质金属蛋白酶-1水平与不稳定性心绞痛危险度分层的关系

目的：通过检测不稳定性心绞痛患者外周血基质金属蛋白酶-1、白介素-1β、C反应蛋白水平的变化，探讨基质金属蛋白酶-1在不稳定性心绞痛患者危险度分层以及预后价值中的作用。方法：选择不稳定性心绞痛患者（UA组）32例，稳定性心绞痛患者（SA组）28例及健康对照组20例，采用酶联免疫吸附法（ELISA）分别测定各组外周血基质金属蛋白酶-1及白介素-1β的水平，采用免疫比浊法测定各组C反应蛋白的水平，分析UA组基质金属蛋白酶-1水平与心脏事件发生率及C-反应蛋白之间的相关性。结果：UA组基质金属蛋白酶-1水平、白介素-1β、C-反应蛋白水平显著高于SA组（P〈0．01）及对照组（P〈0．01）；UA组基质金属蛋白酶-1水平与C-反应蛋白之间呈正的直线相关（r=0．489，P〈0．01），UA组基质金属蛋白酶-1水平升高者发生心脏事件的几率明显高于水平低者（P〈0．05）。结论：基质金属蛋白酶-1可能是不稳定性心绞痛患者危险度分层及预后的有价值的生化指标。     

血清基质金属蛋白酶及其组织抑制物的变化及临床意义

目的探讨原发性高血压（EH）患者血清基质金属蛋白酶（MMPs）及其组织抑制物（TIMPs）检测的变化及临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验法分别测定90例未经治疗的EH患者（EH组）和60例健康体检者（对照组）血清MMP-9和TIMP-1水平。经6个月降压治疗后，检测EH患者的血清MMP-9和TIMP-1水平，并与治疗前进行对比分析。结果治疗前EH组的血清MMP-9和TIMP-1水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P〈0、01，t=8、484、8、483）。EH组患者MMP-9与TIMP-1呈显著正相关（r=0．585，P〈0、01），但其水平与收缩压和舒张压无相关性（P〉0．05）。与治疗前相比，EH组治疗后的血清MMP-9和TIMP-1水平明显增高，差异有统计学意义（P〈0．01，t=16．597、26．298）。结论EH患者MMP-9和TIMP-1降低可能反映了EH患者细胞外基质代谢异常，可将其作为EH相关血管活性异常的间接标志物。     

慢性充血性心力衰竭患者血清基质金属蛋白酶与骨桥蛋白变化的相关性研究

目的探讨慢性充血性心力衰竭（CHF）患者血清基质金属蛋白酶（MMPs）及其组织抑制因子（TIMPs）和骨桥蛋白（OPN）的变化及相关性。方法CHF患儿24例，正常对照组15例。采用ELISA法测定血清MMP-9和TIMP-1的含量,ELISA法测定血清OPN的含量，分析MMP-9／TIMP-1值与OPN和左室舒末内径（LVEDD）及射血分数（EF）的关系。结果CHF患者血清MMP-9、MMP-9／TIMP-1值和OPN含量明显增加（P均〈0．01），TIMP-1含量明显减少（P〈0．01），MMP-9／TIMP-1值与OPN含量和LVEDD呈正相关（P〈0．05），与EF呈负相关（P〈0．05）。结论CHF患者MMP-9／TIMP-1值与OPN含量呈明显的正相关；MMP-9／TIMP-1值与OPN含量的变化，可反映心衰的严重程度并加速了心功能的恶化。     

血红素氧合酶1修饰骨髓间充质干细胞多点注射梗死灶周围对梗死后心肌结构重塑的影响

背景：研究表明血红素氧合酶1的过表达有抗炎症反应的作用,将血红素氧合酶1修饰的骨髓间充质干细胞（HO-1-BMSCs）移植入梗死心脏周围是否可调节基质金属蛋白酶/组织金属蛋白酶抑制剂的比例而明显改善梗死心肌重构呢？目的：观察血红素氧合酶1修饰的骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心肌胶原的调节及心肌重塑的逆转作用。方法：利用血红素氧合酶1腺病毒转染体外培养扩增的骨髓间充质干细胞。结扎大鼠左前降支动脉制造心肌梗死模型,1h后,分别将HO-1-BMSCs、BMSCs多点注射到大鼠心脏梗死区四周,对照组注射等量磷酸盐缓冲液。结果与结论：Adv-hHO-1转染BMSCs后获稳定表达;hHO-1-mRNA仅在HO-1-BMSCs移植组表达;与对照组相比,HO-1-BMSCs移植组基质金属蛋白酶2/9的表达显著减少（P〈0.05）,Null-BMSCs组基质金属蛋白酶2/9的表达虽然减少,但差异无显著性意义（P〉0.05）;与对照组相比,细胞移植组金属蛋白酶组织抑制剂2/3的表达显著增加,尤以HO-1-BMSCs组明显（P〈0.05）;但金属蛋白酶组织抑制剂1无明显变化（P〉0.05）。金属蛋白酶组织抑制剂2/基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制剂3/基质金属蛋白酶9的比例在细胞移植的心脏中明显上升。与对照组比较,细胞移植组心室中的胶原蛋白沉积减少,心室腔内径显著缩小。结果表明血红素氧合酶1修饰的骨髓间充质干细胞移植可使基质金属蛋白酶/组织金属蛋白酶抑制剂的比例正常化,并逆转心肌细胞外基质的重构。     

基质金属蛋白酶在肥厚心肌中的表达与过氧化物酶体增殖物活化受体γ激活剂的调控效应

目的：观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ激活剂吡格列酮对体外肥厚心肌细胞基质金属蛋白酶表达水平的影响。 方法：实验于2005-04／12在军事医学科学院放射医学研究所药理毒理室完成。体外培养新生Wistar大鼠心肌细胞，以血管紧张素Ⅱ刺激建立心肌肥厚模型。将心肌细胞分为5组，即正常对照组、心肌细胞肥大模型组及吡格列酮5，10，20μmol／L组，其中肥大模型组仅诱导心肌细胞肥大，不加吡格列酮处理；吡格列酮5，10，20μmol／L组分别在加入血管紧张素Ⅱ前30min，培养液中加入不同浓度的吡格列酮（5，10，20μmol／L）处理；正常对照组不加血管紧张素Ⅱ。采用半定量反转录-聚合酶链反应法检测心肌肥厚特征性基因心钠肽、脑钠肽、基质金属蛋白酶2，9以及过氧化物酶体增殖物活化受体γ mRNA的表达水平，通过测定^3H-亮氨酸掺入量检测心肌细胞蛋白合成速率，并用软件分析心肌细胞表面积。 结果：①与正常对照组相比，心肌细胞肥大模型组心肌细胞表面积增加了49％（P〈0．01）、蛋白合成速率显著增加（P〈0．01），心钠肽、脑钠肽、基质金属蛋白酶2，9的mRNA表达也显著增加（P〈0．01），过氧化物酶体增殖物活化受体γ的mRNA表达显著下降（P〈0．01）。②与心肌细胞肥大模型组相比，吡格列酮10μmol／L组心肌细胞的表面积减小了19％；吡格列酮5，10，20μmol／L组的蛋白合成速率及心钠肽、脑钠肽的mRNA表达均显著降低（P〈0．05-0．01），并呈一定的剂量依赖性：吡格列酮5，20μmol／L组的基质金属蛋白酶2，9mRNA的表达均显著降低（P〈0．05-0．01），过氧化物酶体增殖物活化受体γ mRNA的表达显著增加（P〈0．05-0．01），并呈一定的剂量依赖性。 结论：吡格列酮能够抑制大鼠的心肌肥厚，这一作用可能与其增加过氧化物酶体增殖物活化量体γmRNA表达．下调基质金属蛋白酶表达有关。     

蛋白酶抑制剂对内毒素致大鼠肾功能损害的保护作用

目的 探讨蛋白酶抑制剂对内毒素所致大鼠肾功能损伤的作用及其可能机制。方法 健康雄性Wistar大鼠32只，随机分为对照组（n=6），内毒素（LPS）组（n=10，静脉注射LPS5mg／kg），大剂量乌司他丁（UT）干预组（n=8，腹腔注射UT100kU／kg和LPS5mg／kg），小剂量UT干预组（n=8，腹腔注射UT50kU／kg和LPS5mg／kg）。给予LPS2h后用乌拉坦麻醉大鼠，测定动脉血气、血浆内皮素-1（ET-1）、乳酸、肌酐（Cr）水平；行肾组织病理学检查；穿刺膀胱取尿，测定N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）。结果 LPS组动脉血pH值、动脉血氧分压（PaO2）、动脉血二氧化碳分压（PaO2）、剩余碱（BE）均明显低于对照组（P均〈0．01）；两个UT干预组动脉血pH值、PaO2、PaCO2和BE均明显高于LPS组（P〈0．05或P〈0．01）。LPS组血浆ET-1水平明显高于对照组（P〈0．01），两个UT干预组均明显低于LPS组（P均〈0．01），两个UT干预组之间差异无显著性（P〉0．05）。LPS组乳酸水平明显高于对照组（P〈0．001）；两个UT干预组均明显低于LPS组（P均〈0．01）；两个UT干预组间比较差异无显著性（P〉0．05）。LPS组血浆Cr及尿NAG均较对照组明显升高（P均〈0．01）；两个UT干预组血浆Cr及尿NAG水平均较LPS组明显降低（P均〈0．01），两个UT干预组间比较差异均无显著性（P均〉0．05）。肾脏病理检查可见LPS组肾小球大致正常，而肾小管上皮细胞空泡变性，部分上皮细胞崩解、脱落，管腔扩张，两个UT干预组肾小管病理变化均较LPS组减轻，不同剂量组间形态差异无显著性。结论 蛋白酶抑制剂UT能够减轻LPS所致的大鼠肾脏损伤。     

人参五味子汤预防小鼠哮喘的作用机制研究

目的 探讨中药人参五味子汤预防小鼠哮喘的作用及其机制。方法 40只小鼠被随机分为正常对照组（A）、模型组（B）、布地奈德治疗组（C）、人参五味子汤治疗组（D）、人参五味子汤和布地奈德联合治疗组（E）5组，每组8只。用卵白蛋白致敏建立哮喘小鼠模型；分别给予布地奈德、人参五味子汤对哮喘小鼠进行早期治疗4周。观察支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞学变化；采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定BALF中自细胞介素-4（IL-4）与γ-干扰素（IFN-γ）；免疫组化测定肺组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）；原位杂交结合免疫组化测定骨髓细胞表达IL-5Rα mRNA^＋的CD34^＋细胞。结果 与B组比较，C、D、E组BALF中细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸粒细胞比例及IL-4、IL-4／IFN-γ比值均显著降低，IFN-γ升高；肺组织中MMP-9、TIMP-1、MMP-9／TIMP-1比值亦显著降低（P均〈0．01）；C组和E组IFN-γ较D组升高，其余指标均较D组明显下降（P〈0．05或P〈0．01），而C组与E组间差异无统计学意义。与A组比较，B、C、D、E组小鼠骨髓CD34^＋细胞数和IL-5Rα mRNA^＋的CD34^＋细胞比例均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）；C组与B组差异无统计学意义，D组和E组较B组显著降低（P均〈0．01）。结论 人参五味子汤可通过影响小鼠骨髓CD34^＋造血细胞和IL-5Rα mRNA^＋的CD34^＋造血细胞向嗜酸粒细胞的转化和对气道炎症过程等途径，影响小鼠哮喘的病理过程。     

螺内酯对肝星状细胞表达基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响

目的研究螺内酯干预肝星状细胞（HSCs）后基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、MMP-13和其组织抑制剂1（TIMP-1）的变化。探讨螺内酯对胶原代谢影响的机制。方法应用不同浓度螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-7）mol／L干预HSCs 48小时,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测MMP-2、MMP-9、MMP-13 mRNA和TIMP-1 mRNA的表达。结果①螺内酯组的MMP-13基因表达强度上调,螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-5）mol／L浓度组MMP-13基因表达强度（0．91±0．13、0．80±0．01、0．67±0．15）均明显高于对照组（0．53±0．10）（P〈0．01）。1×10^-4mol／L浓度组MMP-13基因表达强度接近对照组的2倍。②螺内酯干预HSCs48小时后,TIMP-1基因表达减少,螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-6）mol／L浓度组（0．15±0．05、0．28±0．15、0．37±0．03）明显低于对照组（0．47±0．04）（P〈0．01或〈0．05）。③螺内酯不同浓度干预HSCs 48小时后,HSCs MMP-2、MMP-9基因表达无明显变化（P〉0．05）。结论螺内酯可抑制HSCs TIMP-1基因的表达,增加间质胶原酶MMP-13 mRNA的含量。螺内酯可能通过对MMPs及TIMP-1影响而促进胶原降解。     

基质金属蛋白酶2和9与自发性胎膜早破关系的研究

目的；探讨基质金属蛋白酶2和9在自发性胎膜早破发病机制中的作用。方法：选择确诊为胎膜早破的病例39例，同期正常妊娠50倒，择期剖宫产50例。采用免疫组织化学方法检测基质金属蛋白酶2及基质全属蛋白酶9的表达情况。结果：基质金属蛋白酶2在胎膜早破产妇胎膜中的表达明显高于正常妊娠组和剖宫产组（均P＜0．01）；基质金属蛋白酶9在择期剖宫产产妇的胎膜中未见表达，而在胎膜早破组则高表达，明显高于正常产妇（P〈0．01）。结论：基质金属蛋白酶2和9在自发性胎膜早破组的高表达导致胎膜组织细胞间基质的降解，胎膜细胞间的连接强度减弱，最终发生胎膜破裂。