抗淋巴细胞球蛋白在鼠内耳免疫损伤中的作用

目的研究抗淋巴细胞球蛋白(Antilymphocyte Globuli ALG)经内耳给药后能否改善豚鼠内耳免疫反应动物模型的免疫损伤。方法 24只清洁级健康Hartley豚鼠随机分为三组,即试验组、阳性对照组、阴性对照组(n=8),试验组、阳性对照组以钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin KLH)建立右耳免疫反应动物模型,阴性对照组右耳以PBS对照;建模后第3天试验组、阴性对照组予内耳注射兔抗鼠免疫球蛋白,阳性对照组予PBS对照。通过观察听性脑干反应(auditory brainstem response ABR)、外淋巴液抗KLH抗体,了解ALG对内耳异常免疫调节作用。结果造模后3天试验组及阳性对照组听力较阴性对照组有明显下降(p﹤0.05),ALG干预后1周,试验组听力较阳性对照组有明显改善(p﹤0.05),4周后与阴性对照组无明显差异(p﹥0.05);在KLH免疫后外淋巴抗KLH抗体升高,ALG可阻止或减轻抗KLH抗体在内耳的表达(p﹤0.05)。结论 ALG可阻止或减轻内耳异常免疫反应,对梅尼埃病等内耳病症有临床应用前景。     

用MRI体内观测钥孔嘁血蓝素中耳免疫诱导的内淋巴积水的初步探讨

目的用磁共振成像方法研究中耳免疫反应诱导的动物内淋巴积水.方法将9只豚鼠分为2组,中耳免疫组(4只)和磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered saline,PBS)对照组(5只).先用KLH加福氏完全佐剂行四肢趾蹼免疫,2周后将KLH投放至中耳进行局部免疫.另外5只豚鼠中耳放置PBS作为对照组.用gadolinium增强的磁共振成像观察内耳淋巴液的动态变化,用耳蜗电图评估听功能改变.结果在KLH中耳免疫的动物中,2只发生内淋巴积水,3只血迷路屏障通透性增加,2只听力损失大于10dB.结论磁共振成像可以显示KLH中耳免疫反应的耳蜗改变,内淋巴积水和血迷路屏障通透性的增加提示存在着一个"漏的迷路",将有可能为内耳疾病的诊断提供更加精确的依据.     

豚鼠内耳手术对脑干诱发电位测定的影响

目的 探讨豚鼠内耳手术对脑干诱发电位(ABR)测定的影响。方法 Hartley系豚鼠，18只，体重250～300g。全麻后取耳后切口行鼓泡开放，暴露耳蜗。在手术显微镜下经耳蜗微孔(直径30μm)将不同的溶液PBS、钥孔戚血蓝素(Keyhole limpet hemocyanin，KLH)、氮甲喋呤(methotrexate，MTX)及20ml的MTX(10m1)和KLH(10m1)混合制剂分别导人鼓阶。按以下程序测定ABR，即第1天(系统免疫前)，手术前5min(第14天)，手术后5min及1周或2周。结果共测定18只36耳，其中32耳手术前后听力损失为0～5dB，4耳听力损失较为严重，(手术前后测定听力损失超过45dB)，且术后1周或2周未恢复；在听力损失较轻，手术前后测定听力损失小于20dB的另外4耳中，术后1周或2周ABR恢复至正常。结论为正确评估豚鼠ABR，除外手术对ABR测定的影响，内耳开窗术或任何其他有可能损伤耳蜗功能的操作，都应于操作结束后即刻测定ABR。     

含抗内耳抗原特异性抗体的体液转移免疫致豚鼠先天性感音神经性聋的实验研究

目的：证实针对内耳组织抗原特异性抗体通过胎盘可造成子鼠先天性自身免疫性感音神经性聋。方法：同种粗制内耳抗原（CIEAgs）免疫豚鼠,造成自身免疫性感音神经性聋（ASNHL）动物模型。ELISA法测定示其血清抗体水平升高,耳蜗电图（ECochG）示其听神经复合动作电位和（或）耳蜗微音器电位阈值或伪阈升高。取其血清（含特异性抗内耳组织抗原抗体）持续转移免疫妊娠豚鼠,采用ECochG测试被动免疫妊娠母鼠和子鼠的听觉功能,再采用颞骨火棉胶切片和苏木精一伊红染色,光镜观察内耳组织形态学改变。结果：各组出现听觉损伤的动物是：采用ASNHL模型动物血清被动免疫的8只妊娠母鼠中有5只（7耳）和其所产子鼠8只中有6只（10耳）,采用非ASNHL模型动物血清免疫的妊娠豚鼠所产子鼠5只中有1只（2耳）。出现听力损失的被动免疫母鼠和子鼠内耳病理形态学改变主要为螺旋神经节细胞变性和Rosenthal管中炎性细胞（以单个核细胞为主）浸润,部分动物出现膜迷路积水。结论：同种体液转移免疫可造成自身免疫性内耳病变,子鼠产生听觉功能障碍主要是由于母鼠所产生的特异性抗内耳组织抗原抗体经胎盘到达子鼠体内所致。     

尼莫地平对内耳缺血/再灌注豚鼠耳蜗血迷路屏障通透性的影响

目的研究尼莫地平对内耳缺血/再灌注后豚鼠耳蜗血迷路屏障通透性的影响。方法随机将32只豚鼠分为4组,每组8只,分别为缺血用药组、缺血对照组、再灌注用药组、再灌注对照组。采用小脑前下动脉FeCl3诱导血栓形成制备耳蜗缺血豚鼠模型,缺血1小时后再经股静脉给予尿激酶溶解血栓制备再灌注模型,分别于缺血后早期及再灌注后静脉注射尼莫地平,各对照组以等量生理盐水代替尼莫地平注射。采用激光多普勒血流测量仪监测耳蜗血流量(cochlear bloodflow,CoBF),测量实验前后豚鼠听性脑干反应(ABR)波Ⅲ反应阈值;分别在股静脉推注伊文思蓝2小时后采用荧光定量检测其血迷路屏障通透性变化。结果豚鼠耳蜗发生缺血后早期应用尼莫地平组与缺血对照组伊文思蓝通过血迷路屏障的平均量分别为每只0.245±0.108和0.442±0.153μg,差异有统计学意义(P<0.05);耳蜗发生缺血再灌注后应用尼莫地平组与再灌注对照组,伊文思蓝通过血迷路屏障的平均量分别为每只0.963±0.261和0.620±0.148μg,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在内耳缺血早期使用尼莫地平,能减轻血迷路屏障的损伤;但在缺血再灌注后使用尼莫地平,则加重血迷路屏障的损伤,使其通透性增加。     

豚鼠自身免疫性梅尼埃病模型的主要内耳抗原分析

目的 探寻导致豚鼠自身免疫性梅尼埃病(autoimmune Meniere's disease,AIMD)的主要内耳组织抗原成分.方法 采用同种粗制内耳抗原免疫豚鼠,观察听觉功能、前庭功能及内耳组织形态学方面的变化,判断AIMD模型与非模型动物.采用免疫印迹法(Western blotting)对比分析模型动物与非模型动物血清内针对内耳组织抗原不同成分特异性免疫反应的差异,寻找只针对AIMD模型动物的特异性成分.结果 内耳组织所含抗原成分较多,免疫后酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示,AIMD模型与非AIMD模型动物均不同程度地存在针对内耳组织抗原的血清抗体水平升高.听功能检测,非AIMD模型动物听力损失不明显.Western bohting结果显示,AIMD模型动物出现针对相对分子质量为68 000、58 000、42 000及28 000蛋白质成分的反应条带,而非AIMD模型动物则未显示这些条带的特异性抗原抗体反应.结论 可能只有出现针对导致内耳自身免疫性疾病的主要抗原成分的特异性免疫反应,才会造成明显的内耳免疫病理损伤和功能障碍.相对分子质量为68 000、58 000、42 000及28 000的内耳组织抗原可能是导致豚鼠自身免疫性膜迷路积水的主要抗原成分.     

内耳对抗原的特异性免疫反应

研究证明抗原刺激内耳后可产生特异性抗体,并观察到内耳免疫病理改变及耳蜗功能改变,因此产生内耳受免疫影响的概念。作者选择雌性豚鼠,用孔血兰蛋白(KLH)及牛血     

内耳的免疫学:内耳对抗原刺激的反应

本文对内耳和宿主免疫性的关系及内耳被抗原刺激后产生的免疫反应进行了研究。作者详细介绍了有关动物实验的技术,用豚鼠作动物实验,采用锁孔(?)血青蛋白(KLH)作为抗原,通过皮内注射及外淋巴灌注使动物致敏,采取血清、外淋巴液及脑脊液作抗体滴度测定。     

地塞米松对尼莫地平致豚鼠血迷路屏障损伤的影响

目的研究地塞米松对豚鼠内耳缺血再灌注后应用尼莫地平致血迷路屏障损伤的影响。方法随机将豚鼠分为4组:地塞米松预处理再灌注应用尼莫地平组(A组)、再灌注应用尼莫地平及地塞米松组(B组)、再灌注应用尼莫地平组(C组)、再灌注对照组(D组)。采用小脑前下动脉FeCl3诱导血栓形成制备耳蜗缺血豚鼠模型,缺血1小时后再经股静脉给予尿激酶溶解血栓制备再灌注模型。实验过程中采用激光多普勒血流测量仪监测耳蜗血流量,实验前后测量豚鼠听性脑干反应Ⅲ波反应阈值。分别在股静脉推注伊文思蓝(Evaan'sBlue,EB)2小时后采用荧光定量检测其血迷路屏障通透性变化。结果耳蜗发生再灌注后应用尼莫地平组与再灌注对照组,EB通过血迷路屏障的量分别为每只(0.963±0.261)μg和(0.620±0.148)μg,t检验P<0.05,地塞米松预处理再灌注应用尼莫地平组与再灌注应用尼莫地平及地塞米松组,EB通过血迷路屏障的量分别为每只(0.619±0.212)μg和(0.859±0.228)μg。结论内耳缺血早期使用地塞米松,能减轻血迷路屏障再灌注后尼莫地平引起的急性高灌注所致继发损伤。     

内耳免疫反应中细胞凋亡及Caspase-3动态表达的研究

目的:研究内耳免疫反应过程中是否存在细胞凋亡,以及细胞凋亡是否与Caspase3信号转导有关。方法:选用雌性白色豚鼠45只,随机分为实验组29只,对照组16只,以钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)全身免疫后,实验组以相同抗原进行内耳免疫,对照组内耳注射等量的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS),分别在内耳免疫术后1、3、5、7d和14d后处死动物,于免疫前及处死前行双侧听性脑干反应(ABR)测试。取内耳免疫侧耳蜗做石蜡切片。通过DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测内耳凋亡细胞,免疫组织化学检测内耳Caspase3的表达。结果:实验组豚鼠内耳免疫前、后反应阈比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01);对照组给药前、后比较反应阈无明显变化。实验组豚鼠内耳均存在TUNEL染色阳性细胞,并且TUNEL染色阳性细胞具有凋亡细胞的典型形态学特征,而对照组仅在支持细胞、血管纹和螺旋神经节细胞中发现极少数TUNEL染色阳性细胞。Caspase3免疫组织化学染色实验组内耳从内耳免疫后5d开始出现阳性表达,而对照组表达阴性。结论:内耳免疫反应可以诱导细胞凋亡的发生;内耳免疫反应诱导细胞凋亡的发生中有Caspase3的激活。