聚酰胺-胺型树枝状聚合物介导人凝血因子Ⅷ的体外高效稳定表达

目的 应用纳米材料聚酰胺-胺型(PAMAM)树枝状聚合物／逆病毒基础的质粒载体复合体，在表达水平、持续时间和细胞毒性三方面进行血友病A基因治疗的体外研究。方法 PAMAM树枝状聚合物与含B区缺失(760aa～1639aa)人FⅧ cDNA(FⅧBD cDNA)的以逆病毒为框架的重组表达质粒载体pLNC-FⅦBD形成复合体后，转染NIH3T3细胞系，于转染后第2，5，10，15，30d留取细胞培养上清，分别采用一期法和ELISA法检测其中人FⅧ的凝血活性(FⅧ：C)和抗原含量(FⅧ：Ag)，并应用RTPCR方法检测细胞中FⅧBD cDNA的转录，以细胞生长抑制率来表示PAMAM的细胞毒性。结果 PAMAM载体介导的人FⅧ的体外表达可持续30d，24h内每ml细胞上清中10^6细胞表达FⅧ：C平均为0．929U，FⅧ：Ag平均为0．188μg，期间FⅧ表达未见降低；PAMAM的细胞生长抑制率为5．32％。结论 PAMAM能够有效介导逆病毒基础的质粒载体pLNC-FⅧBD转染靶细胞，并维持高效稳定表达，且PAMAM的细胞毒性较低。     

人凝血因子Ⅷ cDNA 体外真核表达的初步研究

目的：建立人凝血因子ⅧｃＤＮＡ体外真核高效表达的体系。方法：将人ＦⅧＢ区大部分缺失（Δａ７６０１６３９）的ＦⅧｃＤＮＡ插入ｐＣＩ真核表达载体、ｐＧＲＥ５．２／ＥＢＶ载体和逆转录病毒载体ｐＭＳＣＶ，构建了５种表达框架，在体外转染和感染了多种靶细胞。结果：ｐＣＩⅧ在ＮＩＨ３Ｔ３细胞产生了低水平表达，而ｐＧＲＥ５．２／ＥＢＶⅧ和ｐＭＳＣＶⅧ系列分别在Ｈｅｌａ细胞和Ｂｏｓｃ２３逆转录病毒包装细胞中呈较高水平的表达。Ｂｏｓｃ２３细胞培养上清感染的ＮＩＨ３Ｔ３和３２ＤＣ不能有效地产生ＦⅧ。结论：在ＦⅧ体外表达及基因治疗的方案设计中，靶细胞的选择是一重要因素。     

精子载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在转基因小鼠体内的表达

利用精子载体技术通过人工授精观察人凝血因子Ⅷ基因在转基因小鼠体内的表达，将含有人FⅧBD（B-domain deleted)cDNA的质粒pRC/RSV-hFⅧBDl转染至小鼠精子，通过人工授精使母鼠受孕，新生小鼠出生后第4周，应用PCR筛查hFⅧBDcDNA阳性转基因幼鼠，取转有人FⅧBDcDNA幼鼠的血液检测血浆中的人FⅧ抗原和抗体，分别用Northern印迹和Western印迹检测脾，肝，肺和肾组织中人FⅧBDcDNA的转录和表达。结果发现，人工授精后20只受体母鼠7只受孕，共产下11只仔鼠，存活9只，PCR筛检出3只转有人FⅧBDcDNA的阳性鼠，3只阳性鼠血浆中的人FⅧ抗原量分别为8.65ng/ml,7.84ng/ml和8.44ng/ml，人FⅧ的抗体均为阴性。Northern印迹和Western印迹检测显示3只F1代阳性幼鼠的脾，肝，肺和肾组织中均有人FⅧBDcDNA的转录和表达。结论提示，利用精子载体法可以制备转有人凝血因子Ⅷ基因的转基因小鼠，并表达人FⅧ蛋白，这为用精子载体技术生产转基因动物并将之作为生物反应器生产人凝血因子Ⅷ提供了实验依据。     

人凝血因子Ⅷ基因表达调控的研究

血友病A是一种单基因遗传病，目前尚无根治方法。基因治疗有可能最终治愈本病，但目前在血友病A的基因治疗研究中，FⅧ的表达量低，表达持续时间短，阻碍了将血友病A的基因治疗推向临床的进程。因而研究FⅧ基因表达的调控，以提高其表达水平，延长表达时间，是当前乃至今后血友病A基因治疗研究的重点。本文分别从转录前、转录以及转录后水平综述了近年来在FⅧ基因表达调控方面的研究进展。     

逆转录病毒载体介导骨髓基质细胞体外表达人凝血因子Ⅷ

目的探索骨髓基质细胞用于血友病A基因治疗的可能性.方法采用一包含了B区缺失(△760aa～1?639aa)的人凝血因子ⅧcDNA(FⅧ△BcDNA)的复制缺陷型重组逆转录病毒LNC-FⅧ△B,在低温(32?℃)和离心等改进条件下转化体外分离培养的小鼠和兔骨髓基质细胞.分别采用一期法、ELISA法和半定量PCR方法检测细胞培养上清中人FⅧ的凝血活性(FⅧC)和抗原含量(FⅧAg)以及骨髓基质细胞的基因转化效率.并对转化细胞表达的FⅧ蛋白进行Westernblot分析.结果与标准方法相比,离心和32℃转化使小鼠骨髓基质细胞的基因转染效率提高50%～80%.转化后的小鼠和兔骨髓基质细胞分泌的人FⅧAg分别为每24h(556±80)ng/106细胞和每24h(480±56)?ng/106细胞,FⅧC分别为每24?h2.42?U/106细胞和1.8U/106细胞.Westernblot分析显示,骨髓基质细胞分泌缺失B区的FⅧ蛋白(FⅧ△760～1639aa)与正常人血浆中的野生型FⅧ相似,主要以重-轻链异二聚体形式存在.结论转化后的骨髓基质细胞可以高效分泌人FⅧ,结合离心和低温对方法的改进,可望成为血友病A基因治疗研究的良好靶细胞.     

凝血因子Ⅷ cDNA的克隆及分子裁剪

凝血因子Ⅷ基因的分子克隆是制备重组因子ＦⅧ及进行甲型血友病基因治疗的基础。本研究采用基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增，ｍＲＮＡ的逆转录酶／聚合酶链反应扩增以及基因组ＤＮＡ文库的筛选等多种技术，得到了编码Ｆ Ⅷ的合部ｃＤＮＡ片段，并剪接成了可供表达的两种Ｆ ⅧｃＤＮＡ分子：一种包括Ｆ Ⅷ全部编码序列，长７８２８ｂｐ。另一种是缺失编码大部分Ｂ结构域及部分轻链Ｎ端的缺友型，长５３２３ｂｐ。     

聚酰胺-胺型树枝状聚合物介导的基因治疗

聚酰胺-胺型(polyamidoamine,PAMAM)树枝状聚合物是一种新兴起的非病毒类纳米材料载体,可有效地转染外源基因进入细胞。本文对其结构特征及转染机理作一综述。     

人凝血因子Ⅷ的细菌内毒素检查法

人凝血因子Ⅷ的细菌内毒素检查法６１００８１中国医学科学院中国协和医科大学输血研究所姚志强倪永碧陈仁清细菌内毒素检查法［１］比家兔热原实验迅速、经济、所需样品量少、操作简便，可同时进行多个样品的检测，１９８８年卫生部颁布了细菌内毒素检查法，使它在生物制...     

白细胞介素6诱导人凝血因子Ⅷ基因的体外表达

血友病A是一种单基因遗传病，基因治疗有可能根治本病，因此，近二十年来国内外在血友病A基因治疗的研究方面做了大量工作，取得了一定进展，但总的效果并不理想，焦点是凝血因子Ⅷ（FⅧ）的表达量低，表达持续时间短。所以，研究FⅧ基因表达的调控，以提高其表达水平，延长表达时间，是当前和今后血友病A基因治疗研究的重点和方向。我们观察了白细胞介素6（IL-6）在体外对人FⅧ基因表达的影响，并对其机制进行了初步探讨。     

重组狗凝血因子Ⅷ的慢病毒介导体外表达的研究

本研究的目的是制备携带狗凝血因子Ⅷ（cFⅧ）基因的慢病毒载体,探讨慢病毒载体能否介导cFⅧ在体外的有效表达。用构建携带cFⅧ基因的慢病毒载体pTK161（含PUB启动子）和pTK162（含2OH1启动子）,同时构建含绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体pTK161′（含PUB启动子）和pTK162′（含2OH1启动子）的方法,分别与包装质粒ΔNRF、包膜蛋白质粒VSV-G共转染293T包装细胞,将包装好的病毒颗粒再感染293T细胞,检测病毒滴度和培养细胞上清中cFⅧ活性。结果显示：经限制性酶切鉴定,成功构建了pTK161、pTK162、pTK161′和pTK162′正向连接载体;pTK161′和pTK162′的病毒滴度分别为1.54×10^6U/ml和2.83×106U/ml;pTK161、pTK162感染靶细胞后24小时细胞上清中即可检测到cFⅧ的表达,72小时表达量达高峰。pTK162载体cFⅧ表达活性接近正常狗血浆FⅧ活性,而且明显高于pTK161（p〈0.05）,6周后cFⅧ表达活性仍达最高值的1/4。结论：构建的自身失活慢病毒载体可携带较大片段的cFⅧ基因,并在体外可获得有效表达;本研究为慢病毒载体介导的血友病A的基因治疗研究提供实验依据。     

聚酰胺—胺型树枝状聚合物介导的基因治疗

聚酰胺－胺型(polyamidoamine,PAMAM)树枝状聚合物是一种新兴起的非病毒类纳米材料载体，可有效地转染外源基因进入细胞。本文对其结构特征及转染机理作一综述。     

人凝血因子Ⅷ体外高效表达体系的建立

目的 构建含有人凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因的慢病毒载体pXZ208-BDDhFⅧ,观察其在体外培养细胞中的表达情况.方法 用限制性内切酶酶切法获得B区缺失的人FⅧ基因(BDDhFⅧ cDNA)片段,将其克隆至慢病毒载体pXZ208的多克隆位点,构建慢病毒表达载体pXZ208-BDDhFⅧ,限制性内切酶酶切法鉴定载体的连接方向.采用三质粒共转染293T细胞制备病毒颗粒,包装后感染人肺、肾HLF细胞、张氏肝(Chang-Liver)细胞和成人骨髓基质细胞(MSC),并以pXZ171作为对照.流式细胞术(FCM)检测载体的感染效率,一期法检测细胞培养上清中FⅧ的活性,PCR检测BDDhFⅧ基因的整合.结果 成功构建了慢病毒载体pXZ208-BDDhFⅧ,包装后能有效感染多种靶细胞,感染效率分别为:HLF细胞(74.52±7.57)%、MSC(42.34±5.84)%和Chang-Live细胞(27.24±6.53)%.感染后48 h检测到HLF细胞、Chang-Liver细胞和MSC培养上清中有FⅧ的表达,FⅧ活性分别为(54.1±5.6)%、(22.5±2.9)%和(12.5±2.7)%.PCR检测到目的 基因的整合.结论 成功构建了慢病毒表达载体pXZ208-BDDhFⅧ,在体外可以有效感染多种靶细胞并表达有活性的FⅧ.     

非病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在小鼠32D细胞系中的表达

为了观察非病毒载体 pRC/RSV介导的人凝血因子Ⅷ基因在小鼠 32D细胞系中的表达 ,将B结构域缺失(△ 76 0aa - 16 39aa)的人FⅧcDNA(hFⅧBDcDNA)亚克隆至质粒载体pRC/RSV ,构建重组质粒载体 pRC/RSV hFⅧBDcDNA。经SuperFectTransfectionReagent转染小鼠 32D细胞系 ,分别采用一期法、ELISA法和RT PCR检测细胞培养上清液中人FⅧ的促凝活性 (hFⅧ∶C)和抗原含量 (hFⅧ∶Ag)以及细胞中hFⅧBDcDNA的转录。结果表明 :小鼠 32D细胞系培养上清液中的人FⅧ∶Ag最高达到了 4 5 0 .0 8毫微克 /(10 6细胞·2 4小时 ) ,hFⅧ∶C最高达到了 2 .0 1单位 /(10 6细胞·2 4小时 ) ,RT PCR可检测到 32D细胞中hFⅧBDcDNA转录的mRNA。结论 :非病毒质粒载体 pRC/RSV介导的人凝血因子Ⅷ基因能够在小鼠 32D细胞系中表达人FⅧ蛋白 ,所表达的FⅧ与正常人血浆中的野生型FⅧ具有相似的凝血活性。     

人凝血因子Ⅷ几种冻干保护剂的比较

目的探讨不同冻干保护剂对人凝血因子Ⅷ(FⅧ)制品在冻干及干热(100℃,30min)过程中的作用。方法同批次人FⅧ样品在相同冻干条件及一定保护剂(0.3%甘氨酸、1.5%蔗糖、1.0%白蛋白)组成的基础上,改变甘氨酸、蔗糖、白蛋白、木糖醇和精氨酸5种冻干保护剂的含量或种类,组合成6组配方,对不同配方冻干及干热后FⅧ制品外观、复溶后澄清度及FⅧ活性等进行分析比较。结果Ⅰ组(3%甘氨酸):冻干和干热后制品成形最好,但复溶后均有少量絮状物;Ⅱ组(5%蔗糖):冻干和干热后制品均萎缩,冻干过程部分制品水份未抽干,冻干后澄清度较好,干热后部分有少量絮状物;Ⅲ组(2%白蛋白):冻干和干热后制品成形较好,但复溶后均有絮状物;Ⅳ组(5%木糖醇):冻干后制品萎缩,复溶后澄清度最好,干热后膨胀,复溶后有大量絮状物;Ⅴ组(1.2%精氨酸):冻干和干热后制品萎缩,但复溶后澄清度均较好;Ⅵ组(5%木糖醇+1.2%精氨酸):冻干后制品膨胀,复溶后澄清度较好,干热后进一步膨胀,复溶有大量絮状物。各组冻干后FⅧ活性≥9.3 IU/ml,回收率均较高(≥84.2%);干热后差别明显,其中Ⅲ组(2%白蛋白)FⅧ活性≥9.3 IU/ml,回收率最高(≥90.4%),而Ⅳ组(5%木糖醇)和Ⅵ组(5%木糖醇+1.2%精氨酸)FⅧ活性≤0.94 IU/ml,回收率极低(≤9.8%)。结论在冻干及干热过程中不同冻干保护剂作用差异较大,甘氨酸赋形作用较好,精氨酸对制品中蛋白稳定作用明显,白蛋白对FⅧ活性保护作用最佳;较高浓度的蔗糖不利于冻干过程中水份的去除,木糖醇不适于作为需100℃干热处理的人FⅧ冻干保护剂。     

慢病毒介导的B区缺失的人凝血因子Ⅷ在NOD/SCID小鼠中的持续表达

近年来,基因治疗作为一种新的治疗方法给血友病A的治疗提供了新的思路.本研究旨在探讨在体外和NOD/SCID小鼠中应用慢病毒载体介导的血友病A基因疗法的可能性.构建含有B区缺失的人凝血因子Ⅷ(BDDhFⅧ)基因和IRES-eGFP编码序列的慢病毒表达载体pXZ9/BDDFⅧ.通过3质粒共转染293FT包装细胞,包装后感染293FT,HLF,Chang-liver和人骨髓间充质干细胞.在感染后分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA),一期法,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和聚合酶链反应(PCR)法检测凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性,FⅧ抗原,FⅧ的mRNA转录和基因整合情况.超速离心收集病毒颗粒,并通过门静脉注射感染NOD/SCID小鼠.ELISA分析小鼠血浆FⅧ抗原,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,转导后1个月RT-PCR分析小鼠肝脏人FⅧ的转录情况.结果表明:成功制备高浓度的重组慢病毒,并能在体外高效转导靶细胞.感染后72 h能检测到高水平的FⅧ活性和FⅧ抗原.RT-PCR和PCR法能敏感检测到人FⅧ基因特录和整合至感染后的细胞中.在所有接受重组慢病毒颗粒注射后的NOD/SCID小鼠肝脏中均能检测到人FⅧ基因的转录,同时重组慢病毒也能在体内高效转导小鼠肝细胞.在感染后72 h小鼠血浆中人FⅧ水平为(49±6) mU,1周后为(54±8) mU,1个月后为(23±4) mU.结论:携带BDDhFⅧ基因的慢病毒颗粒在体内外能高效转导靶细胞,且所有被转导的靶细胞都能有效的分泌人FⅧ.经过门静脉注射慢病毒颗粒的NOD/SCID小鼠可以持续表达人FⅧ.     

逆转录病毒载体转染的人凝血因子Ⅸ基因在人脐带组织源间充质干细胞中的表达

为了研究逆转录病毒（pLEGFP—N1）转染的人凝血因子Ⅸ（hFⅨ）基因在人脐带间充质干细胞中的表达,应用DNA重组技术将hFⅨ cDNA构建入pLEGFP—N1载体,转导入包装细胞系Pheonix细胞,应用病毒上清感染人脐带组织源间充质干细胞（hUCT—MSCs）,经G418筛选10天后获得全部的转染阳性细胞,从蛋白质水平和其功能活性上检测hFⅨ的表达。结果显示：配养上清液中可检测到hFⅨ的表达,每24小时分泌量达2．68±0．36μg／10^6细胞。Westernblot检测表明,转导hFⅨ的hUCT—MSCs能分泌预期分子大小的hFⅨ入上清。功能性凝集测定实验表明了转导F／X的hUCT—MSCs 2天培养上清中hFⅨ的活性为100％-130％。结论：pLBGVe—N1-hFⅨ能有效地转导hUCT—MSCs,并在其子代细胞中表达具有凝血活性的hFⅨ,这为hUCT—MSCs成为血友病B基因治疗的细胞载体研究奠定了基础。     

基质效应对注射用重组人凝血因子Ⅷ效价检测方法的影响

目的 考察不同基质对注射用重组人凝血因子Ⅷ(rFⅧ)效价检测方法的影响。方法 采用两种不同检测基质分别建立注射用重组人凝血因子Ⅷ效价检测方法,并对两种基质效应的影响进行了方法验证,包括专属性、线性、准确性/重复性和中间精密度。结果 专属性：高浓度两种基质加标回收率分别为112%,110%,低浓度两种基质加标回收率分别为104%,109%。线性：在0.125～1.000 IU/mL范围内,标准品/样品的浓度和凝固时间之间的相关系数r均>0.99。准确性/重复性：两种基质回收率分别为104%、102%,RSD分别为2.4%、1.9%。中间精密度：两种基质人员因素P值分别为0.72、0.23,日期因素P值分别为0.79、0.85,RSD_12次分别为4.2%、3.0%。两种基质检测结果比对：6批重组人凝血因子Ⅷ(rFⅧ)检测结果差异均≤5%,两种检测基质的检测结果无明显差异。结论 两种检测基质均具有良好的专属性、线性、重复性、准确性及中间精密度,适用于重组人凝血因子Ⅷ(rFⅧ)产品的效价检测。     

纳米高聚合物转导Survivin反义寡核苷酸对大肠癌的体内杀伤作用

背景:近年来纳米载体已被视为突破基因转移瓶颈最有前途的技术之一.聚酰胺-胺型树枝状高聚合物(polyamidoamine,PAMAM)是一种新型的纳米材料,体内外实验表明,PAMAM比其他阳离子载体的基因转染效率高、细胞毒性低.目的:探讨PAMAM介导Survivin反义寡核苷酸(Survivin antisense oligonucleotide,Survivin-asODN)对结直肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用.设计、时间及地点:肿瘤基因治疗体内实验,于2008-02/08在上海交通大学微纳米科学技术研究院生物纳米工程研究室及南方医科大学珠江医院中心实验室完成.材料:人结直肠癌细胞株SW620购自中科院上海细胞所,PAMAM树形分子由上海交通大学微纳米研究院生物纳米工程研究室提供,脂质体Lipolifectmain~(TM)2000购自美国Invitrogen公司.Survivin-asODN 由上海生工公司合成.方法:将PAMAM和阳离子脂质体分别与Survivin-asODN混合得到载反义基因转染复合物.透射电镜观察复合物的形态,激光散射粒径分析仪测定粒径,zeta电位分析仪测定复合物的zeta电位,离心法和紫外分光分度仪测定复合物的包封率和体外DNA释放速度.将对数生长期的人结直肠癌细胞SW620细胞接种于18只Balb/C裸鼠皮下建立结直肠癌裸鼠皮下移植瘤模型.随机均分为脂质体组、PAMAM组和空白对照组.分别注射脂质体-survivin-asODN转染复合物、PAMAM-survivin-asODN转染复合物、血清培养液,观察两组移植瘤体积,Western bloting方法检测移植瘤组织中survivin基因的表达.主要观察指标:阳离脂质体-survivin-asODN复合物及PAMAM-survivin-asODN复合物的粒经,zeta电位,基因载药率,包封率,释放率,转染后survivin表达率及对凋亡的诱导率,种植肿瘤生长抑制率,移植瘤细胞Survivin蛋白的表达及活性.结果:PAMAM-survivin-asODN复合物的粒径小于脂质体-survivin-asODN复合物的粒径(P<0.01),而zeta电位高于PAMAM-survivin-asODN复合物zeta电位(P<0.05),基因包封率两组差异无显著性意义.PAMAM对DNA持续释放达14 d,但脂质体复合物只持续5 d.PAMAM-survivin-asODN复合物治疗组裸鼠移植瘤survivin蛋白表达低于脂质体-survivin-asODN复合物组(P<0.05).PAMAM-survivin-asODN复合物治疗组移植瘤体积低于脂质体-survivin-asODN复合物组(P<0.05).结论:PAMAM能将Survivin-asODN高效递送到结直肠癌移植瘤细胞,降低survivin蛋白的表达,抑制移植瘤生长.     

注射用重组人凝血因子Ⅷ治疗血友病A的护理

目的探讨注射用重组人凝血因子Ⅷ(拜科奇)治疗血友病A的护理方法和要点。方法通过对7例血友病A患者31次使用注射用重组人凝血因子Ⅷ进行治疗时,予心理护理、药物配制、用药观察以及健康教育等护理干预。结果 7例血友病A患者31次使用注射用重组人凝血因子Ⅷ治疗,均未见不良反应。结论在使用注射用重组人凝血因子Ⅷ治疗中,加强药物及患者的护理,可减少不良反应,提高患者的治疗依从性与治疗效果。     

L-精氨酸对人凝血因子Ⅷ基因表达的影响

目的研究L-精氨酸对人凝血因子Ⅷ（FⅧ）基因转录及表达的影响。方法将B结构域（氨基酸760～1639）缺失的人FⅧcDNA（BDDhFⅧcDNA）插入至质粒载体pcDNA6／V5-HisA，构建重组载体pcDNA6／V5-HisA-BDDhFⅧ，转染人脐静脉内皮细胞（HUVEC），加入L-精氨酸（终浓度10mmol／L）培养72h后，用ELISA方法检测细胞上清液中的人FⅧ抗原（FⅧ：Ag），一期凝血酶法检测FⅧ的促凝活性（FⅧ：C）。用Northern blot检测HUVEC中人FⅧ基因的转录。用PCR扩增BDDhFⅧcDNA的A1、A2、A3、C1和C2结构域基因，分别插入至pcDNA6／V5-HisA，构建五种载体pcDNA6／V5-HisA-BDDhFⅧ-A1、pcDNA6／V5-BDDhF Ⅷ-A2、pcDNA6／V5-HisA-BDDhF Ⅷ-A3、pcDNA6／V5-HisA-BDDhF Ⅷ-C1和pcDNA6／V5-HisA-BDDhF Ⅷ-C2，分别转染HUVEC后，加入L-精氨酸（终浓度10mmol／L）培养72h。膨胀裂解法分离细胞核，进行细胞核连缀（Run-on）反应，狭线印迹杂交检测A1、A2、A3、C1和C2结构域基因的转录。结果经L-精氨酸诱导后，HUVEC中人FⅧ基因表达明显增强[FⅧ：Ag为（146．08±4．78）ng／ml，10^6细胞诱导24h后FⅧ：C为（0．752±0．009）U／ml]，约是未经L-精氨酸诱导[FⅧ：Ag为（34．66±3．98）ng／ml，10^6细胞诱导24h后FⅧ：C为（0．171±0．006）U／ml]的4倍（P〈0．01）。Northern blot检测显示，加L-精氨酸培养之后，HUVEC中人BDDFⅧ mRNA的转录也较未加L-精氨酸显著增强，而只转染pcDNA6／V5-HisA的HUVEC中无人BDDFⅧ mRNA的转录存在。Run-on及狭线印迹杂交显示，加L-精氨酸培养后，A1和A2结构域基因的转录均较未经L-精氨酸诱导者明显增强，也显著强于A3、C1和C2结构域基因的转录，而A3、C1和C2结构域基因的转录在L-精氨酸诱导前后均无明显变化。结论L-精氨酸通过促进人FⅧ的A1和A2结构域基因的转录进而增强FⅧ在体外的转录和表达，因而在血友病A的基因治疗研究中，L-精氨酸是一个很有前途的诱导FⅧ转录和表达的物质。