人支气管肺泡灌洗液抗菌多肽探讨

用酶低温消化获得的人气管上皮细胞,气-液界面无血清培养,细胞呈现复层生长,细胞角蛋白免疫组化染色呈阳性反应,可确认为上皮细胞。琼脂糖弥散法显示培养细胞表面分泌物对绿脓杆菌有明显的抗菌活性。随底层培养基NaCI浓度的增高,杀菌环直径逐渐减小。当NaCl浓度分别为0、20、40、80、160、320mmol/L时,     

人支气管上皮细胞的体外培养

背景：人支气管上皮细胞培养在呼吸系统疾病研究中应用越来越广泛。 目的：探索美国典型培养物保藏中心人支气管上皮细胞体外培养方法的可行性。 方法：对人支气管上皮细胞培养条件进行反复摸索,最终确定应用含体积分数20%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养。 结果与结论：实验培养的人支气管上皮细胞扁平,呈多边形,长满后呈“铺路石”样分布,经免疫组化检测发现培养的细胞表达上皮细胞标志物细胞角蛋白。在支气管扩张症患者痰液上清刺激下,细胞表达的核因子κB、肿瘤坏死因子α和白细胞介素8明显增强,证实培养的人支气管上皮细胞获得成功。提示不必拘泥于美国典型培养物保藏中心推荐的培养条件,改进的培养方法简便易行,有应用价值。     

猪气道上皮细胞的快速分离培养

原代培养的细胞在生理上接近体内的状态,在细胞生物学研究中具有重要价值。气道（气管和支气管）上皮细胞较难培养,对生长条件要求高,目前国内这方面的报道很少。我们通过多年实践摸索,已能稳定地培养猪气道上皮细胞,现介绍其具体方法及细胞微管的检测和绿色荧光蛋白（GFP）的表达。     

肝干细胞分离培养技术的研究进展

干细胞是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,存在于许多组织中;肝干细胞在肝脏的形成和再生中有重要作用,可以分化为肝细胞、胆管上皮细胞和胰腺上皮细胞等.随着对其特性的深入了解,它将代替肝细胞移植和肝脏移植成为治疗器官衰竭的一种重要细胞来源,在体外对肝干细胞进行分离纯化和培养扩增,将对肝的细胞移植、组织工程和基因治疗等有重要作用.     

人羊膜细胞在Ⅰ型胶原基质中的三维培养研究

将人羊膜间质细胞种入Ⅰ型胶原三维基质中,羊膜上皮细胞接种在基质的表面,构建人羊膜细胞/Ⅰ型胶原基质复合物以模拟人体羊膜组织结构,为其用于修复胎膜破口的研究做准备。采用罗丹明-鬼笔环肽荧光染色剂特异性标记胞浆中的微丝(F-actin)结构,观察细胞在三维基质中的细胞形态;扫描电镜和透射电镜法观察羊膜上皮细胞和间质细胞在三维培养中的超微结构。结果显示人羊膜上皮细胞和间质细胞在Ⅰ型胶原基质的复合培养中生长良好,显示出与体内羊膜细胞的相似性。以上结果提示,Ⅰ型胶原蛋白有望应用在羊膜细胞组织工程,三维细胞基质培养系统有望为胎膜早破提供新的研究方法和治疗手段。     

犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞可在体外长期稳定培养

背景：体外分离培养获得足够活性良好的种子细胞是构建阴道组织工程的关键。文献报道阴道上皮细胞体外纯化培养和传代较为困难,尤其是体外长期培养犬等大动物的阴道种子细胞尚未见报道。 目的：建立体外稳定培养犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞方法。 方法：获取犬小块阴道组织,机械分离阴道黏膜上皮,Dispase酶和胰蛋白酶分步消化收集上皮细胞,接种于无血清角化细胞培养液中培养和传代;机械分离阴道平滑肌组织后采用Ⅱ型胶原酶消化获得平滑肌细胞,在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液中连续培养传代。动态观察上皮细胞和平滑肌细胞生长增殖情况,分别采用特异性抗体行细胞免疫化学染色鉴定。 结果与结论：原代培养的上皮细胞24-36 h后开始贴壁铺展,四五天后呈对数生长,七八天可达70%融合,为单一的上皮细胞,呈典型铺路石样,未见成纤维细胞混杂。每四五天可传代1次,连续传代六七次,细胞免疫化学染色角蛋白AEl/AE3抗体阳性。平滑肌细胞原代培养24 h后贴壁呈梭形,此后呈对数生长,4 d后融合呈典型的“峰和谷”样,每三四天可传代1次,连续传代七八次,细胞免疫化学染色示α-肌动蛋白染色阳性。结果证实,犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞可在体外长期稳定培养,可为体外构建组织工程化阴道提供足够的种子细胞。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

人细支气管上皮细胞的ROCK激酶抑制剂培养体系扩增及气液相模型的建立

背景：人类原代肺脏上皮细胞在体外难以分离培养,表现为组织来源有限、细胞存活率低、增殖速度慢,缺乏上皮细胞表型分化能力等。目的：体外扩增人细支气管上皮细胞,建立其气液相分化模型,用于肺脏上皮细胞功能研究。方法：采用Pronase和DnaseⅠ联合消化法分离人细支气管上皮细胞。利用ROCK激酶抑制剂培养体系对其进行扩增,免疫荧光染色鉴定细胞类型。建立气液相培养模型,扫描电镜、相差显微镜和免疫荧光染色鉴定细胞分化类型。结果与结论：通过ROCK激酶抑制剂培养体系,体外成功培养扩增了人细支气管上皮细胞。扩增细胞经免疫荧光染色鉴定绝大部分都表达基底细胞标记角质蛋白14,提示人细支气管的基底细胞可能是肺脏上皮干细胞的主要亚群。同时,扩增细胞在气液相培养条件下分化成纤毛细胞和无纤毛柱状细胞,表明ROCK激酶抑制剂培养体系扩增的上皮细胞仍然保持干细胞的增殖分化能力,体外气液相培养模型可以促进人细支气管上皮细胞分化。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

淋巴细胞对人原代甲状腺滤泡上皮细胞凋亡的影响

目的研究淋巴细胞对人原代甲状腺滤泡上皮细胞凋亡的影响及其临床意义。方法以不同浓度的淋巴细胞刺激单层培养的原代甲状腺滤泡上皮细胞,采用MTT、流式细胞术及荧光定量PCR法检测刺激前后甲状腺细胞的增殖抑制率及凋亡率。结果淋巴细胞可以剂量依赖性地抑制甲状腺细胞增殖,增加甲状腺细胞凋亡相关mRNA的表达,促进甲状腺细胞凋亡。结论淋巴细胞可抑制甲状腺细胞增殖,促进甲状腺细胞凋亡的发生。     

角质细胞生长因子对胸腺作用的研究进展

角质细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）是1989年Rubin等人从人胚胎肺成纤维细胞的培养上清中分离并纯化的。因这种细胞因子具有促进小鼠角质细胞有丝分裂的作用,故将其命名为角质细胞生长因子。随后的一系列研究表明,KGF的靶细胞为上皮细胞,分泌细胞为各种来源的间质细胞,其作用是促进上皮细胞的增殖和生长。     

人气管上皮细胞气液界面无血清培养

用低温酶消化法分离人气管上皮细胞，具有细胞损伤小，活力及纯度高的优点，成纤维细胞污染低。人胎盘胶原提高了气管上皮细胞的贴壁性。无血清培养基能促进人气管上皮细胞增殖，分化和成熟。气液界面培养方式更好地模拟了气管上皮细胞的天然生长环境，细胞在膜上呈复层生长，有利于其分化成熟及功能表达。光镜下细胞形态及免疫组化角蛋白染色阳性证实培养细胞为气管上皮细胞。本文所建立的人气管上皮细胞体外气液界面无血清培养方法     

角质细胞生长因子促进大鼠胰腺导管上皮细胞体外增殖

目的 探讨不同浓度的角质细胞生长因子(KGF)对大鼠胰腺导管上皮细胞增殖的影响,寻求最佳浓度.方法 免疫细胞化学染色及RT-PCR方法鉴定SD大鼠胰腺导管上皮细胞;不同浓度的KGF刺激胰腺导管上皮细胞增殖,寻求最佳浓度.结果 大鼠胰腺导管上皮细胞表达Nestin和CK19,不表达Insulin及Glucagon;不同浓度KGF刺激胰腺导管上皮细胞2d后,细胞均有不同程度增殖,20 μg/L KGF作用2d时,细胞数为0.35±0.03,显著高于对照组的0.27±0.02(P ＜0.01).结论 KGF在本实验的剂量范围内可促进胰腺导管上皮细胞增殖,20 μg/L为促进增殖的最佳浓度.     

一种用于定量研究细胞缺氧的简易模型

目的:建立一种可用于定量研究培养细胞缺氧的实验模型。方法:用厚有机玻璃制作一带有控制气体出入管道的缺氧箱;用混合气(94%N₂+6%CO₂)吸空箱内气体, 然后注入一定体积的空气, 以达到研究所需氧浓度。将A549肺癌细胞置缺氧箱内培养, 检测不同缺氧时段箱内O₂和CO₂的浓度, 以及不同氧浓度下细胞培养液的酸度变化和细胞存活分数。结果:应用该实验模型获得了预计的氧浓度;细胞培养结果表明, 在细胞缺氧培养5 h以内箱内气体浓度无明显变化;细胞存活分数和培养液pH值随缺氧程度的加重和时间延长而下降。结论:该模型可应用于定量研究细胞缺氧, 具有简便、实用、可靠等特点。     

不同细胞接种浓度影响人脐带间充质干细胞生长及多向分化

背景：在干细胞培养过程中寻找合理的细胞接种浓度,从而得到能稳定、高效生长的干细胞非常重要。 目的：观察不同接种浓度对人脐带间充质干细胞原代培养及分化为神经元样、胰岛样、脂肪样细胞的影响。 方法：分离人脐静脉内皮及内皮下层细胞,按不同接种浓度分组进行原代培养,记录原代培养时间并进行传代。取第1代人脐带间充质干细胞,体外诱导其向神经元样、胰岛样、脂肪样细胞分化。 结果与结论：原代培养发现以5×105~1×106/cm2细胞浓度接种的人脐带间充质干细胞生长状态最佳。经β-巯基乙醇诱导6 h,细胞即表达Nestin、神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白;经尼克酰胺,活化素A,胰高血糖素样肽1诱导21 d可见明显的胰岛样细胞团,双硫腙染色呈砖红色;经成脂诱导培养基诱导后细胞油红O染色阳性,有明显脂滴出现。可见选取合适的细胞浓度可以快速获得大量的人脐带间充质干细胞,且该细胞经体外诱导可向神经元样、胰岛样及脂肪样细胞分化。关键词：细胞浓度;脐带间充质干细胞;原代培养;分化;神经元样细胞;胰岛样细胞;脂肪样细胞 缩略语注释：MSCs：mesenchymal stem cells,间充质干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.14.016     

培养人食管上皮细胞、平滑肌细胞、纤维和胶原重建新食管

据Hayashi K[ASAIO J，2004，50(3)：161-166]报道，用来源于外科术后切取组织的胶原，将食管上皮细胞、纤维、平滑肌细胞进行培养，可重建用于临床的人工食管。     

Caspase-3基因沉默对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的:通过siRNA抑制caspase-3基因的表达探讨肺炎链球菌对肺泡上皮细胞凋亡的影响及凋亡基因caspase-3对凋亡的调节作用,寻找治疗肺炎链球菌肺炎的新方法。方法:体外培养肺泡上皮细胞A549,用肺炎链球菌R6作用于A549细胞,使用siRNA技术抑制caspase-3表达,RT-PCT法检测caspase-3转录强度,化学荧光测定法检测caspase-3蛋白含量,ELISA法检测细胞上清中IL-6和IL-10浓度,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:肺炎链球菌能诱导A549细胞凋亡、导致caspase-3的表达和IL-6的浓度升高、IL-10的浓度降低;使用siRNA抑制caspase-3表达后,caspase-3的表达降低,A549细胞的凋亡率降低,而IL-6和IL-10的浓度并无明显变化。结论:Caspase-3在肺炎链球菌引起的肺泡上皮细胞的凋亡中占据了重要的地位;运用RNA干扰技术抑制caspase-3的表达能降低肺泡上皮细胞的凋亡率,这可能对肺炎链球菌肺炎的治疗有积极意义。     

环境内分泌干扰物双酚A对小鼠甲状腺滤泡上皮细胞增殖和凋亡的影响

 目的：探讨环境内分泌干扰物双酚A（BPA）对小鼠甲状腺原代培养细胞增殖和凋亡的影响。方法：取雌性BALB/c nu/nu小鼠甲状腺组织,采用胶原酶I/中性蛋白酶联合消化并进行滤泡上皮细胞培养,Western blotting检测甲状腺球蛋白表达对细胞进行鉴定。采用不同浓度的BPA干预稳定培养48 h的小鼠甲状腺原代培养的滤泡上皮细胞,作用24 h后,光学显微镜观测干预前后细胞生长状态的变化,流式细胞术分析细胞增殖和凋亡,real-time PCR法和免疫细胞化学染色法测定干预前后肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1（TRAIL-R1） mRNA和蛋白的表达变化。结果：原代培养的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞随BPA刺激浓度的增加,生长状态呈现先促进后抑制的趋势;0.01～0.1 μmol/L BPA作用24 h后,细胞增殖呈剂量依赖性增长,0.1 μmol/L BPA可显著刺激细胞增殖（P<0.05）,而1 μmol/L BPA刺激后则表现为细胞增殖水平显著下降（P<0.05）;0.1 μmol/L BPA刺激后凋亡指数减低（P<0.05）;0.1 μmol/L和1 μmol/L BPA刺激后TRAIL-R1 mRNA表达均显著下调（均P<0.05）,蛋白表达与mRNA表达结果趋势一致。结论：低、中浓度BPA可刺激原代培养的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡,而高浓度BPA对细胞主要表现为毒性损害作用。BPA对细胞凋亡的影响可能与TRAIL-R1相关途径有关。     

庆大霉素对培养的肾小管上皮细胞毒性作用的研究进展

庆大霉素属氨基糖甙类抗生素 ,由于其抗菌谱广、疗效佳且费用低廉而深受医生和患者的欢迎 ,但其有效血清浓度和毒性浓度相近 ,容易造成肾、耳毒性。因此 ,对庆大霉素所引起的肾小管上皮细胞毒性作用的研究具有重要的临床意义。本文就庆大霉素对肾小管上皮细胞毒性作用机制 ,肾小管上皮细胞的培养与鉴定 ,庆大霉素对培养的肾小管上皮细胞毒性作用的表现以及肾小管上皮细胞的损伤与保护作用的研究进展进行综述     

正常人乳腺上皮细胞的原代培养

目的研究正常人乳腺上皮细胞原代培养的可行性,以及激素对其增殖的影响。方法从乳房区段切除术切除组织中获取正常人乳腺组织,用胶原酶溶液消化乳腺组织分离得到较纯净的上皮细胞,用烧灼法结合酶消化法解决细胞纯化问题。细胞形态观察和电镜检测鉴定细胞。结果正常人乳腺上皮细胞的原代培养是可行的。1×10-5的雌二醇和孕酮混合液可以促进细胞增殖。     

幽门螺杆菌对体外培养的胃上皮细胞增殖与凋亡的影响

目的　研究H .pylori对体外培养的胃上皮细胞增殖与凋亡的影响。方法　以SGC 790 1细胞作为H .pylori感染的体外细胞模型 ,用Ki 6 7抗原的免疫组化分析检测了H .pylori标准菌株NCTC 116 37活菌对胃上皮细胞增殖的影响 ,同时用流式细胞术、荧光染色技术检测了细胞凋亡率。结果　H .pylori在较低浓度 (≤ 1.6× 10 5CFU/ml)时对细胞增殖有促进作用 ,而在较高浓度 (≥ 8× 10 5CFU/ml)时抑制细胞增殖。H .pylori以浓度依赖方式诱导胃上皮细胞凋亡 ,Hoechst 332 5 8荧光染色和流式细胞术两种方法所得结果一致。结论　细胞凋亡与增殖间的不平衡亦可部分解释人体感染H .pylori后所表现的多样化结局     

结核分支杆菌培养上清诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达

目的：观察呼吸道上皮细胞对结核杆菌产物产生的炎症反应，探讨炎症反应信号传递的机制。方法：制备结核分枝杆菌强毒力H37RV株培养上清，用培养上清刺激肺上皮细胞株SPC-A-1和A549，酶联免疫吸附实验检测细胞IL-8表达量。用突变MyD88表达重组质粒转染SPC-A-1细胞，观察MyD88与结核杆菌培养上清诱导上皮细胞炎症反应信号传递的关系。结果：结核分枝杆菌强毒力H37RV株培养上清明显增加SPC-A-1和A549细胞IL-8的表达。用突变MyD88表达重组质粒pcDNA3．1-MyD88转染SPC-A-1。结果显著抑制了结核杆菌培养上清对SPC-A-l细胞的炎症刺激作用。结论：结核杆菌培养上清能够诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达，，Toll／IL-1受体信号通路及MyD88分子与细胞炎症反应的信号传递相关，提示在肺结核病发病过程中。结核杆菌的代谢产物可能刺激肺上皮细胞产生炎症细胞因子，参与肺结核炎症病变的形成。