鱼藤素对斑马鱼胚胎毒性的作用*

背景：以模式生物斑马鱼构建生物模型,易于开展活体实验。 目的：探讨了不同鱼藤素浓度对斑马鱼胚胎发育的影响。 方法：不同鱼藤素浓度作用于斑马鱼胚胎,分别在受精后48,72 h观测其表型变化,受精后72 h统计其胚胎孵化率。 结果与结论：鱼藤素在0.1 μmol/L浓度以下对斑马鱼胚胎发育无影响,0.2 μmol/L浓度延缓斑马鱼胚胎发育,0.3 μmol/L浓度以上抑制了斑马鱼胚胎发育,使胚胎致死。结果表明,鱼藤素高浓度使胚胎致死,低浓度延缓胚胎发育。       

同型半胱氨酸对大鼠胚胎发育的毒性作用

目的 研究同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)和同型半胱氨酸诱导基因(homocyste-induced gene，HCY-2)与心脏畸形的关系。方法大鼠妊娠8、9、10 3d尾静脉注射同型半胱氨酸，分别于第13、15、17、19d取材，用组织学和免疫组织化学ABC法观察心脏畸形和基因Hcy-2在心脏上的表达并进行图像定量分析。结果 HCY对大鼠胚胎心脏有明显致畸作用，主要为心脏偏位，心脏过小；室间隔缺损，心房缺失等；ABC法显示基因Hcy-2在给药组胚胎心脏中表达增强。结论 HCY对心脏发育是一种新的毒性因子；Hcy-2基因的过度表达与心脏畸形发生可能有一定关系。     

促红细胞生成素在斑马鱼胚胎发育中抑制肾脏细胞凋亡

目的:研究促红细胞生成素(Epo)在斑马鱼早期胚胎肾脏细胞发育中的凋亡和坏死方面起到的作用。方法:使用吗啉反义寡核苷酸技术通过胚胎注射使Epo及其受体(EpoR)的表达下调,并用real-time PCR及血红蛋白染色进行基因下调的有效性验证。在胚胎受精48 h观察肾脏形态并进行TUNEL凋亡染色,使用流式细胞术分析Annexin V凋亡染色,并用Western blot进行Akt磷酸化验证。结果:Epo及EpoR基因表达下调的斑马鱼胚胎在受精48 h可见明显肾小球囊样改变,且肾小管颈部缩短消失。TUNEL及Annexin V染色结果提示受精48 h后,Epo及EpoR基因表达下调的斑马鱼胚胎中肾脏凋亡细胞增多,但EpoR基因下调的斑马鱼胚胎内主要表现为晚期凋亡细胞及坏死细胞增多。Western blot实验结果提示Epo及EpoR基因表达下调的斑马鱼胚胎较对照组Akt磷酸化减少(P0.05)。结论:促红细胞生成素可引起Akt磷酸化。促红细胞生成素通过保护肾脏细胞免于凋亡和坏死而在斑马鱼胚胎肾脏发育中发挥重要作用。     

采用全胚胎培养法研究酒精对胚胎发育的毒性影响

目的化学物质的毒性作用常因其在体内代谢而变化。为探讨酒精在代谢条件下的发育毒性，本研究应用植入后全胚胎培养技术研究了酒精对胚胎发育的影响。方法：孕９５天大鼠胚胎于体外条件下移植分离培养在含４０、１００、２０、４０ｍｇ／ｄｌ内含Ｓ９的即可离心大鼠血清培养基中连续培养４８小时，观察酒精对胚胎生长发育和器官形态分化的影响。结果：４０ｍｇ／ｄｌ＋Ｓ９组与对照组各指标无显著性差异，１００ｍｇ／ｄｌ＋Ｓ９组则导致胚胎的体长、ＤＮＡ、蛋白质含量及部分器官形态评分呈剂量相关的下降，但前脑、中脑评分并无影响。随染毒剂量增加，胚胎的绝大多数指标显著降低，胚胎致畸率和死亡率相应增高。结论：酒精在Ｓ９作用下转化为乙醛后，毒性作用的靶器官发生改变，表现为肢芽、心脏等器官发育异常为主，代谢产物乙醛也有一定的致畸作用。     

斑马鱼胚胎发育过程成纤维细胞生长因子受体基因时序性表达

目的探讨斑马鱼胚胎发育过程成纤维细胞生长因子(FGF)受体基因时序性表达规律。方法分别提取发育至4、6、10、12、18、24、48及72hpf斑马鱼胚胎总RNA并反转录为cDNA,用实时定量PCR方法检测FGF受体基因(fgfrs)mRNA的相对表达量。结果斑马鱼胚胎发育过程fgfrs mRNA动态表达水平有明显峰谷变化(P0.01),胚胎fgfrs开始表达阶段依次为fgfr1a与fgfr1b(囊胚期)、fgfr4(原肠胚初期)、fgfr2(原肠胚期)及fgfr3(原肠胚后期),其表达高峰期分别在原肠胚期、原肠胚后期、体节期及胚胎发育中后期。旁系同源基因fgfr1a与fgfr1b动态表达趋势相似(r=0.830,P0.05)。fgfr1a与fgfr3、fgfr1b与fgfr4、fgfr2与fgfr3 mRNA表达量之间相关分析也有意义(r值分别为-0.726,0.821及0.772,P0.05)。结论斑马鱼胚胎发育过程fgfrs时序性表达有一定规律性,fgfr1、fgfr4主要参与胚胎早期发育调控,fgfr2、fgfr3主要参与胚胎中、后期发育调控。fgfr1a与fgfr1b共表达使其调控作用具有冗余能力。fgfr1和fgfr3之间在表达上可能存在相互制约关系。     

胚胎期铅暴露对斑马鱼胚胎及幼鱼NMDA受体mRNA表达的影响

目的:了解胚胎期铅暴露对斑马鱼胚胎及幼鱼N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体mRNA表达的影响。方法:野生型AB品系斑马鱼胚胎醋酸铅暴露浓度分别为0、0.1、0.5、2.5和12.5 μmol/L,提取各组受精后24、48、72、96和120 h(hpf)斑马鱼胚胎或幼鱼总RNA,实时定量PCR检测NMDA受体亚基NR1.1、NR1.2和NR2B的mRNA表达量。结果:(1)对照组NR1.1和NR1.2及NR2B表达量在胚胎发育过程中逐渐升高,在孵化期(72 hpf)表达量增加明显,在幼鱼早期(96 hpf)时达到高峰(与24 hpf时比较, P<0.01),在120 hpf时仍处于较高水平。(2)随着铅暴露浓度增高,NR1.1表达量增加并有高峰前移的趋势,2.5 μmol/L和12.5 μmol/L铅暴露组NR1.1表达高峰期在72 hpf,并且显著高于对照组(P<0.05);铅暴露组NR1.2和NR2B动态表达也呈类似规律,但NR1.2表达高峰期呈平台化趋势,横跨72 hpf至120 hpf阶段,NR2B表达高峰期出现在72 hpf和120 hpf阶段。(3)NR1.1、NR1.2及NR2B mRNA表达量之间Pearson相关系数值分别为r_NR1.1-1.2 =0.681、r_NR1.1-2B=0.637和r_NR1.2-2B =0.514,均有统计学意义(P<0.01)。结论:在斑马鱼胚胎发育过程NR1.1、NR1.2及NR2B mRNA表达水平逐渐升高,在幼鱼早期达到高峰;胚胎和幼鱼阶段NR1.1、NR1.2及NR2B之间mRNA表达水平存在关联;铅有上调NR1.1、NR1.2和NR2B mRNA表达作用并使表达峰期前移,改变了正常的NMDA受体表达规律。     

基因芯片分析鱼藤素对斑马鱼胚胎发育的影响

背景：鱼藤素具有延缓斑马鱼胚胎发育的作用,但其具体作用机制尚未明确。 目的：分析鱼藤素处理斑马鱼胚胎的基因与信号传导通路表达差异。 方法：斑马鱼胚胎来自于根据Zebrafish book中描述的方法养的殖斑马鱼。用0.6 μmol/L鱼藤素处理2-细胞期斑马鱼胚胎,以二甲基亚砜孵化液处理2-细胞期斑马鱼胚胎为对照。4 hpf 时期提取二甲基亚砜组及鱼藤素组总RNA,利用基因芯片技术检测鱼藤素处理斑马鱼胚胎后基因的差异表达,采用实时荧光定量PCR验证基因芯片结果,结合聚类分析及通路分析来探索鱼藤素的作用机制。 结果与结论：芯片结果显示,鱼藤素处理斑马鱼胚胎后差异表达上调3倍以上的基因407个,下调的461个。PCR 验证结果与芯片结果相符。经KEGG 通路分析,涉及14条通路。鱼藤素可能通过干扰细胞的代谢生长及影响其分化起作用。     

二甲苯对妊娠小鼠及胚胎发育的毒性作用

目的探讨二甲苯对妊娠小鼠及胚胎发育的影响.方法对妊娠初期的雌性小鼠采用静式吸入染毒法进行二甲苯染毒,观察胎鼠体重变化;原子吸收分光光度测定法（atomic absorption spectroscopy,AAS）检测妊娠母鼠血清Fe^2＋、Mg^2＋含量;单细胞凝胶电泳法（single cell gel electrophoresis,SCGE）检测妊娠母鼠外周血有核细胞DNA损伤程度.结果染毒各组妊娠母鼠血清Fe^2＋、Mg^2＋含量下降（P＜0.01,P＜0.05）,并具有统计学意义;染毒组妊娠母鼠外周血有核细胞发生DNA断裂并形成彗尾图像;染毒各组胎鼠体重较正常组相比均显著下降,且存在显著性差异（P＜0.05）;部分胎鼠表现为胚胎被吸收、脑膜脑膨出、椎骨发育不全等.结论二甲苯可造成妊娠母鼠血清Fe^2＋、Mg^2＋含量下降、外周血有核细胞DNA损伤并致使流产发生;二甲苯引起胎鼠体重下降,并影响生长发育.     

桉叶油对大鼠胚胎发育的影响

目的 探讨桉叶油对SD大鼠胚胎发育的影响。 方法 取SD孕鼠25只,随机分成3个实验组（桉叶油高、中、低剂量）、溶剂对照组（花生油）和阳性对照组（环磷酰胺）,每组5只。实验组和溶剂对照组分别在大鼠妊娠第10天用300、200、100mg/kg 的桉叶油和花生油2ml/只灌胃,每天1次,连续5d。阳性对照组于孕第13天腹腔注射环磷酰胺1次（12.5mg/kg）。各组孕鼠于孕19d处死取胚胎,记录孕鼠的体重、子宫重、卵巢重和胎盘重;统计胚胎植入的总数、吸收胎数、活胎数和死胎数;观察胚胎外形,并测量胎鼠体重、身长和尾长。 结果 桉叶油灌胃SD孕鼠后,孕鼠的体重、子宫重、卵巢重及胎盘重与溶剂对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。胚胎植入总数、吸收胎数、活胎数及死胎数与溶剂对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。桉叶油各组活胎鼠平均体重、身长及尾长均较溶剂组高,但只有高剂量桉叶油组胎鼠平均体重（2.318±0.606）与溶剂组（1.462±0.397）比较有明显差异（P<0.05）,其余指标与溶剂组比较无明显差异（P＞0.05）。阳性对照组胎鼠平均体重、尾长明显低于溶剂组,且有差异（P<0.05）。阳性对照组胎鼠平均身长低于溶剂组,但统计学分析无差异（P＞0.05）。 结论 本实验条件下,桉叶油对SD孕鼠胚胎无毒性,环磷酰胺对大鼠胚胎有毒性。     

菘蓝对小鼠胚胎发育的保护作用

目的 :研究菘蓝叶氯仿提取物对环磷酰胺 (CP)引起的胚胎发育障碍的保护作用。方法 :采用小鼠胚胎致畸试验 ,观察了受孕母鼠的体重变化 ,活胎率 ,死胎率 ,吸收胎率 ,以及胎鼠的身长、尾长、体重等指标。并用骨骼染色法观察胎鼠有无骨骼畸形。结果 :菘蓝叶氯仿提取物本身对胚胎发育无毒性 ,而对CP引起的胚胎发育障碍有一定的保护性抑制作用。CP +菘蓝叶提取物 1 0 0mg·kg- 1·w- 1剂量组与阳性对照组相比可显著增加胎鼠的活胎率 (增加 5 9.60 % )、降低吸收胎率 (降低 86.91 % )、及胎鼠畸形率的发生 ,也可明显增加胎鼠的身长、尾长和体重等指标。结论 :中药菘蓝具有保护小鼠胚胎发育的作用。     

Studying rod photoreceptor development in zebrafish

The zebrafish has rapidly become a favored model vertebrate organism, well suited for studies of developmental processes using large-scale genetic screens. In particular, zebrafish morphological and behavioral genetic screens have led to the identification of genes important for development of the retinal photoreceptors. This may help clarify the genetic mechanisms underlying human photoreceptor development and dysfunction in retinal diseases. In this review, we present the advantages of zebrafish as a vertebrate model organism, summarize retinal and photoreceptor cell development in zebrafish, with emphasis on the rod photoreceptors, and describe zebrafish visual behaviors that can be used for genetic screens. We then describe some of the photoreceptor cell mutants that have been isolated in morphological and behavioral screens and discuss the limitations of current screening methods for uncovering mutations that specifically affect rod function. Finally, we present some alternative strategies to target the rod developmental pathway in zebrafish.     

A systematic in-vivo toxicity evaluation of nanophosphor particles via zebrafish models

Lanthanide ion-doped nanophosphors are an emerging group of nanomaterials with excellent optical properties, and have been suggested as alternatives to quantum dots. In this letter, we determine the in-vitro and in-vivo toxicity of β-NaYF₄:Ce,Tb nanophosphors using Capan-1 cells and embryonic zebrafish, respectively. In particular, we are the first to report on the in-vivo toxicity of β-phase nanophosphors and examine phenotypic developmental abnormalities (growth retardation, heart deformity, and bent tail), apoptotic cell death, and changes in heart function due to the nanophosphors. This study suggests the use of β-NaYF₄:Ce,Tb nanophosphors as alternatives for QDs in a wide variety of biomedical imaging applications.     

人类早期胚胎体外发育的分子基础

人类早期胚胎的发育过程是一个复杂的过程,不同的发育阶段的营养需求及代谢类型是在不断变化,并且基因表达也有所转变。胚胎在由母型调节向合子型调节转变的过渡期间细胞水平和分子水平上都发生了一系列复杂的变化,调节着胚胎的发育进程。     

斑马鱼胚胎发育过程中miR-9、miR-219及Dicer基因的时序性表达

目的探讨斑马鱼胚胎发育过程中miR-9、miR-219及Dicer基因时序性表达规律。方法取正常发育至受精后4、8、12、16、20、24、36、48和72 h(hpf)斑马鱼胚胎各约40枚,用Trizol法分别提取总RNA,茎环法反转录为c DNA,用Real-time PCR检测胚胎miR-9、miR-219及Dicer表达量。结果 miR-9、miR-219及Dicer表达水平在胚胎发育过程中呈现峰谷变化,不同发育阶段之间总的差异有统计学意义(P0.05)。与胚胎发育全程的基因平均表达水平相比,miR-9在8 hpf之前表达量较低(P0.05),36 hpf后表达量持续增高,48 hpf和72 hpf时表达量显著高于平均水平(P0.01)。miR-219在8 hpf之前表达量也处于较低水平(P0.05),20 hpf后迅速增高,24hpf时达到峰值,并持续到48 hpf(P0.01)。Dicer在胚胎早期(4 hpf)就有明显表达(P0.05),随后表达水平迅速下降,16 hpf时达到低点(P0.05),然后逐渐回升,直至胚胎末期。结论斑马鱼胚胎发育过程miR-9、miR-219及Dicer时序性表达有一定规律,miR-9主要在胚胎后期表达,miR-219主要在胚胎中期表达,Dicer主要在胚胎早期表达,其次在胚胎后期,提示miR-9、miR-219及Dicer参与胚胎发育调控过程。     

初乳铅含量对婴儿早期神经行为发育的影响

目的探讨初乳铅对婴儿早期神经行为发育的影响。方法检测初乳铅水平,做t检验分析初乳铅对新生儿以及3月龄婴儿神经行为发育的影响,并对初乳铅水平与3月龄婴儿神经行为发育得分做相关分析。结果初乳高、低铅组新生儿以及3月龄婴儿神经行为得分差异均有显著性,初乳铅水平与3月龄婴儿神经行为发育得分有负相关关系。结论初乳铅水平与婴儿的早期发育有关,铅可通过乳汁造成婴儿的铅接触,对婴儿早期神经行为发育产生不良影响。     

Anxiolytic effects of nicotine in zebrafish

Anxiolytic effects of nicotine have been documented in studies with rodents and humans. Understanding the neural basis of nicotine-induced anxiolysis can help both with developing better aids for smoking cessation as well as with the potential development of novel nicotinic ligands for treating anxiety. Complementary non-mammalian models may be useful for determining the molecular bases of nicotine effects on neurobehavioral function. The current project examined whether a zebrafish model of anxiety would be sensitive to nicotine. When zebrafish are placed in a novel environment, they dive to the bottom of the tank. In the wild, diving could help to escape predation. We tested the anxiolytic effect of nicotine on the novelty-elicited diving response and subsequent habituation. Zebrafish placed in a novel tank spent the majority of time at the bottom third of the tank during the first minute of a 5-min session and then show a gradual decrease in time spent at the tank bottom. Nicotine treatment at 100 mg/l for 3 min by immersion before testing caused a significant decrease in diving throughout the session, while 50 mg/l was effective during the first minute when the greatest bottom dwelling was seen in controls. Nicotine effects were reversed by the nicotinic antagonist mecamylamine given together with nicotine, but not when administered shortly before the test session after prior nicotine dosing. This implies that the effect of nicotine on diving was due to net stimulation at nicotinic receptors, an effect that is blocked by mecamylamine; and that once invoked, this effect is no longer dependent on continuing activation of nicotinic receptors. The effect of nicotine on diving did not seem to be the result of a general disorientation of the fish. The 100 mg/ml nicotine dose was shown in our earlier study to significantly improve spatial-discrimination learning in zebrafish. Nicotine-induced anxiolytic effects can be modeled in the zebrafish. This preparation will help in the investigation of the molecular bases of this effect.